專利名稱：魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7及其應(yīng)用，屬植保技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
魔芋屬天南星科魔芋屬的多年生草本植物，可大量提取葡甘露聚糖的植物，魔芋大田種植產(chǎn)量高，有很好的經(jīng)濟效益，我國西南諸省大面積栽培，并已成為該地區(qū)的主要經(jīng)濟作物，也是該地區(qū)調(diào)整農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)、農(nóng)民脫貧致富、振興地方經(jīng)濟的有效途徑之一。魔芋細菌性軟腐病在全世界范圍內(nèi)發(fā)病都很嚴重，在大田生長期和儲藏期周年發(fā)生為害，魔芋植株感染軟腐病后葉片或球莖變軟，發(fā)黑腐爛，并有惡臭味，從病部流出帶菌汁液又侵染新的 植株，使之發(fā)病，嚴重時引起成片倒苗。魔芋軟腐病主要由胡蘿卜軟腐果膠桿菌(Pectobacterium carotovora subsp.carotovora, Pcc)引起的細菌性病害,廣泛分布在我國大部分魔芋種植地區(qū)。隨著魔芋種植面積的逐年擴大，魔芋軟腐病的發(fā)生也不斷加劇，造成的損失一般在30%-50%，嚴重者可達80%甚至絕收，嚴重影響芋農(nóng)種植魔芋的積極性，防礙了西南地區(qū)地方經(jīng)濟的發(fā)展。魔芋細菌性軟腐病屬于土傳病害，防治十分困難，主要采用玉米和魔芋間栽種植，以及實行輪作、建立無病種薯基地來控制等農(nóng)業(yè)栽培措施進行防治軟腐病的發(fā)生?；瘜W(xué)防治由于缺少高效防治軟腐病的藥劑，土壤消毒劑不易降解，高殘留、對人畜極不安全；破壞土壤結(jié)構(gòu)、造成土壤酸化等，加之沒有魔芋軟腐病抗病品種，生物防治魔芋軟腐病顯得極其重要，國內(nèi)許多學(xué)者從多種作物根際篩選根際細菌，用于溫室和田間防治魔芋細菌性軟腐病，主要生防細菌有芽孢桿菌、溶桿菌、放線菌等，但生防效果不盡理想。從魔芋植株體內(nèi)分離內(nèi)生細菌，針對細菌性軟腐病開展室內(nèi)抑菌、促生和田間防效試驗，篩選到一株對魔芋細菌性軟腐病和十字花科蔬菜根腫病具有較好效果的生防菌株。十字花科作物包括油菜和大宗蔬菜，如大白菜、甘藍、花椰菜、苤藍、莖芥菜、芥菜、蘿卜、小白菜、瘤芥菜(榨菜)及特種作物板藍根和山葵等，每年發(fā)生根腫病面積達2000多萬畝(次)，特別是一旦發(fā)生，病害逐年加重，十字花科植物根腫病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae woron.)侵染引起。十字花科根腫病對蔬菜產(chǎn)量影響極大，十字花科作物，最嚴重的可能會導(dǎo)致減產(chǎn)70% — 80%，甚至讓菜農(nóng)顆粒無收，不能在同地塊種植十字花科作物。由于近些年來，種子和蔬菜種苗大范圍、遠距離調(diào)運，根腫病發(fā)生范圍逐年擴大，西自新疆的霍爾果斯、西藏的察隅，東至臺灣，北自黑龍江，南至海南島全國各省區(qū)均有分布。特別是大棚溫室育苗和漂浮育苗更加快了病害流行速度，致使新的病區(qū)只能種植一年，第二年就無法種植。病菌能在土壤中存活10年以上，且可以通過侵染雜草而得到繁殖，導(dǎo)致輪作不能很好地起到防病作用，水旱輪作導(dǎo)致病菌均勻擴散，還會加重病害。目前，防治上述病害的措施主要有檢疫，農(nóng)業(yè)栽培措施，抗病品種、化學(xué)防治措施，但其防治效果不理想。經(jīng)文獻檢索，尚未見利用魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7制備生物制劑，并應(yīng)用于大田防治魔芋細菌性軟腐病和十字花科蔬菜根腫病的公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種高效、無毒、安全無殘留的魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7及其應(yīng)用。本發(fā)明的成團泛菌(Pantoea agglomerans)l_7菌株已經(jīng)保藏。保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址北京市朝陽區(qū)北晨西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2012年5月28日；保藏號CGMCC NO :6160。成團泛菌(Pantoea agglomerans) 1-7菌株,系本發(fā)明人于2010年從從魔芋植株體內(nèi)分離的內(nèi)生細菌，國內(nèi)未見報道，經(jīng)形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)性狀、常規(guī)生理生化、Biolog全自動鑒定系統(tǒng)測定和16S rDNA序列測定及其系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析,該生產(chǎn)菌株成團泛生菌(Pantoeaagglomerans) 1-7 是一個新菌株。本發(fā)明的成團泛菌(Pantoea agglomerans) 1-7菌株用于大田防治十字花科蔬菜根腫病制劑的制備中。即通過常規(guī)的液體或固體培養(yǎng)，獲得包括細菌菌體培養(yǎng)物；通過常規(guī)的液體發(fā)酵生產(chǎn)，加入填充劑、板框過濾、打漿、干燥、粉碎，制成可濕性粉劑。本發(fā)明具有高效、無毒、安全無殘留，生防細菌1-7菌株活菌控病、促生效果較好，綜合性狀較好，易于工業(yè)化生產(chǎn)的特點；生產(chǎn)菌株成團泛生菌(Pantoea agglomerans) 1-7能夠用于制備大田十字花科蔬菜根腫病制劑的制備中。
