專利名稱：肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片及肌酸酐測定法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片及肌酸酐測定法。
背景技術(shù)：
肌酸酐是肌酸通路的最終代謝物，肌酸具有脫水而成環(huán)的結(jié)構(gòu)。在體內(nèi)，大部分以肌酸或磷酸肌酸的形式存在于肌肉中。肌酸從ATP接受高能磷酸而形成磷酸肌酸，從而作為儲能物質(zhì)發(fā)揮作用。具體而言，磷酸肌酸在肌肉收縮等能量消耗時(shí)向ADP轉(zhuǎn)移高能磷酸而變回肌酸，或者通過非酶反應(yīng)而形成肌酸酐。然后，生成的肌酸酐通過腎臟排泄到尿中。因此，肌酸酐的尿中排泄量即尿中濃度被用作肌肉疾病和腎功能障礙的指標(biāo)。此夕卜，在患腎功能障礙等情況下，血中的肌酸酐濃度可以作為疾病的指標(biāo)。 在集體診察的現(xiàn)場或篩選檢查等初期診斷的情況下，為了迅速地進(jìn)行肌酸酐的尿中、血清中或血漿中的濃度的測定，廣泛使用將與肌酸酐發(fā)生反應(yīng)而顯色的試劑預(yù)先涂布或浸滲到支持體上并使其干燥而成的干式試驗(yàn)片?，F(xiàn)有的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片利用在強(qiáng)堿性條件下由肌酸酐與苦味酸的縮合物引起的顯色反應(yīng)(捷非氏反應(yīng))。作為這樣的試驗(yàn)片之一，日本特開平09-061430號公報(bào)中公開了一種肌酸酐測定用試驗(yàn)片，其由支持體、負(fù)載在該支持體上的含有3，5_ 二硝基苯甲酸的試劑層和設(shè)置在該試劑層上的含有氫氧化鋰等強(qiáng)堿性物質(zhì)的展開層構(gòu)成。此外，作為用于測定肌酸酐的顯色反應(yīng)，還已知有酶法。日本專利第4243255號公開了對由肌酸酐與肌酐亞胺水解酶的反應(yīng)生成的氣態(tài)氨進(jìn)行定量的干式分析元件。具體而言，在透明支持體上依次一體地層疊有含有由于氣態(tài)氨而產(chǎn)生可檢測的變化的指示藥的指示藥層、使氣態(tài)氨通過的液體阻斷層、含有堿性緩沖劑且可以根據(jù)需要與基質(zhì)發(fā)生反應(yīng)而生成氨的試劑層、以及展開層。此外，就現(xiàn)有的濕式肌酸酐測定試劑盒而言，利用作為酶法的一種的肌酸酶-肌氨酸氧化酶-過氧化物酶法。“CRE-L試薬力4 ) ^添付文書，第4版，力4 ) ^株式會社，2010，，、“N- T -fe ^ CRE-L 二 ”卜一一添付文書，第11版，日東紡織株式會社，2008，，及“ 二夕七9 4開' CRE添付文書，第6版，積水醫(yī)療株式會社，2008”中公開了一種由第一反應(yīng)試劑和第二反應(yīng)試劑構(gòu)成的濕式肌酸酐測定試劑盒。第一反應(yīng)試劑利用肌酸酐酶預(yù)先將樣品中的內(nèi)源性肌酸分解。第二反應(yīng)試劑添加到添加了第一反應(yīng)試劑而反應(yīng)后的樣品中，利用肌酸酶使樣品中的肌酸酐轉(zhuǎn)變?yōu)榧∷?，并利用肌酸酐酶使該肌酸分解為肌氨酸和尿素，使該肌氨酸與肌氨酸氧化酶反應(yīng)而生成過氧化氫，在該過氧化氫及過氧化物酶存在下使供氫體化合物及4-氨基安替比林發(fā)生氧化縮合，由此生成醌色素。但是，日本特開平09-061430號公報(bào)所示的現(xiàn)有的利用捷非氏反應(yīng)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片，在低濃度范圍內(nèi)測定肌酸酐時(shí)存在誤差大的缺點(diǎn)。日本專利第4243255號所公開的干式分析元件在低濃度范圍內(nèi)測定肌酸時(shí)的誤差比利用捷非氏反應(yīng)時(shí)小，但存在如下缺點(diǎn)不能完全消除樣品中的內(nèi)源性氨的影響，此夕卜，需要復(fù)雜的層結(jié)構(gòu)來控制作為反應(yīng)產(chǎn)物的氨氣，從而使制造的成品率低。
