專利名稱：治療眼部疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療需要的受試者的眼部障礙的無創(chuàng)傷性方法，包括向所需受試者眼睛表面局部施用藥物組合物的步驟，所述藥物組合物包含與受試者視網(wǎng)膜中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因的治療型寡核苷酸。此外，本發(fā)明涉及一種提高患有眼部疾病、障礙或損傷的受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活的無創(chuàng)傷性方法。
背景技術(shù)：
向視網(wǎng)膜組織傳輸核酸化合物，特別是向視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞是一個很大的給藥挑戰(zhàn)。迄今為止，滴眼劑被認為主要用于治療眼前段疾病是有效的，就是因為其已經(jīng)表明，核酸不通過角膜，且不充足的藥物濃度達到眼后段組織(reviewed in del Amo andUrtti,2008. Drug Discov Today 13 (3/4):135-143;Fattal and Bochot, 2006. Adv DrugDel Rev 56:1203-1223)。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)是一種靠近眼睛視網(wǎng)膜內(nèi)表面位置的神經(jīng)細胞。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞由感光細胞接收視覺信息，并統(tǒng)一傳送視網(wǎng)膜視覺信息至大腦中的幾個區(qū)域。此外，同時仍然需要有抑制受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的無創(chuàng)傷性方法。各種眼部疾病和障礙是以視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)死亡為特征。因此，仍然需要有一種抑制患有眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷或以存在感染眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷的風險為特征和/或以視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)變性或死亡介導的受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)缺失的無創(chuàng)傷性方法。發(fā)明概述本發(fā)明涉及一種與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)變性或死亡相關(guān)的眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷的無創(chuàng)傷性治療方法及其使用的組合物。本發(fā)明的方法包括向受試者眼睛表面局部施用可用于提高受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活的治療型寡核苷酸組合物。迄今為止，寡核苷酸已通過系統(tǒng)傳輸或玻璃體內(nèi)注射，與有害副作用和患者依從性差相關(guān)的方法分別傳輸?shù)窖鄄恳暰W(wǎng)膜組織。本發(fā)明提供了包含寡核苷酸的局部眼科藥物組合物，及其用于下調(diào)與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因表達的無創(chuàng)傷性方法，以挽救視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡并治療眼部障礙。因此，一方面，本發(fā)明提供一種向患有眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷的受試者視網(wǎng)膜組織傳輸寡核苷酸的無創(chuàng)傷性方法，其中包括向受試者眼睛表面局部施用包含寡核苷酸的眼科組合物。另一方面，本發(fā)明提供一種向患有眼部障礙的受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞傳輸寡核苷酸的無創(chuàng)傷性方法，其中包括向受試者眼睛表面局部施用包含寡核苷酸的眼科組合物。另一方面，本發(fā)明提供了一種減弱與患有眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷的受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因表達的方法，其中包括向受試者眼睛表面局部(無創(chuàng)傷性)施用藥物組合物，所述藥物組合物包含目標基因的mRNA產(chǎn)物的至少一種寡核苷酸，以一定用量經(jīng)過一段時間能有效減弱受試者視網(wǎng)膜基因的表達。
另一方面，本發(fā)明提供一種治療受試者患有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷的方法，并提供神經(jīng)保護劑給患有或者存在感染眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷風險的受試者。該方法包括向受試者眼睛表面局部施用眼科藥物組合物，所述眼科藥物組合物包括受試者視網(wǎng)膜目標基因靶向的至少一種寡核苷酸，以一定用量經(jīng)過一段時間能有效抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷。在不同實施例中，眼科藥物組合物被配制為霜、泡沫、膏、軟膏、乳劑、包括滴眼劑、凝膠、噴霧、懸浮液、微乳液、微球、微囊劑、納米球、納米粒子、脂質(zhì)囊泡、脂質(zhì)體、聚合物囊泡、眼罩或隱形眼鏡的液體溶液。在一些實施例中，藥物組合物被配制為滴眼劑。在優(yōu)選實施例中，向眼睛施用眼科組合物，例如，是通過滴眼劑滴注或通過施用薄霧。在某些實施例中，至少一種目標眼部mRNA基因是選自任一 SEQ ID N0:l_58所述mRNA多核苷酸。