專利名稱：食品及飼料中鵝成分的實(shí)時(shí)熒光pcr檢測方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和核酸檢測技術(shù)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及食品或飼料中鵝成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法和試劑盒。
背景技術(shù)：
為確保食品成分的真實(shí)性，質(zhì)檢“十二五”規(guī)劃綱要明確指出“十二五”期間需重點(diǎn)加強(qiáng)開展食品摻假鑒別技術(shù)研究?！吨腥A人民共和國產(chǎn)品質(zhì)量法》、《中華人民共和國食品衛(wèi)生法》和《食品標(biāo)識管理規(guī)定》(國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局令第102號)等法律法規(guī)禁止產(chǎn)品的造假摻假行為和正確標(biāo)識食品標(biāo)簽。然而，由于經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)動，一些不法商在食品的加工過程中，常常以價(jià)格低廉的原料替代或摻入高價(jià)格的原料，或者根本就不添加標(biāo)注的原料成分。在加工產(chǎn)品的造假摻假過程中，經(jīng)常會使用有毒有害物質(zhì)(如染色饅頭等)， 危害人民身體健康。在動物產(chǎn)品原料和加工產(chǎn)品中，經(jīng)常出現(xiàn)成分的摻假造假和無意污染現(xiàn)象。人為攙假主要是不法商要降低成本或增加品質(zhì)，以謀取巨額的經(jīng)濟(jì)利益。這種摻假造假、以次充好的行為除了影響我國經(jīng)濟(jì)，另一個(gè)最主要的是影響人體健康和畜禽安全。瘋牛病和禽流感的世界性爆發(fā)和流行，人們越來越關(guān)注食品安全和飼料安全。部分人群因?yàn)榻】稻壒室仓皇秤盟厥巢糠帧／偱２〉陌l(fā)生是由于反芻動物食用了含有動物成分的飼料，所以各國禁止含有動物成分的飼料喂養(yǎng)動物。含有禽成分的飼料可能具有傳播禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。用這些摻假的飼料喂養(yǎng)動物，會影響畜禽的健康生長及我們的畜牧業(yè)安全。因此迫切需要開發(fā)有效的鑒定各種禽類成分的方法，以規(guī)范市場，保護(hù)消費(fèi)者權(quán)
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供食品及飼料中鵝成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法。本發(fā)明的另一目的在于提供食品及飼料中鵝成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測的試劑盒。在本發(fā)明的第一方面，提供一種鑒定鵝成分的方法，所述方法包括以待測樣品的DNA為模板，以SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2所示的引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增；若發(fā)生特異性擴(kuò)增，則表明待測樣品中包含鵝成分。在一個(gè)優(yōu)選例中，在以SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2所示的引物以及SEQID NO 3所示的Taqman MGB探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測。在另一優(yōu)選例中，所述的待測樣品是食品或飼料。在另一優(yōu)選例中，所述方法的檢測靈敏度為10_4ng/y L DNA。在本發(fā)明的另一方面，提供一種引物，所述引物是引物對，其序列如SEQ ID NO 1 和 SEQ ID NO 2 所示。在本發(fā)明的另一方面，提供一種Taqman MGB探針，所述的探針序列如SEQ ID NO 3所示。
在本發(fā)明的另一方面，提供所述的引物和/或所述的Taqman MGB探針的用途，用于從待測樣品中鑒定鵝成分。在本發(fā)明的另一方面，提供一種鑒定鵝成分的試劑盒，其中包括所述的引物；和/ 或所述的iTaqman MGB探針。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括含有鵝成分的檢測標(biāo)準(zhǔn)品(該標(biāo)準(zhǔn)品中鵝成分含量是確定的)。在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括選自以下的試劑DNA提取試劑(或試劑盒)，Taq酶，PCR緩沖液，DNA聚合酶，和/或說明鑒定鵝成分的方法的使用說明書。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。