此外，現(xiàn)有的干式試驗(yàn)片中，由于該試驗(yàn)片中所含的所有試劑都進(jìn)入樣品中來發(fā)生反應(yīng)，因此，如果不借助日本專利第4243255號中記載的氨氣等氣體，則不能將由兩階段以上構(gòu)成的反應(yīng)體系應(yīng)用于干式試驗(yàn)。因此，作為在反應(yīng)過程中不產(chǎn)生氣體的兩階段反應(yīng)體系的“CRE-L試薬力、)7添付文書，第4版，力、)7株式會社，2010，，、“N- T -fe ^CRE-L 二 ”卜一一添付文書，第11版，日東紡織株式會社，2008，，及“工-fc 7 CRE添付文書，第6版，積水醫(yī)療株式會社，2008”中記載的肌酸酶-肌氨酸氧化酶-過氧化物酶法，到目前為止還不能用于干式試驗(yàn)片。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明鑒于上述問題而完成，其目的在于，提供在低濃度范圍內(nèi)測定肌酸酐時(shí)的誤差小且具有簡單的結(jié)構(gòu)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片以及使用該試驗(yàn)片的肌酸酐測定法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第一觀點(diǎn)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的特征在于，具備支持體、設(shè)置在該支持體上的試劑層、設(shè)置在該試劑層上的試劑保持層以及 設(shè)置在上述試劑層與上述試劑保持層之間來連接上述試劑層與上述試劑保持層的連接層，上述試劑層含有肌酸酐酶，上述試劑保持層含有肌酸酶和肌氨酸氧化酶，過氧化物酶、4-氨基安替比林以及供氫體化合物各自包含在上述試劑層和上述試劑保持層中的僅任意一者的層中或者包含在兩者的層中，且上述連接層使滴加在上述試劑保持層上的液態(tài)樣品延遲到達(dá)上述試劑層。優(yōu)選上述連接層由以形成彼此分離的多個(gè)斑點(diǎn)的方式涂布的膠粘劑構(gòu)成，并且上述斑點(diǎn)之間存在沒有上述膠粘劑的部分。優(yōu)選上述供氫體為N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺。優(yōu)選上述試劑保持層和/或上述試劑層還含有緩沖劑。 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第二觀點(diǎn)的肌酸酐測定法是使用本發(fā)明的第一觀點(diǎn)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的肌酸酐測定法，其特征在于，具備在上述試劑保持層上滴加液態(tài)樣品的步驟；在上述液態(tài)樣品中的內(nèi)源性肌酸被上述肌酸酶完全分解后，對上述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的顯色程度進(jìn)行測定的第一測定步驟；從上述第一測定步驟開始經(jīng)過預(yù)定時(shí)間后，對上述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的顯色程度進(jìn)行測定的第二測定步驟；從上述第二測定步驟中測定的顯色程度中減去上述第一測定步驟中測定的顯色程度來獲得從上述第一測定步驟開始至上述第二測定步驟為止的顯色程度的變化量的步驟；及通過求出與上述變化量相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的值來確定上述液態(tài)樣品中的肌酸酐濃度的步驟。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第三觀點(diǎn)的肌酸酐測定法是使用本發(fā)明的第一觀點(diǎn)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的肌酸酐測定法，其特征在于，具備在上述試劑保持層上滴加液態(tài)樣品的滴加步驟；上述滴加步驟后，直到上述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片與液態(tài)樣品反應(yīng)而使顯色達(dá)到穩(wěn)態(tài)為止，對上述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的顯色程度進(jìn)行經(jīng)時(shí)記錄的步驟；在上述記錄中獲得從上述顯色程度的變化率發(fā)生變化的時(shí)刻開始至顯色達(dá)到穩(wěn)態(tài)的時(shí)刻為止的上述顯色程度的每單位時(shí)間的變化量的步驟；及通過求出與上述變化量相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的值來確定上述液態(tài)樣品中的肌酸酐濃度的步驟。


