專利名稱：紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物酶制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法。
背景技術(shù)：
紅曲起源于我國，紅曲霉在我國主要用于紅曲釀酒、發(fā)酵食品、色素生產(chǎn)等方面。紅曲霉在代謝中可產(chǎn)生淀粉酶、酯化酶、蛋白酶等多種酶類，并且有不少紅曲霉菌株可以產(chǎn)生較高活性的蛋白酶，可用于腌潰魚、肉、豆腐等高蛋白食品，使食品色香味俱佳。而紅曲霉代謝中產(chǎn)生的酸性蛋白酶不僅可以用于食品，還在飼料、紡織、皮革生產(chǎn)等其它領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。紅曲霉生長過程中能產(chǎn)生生物活性較強的酯化酶，而大量用于釀酒和發(fā)酵食品及多孔淀粉的生產(chǎn)。在我國紅曲霉的生產(chǎn)主要分布在福建、浙江和臺灣等地。紅曲霉在秈稻米上生長，由古至今多用固體培養(yǎng)紅曲霉生產(chǎn)酯化酶，目前也有研究院所進行紅曲霉液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)生酯化酶方面的研究，但皆產(chǎn)酶能力較低，離實際大生產(chǎn)還有很大距離。由于多種紅曲霉菌種皆具有產(chǎn)生高酶活酯化酶的能力，因此，在濃香型大曲酒的釀造過程中，紅曲酯化酶的應(yīng)用比較普遍。查閱國內(nèi)外文獻后發(fā)現(xiàn)，基本所有的紅曲霉菌種都是單酶發(fā)酵，有少部分菌種為雙酶發(fā)酵，但一般僅有其中一種酶具有較大利用價值，而另一種酶活力則不盡人意。紅曲酯化酶制劑已早有商品問世(武漢佳成生物制品有限公司)且已應(yīng)用于白酒生產(chǎn)，但其酶系單一，酯化力最高只有35mg/g左右。目前，國內(nèi)白酒行業(yè)的現(xiàn)狀大都是利用單一菌種分別制造各種單一的曲種，在白酒生產(chǎn)過程中需要通過分別加入不同的曲種來實現(xiàn)釀造過程中淀粉的糖化、蛋白的水解及香味的增加，多種菌制曲的產(chǎn)品相比較顯得產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)味不足，酯香不濃，出品率低，所以紅曲酯化酶制劑的使用將會改變國內(nèi)白酒行業(yè)的這一現(xiàn)狀。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種利用紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，采用該方法生產(chǎn)的酶制劑其酯化酶活力高、液化酶活力和糖化酶活力高。本發(fā)明其采用的菌株紅曲霉菌ifoftasciAs sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC NO. 6807，該菌株在麥芽汁培養(yǎng)基上呈現(xiàn)煙灰色，底色呈現(xiàn)粉色，在顯微鏡下觀察到該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規(guī)則。一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟
a.菌種誘變
出發(fā)菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅 曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡30-40小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為25-30°C，時間2. 5-3小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括O. 1-5%溶菌酶，O. 3-1%蝸牛酶和O. 3-0. 8%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離15w紫外燈下25厘米，照射80-100秒，使致死率達88%-91% ；
b.分離
將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨O. 5-1. 2%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2-3 %，氯化鈉O. 2-1%，瓊脂1-5%，28-32°C培養(yǎng)65-80小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；
c.制曲加入麩皮60-100%,玉米面10-20%,大豆粉3-7%，磷酸二氫鉀O.01-0. 03%,加水60-90%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-35°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時，測定酶活力。優(yōu)選的，一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟
a.菌種誘變
出發(fā)菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡36小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為28°C，時間2. 5-3小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括O. 3%溶菌酶，O. 5%蝸牛酶和O. 5%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離紫外燈下29厘米，照射80-100秒，致死率達88%-91% ；
b.分離
將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨1%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2. 5%，氯化鈉O. 5%，瓊脂2%，30°C培養(yǎng)72小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；
c.制曲加入麩皮80%，玉米面15%，大豆粉5%，磷酸二氫鉀O.02%,加水80%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-3`5°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時，干燥至水分< 20%，測定酶活力。本發(fā)明的有益效果在于，采用本發(fā)明的方法分離篩選得到的菌落，酯化酶系和淀粉酶系發(fā)達，所制得曲種的酯化力、液化力、糖化力有明顯提高，酯化力由傳統(tǒng)方法中的35mg/g提高到60 mg/g,液化力由20提高到40 mg/g,糖化力由1500u/g提高到2000u/g以上。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更進一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但并不因此限制本發(fā)明。以下實施例中采用的菌株紅曲霉菌Monascus sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC NO. 6807，該菌株在麥芽汁培養(yǎng)基上呈現(xiàn)煙灰色，底色呈現(xiàn)粉色，在顯微鏡下觀察到該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規(guī)則。實施例1
一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟
a.菌種誘變
出發(fā)菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡30小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為25°C，時間2. 5小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括O. 1%溶菌酶，O. 3%蝸牛酶和O. 3%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離15w紫外燈下25厘米，照射80-100秒，使致死率達88%_91% ；
b.分離
