專利名稱：一種抗氧化肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到食品加工領(lǐng)域，具體指一種抗氧化肽的制備方法。
背景技術(shù)：
花蛤，學(xué)名菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum),是簾蛤科雙殼貝類,其肉質(zhì)細(xì)嫩，滋味鮮美，營養(yǎng)豐富，是我國傳統(tǒng)的養(yǎng)殖貝類。但是，隨著花蛤養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，產(chǎn)量迅速增加，已出現(xiàn)供過于求的趨勢。因此，如何充分高效地利用花蛤資源，開發(fā)花蛤加工利用的新途徑具有重大意義?；ǜ虻鞍踪|(zhì)含量高，游離氨基酸種類豐富，是優(yōu)質(zhì)的蛋白源。CN1768765A公開了一種利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解牡蠣蛋白獲得抗氧化肽的方法。以上公開的這些方法都是通過酶解天然蛋白質(zhì)，得到抗氧化多肽。但是，蛋白質(zhì)在酶解過程中，受到許多因素的影響，酶解工藝條件嚴(yán)格，酶解反應(yīng)進(jìn)程難以控制，酶解產(chǎn) 物種類及活性成分含量不穩(wěn)定，難以規(guī)?；a(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種反應(yīng)進(jìn)程易于控制且產(chǎn)物活性好的抗氧化肽的制備方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為該抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括下述步驟①將新鮮花蛤煮至殼開，去殼，將花蛤肉在35_50°C真空烘干；②將烘干的花蛤肉粉碎，過50-100目篩，得到初級花蛤肉粉末；③將所述的花蛤肉粉末按照Ig粉末，10_20mL石油醚的比例放入，振蕩，常溫靜置I小時，過濾，將濾渣重復(fù)上述操作2-3次進(jìn)行脫脂；④將上述脫脂后的花蛤肉粉末置于50_70°C真空干燥箱中，去除石油醚，得到中級花蛤肉粉末；⑤用蒸餾水與中級花蛤肉粉末混合，配制成質(zhì)量濃度為5-30%的懸浮液；調(diào)節(jié)懸浮液的PH為4. 5-9. 0，加入中級花蛤肉粉末質(zhì)量O. 5-5. 0%的Alcalase蛋白酶，于45_75°C下酶解1-3小時，然后再在95-100°C下滅酶5-10min ;將得到的酶解液在3000-12000rpm下離心，得到的上清液即為花蛤蛋白水解液；⑥對上述花蛤蛋白水解液進(jìn)行超濾除去大分子，過分子量10-50KDa的超濾膜，收集透過液；⑦將上述透過液真空濃縮至固形物含量為15-50%，加入葡萄糖，葡萄糖在濃縮后的透過液中的濃度為I. 0-10%，在110-120°c下反應(yīng)30-90min，得到反應(yīng)產(chǎn)物；⑧將上述反應(yīng)產(chǎn)物用S印hadex G_25凝膠層析，以純水為洗脫劑，洗脫液在420nm下檢測，收集洗脫液組分；⑨將上述洗脫液組分真空冷凍干燥至水分含量為1_5%，即得到黃色粉末狀的抗氧化肽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的抗氧化肽的制備方法使用生物酶制劑對花蛤蛋白進(jìn)行水解，酶解條件相比控制水解更加簡單可控，反應(yīng)條件溫和，且避免了酸水解對產(chǎn)品的污染，酶解產(chǎn)物的種類和含量更加穩(wěn)定，抗氧化肽得率高，且利用真空干燥技術(shù)，在干燥過程中最大限度的保證了抗氧化肽的活性，使其抗氧化功能大大增加，制成的花蛤抗氧化肽粉，功能性強(qiáng)，易保存；且生產(chǎn)工藝簡單、易于工業(yè)化生產(chǎn)，也為花蛤的深加工利用開辟了新途徑。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。本實(shí)施例中抗氧化肽的制備方法包括下述步驟