圖IA是表示本發(fā)明的實(shí)施方式的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的構(gòu)成的立體圖。圖IB是圖IA的A-A縱剖面圖。圖2A是表示使用實(shí)施例I的肌酸酐測定用試驗(yàn)片來測定高肌酸樣品時(shí)的K/S值的經(jīng)時(shí)變化的圖。 圖2B是表示測定高肌酸酐樣品時(shí)的K/S值的經(jīng)時(shí)變化的圖。圖3是對使用實(shí)施例I的肌酸酐測定用試驗(yàn)片并利用反應(yīng)時(shí)間差測定法測得的AK/S值與使用分析裝置測得的肌酸酐濃度測定值進(jìn)行作圖而示出的圖。圖4A是表示使用實(shí)施例I及2的肌酸酐測定用試驗(yàn)片來測定肌酸酐濃度低的樣品時(shí)的K/S值的經(jīng)時(shí)變化的圖。圖4B是表示測定肌酸酐濃度高的樣品時(shí)的K/S值的經(jīng)時(shí)變化的圖。
具體實(shí)施例方式以下，參考附圖對本發(fā)明的實(shí)施方式詳細(xì)地進(jìn)行說明。(實(shí)施方式)如圖IA及圖2A所示，本發(fā)明的實(shí)施方式的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片I由支持體2和負(fù)載在支持體2上的試劑部3構(gòu)成。試劑部3由形成于支持體2上的試劑層4、以覆蓋該試劑層4的方式形成的試劑保持層5、以及在試劑層4與試劑保持層5之間形成的用于、連接試劑層4與試劑保持層5的連接層6構(gòu)成。支持體2優(yōu)選不具有液體滲透性。由此，在使用本實(shí)施方式的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片I來測定肌酸酐時(shí)，滴加到試劑層4、試劑保持層5上的液態(tài)樣品停留在試劑層4及試劑保持層5內(nèi)，因此，能夠高精度地進(jìn)行測定。作為支持體2，可以使用紙片、塑料(合成樹脂)片、金屬片等。從批量生產(chǎn)率、低成本、保存性和耐水性等觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選使用合成樹月旨片。此外，在滴加液態(tài)樣品而使檢測反應(yīng)發(fā)生之后的光學(xué)分析中，使光從支持體側(cè)照射時(shí)，需要支持體2具有透光性。與此相對，使光從試劑保持層5側(cè)照射時(shí)，不要求透光性。試劑層4含有肌酸酐酶。試劑層4以具有液體滲透性的材質(zhì)為主體而構(gòu)成。特別優(yōu)選以水溶性材質(zhì)為主體、并且其中分散有試劑。由此，在測定時(shí)，試劑層4中所含的試劑可進(jìn)入到滴加在位于上層的試劑保持層5上的液態(tài)樣品中。作為水溶性材質(zhì)，可以使用以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為代表的水溶性高分子化合物等。此外，試劑層4也可以是在具有液體滲透性的紙、編織物或機(jī)織物等布帛材料中分散有試劑的構(gòu)成。試劑保持層5含有肌酸酶及肌氨酸氧化酶。試劑保持層5以具有液體滲透性的材質(zhì)為主體而構(gòu)成。特別優(yōu)選以水溶性材質(zhì)為主體、并且其中分散有試劑。由此,在測定時(shí)，滴加到試劑保持層5上的液態(tài)樣品在試劑保持層5中迅速且均勻地?cái)U(kuò)散。作為水溶性材質(zhì)，可以使用以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為代表的水溶性高分子化合物等。此外，試劑保持層5可以是在具有液體滲透性的紙、編織物或機(jī)織物等布帛材料中分散有試劑的構(gòu)成。連接層6通過以在試劑層4的表面形成彼此分離的多個(gè)斑點(diǎn)的方式涂布膠粘劑來膠粘試劑層4與試劑保持層5而形成。由多個(gè)斑點(diǎn)狀的膠粘劑構(gòu)成的連接層6以在試劑保持層5與試劑層4之間夾有少許空隙的方式將它們連接。在樣品滴加到試劑保持層5上時(shí)，由于該空隙的存在，液態(tài)樣品在從試劑保持層5向試劑層4移動的過程中產(chǎn)生延遲。因此，滴加到試劑保持層5上的液態(tài)樣品，首先優(yōu)先地在試劑保持層5中擴(kuò)散，然后向試劑層4中移動。本實(shí)施方式中，顯色反應(yīng)如下進(jìn)行在由肌氨酸氧化酶引起的肌氨酸的水解而產(chǎn)生的過氧化氫以及過氧化物酶的存在下，通過4-氨基安替比林及供氫體化合物的偶聯(lián)反應(yīng)而形成有色醌。因此，過氧化物酶、4-氨基安替比林及供氫體化合物包含在試劑層4或試劑保持層5中的至少一層中。