將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨O. 5%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2 %，氯化鈉O. 2%，瓊脂1%，28°C培養(yǎng)65小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；
c.制曲加入麩皮60%，玉米面10%，大豆粉3%，磷酸二氫鉀O.01%,加水60%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時，測定酶活力。實施例2
a.菌種誘變
出發(fā)菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡36小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為28°C，時間2. 5-3小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括O. 3%溶菌酶，O. 5%蝸牛酶和O. 5%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離紫外燈下29厘米，照射80-100秒，致死率達88%-91% ；
b.分離
將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨1%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2. 5%，氯化鈉O. 5%，瓊脂2%，30°C培養(yǎng)72小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；
c.制曲加入麩皮80 %，玉米面15%，大豆粉5%，磷酸二氫鉀O.02%,加水80%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-35°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時，干燥至水分< 20%，測定酶活力。實施例3
一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟
a.菌種誘變
出發(fā)菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡40小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為300C，時間3小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括5%溶菌酶，1%蝸牛酶和O. 8%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離15w紫外燈下25厘米，照射100秒，使致死率達88%-91% ；
b.分離
將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨1. 2%，聚乙烯醇橄欖油乳化液3 %，氯化鈉1%，瓊脂5%，32°C培養(yǎng)80小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；
c.制曲加入麩皮100%，玉米面20%，大豆粉7%，磷酸二氫鉀O.03%,加水90%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到35°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時，測定酶活力。
權(quán)利要求
1.一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，其采用的菌株紅曲霉菌ifoaasctts sp.于2012 年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC NO. 6807。
2.如權(quán)利要求1所述的紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，其特征在于，所采用的菌株紅曲霉菌sp.在麥芽汁培養(yǎng)基上呈現(xiàn)煙灰色，底色呈現(xiàn)粉色，在顯微鏡下觀察該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規(guī)則。
3.—種如權(quán)利要求1所述的紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟a.菌種誘變出發(fā)菌株為煙灰色紅曲霉菌株，紫紅色紅曲霉菌株，橙色紅曲霉菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡30-40小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為25-30°C，時間2. 5-3小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括O. 1_5%溶菌酶，O. 3_1%蝸牛酶和O.3-0. 8%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離15w紫外燈下25厘米，照射80-100秒， 使致死率達88%-91% ；b.分離將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨O. 5-1. 2%，聚乙烯醇橄欖油乳化液 2-3%，氯化鈉O. 2-1%，瓊脂1-5%，28-32°C培養(yǎng)65-80小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；c.制曲加入麩皮60-100%,玉米面10-20%,大豆粉3-7%，磷酸二氫鉀O.01-0. 03%,加水60-90%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-35°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時，測定酶活力。
4.如權(quán)利要求1或2所述的一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，包括下述的步驟a.菌種誘變出發(fā)菌株為煙灰色紅曲菌株，紫紅色紅曲菌株，橙色紅曲菌株；采用細胞融合方法和紫外照射相結(jié)合，將三種出發(fā)菌株培養(yǎng)至菌齡36小時，進行細胞質(zhì)分解，質(zhì)解條件為 28°C，時間2. 5-3小時，質(zhì)解酶系統(tǒng)包括O. 3%溶菌酶，O. 5%蝸牛酶和O. 5%纖維素酶，將質(zhì)解的紅曲菌原生質(zhì)在距離紫外燈下29厘米，照射80-100秒，致死率達88%-91% ；b.分離將誘變后菌種做平板分離，平板培養(yǎng)基如下，蛋白胨1%，聚乙烯醇橄欖油乳化液2. 5%， 氯化鈉O. 5%，瓊脂2%，30°C培養(yǎng)72小時后，挑選菌落透明圈較大的單菌落，進行至少三次篩選，待遺傳性狀穩(wěn)定后進行選定；c.制曲加入麩皮80%，玉米面15%，大豆粉5%，磷酸二氫鉀O.02%,加水80%，潤水一小時，常壓蒸煮一小時，冷卻到30-35°C，無菌環(huán)境下接種操作，在通風(fēng)曲床30°C培養(yǎng)72小時， 干燥至水分< 20%，測定酶活力。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物酶制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法。一種紅曲霉生產(chǎn)酯化酶制劑的方法，其采用的菌株紅曲霉菌Monascus sp.于2012年11月13日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC No.6807，該菌株在麥芽汁培養(yǎng)基上呈現(xiàn)煙灰色，底色呈現(xiàn)粉色，在顯微鏡下觀察該菌絲有橫隔，多核，分枝多且不規(guī)則。采用本發(fā)明的方法分離篩選得到的菌落，酯化酶系和淀粉酶系發(fā)達，所制得曲種的酯化酶活力、液化酶活力、糖化酶活力有明顯提高，酯化力由傳統(tǒng)方法中的35mg/g提高到60mg/g，液化力由20mg/g提高到40mg/g，糖化力由1500u/g提高到2000u/g以上。
文檔編號C12N13/00GK103045558SQ20121054980
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月18日
發(fā)明者趙吉興, 李耀 申請人:山東中惠食品有限公司, 趙吉興