①將新鮮花蛤煮至殼開，去殼，將花蛤肉在50°C下真空烘干；②將烘干的花蛤肉粉碎，過80目篩，得到初級花蛤肉粉末；③將所述的花蛤肉粉末按照Ig粉末，IOmL石油醚的比例加入，振蕩，常溫靜置I小時，過濾，將濾渣重復(fù)上述操作3次進(jìn)行脫脂；④將上述脫脂后的花蛤肉粉末置于50°C真空干燥箱中，去除石油醚，得到中級花蛤肉粉末；⑤用蒸餾水與中級花蛤肉粉末混合，配制成質(zhì)量濃度為10%的懸浮液；調(diào)節(jié)懸浮液的PH為8. 0，加入中級花蛤肉粉末質(zhì)量1%的Alcalase蛋白酶，65°C下酶解3小時，然后再95°C下滅酶IOmin ;將得到的酶解液在3000rpm離心，得到的上清液即為花蛤蛋白水解液；⑥對上述花蛤蛋白水解液進(jìn)行超濾除去大分子，過分子量10_50KDa的超濾膜，收集透過液；⑦將上述透過液真空濃縮至固形物含量為15%，加入葡萄糖，葡萄糖在濃縮后的透過液中的濃度為6. 0%，在120°C下反應(yīng)60min，得到反應(yīng)產(chǎn)物；⑧將上述反應(yīng)產(chǎn)物用S印hadex G_25凝膠層析，以純水為洗脫劑，洗脫液在420nm下檢測，收集洗脫液組分。采用葡聚糖凝膠Sephadex G_25層析，主要作用是除去雜質(zhì)，收集抗氧化組分。⑨將上述洗脫液組分真空冷凍干燥至水分含量在3%，即得到黃色粉末狀抗氧化肽。將得到的抗氧化肽配制成5mg/mL的溶液，取lmL。加入ImL磷酸緩沖液(O. 2mol/L，pH6. 6)及ImL質(zhì)量濃度為1%的鐵氰化鉀溶液，混勻，50°C下水浴反應(yīng)20min后在2min內(nèi)冷卻至室溫，然后加入ImL質(zhì)量濃度為10%的三氯乙酸終止反應(yīng),混勻后在3000rpm下離心IOmin ;取ImL上清液，依次加入3mL蒸餾水及O. 2mL質(zhì)量濃度為O. 1%的三氯化鐵，混合均勻，于700nm處測定吸光度。以水代替質(zhì)量濃度為5mg/mL抗氧化肽溶液，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)作為空白對照，吸光值越大，表示還原力越強(qiáng)。本實(shí)施例抗氧化肽的還原力如表I所示。將得到的抗氧化肽配制成5mg/mL的溶液，取O. ImL試樣溶液，加O. 2mmol/LDPPH ·甲醇溶液3. 9mL，室溫下避光反應(yīng)30min。以甲醇做參比，517nm波長下測其吸光值。用下式計(jì)算清除率
權(quán)利要求
1.一種抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括下述步驟 ①將新鮮花蛤煮至殼開，去殼，將花蛤肉在35-50°C真空烘干； ②將烘干的花蛤肉粉碎，過50-100目篩，得到初級花蛤肉粉末； ③將所述的花蛤肉粉末按照Ig粉末，10-20mL石油醚的比例放入，振蕩，常溫靜置I小時，過濾，將濾渣重復(fù)上述操作2-3次進(jìn)行脫脂； ④將上述脫脂后的花蛤肉粉末置于50-70°C真空干燥箱中，去除石油醚，得到中級花蛤肉粉末； ⑤用蒸餾水與中級花蛤肉粉末混合，配制成質(zhì)量濃度為5-30%的懸浮液；調(diào)節(jié)懸浮液的PH值為4. 5-9. 0，加入中級花蛤肉粉末質(zhì)量O. 1-5. 0%的Alcalase蛋白酶，于45_75°C下酶解1-3小時，然后再于95-100°C下滅酶5-10min ;將得到的酶解液在3000-12000rpm離心，得到的上清液即為花蛤蛋白水解液； ⑥對上述花蛤蛋白水解液進(jìn)行超濾除去大分子，過分子量10-50KDa的超濾膜，收集透過液； ⑦將上述透過液真空濃縮至固形物含量為15-50%，加入葡萄糖，葡萄糖在濃縮后的透過液中的濃度為I. 0-10%，在110-120°C下反應(yīng)30-90min，得到反應(yīng)產(chǎn)物； ⑧將上述反應(yīng)產(chǎn)物用S印hadexG-25凝膠層析，以純水為洗脫劑，洗脫液在420nm下檢測，收集洗脫液組分； ⑨將上述洗脫液組分真空冷凍干燥至水分含量在1_5%，即得到黃色粉末狀抗氧化肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及到一種抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括下述步驟將花蛤肉在真空烘干后過50-100目篩，得到的初級花蛤肉粉末放入石油醚中脫脂，去除石油醚，得到的中級花蛤肉粉末與蒸餾水混合，配制懸浮液，加入蛋白酶酶解，將得到的酶解液在離心后的上清液超濾除去大分子，透過液濃縮后加入葡萄糖反應(yīng)，得到的反應(yīng)產(chǎn)物純化后即為抗氧化肽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的抗氧化肽的制備方法酶解條件簡單可控，反應(yīng)條件溫和，且避免了酸水解對產(chǎn)品的污染，酶解產(chǎn)物的種類和含量更加穩(wěn)定，抗氧化肽得率高，功能性強(qiáng)，易于工業(yè)化生產(chǎn)，為花蛤的深加工利用開辟了新途徑。
文檔編號A23J3/04GK102870954SQ20121041464
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月25日
發(fā)明者張慧恩, 楊華, 王彩霞 申請人:浙江萬里學(xué)院