含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明是關于一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品及其制備方法。本發(fā)明提供的大豆寡糖產(chǎn)品，其包含大豆的酸可溶性糖及益生菌，其中該大豆的酸可溶性糖包含果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖，其中棉子糖及水蘇糖兩者的重量和占46％以上，果糖占8.5％以下，及葡萄糖占1.0％以下，以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。本發(fā)明也提供一種大豆寡糖產(chǎn)品的制備方法包括以水在pH3-6及溫度50-70℃萃取大豆原料以獲得含有大豆的酸可溶性糖的萃取物，及對該萃取物接種可分解單糖與雙糖但不分解三糖與四糖的益生菌進行發(fā)酵。
【專利說明】含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明是關于一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品及其制備方法，具體而言，本發(fā)明是將大豆原料經(jīng)酸萃取，并去除雜質(zhì)和脫鹽等步驟后，接種益生菌進行發(fā)酵，獲得一含益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品。
【背景技術】
[0002]腸道是人體主要的消化器官，也是重要的免疫系統(tǒng)。腸道中的細菌種類非常多，有好菌也有壞菌，已有許多研究顯示腸道中益生菌的增加，可防止壞菌的生長，改善腸道蠕動、增加免疫力及預防癌癥發(fā)生等保健效果(Gibson and Roberfroid, 1995)。此外,研究也發(fā)現(xiàn)腸道菌可控制脂質(zhì)的代謝，當腸道菌相失去平衡，會引發(fā)全身性的低度慢性發(fā)炎，進而導致肥胖，增加代謝癥候群等疾病發(fā)生的機率(Cani and Delzenne, 2009)。腸道菌對人體健康的影響可見一斑。而一般可以透過補充有益于腸道健康的保健食品，來改善腸道的環(huán)境，這類的保健食品可分成三種:益生菌(probiotics)、益菌生(prebiotics)以及同時具有益生菌與益菌生的合生素(synbiotics)。
[0003]大豆寡糖是常見的益菌生(prebiotics),天然存在的是由棉子糖(raffinose)、水蘇糖(stachyose)等α -半乳糖苷類(a-galactoside)及鹿糖(sucrose)所組成。是一種低甜度、低熱量的甜味劑，能替代蔗糖應用在功能性食品或低熱量食品中，由于不會增加胰島素的分泌量，糖尿病人也可安心食用。其主要成分在小腸內(nèi)不會被吸收，而在菌叢較多的大腸部位才會被利用。研究發(fā)現(xiàn)，對人體健康有害的細菌如大腸桿菌等，不僅無法利用寡糖，反而會被抑制生長。另一方面，大豆寡糖在大腸中發(fā)酵或部份發(fā)酵，產(chǎn)生短鏈旨肪酸(short chain fatty acids, SCFA),醋酸鹽(acetate)、丙酸鹽(propionate)及丁酸鹽(butyrate)等代謝產(chǎn)物，可以直接促進腸道蠕動，使排便順暢。醋酸鹽或丁酸鹽并且可以抑制有害菌的生長繁殖，進而改變腸道菌相，使腸道成為有利于好菌生長的良好環(huán)境(Campbell et al., 1997 ；Bang et al.,2007 ；Su et al.,2007 ；Smiricky-Tjardes et al.,2003)。
[0004]一般而言，益生菌被認定為活菌本身，但是近年來發(fā)現(xiàn)某些益生菌所衍生的活性物質(zhì)，也有促進宿主健康的功效，因此目前已把活菌體、死菌體、菌體的萃取物，甚至其代謝產(chǎn)物等，都歸納屬于益生菌的范圍。乳酸菌兼具多樣生理功能以及高度食用安全的特性，因此成為現(xiàn)今保健產(chǎn)品開發(fā)的重要素材(陳等人，2007)。
[0005]乳酸菌是益生菌中最重要的一群，人類長久以來有飲用發(fā)酵乳品的習慣，乳酸菌被認為是相當安全的一種菌種，且是腸內(nèi)有益菌的代表I性細菌。當乳酸菌進入腸道后，可刺激腸道相關淋巴組織特異性與非特異性的免疫反應，效果會受到菌體黏著在腸腔時與淋巴組織接觸的程度影響。一般認為乳酸菌必須黏著于腸道并繁殖才具有效用。有些實驗顯示，停止攝食乳酸菌后，在幾周內(nèi)乳酸菌便會消失，并不會持續(xù)存在于腸道內(nèi)。但是短暫的黏著，還是有刺激腸道免疫系統(tǒng)的效果，尤其是對服用抗生素或腹瀉感染的對象，攝食乳酸菌后可幫助病人腸內(nèi)菌叢的重建，而回復免疫系統(tǒng)的平衡。乳酸菌借著促進宿主內(nèi)部防御機制的功能和改善腸道菌相，可作為腸道異常和發(fā)炎反應等疾病上的治療。有研究指出，愈早攝食乳酸菌，愈有機會與宿主細胞上的接受器交互作用，在上皮細胞黏膜建立據(jù)點，成為共生的菌群(Parvez et al.，2006)。由于乳酸菌在腸道中扮演非常關鍵的角色，直接影響到人類的健康，因此乳酸菌產(chǎn)品或利用乳酸菌進行生物轉(zhuǎn)化的衍生性產(chǎn)品，已成為市場上的熱門商品(陳等人，2007)。目前于市售乳酸菌商品，較常使用的菌種以乳酸桿菌(Lactobacillus sp.)與雙歧桿菌(Bifidobacterium sp.) 二屬居多，而胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)也是其中常見的益生菌菌株(Parvez et al., 2006) ?