作為供氫體化合物，有N-(2_羥基-3-磺丙基)-3，5_ 二甲氧基苯胺(HDAOS)、N-乙基-N-磺丙基-3-甲氧基苯胺(ADPS)、N-乙基-N-磺丙基苯胺(ALPS)、N_乙基-N-磺丙基-3，5-二甲氧基苯胺(DAPS)、N-磺丙基-3，5-二甲氧基苯胺(HDAPS)、N-乙基-N-磺丙基-3，5- 二甲基苯胺(MAPS)、N-乙基-N-磺丙基-3-甲基苯胺(TOPS)、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺(ADOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)苯胺(ALOS)、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3，5- 二甲氧基苯胺(DAOS)、N_乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3，5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)及N-磺丙基苯胺(HALPS)等。試劑層4和/或試劑保持層5可以含有用于提高它們所含的酶的反應(yīng)或保存穩(wěn)定性的緩沖劑。優(yōu)選氫離子濃度指數(shù)(P 在pH為6 9的范圍內(nèi)。作為緩沖劑，可以使用例如磷酸緩沖劑、N，N-雙(2-羥基乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、N-甲基-2-氨基乙磺酸(TES)、2-[4-(2_羥乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)、哌嗪-I，4-雙(2-羥基-3-丙磺酸)二水合物(POPSO)等公知的緩沖劑。在打算作為肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片I的測定對象的液態(tài)樣品為微量、例如約5ul的情況下，試劑層4及試劑保持層5只要是數(shù)毫米X數(shù)毫米左右的面積即可。而且，由于難以用手等來握住這些層，因此，優(yōu)選將支持體2設(shè)置成寬度為約數(shù)毫米至約I厘米的細(xì)長片，以使其能夠作為把手來使用。此外，對于肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片I中的各試劑的含量，對于肌酸酐酶而言，只要是至少足以與預(yù)定的測定上限量的肌酸酐發(fā)生反應(yīng)的量即可。對于其他試劑而言，只要是至少足以與預(yù)定的測定上限量的肌酸酐以及液態(tài)樣品中的內(nèi)源性肌酸發(fā)生反應(yīng)的量即可。例如，測定對象為血清時(shí)，包括患者來源的血清在內(nèi)的血清中的肌酸酐濃度為約0. 3mg/dl 約20mg/dl,肌酸濃度為約0. 2mg/dl 約0. 6mg/dl。根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS,National Committee for Clinical Laboratory Standards),在對對象物質(zhì)進(jìn)行測定時(shí)，關(guān)于給其測定帶來影響的干擾物質(zhì)，只要是以干擾物質(zhì)的上限值的約3倍為基準(zhǔn)即可。因此，將肌酸酐的測定上限設(shè)定為20mg/dl，將內(nèi)源性肌酸濃度的基準(zhǔn)值設(shè)定為I. 8mg/dl，從而確定各試劑的濃度即可。此外，即使對健康人而言血中的肌酸濃度也可能由于補(bǔ)充物等的攝取而增加。因此，更優(yōu)選在考慮到這種預(yù)計(jì)血中肌酸濃度的升高部分的情況下來確定內(nèi)源性肌酸濃度的基準(zhǔn)值。例如，在上述例的情況下，更優(yōu)選將內(nèi)源性肌酸濃度的基準(zhǔn)值設(shè)定為5. Omg/dl。