在某些實施例中，至少一種目標基因是選自被轉(zhuǎn)錄為任一 SEQ ID NO: 1-58所示mRNA多核苷酸的基因。在一些實施例中，至少一種寡核苷酸是選自化學修飾的siRNA、未修飾的RNA、反義、核酶、miRNA和shRNA。在優(yōu)選實施例中，至少一種寡核苷酸是化學修飾的siRNA。在一些實施例中，siRNA正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36中的正義和相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ ID NO:59-33，596所述。在一些實施例中，眼部障礙、疾病或損傷是選自青光眼、干眼癥、糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或老年性黃斑變性(AMD)。在其他實施例中，眼部障礙、疾病或損傷是視神經(jīng)炎、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、視網(wǎng)膜分枝靜脈阻塞(BRV0)。在進一步實施例中，眼部障礙、疾病或損傷是色素性視網(wǎng)膜炎(RP)、缺血性視神經(jīng)病變或視神經(jīng)損傷。在進一步的實施例中，眼部障礙、疾病或損傷是早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的視網(wǎng)膜病變(R0P)、黃斑變性、遺傳性視神經(jīng)病變、代謝性視神經(jīng)病變，以及由于毒劑或藥物不良反應(yīng)或維生素缺乏癥引起的視神經(jīng)病變。在另一個實施例中，該障礙是與腫瘤疾病相關(guān)的視力喪失。在不同實施例中，至少一種siRNA化合物被傳輸?shù)绞茉囌哐劬ψ鳛橐后w溶液，其中包括滴眼劑。在不同實施例中，本發(fā)明提供了一種減弱與患有眼部疾病、障礙或損傷的受試者的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標眼部基因表達的方法，其中包括向受試者眼睛表面局部施用以滴眼劑為配方的眼科藥物組合物。在不同實施例中，目標眼部mRNA的表達在患有眼部疾病、障礙或損傷的受試者視網(wǎng)膜眼部細胞中減弱。在不同實施例中，眼部細胞包括但不僅限于淚腺腺泡細胞、淚腺導管細胞、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)、視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞、脈絡(luò)膜細胞、角膜細胞、睫狀突細胞或小梁網(wǎng)細胞或其組合。本發(fā)明提供了一種抑制受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA下調(diào)與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因表達，從而抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的喪失。在某些實施例中，兩種或多種目標基因根據(jù)本發(fā)明方法被下調(diào)。至少一種與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因(眼部mRNA)的減弱表達賦予眼部神經(jīng)保護特性。在不同實施例中，至少一種眼部目標基因是選自表Al至A4的列表，如SEQ ID NO: 1-58所述。在一個實施例中，所述眼部障礙是青光眼。因此，本發(fā)明提供了一種抑制患有青光眼受試者的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的方法，其中包括局部(無創(chuàng)傷性)向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括包括至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA下調(diào)與 受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因表達，從而抑制受試者眼睛視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的缺失。在優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在一些實施例中，化學修飾的siRNA減弱基因在受試者眼睛視網(wǎng)膜(目標眼部mRNA)的表達。在其他實施例中，化學修飾的siRNA減弱目標mRNA在受試者眼睛視神經(jīng)中的表達。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達是青光眼的有效治療方法。在某些實施例中，至少一種目標基因是選自表Al JBSEQ ID NO: 1-35所述。在某些優(yōu)選實施例中，該目標基因是選自 CASP2(SEQ ID NO: 1-2) ,ASPPl (SEQ ID NO: 4)、TP53BP2 (SEQ ID NO:6-7),BNIP3 (SEQ ID NO: 12)，RTP801L (SEQ ID NO: 14)、ACHE (SEQ ID NO: 19-20)、ADRBl (SEQ IDN0:21)和CAPNSl (SEQ ID NO: 28-29)。在不同實施例中，該基因如SEQ ID N0:l_2所述。在一些實施例中，siRNA正義和反義鏈均是選自SEQ ID NO:8515-9516所述的寡核苷酸序列對。在另一個實施例中，所述眼部障礙是干眼癥。因此，本發(fā)明提供了一種抑制患有干眼癥受試者的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的方法，所述方法包括局部(無創(chuàng)傷性)向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA下調(diào)與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因(目標眼部mRNA)表達，從而抑制受試者眼睛視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的缺失。