[0006]目前常見的合生素(synbiotics)的調(diào)制方法是將益生菌(probiotics)添加至益菌生(prebiotics)中，例如日本專利JP2-200168揭示了一種于制造豆腐等大豆加工食品過程中，利用所產(chǎn)生的含糖質(zhì)的大豆浸潰水進行乳酸菌發(fā)酵，而制造乳酸飲料的方法，但是該方法所使用的大豆浸潰水由于以水萃取，無法去除豆臭等大豆特有異味的問題，同時由于溶出物相當有限，就經(jīng)濟效益而言，難說令人滿意。也有建議將益生菌(如乳酸菌等)添加至益菌生(如大豆寡糖等)中而制造合生素的方法，例如韓國專利KR20020043078揭示了一種益生菌復合物，中國專利CN101406489A揭示了一種微生態(tài)復合菌劑及其制備方法以及CN101496583A揭示了一種含有益生菌的營養(yǎng)食品。該三專利案均是將特定的乳酸菌組合物以特定比例添加至大豆寡糖中而成，但是對于大豆寡糖的組成并未具體界定，特別是對于腸內(nèi)細菌有選 擇性增殖作用的棉子糖與水蘇糖的含量，完全未述及。另外，中國臺灣發(fā)明專利252759揭示了一種發(fā)酵大豆萃取液的制備方法，以熱水溶出方式取得大豆萃取液后，加入乳酸菌培養(yǎng)，將最終發(fā)酵液經(jīng)加熱殺菌及過濾處理而獲得具有免疫調(diào)節(jié)功能的活性物質(zhì)，亦即所制備者僅為益菌生物質(zhì)。
[0007]由上述可知，現(xiàn)今對于合生素的調(diào)制方法，仍采用將益生菌添加至益菌生中的方式，而本發(fā)明案的發(fā)明人則是針對上述問題，提供一種由將益生菌接種至益菌生，進行發(fā)酵，而此發(fā)酵產(chǎn)品可直接作為合生素的方法。
[0008]【【背景技術】文獻】
[0009]專利文獻
[0010]1.日本專利 JP2-200168
[0011]2.中國專利 CN101406489A
[0012]3.中國專利 CN101496583A
[0013]4.韓國專利 KR20020043078
[0014]5.中華民國發(fā)明專利252759
[0015]非專利文獻
[0016]1.Bang, Μ.H., Chio, 0.S.and Kim, ff.K.2007.Soy oligosaccharide increasesfecal bifidobacteria counts, short — chain fatty acids, andfecal lipidconcentrations in young Korean women.2007.J.Med.Food.10:366-370.[0017]2.Campbell, J.M., Fahey, G.C.and Wolf, B.ff.1997.Selected indigestibleoligosaceharides affect large bowel mass, cecal and fecal short chain fattyacids, pH and microflora in rats.J.Nutr.127: 130-136.[0018]3.Cani, P.D.and Delzenne, N.M.2009.1nterplay between obesity andassociated metabolic disorders:new insights into the gut microbiota.Cur.0pin.Pharma.9:737-743.[0019]4.Gibson，G.R.and Roberfroid, Μ.B.1995.Dietary modulation of thehuman colonic microbiota !introducing the concept of prebiotics.J.Nutr.152:1401-1412.[0020]5.Parvez, S., Malik, K.A., Kang, S.A.and Kim, Η.Y.2006.Probiotics and theirfermented food products are beneficial for health.J.Appl.Micr0.100:1171-1185.[0021]6.Smiricky-Tjardes，M.R.，F(xiàn)lickinger, E.A.，Grieshop，C.M.，Bauer, L L，Murphy,M.R.and Fahey,G.C.2003.1n vitrofermentation characteristics of selectedoligosaccharides by swinefecal microflora.J.Animal Sc1.81:2505-2514.