具體實施例方式本發(fā)明的成團泛菌(Pantoea agglomerans)l_7菌株已經(jīng)保藏。保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址北京市朝陽區(qū)北晨西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2012年5月28日；保藏號CGMCC NO :6160。本發(fā)明的成團泛菌(Pantoea agglomerans) 1-7菌株用于大田防治十字花科蔬菜根腫病制劑的制備中。即通過常規(guī)的液體或固體培養(yǎng)，獲得包括細菌菌體培養(yǎng)物；通過常規(guī)的液體發(fā)酵生產(chǎn)，加入填充劑、板框過濾、打漿、干燥、粉碎，制成可濕性粉劑。上述生防菌劑在防治魔芋細菌性軟腐病方面的應(yīng)用方法為每畝4升1-7菌劑，稀釋100倍，進行魔芋浸種和灌根處理。對十字花科根腫病主要采用每畝用1-7菌株制劑3升，稀釋50或100倍進行灌根處理。試驗證明，該菌劑能顯著降低魔芋軟腐病的發(fā)生，并兼有促進魔芋植株生長；該菌劑可以稀釋100倍后在魔芋播種時浸種處理，結(jié)合發(fā)病初期灌根使用，或者與有機肥在魔芋播種時同時伴種施入，對魔芋軟腐病的防效在70%以上。對十字花科蔬菜根腫病，生防菌劑1-7大白菜種子經(jīng)浸種處理、結(jié)合生長前期灌根使用，能有效地防治十字花科蔬菜根腫病，同時對大白菜促生效果明顯，下面用實施例來進一步詳述本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實施例一生防菌劑1-7對魔芋細菌性軟腐病的抑制活性(一 )生防菌株的離體抑菌試驗I.供試材料I. I 供試菌劑成團泛菌(Pantoea agglomerans) 1-7。I. 2供試病原菌
植物病原細菌(魔芋細菌性軟腐病菌、大白菜軟腐病、馬蹄蓮軟腐病、水稻白葉枯病菌、水稻細菌性條斑病菌)，病原真菌(辣椒疫霉菌、三七根腐病菌、煙草黑脛病菌)詳見表1，均由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物多樣性與病害控制國家工程中心細菌研究室提供。I. 3供試試劑和培養(yǎng)基NA培養(yǎng)基(蛋白胨5g，牛肉浸膏3g，酵母浸膏l(xiāng)g，蔗糖10g，瓊脂17g，水IOOOmL,pH7. O) ;PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200g，瓊脂15g，葡萄糖15g，水IOOOmL)。2.試驗方法拮抗試驗采用平板對峙I)菌懸液的制備將得到的芽孢桿菌和病原細菌分別接入裝有50 ml的NA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，置于28 °C、160 r/min搖床上培養(yǎng)48 h。將菌懸液用無菌水適當稀釋，搖均勻后，用600 nm波長、I cm比色皿測定OD值。測定時用無菌NA培養(yǎng)基作空白對照。 用無菌水稀釋使得菌懸液的為OD值O. 5，待用。2)對病原細菌抑菌作用的測定取上步所得病原細菌菌懸液200 μ 加入培養(yǎng)皿中，將冷卻至45 °C左右的NA培養(yǎng)基倒入已加過病原細菌菌懸液的培養(yǎng)皿中，混勻。等完全凝固后，放置牛筋環(huán)于培養(yǎng)基表面，取所得成團泛菌菌懸液200 μ 加入牛筋環(huán)，28 0C中培養(yǎng)48-72 ho觀察、記錄試驗結(jié)果。3)對病原真菌抑菌作用的測定在PDA平板中心接種植物病原菌菌盤(直徑5mm)，兩側(cè)2 cm處接種成團泛菌菌株。置28 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察抑菌情況。試驗結(jié)果表明成團泛菌1-7不同致病力的軟腐病菌拮抗效果不同，最大抑菌圈直徑2. 23 cm，同時還對大白菜軟腐病、馬蹄蓮軟腐病細菌有拮抗活性(一般生防菌拮抗病原菌的抑菌圈> I. Ocm,即可為較強的抑菌能力)，以及水稻、煙草、辣椒等病原細菌和真菌有抑菌活性。因此，成團泛菌1-7具有成為高效生防菌的巨大潛力。表I生防菌劑1-7抑菌譜測定
權(quán)利要求
1.魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7,特征在于生產(chǎn)菌株成團泛菌(Pantoeaagglomerans)l-7已于2012年5月28日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏號CGMCC NO. 6160。
2.權(quán)利要求I所述的魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7，在制備大田防治魔芋細菌性軟腐病和十字花科蔬菜根腫病制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7及其應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的成團泛菌(Pantoea agglomerans)1-7已于2012年5月28日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號CGMCC N0.6160。本發(fā)明的魔芋內(nèi)生細菌成團泛菌菌株1-7，用于大田防治魔芋細菌性軟腐病和十字花科蔬菜根腫病制劑的制備中。本發(fā)明具有高效、無毒、安全無殘留，1-7菌株活菌控病、促生效果較好，綜合性狀較好，易于工業(yè)化生產(chǎn)的特點，其成團泛生菌(Pantoea agglomerans)1-7能夠用于制備大田防治十字花科蔬菜根腫病的制劑中。
文檔編號C12R1/01GK102899266SQ20121024105
公開日2013年1月30日 申請日期2012年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月12日
發(fā)明者姬廣海, 魏蘭芳, 王永吉, 何月秋, 李成云 申請人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)