在優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達是干眼癥的有效治療方法。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達對減輕干眼癥癥狀有效。在某些實施例中，至少一種目標基因(目標眼部mRNA)在受試者眼睛視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞中表達。在某些實施例中，至少一種目標基因(目標眼部mRNA)在受試者眼睛淚腺中表達。在某些實施例中，至少一種目標基因是選自表A2，如任一 SEQ ID N0:5(p53)、SEQ ID NO: 8-10 (LRDD)、SEQ ID NO: 26-27 (SHCl)和 SEQ IDNO:30-44 (FAS和FAS配位體)所述。在一些實施例中，該目標基因是選自FAS、FAS配位體(FASL)、p53、LRDD、PARPl、AIF (凋亡誘導因子)、N0S、N0S2A、XIAP 和 SHC1-SHC。在某些優(yōu)選實施例中，目標基因如任一 SEQ ID N0:36-SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:44所述。在一些實施例中，siRNA的正義和反義鏈均是選自SEQ ID NO: 13，225-15，224所述的寡核苷酸序列對。在另一個實施例中，所述眼部障礙是AMD、DR或DME。因此，本發(fā)明提供了一種抑制患有AMD、DR或DME的受試者的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的方法。所述方法包括局部(無創(chuàng)傷性)向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA下調(diào)與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因(目標眼部mRNA)表達，從而抑制受試者眼睛視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的缺失。在優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達是AMD、DR或DME的有效治療方法。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達對減輕AMD、DR或DME癥狀有效。在某些實施例中，至少一種siRNA的施用減弱至少一種目標基因(靶mRNA)在受試者眼睛視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞中表達。在某些實施例中，至少一種siRNA的施用減弱至少一種目標基因(目標眼部mRNA)在受試者眼睛脈絡(luò)膜中的表達。在某些實施例中，至少一種目標基因列于表A3,如任一 SEQID N0:l-2、3、5、6-7、8-10、12、13、24-25、26-27、30-35、45-53所述。在某些實施例中，siRNA 革巴向CTSD、RTP801和BNIP3。在某些實施例中，該障礙是DR。siRNA靶向SEQ ID NO:48-53所述的mRNA。在一些實施例中，siRNA的正義和反義鏈均是選自SEQ ID NO: 24575-29594所述的任一序列。在某些優(yōu)選實施例中，該障礙是AMD，siRNA靶向SEQ ID N0:3所述的基因，siRNA的正義和反義鏈均是選自SEQ ID NO: 11285-12224所述的任一序列。在一些實施例中，siRNA的正義和反義鏈均是選自SEQ ID NO:24575-29594所述的寡核苷酸序列對。在一個進一步的實施例中，所述眼部障礙是視網(wǎng)膜色素變性(RP)。因此，本發(fā)明提供了一種抑制患有RP的受試者的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的方法。所述方法包括局部(無創(chuàng)傷性)向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA下調(diào)與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因(目標眼部mRNA)表達，從而抑制受試者眼睛視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的缺失。在優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達是RP的有效治療方法。在某些實施例中，減弱與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的至少一種目標基因的表達對減輕RP癥狀有效。在某些實施例中，至少一種目標眼部mRNA是選自表A4所列基因的產(chǎn)物，其被轉(zhuǎn)錄為任一 SEQ ID NO: 3、14、26_35、54_57所述的mRNA。在一些實施例中，目標眼部 mRNA 是選自由 CASP1、CASP3、CASP12、RTP801、RTP801L、CAPNSU PARPU AIF, N0S1、N0S2、XIAP和SHCl-SHC組成的組的基因產(chǎn)物。在某些優(yōu)選實施例中，siRNA靶向SEQ ID NO:56-57所述的基因。另一方面，本發(fā)明是以一種拯救受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的細胞凋亡的方法為特征，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括受試者視網(wǎng)膜的目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而拯救受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的細胞凋亡。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸，如SEQ ID NO: 59-33，596所述。