[0022]7.Su, P.，Henriksson, A.and Mitchell，H.2007.Selected prebiotics supportthe growth of probiotic mono-cultures in vitr0.Anaerobe.13:134-139.[0023]8.陳慶源、黃崇真、邱雪惠、廖啟成。2007。乳酸菌之保健功效與產(chǎn)品開發(fā)。食品生技60-68。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0024]本發(fā)明的一主要目的在于提供一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品，其包含大豆的酸可溶性糖及益生菌，其中該大豆的酸可溶性糖包含果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖，其中棉子糖及水蘇糖兩者的重量和占46%以上，果糖占8.5%以下，及葡萄糖占1.0%以下，以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。
[0025]本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品的制備方法，其包括以水在PH3-6及溫度50-70°C萃取大豆原料以獲得含有大豆的酸可溶性糖的萃取物，及對該萃取物接種可分解單糖與雙糖但不分解三糖與四糖的益生菌進行發(fā)酵。
[0026]較佳的，本發(fā)明的大豆寡糖產(chǎn)品中的棉子糖及水蘇糖兩 者的重量和為49-85%，及葡萄糖占0.5%以下，以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。更佳的，棉子糖及水蘇糖兩者的重量和為75% -85%,以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。
[0027]較佳的，本發(fā)明的大豆寡糖產(chǎn)品中的益生菌為可分解單糖與雙糖，且不分解三糖與四糖的益生菌。
[0028]較佳的，該益生菌為乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳桿菌(Lactococcus Iactis)或干酪乳桿菌(Lactobacillus casei),其中以胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)更佳。
[0029]較佳的，本發(fā)明的大豆寡糖產(chǎn)品中的益生菌為選自BCRC20270 (Saccharomycescerevisiae)、21403、21468、21469、21727、21480(Kluyveromyces marxianus)及21777 (Pichia stipitis)的酵母菌。
[0030]較佳的，本發(fā)明的大豆寡糖產(chǎn)品中的益生菌的含量為1.0xlO9CFU/g-9.9X10lclCFU/g。
[0031]較佳的，本發(fā)明的大豆寡糖產(chǎn)品中的大豆的酸可溶性糖是將大豆原料以水在pH為3-6及溫度50-70°C的條件萃取獲得的。[0032]較佳的，該大豆原料是選自大豆、全脂大豆片、脫脂大豆片、全脂大豆粉、脫脂大豆粉、或大豆殘渣，其中該大豆殘渣是以大豆為原料的食品制程所產(chǎn)生的。更佳的，該大豆原料為脫脂大豆片或脫脂大豆粉。
[0033]在本發(fā)明的一實施方案中，本發(fā)明的含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品是作為食品添加劑。
[0034]在本發(fā)明的另一實施方案中，本發(fā)明的含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品是作為飼料添加劑。
[0035]依本
【發(fā)明內(nèi)容】
所完成的一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品的制備方法，包括下列步驟:
[0036](a)以水在pH3_6的酸性條件下萃取大豆原料；
[0037](b)對步驟(a)的萃取混合物進行固液分離，得到酸可溶性糖液；
[0038](c)調(diào)整該酸可溶性糖液的pH值至堿性并加入植酸沉淀劑，以形成植酸鹽沉淀，接著進行固液分離，得到大豆粗糖液；
[0039](d)去除上述大豆粗糖液中的蛋白質(zhì)，接著去除其中的鹽類，而得到一脫鹽大豆糖液；
[0040](e)將上述脫鹽大豆糖液接種益生菌進行發(fā)酵，以及收集該發(fā)酵液；
