專利名稱：一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法
背景技術(shù)：
國內(nèi)的淋巴細(xì)胞分離液已有二十多年的歷史，主要以葡聚糖(右旋糖酐)和泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)為主要原料進(jìn)行配制，其分離原理是利用各類細(xì)胞本身的密度區(qū)另IJ，在具有一定密度的分離液中經(jīng)過離心，使各類細(xì)胞分離開來。但由于葡聚糖是由葡萄糖經(jīng)過菌種發(fā)酵而得，因此其內(nèi)毒素水平較高，會影響淋巴細(xì)胞的表面蛋白活性，且分離液中含不通透的離子diatrizoate (泛影葡胺),會影響離子通透膜的Gibbs-Donnan平衡(吉布斯一道南膜平衡)。所以，傳統(tǒng)的淋巴細(xì)胞分離液對細(xì)胞有毒性，分得細(xì)胞狀態(tài)不好，影響細(xì)胞活性，不利于所提取細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)及臨床治療的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提出一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中淋巴細(xì)胞分離液對細(xì)胞有毒性，分得細(xì)胞狀態(tài)不好，影響細(xì)胞活性，不利于所提取細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)及臨床治療的應(yīng)用的問題。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，包括如下步驟使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液；使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液；使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品；通過過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品制取動物淋巴細(xì)胞分離液成品。進(jìn)一步地，使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液的具體步驟為稱取羥乙基淀粉加熱溶解于蒸餾水中，以雙蒸水定容，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液。優(yōu)選地，羥乙基淀粉的平均分子量為550萬。進(jìn)一步地，使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液的具體步驟為稱取泛影葡胺溶于雙蒸水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整PH至pH = 8. 0，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影匍胺料液。優(yōu)選地，氫氧化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。進(jìn)一步地，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品的具體步驟為取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40 %的羥乙基淀粉550料液加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液，備用；取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液，加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液，備用；將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34 %的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液混和均勻并將其降溫至20°C ；用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液調(diào)整質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液的混合液，使其在20°C下比重為I. 065 I. 090g/ml,即得動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品。進(jìn)一步地，通過過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品制取動物淋巴細(xì)胞分離液成品的具體步驟為用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品。 進(jìn)一步地，用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品的具體步驟為用G3漏斗、含IOOnm親水性濾芯的親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵以(O. 06MPa的負(fù)壓過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液于百級工作臺內(nèi)灌裝于棕色玻璃瓶中，120°C高壓滅菌20分鐘，即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品。本發(fā)明的有益效果為I、本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離液所用的主要原料之一為羥乙基淀粉，替代了右旋糖酐，生物安全性高，無細(xì)胞毒性，其內(nèi)毒素含量低，使得分離的淋巴細(xì)胞狀態(tài)好，活力高，除應(yīng)用于科學(xué)研究外還可廣泛應(yīng)用于臨床診斷，具有良好的市場前景。2、本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離液在制備過程中不產(chǎn)生任何廢料和污染物，也不產(chǎn)生噪音等，對環(huán)境沒有影響。


為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖I為本發(fā)明一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法的步驟流程圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。如圖I所示，一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，包括如下步驟I、使用羥乙基淀粉使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液，該步驟具體為稱取40g羥乙基淀粉加熱溶解于蒸餾水中，以雙蒸水定容至100ml，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40 %的羥乙基淀粉550料液。其中，優(yōu)先選擇平均分子量為550萬的羥乙基淀粉。
2、使用泛影葡胺使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液，該步驟具體為稱取60g泛影葡胺溶于雙蒸水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH，用pH計(jì)測定pH，將pH調(diào)整至pH = 8. 0，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液。其中，氫氧化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)先選擇為10%。3、使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，該步驟具體為3. I、取76. 8ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液加入261. 96ml蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液，備用；3. 2、取80ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 %的泛影葡胺料液，加入61. 16ml蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為34%的泛影葡胺溶液，備用；3. 3、將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液混和均勻并將其降溫至20°C ；3. 4、用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液調(diào)整質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液的混合液，加入60%泛影葡胺料液過程中使用比重計(jì)在20°C下監(jiān)測比重，使該混合液在20°C下比重為I. 065 I. 090g/ml,即得動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品。4、通過過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品制取動物淋巴細(xì)胞分離液成品，該步驟具體為用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品。具體地，用G3漏斗、含IOOnm親水性濾芯的親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵以彡O. 06MPa的負(fù)壓過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液于百級工作臺內(nèi)灌裝于250ml規(guī)格的棕色玻璃瓶中，每瓶內(nèi)濾液為200ml，120°C高壓滅菌20分鐘，即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液； 使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液； 使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品； 通過過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品制取動物淋巴細(xì)胞分離液成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液的具體步驟為稱取羥乙基淀粉加熱溶解于蒸餾水中，以雙蒸水定容，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，羥乙基淀粉的平均分子量為550萬。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液的具體步驟為稱取泛影葡胺溶于雙蒸水中，用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至pH = 8. 0，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，氫氧化鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液制取動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品的具體步驟為 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40 %的羥乙基淀粉550料液加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9 %的羥乙基淀粉550溶液，備用； 取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液，加入蒸餾水制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液，備用； 將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液混和均勻并將其降溫至20°C ； 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的泛影葡胺料液調(diào)整質(zhì)量分?jǐn)?shù)為34%的泛影葡胺溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9%的羥乙基淀粉550溶液的混合液，使其在20°C下比重為I. 065 I. 090g/ml,即得動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，通過過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品制取動物淋巴細(xì)胞分離液成品的具體步驟為用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，其特征在于，用漏斗、親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液灌裝于棕色玻璃瓶中，高壓滅菌后即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品的具體步驟為用G3漏斗、含IOOnm親水性濾芯的親水性微孔濾器裝置以及隔膜真空泵以彡0. 06MPa的負(fù)壓過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品，將濾液于百級工作臺內(nèi)灌裝于棕色玻璃瓶中，120°C高壓滅菌20分鐘，即得動物淋巴細(xì)胞分離液成品。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種淋巴細(xì)胞分離液的制備方法，包括如下步驟使用羥乙基淀粉配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的羥乙基淀粉550料液；使用泛影葡胺配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％的泛影葡胺料液；使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的羥乙基淀粉550料液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％的泛影葡胺料液制取動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品；通過過濾動物淋巴細(xì)胞分離液粗制品制取動物淋巴細(xì)胞分離液成品。本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離液的制備方法所用主要原料之一為羥乙基淀粉，替代右旋糖酐，生物安全性高，無細(xì)胞毒性，其內(nèi)毒素含量低，使得分離的淋巴細(xì)胞狀態(tài)好，活力高，除應(yīng)用于科學(xué)研究外還可應(yīng)用于臨床診斷，具有良好市場前景；制備過程中不產(chǎn)生任何廢料和污染物，也不產(chǎn)生噪音等，對環(huán)境沒有影響。
文檔編號C12N5/078GK102660504SQ20121011408
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月18日
發(fā)明者高旭 申請人:高旭