另一方面，本發(fā)明提供一種提高呈現(xiàn)視神經(jīng)病變體征或癥狀的受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活的方法，包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包含至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA下調(diào)與受試者視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因表達，從而提高受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的存活。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，視神經(jīng)病變的體征或癥狀是由細胞凋亡介導的。在一些實施例中，該目標基因如任一SEQ ID NO: 1-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸，如SEQ ID NO:59-33, 596所述。另一方面，本發(fā)明涉及一種預防、治療或減輕與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡相關(guān)的眼部疾病的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合包括受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而預防、治療或減輕與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡相關(guān)的眼部疾病。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸，如 SEQ ID NO:59-33，596 所述。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療或預防受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括(a)受試 者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，和(b)藥學上可接受的賦形劑或載體或其混合物，從而治療或預防受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l_58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸，如SEQ IDNO :59-33, 596 所述。另一方面，本發(fā)明涉及一種預防由受試者眼睛中高眼壓介導的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合包括受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而預防受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一個特定實施例中，根據(jù)這一方法該受試者是患有青光眼。在一些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID NO: 1-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸，如SEQ ID NO :59-33, 596 所述。本發(fā)明還提供了一種延遲、預防或拯救患有高IOP受試者的視網(wǎng)膜細胞死亡的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括與受試者視網(wǎng)膜的RGC死亡相關(guān)的目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而延遲、預防或拯救視網(wǎng)膜細胞的損傷或死亡，其中眼內(nèi)壓(IOP)仍然大幅度提升。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一個特定實施例中，根據(jù)這一方法該受試者是患有青光眼。在一些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自SEQ ID NO:59-33，596所述的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸。本發(fā)明還提供一種治療患有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷受試者的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至受試者視網(wǎng)膜的目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而治療受試者或降低受試者視網(wǎng)膜細胞的死亡。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自SEQ ID NO:59-33，596所述的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸。
本發(fā)明還提供了一種降低視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的方法，并提供神經(jīng)保護劑給所需要的受試者，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至受試者視網(wǎng)膜的目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而降低網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失，并提供神經(jīng)保護劑給受試者。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ IDNO :59-33, 596 所述。本發(fā)明還提供一種預防與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的視野喪失的方法，其中包括無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合物包括至受試者視網(wǎng)膜的目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，從而預防受試者的視野喪失。