[0041]其中，該益生菌分解單糖、雙糖而不分解三、四糖。
[0042]較佳的，步驟(a)中的萃取于50至70°C的溫度進行。
[0043]較佳的，步驟(C)中的該酸可溶性糖液的pH值被調(diào)整至8-9，及該植酸沉淀劑為碳酸鈣。更佳的，該碳酸鈣的用量為0.1-0.5%，以該酸可溶性糖液的重量為基準。
[0044]較佳的，本發(fā)明的方法進一步包含，在步驟(C)之前，對步驟(b)得到的酸可溶性糖液進行濃縮。
[0045]較佳的，本發(fā)明的方法進一步包含，在步驟(d)之前，對步驟(C)得到的大豆粗糖液進行濃縮。
[0046]較佳的，本發(fā)明的方法進一步包含，在步驟(e)之前，對步驟(d)得到的脫鹽大豆糖液進行濃縮。
[0047]較佳的，本發(fā)明的方法進一步包含對步驟(e)得到的發(fā)酵液進行濃縮，而得到一糖漿形式的產(chǎn)品。
[0048]較佳的，本發(fā)明的方法進一步包含對步驟(e)得到的發(fā)酵液進行干燥，而得到一粉末形式的產(chǎn)品。
[0049]較佳的，步驟(d)以微過濾膜處理上述大豆粗糖液而去除其中的蛋白質(zhì)，接著對所獲得的過濾液進行電透析處理而去除其中的鹽類。更佳的，該微過濾膜具有0.3μπι的孔徑。
[0050]較佳的，本發(fā)明的方法所使用的大豆原料是選自大豆、全脂大豆片、脫脂大豆片、全脂大豆粉、脫脂大豆粉、或大豆殘渣，其中該大豆殘渣是以大豆為原料的食品制程所產(chǎn)生的。
[0051]在本發(fā)明的一實施方案中，步驟(e)所得到的發(fā)酵液被作為食品添加劑。
[0052]在本發(fā)明的另一實施方案中，步驟(e)所得到的發(fā)酵液被作為飼料添加劑。
[0053]實施方式[0054]本發(fā)明揭示了 一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品，其制備方法包含以酸液萃取大豆原料得到一酸可溶性糖液，進一步精制后，選擇具備益生菌性質(zhì)且選擇性利用單、雙糖而不利用三、四糖的微生物進行發(fā)酵，使得發(fā)酵后的糖液中的棉子糖和水蘇糖的相對濃度顯著的提升，同時也因為益生菌的生長而使得最終產(chǎn)品為一種合生素。
[0055]于本發(fā)明中所使用酸萃取方式可以取得大約脫脂大豆粉或脫脂大豆片的15重量％的酸可溶性糖。該酸可溶性糖液包含果糖、萄葡糖、蔗糖、棉子糖和水蘇糖，其中有約50%為蔗糖及單糖，另有50%左右為具有機能性的棉子糖及水蘇糖。由于其中蔗糖所占比例頗高(約40%，w/w)，無法直接以噴霧干燥方式制成粉末產(chǎn)品。因此本發(fā)明以微生物發(fā)酵方式將糖液中的果糖、萄葡糖及蔗糖轉(zhuǎn)化，但同時不分解棉子糖和水蘇糖，即可使得發(fā)酵后的糖液中的棉子糖和水蘇糖的相對濃度顯著的提升。
[0056]于本發(fā)明的一較佳具體實施例中以大豆糖漿BrixlO至30為培養(yǎng)基，接種乳酸菌(105CFU/mL)于37°C培養(yǎng)2至3天，乳酸菌在增殖過程會選擇性分解雙糖及單糖，并保留住大部分的三糖及四糖，此發(fā)酵培養(yǎng)基的乳酸菌可增殖到相當?shù)木?101(lCFU/mL)。最后得到的發(fā)酵液、發(fā)酵濃縮液或噴霧干燥方式制成的粉末，即是同時含有益生菌(乳酸菌)及益菌生的合生素產(chǎn)品。
[0057]本發(fā)明所使用的大豆原料，并無特別限定，可例舉大豆、全脂大豆片、脫脂大豆片、全脂大豆粉、脫脂大豆粉、或其它以大豆為主要原料的加工制程殘渣，如:豆腐或豆?jié){制程所殘余下來的大豆殘渣(okara)等。較佳為脫脂的大豆片及脫脂的大豆粉。
[0058]本發(fā)明所使用的益生菌，只要為可分解單糖與雙糖，且不分解三糖與四糖者即可，例如乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii)、胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)、乳酸乳桿菌(Lactococcus Iactis)或干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)等。該益生菌也可為選自 BCRC20270 (Saccharomyces cerevisiae)、21403、21468、21469、21727>21480 (Kluyveromyces marxianus)及 21777 (Pichia stipitis)的酵母菌。以脫鹽大豆粗糖液接種益生菌進行發(fā)酵后，棉子糖及水蘇糖的殘留量為75%以上者為佳，尤以棉子糖及水蘇糖對總糖的比例達85%為更佳。