滴加液態(tài)樣品時(shí)形成的反應(yīng)液中的各試劑的優(yōu)選濃度如下。肌酸酐酶20-1000U/ml肌酸酶20-1000U/ml肌氨酸氧化酶20-300U/ml過氧化物酶50-3000U/ml4-氨基安替比林5-100mM 供氫體化合物5-100mM本發(fā)明的實(shí)施方式的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片I可以如下制作。首先，將用于制作支持體2的具有預(yù)定材質(zhì)和預(yù)定厚度的片材切割成預(yù)定尺寸的細(xì)長片。對細(xì)長片進(jìn)行清洗并干燥，由此制作支持體2。接著，制作試劑層4。首先，使肌酸酐酶以及根據(jù)需要的過氧化物酶、4-氨基安替比林、供氫體化合物及PH緩沖劑分散在具有液體滲透性的材質(zhì)中。在具有液體滲透性的材質(zhì)為水溶性高分子化合物等水溶性材質(zhì)的情況下，使其溶解于純水中而制成水溶液，使上述各試劑溶解在水溶液中并攪拌，由此使上述各試劑分散。然后，涂布到支持體2的預(yù)定部位處并進(jìn)行干燥，制成試劑層4。在具有液體滲透性的材質(zhì)為紙、編織物或機(jī)織物等布帛材料的情況下，使上述各試劑溶解在純水中并攪拌而形成水溶液，并使該水溶液被預(yù)定尺寸的布帛材料吸收，由此使其分散。然后，進(jìn)行干燥而除去水分，制成試劑層4。然后，將試劑層4層疊到支持體2上。作為該方法，在試劑層4為以水溶性材質(zhì)為主體的試劑層的情況下，用純水潤濕底面并壓接在支持體2的預(yù)定位置處。由此，底面的水溶性材質(zhì)發(fā)生溶解而發(fā)揮出膠粘劑的作用。作為其他方法，也可以利用膠粘劑將試劑層4膠粘在支持體2上。接著，制作試劑保持層5。首先，對于試劑保持層5而言，使肌酸酶及肌氨酸氧化酶以及根據(jù)需要的過氧化物酶、4-氨基安替比林、供氫體化合物及pH緩沖劑分散在具有液體滲透性的材質(zhì)中。在具有液體滲透性的材質(zhì)為水溶性高分子化合物等水溶性材質(zhì)的情況下，使其溶解于純水中而制成水溶液,使上述各試劑溶解到該水溶液中，并通過攪拌使其分散。然后，涂布到平坦的基材上并進(jìn)行干燥，之后從基材上剝離而制成試劑保持層5。在具有液體滲透性的材質(zhì)為紙、編織物或機(jī)織物等布帛材料的情況下，使上述各試劑溶解到純水中并進(jìn)行攪拌而形成水溶液，并使該水溶液被預(yù)定尺寸的布帛材料吸收，由此使其分散。然后，進(jìn)行干燥而除去水分，制成試劑保持層5。接著，將試劑保持層5層疊到試劑層4上，并利用膠粘劑進(jìn)行膠粘。膠粘劑只要是不阻礙上述各酶的反應(yīng)的膠粘劑即可。優(yōu)選在試劑層上以形成彼此分離的多個(gè)斑點(diǎn)的方式來涂布膠粘劑，并且以在斑點(diǎn)之間形成沒有膠粘劑的部分的方式進(jìn)行膠粘。由此形成連接層6。這樣，可以制作本發(fā)明實(shí)施方式的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片I。
接著，對使用本實(shí)施方式的試驗(yàn)片來測定血清、血漿或尿等液態(tài)樣品中的肌酸酐濃度的方法進(jìn)行說明。首先，將液態(tài)樣品滴加到試劑保持層5上。滴加的液態(tài)樣品在試劑保持層5中沿橫向擴(kuò)散，同時(shí)取入試劑保持層5中所含的各種試劑。此時(shí)，首先，通過取入的肌酸酶的作用，樣品中所含的內(nèi)源性肌酸分解成尿素和肌氨酸。然后，通過進(jìn)入樣品中的肌氨酸氧化酶的作用，經(jīng)肌氨酸的水解而產(chǎn)生過氧化氫。
權(quán)利要求
1.一種肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片，其特征在于， 具備支持體、設(shè)置在該支持體上的試劑層、設(shè)置在該試劑層上的試劑保持層以及設(shè)置在所述試劑層與所述試劑保持層之間來連接所述試劑層與所述試劑保持層的連接層，所述試劑層含有肌酸酐酶， 所述試劑保持層含有肌酸酶和肌氨酸氧化酶， 過氧化物酶、4-氨基安替比林以及供氫體化合物各自包含在所述試劑層和所述試劑保持層中的僅任意一者的層中或者包含在兩者的層中，且 所述連接層使滴加在所述試劑保持層上的液態(tài)樣品延遲到達(dá)所述試劑層。