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID NO: 1-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ ID NO:59-33，596所述。另一方面，本發(fā)明提供了一種無創(chuàng)傷治療與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的 眼部疾病的眼科組合物，其中包括(a)受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，和(b)藥學上可接受的賦形劑或載體或其混合物。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，該目標基因如任一 SEQ ID N0:l-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如 SEQ ID NO:59-33，596 所述。另一方面，本發(fā)明提供了一種無創(chuàng)傷治療與視覺系統(tǒng)組織的病理性異常/變化有關(guān)的眼部疾病的局部眼科藥物組合物，其中包括(a)受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，其中所述目標基因如任一 SEQ ID NO: 1_58所述，和(b)藥學上可接受的賦形劑或載體或其混合物。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ ID NO:59-33，596所述。根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡相關(guān)的眼部疾病的眼科藥物組合物，其中包括(a)受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，其中所述目標基因如任一 SEQ ID NO: 1_58所述，和(b)藥學上可接受的賦形劑或載體或其混合物。在優(yōu)選實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ ID NO :59-33, 596 所述。在不同實施例中，所述眼部疾病是選自包括青光眼、干眼癥、糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR),糖尿病性黃斑水腫(DME)、老年性黃斑變性(AMD)、視神經(jīng)炎、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、視網(wǎng)膜分枝靜脈阻塞、缺血性視神經(jīng)病變、視神經(jīng)損傷、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(R0P)、色素性視網(wǎng)膜炎(RP)、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞變性，黃斑變性、遺傳性視神經(jīng)病變、代謝性視神經(jīng)病變，以及由于毒劑或藥物不良反應(yīng)或維生素缺乏癥引起的視神經(jīng)病變；所述組合物被配制為霜、泡沫、膏、軟膏、乳劑、液體溶液、滴眼劑、凝膠、噴霧、懸浮液、微乳液、微球、微囊劑、納米球、納米粒子、脂質(zhì)囊泡、脂質(zhì)體、聚合物囊泡、眼罩或生物插入物。在優(yōu)選實施例中，所述組合物被配制為滴眼劑。
另一方面，本發(fā)明涉及一種包裝的藥物制劑，其中包括(a)容器內(nèi)根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物(b)所述組合物用于治療眼部疾病的說明書。在不同實施例中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包括患有眼部疾病的受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA。在優(yōu)選實施中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一些實施例中，目標基因如任一 SEQ IDNO: 1-58所述。在不同實施例中，siRNA的正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義及其相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ ID NO:59-33，596所述。在一特定實施例中，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物是用于無創(chuàng)傷性治療與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的眼部疾病。在另一特定實施例中，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物是用于無創(chuàng)傷性治療與視覺系統(tǒng)組織病理異常/變化相關(guān)的眼部疾病。在另一特定實施例中，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物是用于無創(chuàng)傷性治療患有與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡相關(guān)的眼部疾病的受試者。根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明在 藥劑加工中提高受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活的藥物組合物的用途。在不同實施例中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包括患有眼部疾病的受試者視網(wǎng)膜目標基因的治療有效量的至少一種siRNA。在優(yōu)選實施中，至少一種siRNA是化學修飾的。在一些實施例中，目標基因如任一 SEQ ID N0:l_58所述。