[0059]由于希望益生菌黏附于腸道后開始發(fā)生作用，視需要，由本發(fā)明的方法所制得的含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品，可進一步進行濃縮、干燥等加工步驟后，直接與被覆劑調(diào)配作成膜衣制劑，或與此領域中所已知的添加劑(例如黏著劑、賦形劑、可塑劑、潤滑劑、遮蔽齊U、著色劑及防腐劑等的I種或I種以上)組合，作成例如錠劑、膠囊劑、散劑、細粒劑、顆粒齊L1、舌片劑等。
[0060]本發(fā)明可使用的被覆劑、黏著劑、賦形劑、可塑劑、潤滑劑、遮蔽劑、著色劑及防腐劑等，均為此項【技術領域】中所已知，且可為此項【技術領域】者，根據(jù)需要適合選用，無進一步限定的必要。
[0061]根據(jù)本發(fā)明所制得的含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品，不僅本身可作為健康食品，其亦可作為食品添加劑或飼料添加劑。其添加方式及添加量，可由此項【技術領域】者，根據(jù)需要，選擇適當方式，以適當量添加使用。
[0062]本發(fā)明將以下列實施例進一步具體說明，惟這些實施例的揭示不應視為任何限制本發(fā)明之意圖?！揪唧w實施方式】
[0063]實施例1
[0064]1.大豆寡糖液的制備，包括以下步驟:
[0065](I)大豆原料酸萃取
[0066]大豆酸可溶性糖液是由大豆原料經(jīng)酸萃取而得的酸可溶性糖液。將IOOKg脫脂大豆粉(購自大統(tǒng)益股份有限公司的高蛋白黃豆片)加入四倍量的水(w/v)并以16wt%鹽酸水溶液調(diào)整溶液PH值至3至6，于50至70°C加熱攪拌5?30分鐘后(在此實施例中攪拌10分鐘)，以壓榨機進行固/液分離，收集第一次的壓榨酸液，所得的壓榨渣再以同樣的條件萃取一次，再進行第二次的壓榨分離，將兩次壓榨液混合即獲得酸萃取糖液，濃度約Brix(糖度)6。于大量生產(chǎn)時，可多批次制備較多量的酸萃取糖液，適度濃縮后，再進行后續(xù)大批量的精制處理。
[0067](2)大豆酸可溶性糖液的雜質(zhì)去除
[0068]大豆酸可溶性糖液可以一般已知的固液分離方式(例如:離心或過濾)進一步去除不溶的渣，取得的澄清液被加入40wt% NaOH水溶液將pH調(diào)整至8-9，再加入0.1至0.5%(w/w)碳酸鈣(也可使用氯化鈣、碳酸鎂或氯化鎂)，并加熱至90°C、10分鐘，即可將萃取液中的植酸以鹽類形式沉淀，再經(jīng)固液分離(離心)即得澄清大豆粗糖液，最后將粗糖液PH調(diào)至7。
[0069](3)精致化處理:
[0070]此步驟的目的是將粗糖液中的蛋白質(zhì)與鹽分去除。一種合適操作的方法是先以微過濾膜(孔徑為0.3 μ m)處理粗糖液，然后過濾液再使用電透析處理。將280Kg濃縮的大豆粗糖液(Brixl8.6)，經(jīng)微過濾膜處理4小時后，獲得270Kg澄清液(Brixl6.3)，回收率為85% (蛋白質(zhì)含量被降低)；而后繼續(xù)以電透析循環(huán)處理(Micro Acilyzer G5, AsahiC0.),導電度從32mS/em下降至10mS/cm,鹽含量也自1.34%減至0.07 透析液回收量260Kg(Brixl3.9)，回收率為80%，估算鹽分的去除率高達95%，可溶固形物(Brix)的保留率69.4%。將脫鹽后的大豆糖液進一步濃縮至Brixl5，即可供下一階段的發(fā)酵使用。
[0071]2.以脫鹽大豆糖液培養(yǎng)益生菌
[0072]由財團法人食品工業(yè)發(fā)展研究所BCRC菌種數(shù)據(jù)庫中，篩選可以分解單、雙糖但不分解三、四糖之乳酸菌及酵母菌。
[0073]在乳酸菌發(fā)酵方面，透過乳酸菌發(fā)酵將脫鹽后的大豆糖液中的蔗糖、果糖與葡萄糖成份轉(zhuǎn)化，使脫鹽大豆糖液的單、雙糖含量降低，進而提升棉子糖及水蘇糖等寡糖的相對濃度。此處所使用的益生菌可以是Pediococcus、Lactobacillus、Bifidobacterium等所屬的菌株，經(jīng)適當?shù)鼗罨?，即可被接入脫鹽大豆糖液中，于37°C培養(yǎng)24至72小時后(此時已達穩(wěn)定期(stationary phase)),收集發(fā)酵液即得。