2.如權(quán)利要求I所述的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片，其特征在于，所述連接層由以形成彼此分離的多個(gè)斑點(diǎn)的方式涂布的膠粘劑構(gòu)成，并且所述斑點(diǎn)之間存在沒有所述膠粘劑的部分。
3.如權(quán)利要求I所述的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片，其特征在于，所述供氫體為N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3，5- 二甲氧基苯胺。
4.如權(quán)利要求I所述的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片，其特征在于，所述試劑保持層和/或所述試劑層還含有緩沖劑。
5.一種肌酸酐測定法，是使用權(quán)利要求I所述的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的肌酸酐測定法，其特征在于，具備 在所述試劑保持層上滴加液態(tài)樣品的步驟； 在所述液態(tài)樣品中的內(nèi)源性肌酸被所述肌酸酶完全分解后，對所述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的顯色程度進(jìn)行測定的第一測定步驟； 從所述第一測定步驟開始經(jīng)過預(yù)定時(shí)間后，對所述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的顯色程度進(jìn)行測定的第二測定步驟； 從所述第二測定步驟中測定的顯色程度中減去所述第一測定步驟中測定的顯色程度來獲得從所述第一測定步驟開始至所述第二測定步驟為止的顯色程度的變化量的步驟；及通過求出與所述變化量相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的值來確定所述液態(tài)樣品中的肌酸酐濃度的步驟。
6.一種肌酸酐測定法，是使用權(quán)利要求I所述的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的肌酸酐測定法，其特征在于，具備 在所述試劑保持層上滴加液態(tài)樣品的滴加步驟； 所述滴加步驟后，直到所述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片與液態(tài)樣品反應(yīng)而使顯色達(dá)到穩(wěn)態(tài)為止，對所述肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的顯色程度進(jìn)行經(jīng)時(shí)記錄的步驟； 在所述記錄中獲得從所述顯色程度的變化率發(fā)生變化的時(shí)刻開始至顯色達(dá)到穩(wěn)態(tài)的時(shí)刻為止的所述顯色程度的每單位時(shí)間的變化量的步驟；及 通過求出與所述變化量相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的值來確定所述液態(tài)樣品中的肌酸酐濃度的步驟。
全文摘要
本發(fā)明提供肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片及肌酸酐測定法。肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片1的特征在于，具備支持體2、設(shè)置在該支持體2上的試劑層4、設(shè)置在該試劑層4上的試劑保持層5及由使試劑層4與試劑保持層5膠粘的形成為斑點(diǎn)狀的膠粘劑構(gòu)成的連接層6，所述試劑層4含有肌酸酐酶及4-氨基安替比林，所述試劑保持層5含有肌酸酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶及N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3，5-二甲氧基苯胺，并且連接層6使滴加在所述試劑保持層5上的液態(tài)樣品延遲到達(dá)試劑層4。
文檔編號C12Q1/34GK102757893SQ20121013042
公開日2012年10月31日 申請日期2012年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者中村勤 申請人:愛科來株式會社