在不同實施例中，siRNA正義和反義寡核苷酸均是選自顯示于表B1-B36的正義和相應(yīng)的反義寡核苷酸對，如SEQ ID NO:59-33，596所述。在一特定實施例中，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物是用于無創(chuàng)傷性治療與受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的眼部疾病。在另一特定實施例中，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物是用于無創(chuàng)傷性治療與視覺系統(tǒng)組織病理異常/變化相關(guān)的眼部疾病。在另一特定實施例中，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述藥物組合物是用于無創(chuàng)傷性治療受試者患有與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡相關(guān)的眼部疾病。在一些實施例中，所述組合物包括增粘劑。增粘劑是選自(例如)親水聚合物，其中包括纖維素和纖維素衍生物，如甲基纖維素和甲基纖維素衍生物。這些藥劑包括甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素和羧甲基纖維素及其衍生物、組合和鹽類。在一些實施例中，增粘劑是甲基纖維素。在某些實施例中，所提供的增粘劑濃度為約O. 01 %至約4 %，在其他實施例中，所提供的增粘劑濃度為約O.1 %至約3 %，或約O. 5 %至約2%。在一些實施例中，所述組合物包括提供滲透壓平衡或者表面活性劑的藥劑。這些藥劑包括丙三醇、乙二醇、聚乙二醇(PEG)、丙二醇、山梨醇、甘露醇、單糖、雙糖和低聚糖。本發(fā)明還提供一種治療所需受試者青光眼的方法，其中包括局部(無創(chuàng)傷性)地向受試者眼睛表面施用受試者眼睛目標基因的治療有效量的至少一種siRNA，以一定量有效治療青光眼。在某些優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，至少一種siRNA抑制至少一種基因在受試者眼睛視網(wǎng)膜中的表達。在某些實施例中，至少一種基因抑制賦予眼部神經(jīng)保護特性。在某些實施例中，至少一種基因是選自表Al的列表，其被轉(zhuǎn)錄為SEQID NO: 1-35所述的mRNA。在某些優(yōu)選實施例中，該基因是選自CASP2 (SEQ ID NO: 1-2),ASPPl (SEQ ID NO:4)、TP53BP2(SEQ ID NO:6-7)、BNIP3(SEQ ID NO:12),RTP801L(SEQ IDNO:14)、ACHE(SEQ ID NO:19-20),ADRBl(SEQ ID N0:21)和 CAPNSl(SEQ ID NO:28-29) 在不同實施例中，該基因如SEQ ID N0:l-2所述。在一些實施例中，siRNA的正義和反義鏈是選自SEQ ID N0:8515-9516所述的任一序列。
本發(fā)明還提供了一種治療所需受試者干眼癥的方法，其中包括局部(無創(chuàng)傷性)地向受試者眼睛表面施用至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA抑制至少一種基因在受試者眼睛中的表達，其以一定量有效降低干眼癥癥狀。在某些優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，至少一種基因在受試者淚腺中表達。在某些實施例中，至少一種基因是選自表 A2，如任一 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8-10、SEQ ID N0:26_27 和 SEQID N0:30-44所述。在一些實施例中，所述基因是選自FAS、FAS配位體(FASL)、p53、LRDD、PARP1、AIF(凋亡誘導因子)、N0S1、N0S2A、XIAP和SHC1-SHC。在某些優(yōu)選實施例中，所述基因被轉(zhuǎn)錄成任一 SEQ ID N0:36-SEQID NO:44所述的mRNA。在一些實施例中，siRNA的正義和反義鏈均是選自表6-17中SEQ ID N0:13、225-15、224所述的任一序列。本發(fā)明還提供了一種治療所需受試者AMD、DR或DME的方法，其中包括局部(無創(chuàng)傷性)地向受試者眼睛表面施用至少一種siRNA的治療有效量，所述siRNA抑制至少一種基因在受試者眼睛中的表達，其以一定量有效降低AMD、DR或DME癥狀。在某 些優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，至少一種siRNA抑制至少一種基因在受試者眼睛脈絡(luò)膜中的表達。在某些實施例中，至少一種目標眼部mRNA列于表A3，如任一 SEQID N0:l-2、3、5、6-7、8-10、12、13、24-25、26-27、30-35、45-53 所述。在某些優(yōu)選實施例中，siRNA靶向CTSD、RTP801和BNIP3。在某些優(yōu)選實施例中，所述眼部障礙是DR，siRNA靶向SEQ ID NO:48-53 所述的 mRNA。在一個進一步的實施例中，所述眼部障礙是視網(wǎng)膜色素變性(RP)。因此，本發(fā)明提供了一種減弱目標眼部mRNA在患有RP的受試者眼睛中表達的方法。所述方法包括局部(無創(chuàng)傷性)地向受試者眼睛表面施用受試者眼睛目標基因的治療有效量的至少一種siRNA。在某些優(yōu)選實施例中，siRNA是化學修飾的。在某些實施例中，至少一種目標基因(目標眼部mRNA)的減弱表達是有效治療RP的方法。在某些實施例中，至少一種目標眼部mRNA的減弱表達對減輕RP癥狀有效。在某些實施例中，至少一種目標眼部mRNA是選自表A4所列基因的基因產(chǎn)物，其被轉(zhuǎn)錄為任一 SEQ ID N0:3、14、26-35、54-57所述的mRNA。在一些實施例中，目標眼部 mRNA 是選自由 CASPl、CASP3、CASP12、RTP801、RTP801L、CAPNSl、PARPl、AIF、N0S1、N0S2、XIAP和SHCl-SHC組成的組的基因產(chǎn)物。在某些優(yōu)選實施例中，siRNA靶向 SEQ ID NO: 56-57 所述的 mRNA。在不同實施例中，至少一種siRNA是化學修飾的。在不同實施例中，至少一種siRNA包括足夠數(shù)量的具有與目標mRNA中的核苷酸序列具有充分同源性的連續(xù)核苷酸序列，以與mRNA雜交，并減弱mRNA在受試者眼睛中的表達。在不同實施例中，至少一種siRNA包括包括足夠數(shù)量的具有與基因中的核苷酸序列具有充分同源性的連續(xù)核苷酸序列，以與該基因雜交，并降低或抑制基因在受試者眼睛中的表達。附圖簡要說明