[0074]在本實施例中選擇Pediococcus acidilactici BCRCl 1064 或 Lactobacillusdelbrueckii BCRC12297 或 Lactobacillus plantarum BCRC12327 或 Lactobacillusfermentum BCRC10360 或 Lactococcus lactis BCRC12312 或 Lactobacillus caseiBCRC10697等乳酸菌進行脫鹽大豆糖液的發(fā)酵培養(yǎng)，首先于甘油保存管內(nèi)取一接種環(huán)的菌量，接入5毫升MRS培養(yǎng)基，并于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，然后取其培養(yǎng)菌液以1% (v/v)接菌量接入10毫升MRS培養(yǎng)基，再于37°C培養(yǎng)18小時后此菌液即為后續(xù)脫鹽大豆糖液發(fā)酵培養(yǎng)的種菌。而后利用搖瓶培養(yǎng)，以500mL有溝搖瓶，盛裝300mL濃度Brixl5的脫鹽大豆糖液作為培養(yǎng)基，接入1% (v/v)種菌，于37°C培養(yǎng)24小時后，所得的發(fā)酵液經(jīng)離心(3000rpm，10分鐘)去除菌體，取得上清液后，以高效率液相層析儀搭配Hibar250-4LiChrosorb NH2 分離管柱及 ELSD (Evaporative Light Scattering Detector)檢測器，分析發(fā)酵液中果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖等糖類的含量。結果被顯示于表
I。從表I可以看出這些乳酸菌對脫鹽大豆糖液中的葡萄糖有相當好的轉(zhuǎn)化效果，可以完全消耗利用。果糖部分有22至62%的消耗量。而蔗糖的轉(zhuǎn)化方面各乳酸菌消耗利用效率不一,其中Lactobacillus plantarum BCRC12327有較好的轉(zhuǎn)化效果。棉子糖及水蘇糖兩種寡糖殘留量，則各菌株至少都有76%以上。在棉子糖及水蘇糖的重量和對總糖重量的比例部分，Lactobacillus plantarum表現(xiàn)相對較佳(參見表I)。
[0075]表1、比較幾種乳酸菌的糖質(zhì)轉(zhuǎn)化效果
[0076]
【權利要求】
1.一種含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品，包含大豆的酸可溶性糖及益生菌，其中該大豆的酸可溶性糖包含果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖，其中棉子糖及水蘇糖兩者的重量和占46%以上，果糖占8.5%以下，及葡萄糖占1.0%以下，以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。
2.如權利要求1所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中棉子糖及水蘇糖兩者的重量和為49-85%，及葡萄糖占0.5%以下，以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。
3.如權利要求2所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中棉子糖及水蘇糖兩者的重量和為75% -85%，以果糖、葡萄糖、蔗糖、棉子糖及水蘇糖的重量和為基準。
4.如權利要求1所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該益生菌為可分解單糖與雙糖，且不分解三糖與四糖的益生菌。
5.如權利要求4所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該益生菌為乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、胚芽乳桿菌(Lactobacillusplantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳桿菌(Lactococcus Iactis)或干釀乳桿菌(Lactobacillus casei)。
6.如權利要求5所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該益生菌為胚芽乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。
7.如權利要求4所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該益生菌為選自BCRC2027O (Saccharomyces cerevisiae)、21403、21468、21469、21727、21480 (Kluyveromyces marxianus)及 21777 (Pichia stipitis)的酵母菌。