圖1A-1B :表示施用滴眼劑后注入小鼠視網(wǎng)膜的Cy3標記DDIT4siRNA的典型圖像。圖1C:在E.D.給藥后4小時的視網(wǎng)膜的共聚焦顯微鏡圖像，給藥(上X40，下X60)。在左(Cy3)和右(合并)小圖中RGC的Cy3染色是顯著的。 圖2A-2C :表示施用滴眼劑后注入小鼠淚腺導管及腺泡細胞的Cy3標記DDIT4siRNA的典型圖像。圖2D :代表的Cy3標記的siRNADDIT4納入小鼠淚腺導管及腺泡細胞的圖像。E.D.后4小時，淚腺的共聚焦顯微鏡圖像(X60)。圖3A-3C :表示施用滴眼劑1-4小時后小鼠脈絡(luò)膜的Cy3_siRNA累積隨時間的變化。圖4 :表示向眼睛施用滴眼劑I小時后傳輸?shù)叫×壕W(wǎng)和睫狀體的Cy3_siRNA。圖5A-5B :表示施用p53基因靶向QM5 - siRNA的滴眼劑I小時后的視網(wǎng)膜共聚焦顯微鏡圖像(倍數(shù)X60)。視網(wǎng)膜的siRNA (視網(wǎng)膜色素上皮細胞，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞)通過Cy3熒光顯示。圖6A-6B:表示注入小鼠視網(wǎng)膜的Cy3標記DDIT4 siRNA的典型圖像。圖6B表示施用滴眼劑I小時后DDIT4_1 Cy3-siRNA的累積。感光細胞的脈絡(luò)膜、外核層、RPE和外節(jié)層顯不了 Cy3染色。圖7顯示了施用滴眼劑I小時后RGC細胞通過使用Dy_649/C6染色的DDIT4_1 Dy-649/C6-siRNA 累積。圖8A-8C 表示對照 siRNA FITC_CNL_1RD/CNL_1FD 和不規(guī)則的 3’ cy3_CNL_lRGC 通過不同染色方法傳輸?shù)揭暰W(wǎng)膜組織。圖9A-9B表示Casp2的不同結(jié)構(gòu)傳輸?shù)叫∈笠暰W(wǎng)膜組織。圖 10A-10B 表示 TGASEI1-FAM 和 HN0EL-FAM 的傳輸。圖11表示PBS中作為陽性對照組的p53靶向siRNA的視網(wǎng)膜傳輸。圖12A-12B表示正常動物或施用不含有siRNA的ED后視網(wǎng)膜中無熒光信號。圖13A-13D提供了顯示視網(wǎng)膜中p53抑制的實驗結(jié)果。圖13A-13B顯示了測量P53蛋白水平的標準曲線。圖13C-13D顯示了通過滴眼劑實現(xiàn)的視網(wǎng)膜p53抑制。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了局部寡核苷酸組合物及其用于治療各種眼部疾病及障礙的無創(chuàng)傷性方法。特別地，本發(fā)明提供了與患有該疾病或障礙的受試者眼睛基因表達相關(guān)的不同眼部疾病及障礙的治療方法。本發(fā)明部分是基于siRNA組合物靶向某些眼部組織和細胞類型的局部無創(chuàng)傷性給藥的意外發(fā)現(xiàn)，并當局部傳輸至眼睛表面時在那些組織和細胞中很活躍。考慮到已知siRNA的傳輸障礙以及提供無創(chuàng)傷性方法作為玻璃體或全身傳輸?shù)默F(xiàn)實選擇，這一發(fā)現(xiàn)是令人驚訝的。對于有效沉默目標基因的mRNA的siRNA分子，所述siRNA需要三個層次的目標目標組織、目標細胞的類型和目標亞細胞室?，F(xiàn)在本發(fā)明公開了治療眼部疾病和障礙的無創(chuàng)傷性方法。本發(fā)明通常涉及下調(diào)基因在眼部細胞中表達的化合物，特別涉及新的小干擾RNA(siRNA),以及這些新的siRNAs在治療受試者患有與眼部組織和細胞中基因表達相關(guān)的疾病的用途。對減弱眼部目標mRNA表達的方法及治療眼部障礙的方法在此進行了詳細談?wù)?，任何所述分子?或組合物可有益地用于治療患有所述疾病的受試者。本發(fā)明的siRNA具有可能增加活性、增加穩(wěn)定性或減少毒性的結(jié)構(gòu)和修飾；對本發(fā)明siRNAs的新修飾可以有益地應(yīng)用到用于防止或減弱目標基因表達的雙鏈RNA序列中，特別是此處討論的目標基因。
每一個指示目標基因的非限制性實例，已詳列于表A1-A4，見下文。表Al :治療青光眼的目標基因
權(quán)利要求
1.具有如下結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA化合物5’ iB-GCCAGAAUGUGGAACUCCU 3’(正義鏈；SEQ ID NO :503)3’CGGUCUUACACCUUGAGGA 5’(反義鏈；SEQ ID NO: 1004)其中每一個A、C、U和G是核糖核苷酸，并且每一個連續(xù)核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵與下一個核糖核苷酸連接；其中正義鏈包括，從 5，末端數(shù)，在位點 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19的非修飾核糖核苷酸，位點18的L-脫氧胞苷，和在5’末端共價連接的反向脫氧脫堿基(iB);并且其中反義鏈包括，從5’末端數(shù)，在位點2、4、6、8、11、13、15、17和19的2’-O-Me糖基修飾核糖核苷酸，以及在位點1、3、5、7、9、10、12、14、16和18的非修飾核糖核苷酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療的藥物中的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療患有眼部疾病、眼部障礙、眼部損傷、視野喪失的患者；或提供眼部神經(jīng)保護的藥物中的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷與視覺系統(tǒng)組織的病理性異常/變化有關(guān)
5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷是神經(jīng)變性。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷有關(guān)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷由眼內(nèi)壓(IOP)升高介導。
8.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中所述視野喪失與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞死亡相關(guān)。
9.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷選自眼部神經(jīng)病變、眼內(nèi)壓升高(Ι0Ρ)、青光眼、干眼癥、糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、老年性黃斑變性(AMD)、視神經(jīng)炎、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、視網(wǎng)膜分枝靜脈阻塞、缺血性視神經(jīng)病變、視神經(jīng)損傷、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(R0P)、色素性視網(wǎng)膜炎(RP)、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞變性，黃斑變性、遺傳性視神經(jīng)病變、代謝性視神經(jīng)病變，以及由于毒劑或藥物不良反應(yīng)或維生素缺乏癥引起的視神經(jīng)病變。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷是青光眼。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷是缺血性視神經(jīng)病變。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中所述缺血性視神經(jīng)病變是前部缺血性視神經(jīng)病。
13.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中所述缺血性視神經(jīng)病變是后部缺血性視神經(jīng)病變。
14.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷是遺傳性視神經(jīng)病變。
15.根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中所述眼部疾病、眼部障礙或眼部損傷是干眼癥。
16.包括根據(jù)權(quán)利要求1的化合物和藥學可接受賦形劑或載體或其混合物的組合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物在制備用于在眼部細胞中下調(diào)CASP2基因表達的藥物中的用途，其中所述眼部細胞選自淚腺腺泡細胞、淚腺導管細胞、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(RGC)、視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細胞、脈絡(luò)膜細胞、角膜細胞、睫狀突細胞和小梁網(wǎng)細胞或其組合。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述化合物最終存在濃度按組合物體積計為約5 μ g/ μ I 至約 60 μ g/ μ I。
19.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述組合物被配制為霜、泡沫、膏、軟膏、乳劑、液體溶液、滴眼劑、凝膠、噴霧、懸浮液、微乳液、微球、微囊劑、納米球、納米粒子、脂質(zhì)囊泡、脂質(zhì)體、聚合物囊泡、眼罩或隱形眼鏡。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其中所述組合物被配制成液體溶液。
21.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其中所述組合物被配制成用于玻璃體內(nèi)注射。
22.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物在制備用于延遲、抑制或預防視網(wǎng)膜細胞的死亡或?qū)σ暰W(wǎng)膜細胞的損傷或者用于提高視網(wǎng)膜細胞的存活的藥物中的用途。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的用途，其中所述視網(wǎng)膜細胞是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抑制受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失的組合物和方法，包括向受試者眼睛表面局部無創(chuàng)傷性地向受試者眼睛表面施用眼科組合物，所述眼科組合包含治療有效量的至少一種siRNA；所述siRNA下調(diào)與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞缺失相關(guān)的目標基因表達，從而抑制受試者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的缺失。本發(fā)明的方法還涉及一種具有結(jié)構(gòu)基序的化學修飾siRNA化合物的用途，所述結(jié)構(gòu)基序下調(diào)在哺乳動物眼睛視網(wǎng)膜組織表達的人類基因的表達。
文檔編號C12N15/113GK102994500SQ201210278029
公開日2013年3月27日 申請日期2009年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月22日
發(fā)明者E·法因施泰因, E·艾伯特, I·梅特, A·巴-伊蘭, I·斯皮瓦克, H·卡林斯基, N·斯拉格爾 申請人:夸克醫(yī)藥公司