8.如權利要求1所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該益生菌在該產(chǎn)品中的含量為1.0X 109CFU/g-9.9X 1010CFU/go
9.如權利要求1所述的產(chǎn)品，其中該大豆的酸可溶性糖是將大豆原料以水在pH為3-6及溫度50-70°C的條件萃取獲得的。
10.如權利要求9所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該大豆原料是選自大豆、全脂大豆片、脫脂大豆片、全脂大豆粉、脫脂大豆粉、或大豆殘渣,其中該大豆殘渣是以大豆為原料的食品制程所產(chǎn)生的。
11.如權利要求10所述的大豆寡糖產(chǎn)品，其中該大豆原料為脫脂大豆片或脫脂大豆粉。
12.—種如權利要求1所述的含有益生菌的大豆寡糖產(chǎn)品的制備方法，包括下列步驟: (a)以水在pH3-6的酸性條件下萃取大豆原料； (b)對步驟(a)的萃取混合物進行固液分離，得到酸可溶性糖液； (c)調(diào)整該酸可溶性糖液的PH值至堿性并加入植酸沉淀劑，以形成植酸鹽沉淀，接著進行固液分離，得到大豆粗糖液； (d)去除上述大豆粗糖液中的蛋白質(zhì)，接著去除其中的鹽類，而得到一脫鹽大豆糖液； (e)將上述脫鹽大豆糖液接種益生菌進行發(fā)酵，以及收集該發(fā)酵液； 其中，該益生菌分解單糖、雙糖而不分解三、四糖。
13.如權利要求12所述的方法，其中步驟(a)中的萃取于50至70°C的溫度進行。
14.如權利要求12所述的方法，其中步驟(a)的pH3-6是由添加鹽酸而達成。
15.如權利要求12所述的方法，其中步驟(c)中的該植酸沉淀劑為碳酸鈣、氯化鈣、碳酸鎂或氯化鎂。
16.如權利要求12所述的方法，其中步驟(c)中的該酸可溶性糖液的pH值被調(diào)整至8-9，及該植酸沉淀劑為碳酸鈣。
17.如權利要求16所述的方法，其中該碳酸鈣的用量為0.1-0.5%，以該酸可溶性糖液的重量為基準。
18.如權利要求12所述的方法，其進一步包含，在步驟(c)之前，對步驟(b)得到的酸可溶性糖液進行濃縮。
19.如權利要求12所述的方法，其進一步包含，在步驟(d)之前，對步驟(c)得到的大豆粗糖液進行濃縮。
20.如權利要求12所述的方法，其進一步包含，在步驟(e)之前，對步驟(d)得到的脫鹽大豆糖液進行濃縮。
21.如權利要求12所述的方法，其進一步包含對步驟(e)得到的發(fā)酵液進行濃縮，而得到一糖漿形式的產(chǎn)品。
22.如權利要求12所述的方法，其進一步包含對步驟(e)得到的發(fā)酵液進行干燥，而得到一粉末形式的產(chǎn)品。
23.如權利要求12所述的方法，其中步驟(d)包含以微過濾膜處理上述大豆粗糖液而去除其中的蛋白質(zhì)，接著對所獲得的過濾液進行電透析處理而去除其中的鹽類。
24.如權利要求23所述的方法，其中該微過濾膜具有0.3 μ m的孔徑。
25.如權利要求12所述 的方法，其中該益生菌為乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)、胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸乳桿菌(Lactococcus Iactis)或干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)。
26.如權利要求25所述的方法，其中該益生菌為胚芽乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。
27.如權利要求12所述的方法，其中該益生菌為選自BCRC20270(Saccharomycescerevisiae)、21403、21468、21469、21727、21480(Kluyveromyces marxianus)及21777 (Pichia stipitis)的酵母菌。
28.如權利要求12所述的方法，其中該大豆原料是選自大豆、全脂大豆片、脫脂大豆片、全脂大豆粉、脫脂大豆粉、或大豆殘渣，其中該大豆殘渣是以大豆為原料的食品制程所產(chǎn)生的。
29.如權利要求28所述的方法，其中該大豆原料為脫脂大豆片或脫脂大豆粉。
【文檔編號】A23L1/09GK103445048SQ201210202706
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2012年6月19日 優(yōu)先權日:2012年6月4日
【發(fā)明者】劉毓蕙, 張建棣, 洪銘育, 莊少鈞, 劉素娥, 錢阜寧, 賴祥玲, 陳怡宏, 程竹青 申請人:財團法人食品工業(yè)發(fā)展研究所