圖1、鵝源性引物探針特異性實(shí)時(shí)熒光PCR檢測圖譜。僅在鵝DNA中產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物，而在其它物種DNA樣品中均無擴(kuò)增。圖2、鵝源性引物探針靈敏度實(shí)時(shí)熒光PCR檢測圖譜。擴(kuò)增曲線(平滑的弧形線)由左至右分別對應(yīng)于10%鵝DNA，1%鵝DNA，0. 鵝 DNA, 0. 01%· ΝΑ，0. 001%鵝 DNA，0. 0001%鵝 DNA。圖3、鵝肉粉重量比的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測靈敏度圖。擴(kuò)增曲線從左到右(平滑的弧形線)分別(平滑的弧形線)以下樣品的DNA 10% 鵝肉粉；鵝肉粉；0.鵝肉粉；0. 01%鵝肉粉；0. 001%鵝肉粉。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究和試驗(yàn)，首次揭示一種可特異性鑒定鵝成分的引物，所述引物針對含有鵝成分的DNA可發(fā)生特異性擴(kuò)增(獲得陽性結(jié)果)，而對沒有鵝成分的DNA不發(fā)生特異性擴(kuò)增(獲得陰性結(jié)果)。為了簡化PCR擴(kuò)增方法，本發(fā)明人還設(shè)計(jì)了配合所述引物的、用于進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR的Taqman MGB探針。采用所述的引物配合Taqman MGB探針，可良好地應(yīng)用于鑒定鵝成分，并且具有良好的再現(xiàn)性、靈敏度。目前開發(fā)有效的鑒定各種禽類成分的方法的難點(diǎn)在于這些成分通常在外觀、品質(zhì)上非常相近，導(dǎo)致人們難分真?zhèn)?。即使采用一些基因或蛋白水平上的技術(shù)，也由于許多禽類在親緣關(guān)系上較近，難以找到符合標(biāo)準(zhǔn)的、檢測準(zhǔn)確性高、實(shí)用性強(qiáng)的檢測靶標(biāo)。為此，本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究和大量的篩選，找到了合適的檢測靶標(biāo)，基于此開發(fā)了實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測鵝成分的方法。本發(fā)明人通過對引物的篩選，獲得一類可特異性鑒定鵝成分的引物，其對于鵝的 DNA發(fā)生特異性擴(kuò)增，而對沒有鵝成分的DNA不發(fā)生特異性擴(kuò)增。因此，本發(fā)明提供一種引物，所述的引物具SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的核
苷酸序列。本發(fā)明的這些引物還可以用放射性同位素、生物素、酶、熒光素或其他化學(xué)發(fā)光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。本發(fā)明還提供一種探針，所述的探針具SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列；較佳地，所述的探針是iTaqman MGB探針，從而便于實(shí)時(shí)熒光檢測。利用本發(fā)明的引物及探針，只需進(jìn)行常規(guī)的PCR反應(yīng)和/或瓊脂糖凝膠電泳，并通過判斷相應(yīng)的PCR產(chǎn)物的有無，就可以準(zhǔn)確、快速地判斷待測樣品是否含有鵝成分，而且所需的樣品量很少?；诒景l(fā)明所提供的適用于鑒定鵝成分的特異性引物及探針，本發(fā)明還提供了一種鑒定鵝成分的方法，所述方法包括以待測樣品的DNA為模板，以SEQ ID N0:1和SEQ ID NO 2所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若發(fā)生特異性擴(kuò)增，則表明待測樣品中包含鵝成分。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)，其基本原理是體外酶促合成特異DNA片段的方法。本發(fā)明的方法可采用常規(guī)的PCR技術(shù)進(jìn)行。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，利用所述引物，采用Taqman MGB實(shí)時(shí)熒光PCR方法來進(jìn)行鵝成分的鑒定。TaqMan探針法是高度特異的定量PCR技術(shù)，其核心是利用Taq酶的 3' -5'外切核酸酶活性，切斷探針，產(chǎn)生熒光信號。由于探針與模板是特異性結(jié)合，所以熒光信號的強(qiáng)弱就代表了模板的數(shù)量。TaqMan探針根據(jù)其3'端標(biāo)記的熒光淬滅基團(tuán)的不同分為兩種普通的iTaqMan探針和TaqMan MGB探針。TaqMan MGB探針的淬滅基團(tuán)采用非熒光淬滅基團(tuán)(Non-Fluorescent Quencher)，本身不產(chǎn)生熒光，可以大大降低本底信號的強(qiáng)度。同時(shí)探針上還連接有MGB(Minor Groove Binder)修飾基團(tuán)。獲取待測樣品的DNA的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的技術(shù)，例如可采取傳統(tǒng)的酚/氯仿/異戊醇法，或者可采用一些商購的DNA提取試劑盒，這類試劑盒是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。本發(fā)明還涉及一種用于鑒定鵝成分的試劑盒，所述試劑盒中含有SEQ ID N0:1和 SEQ ID NO :2所示的引物；更佳地，所述的試劑盒中還含有SEQ ID NO :3所示的探針。此外，所述的試劑盒還可含有其它鑒定鵝成分的試劑，如(但不限于)(A)各種PCR反應(yīng)用試劑，例如但不限于Taq酶，PCR緩沖液，dNTP，DNA聚合酶等； 或(B)各種提取DNA(即制備PCR反應(yīng)模板)所需的試劑，例如但不限于酚、氯仿、 異戊醇、NaCl等；或(C)提取DNA的試劑盒。此外，所述的試劑盒中還可含有鑒定鵝成分的使用說明書和/或標(biāo)準(zhǔn)操作程序。本發(fā)明所述的試劑盒可實(shí)現(xiàn)快速檢測、批量檢測鵝成分的目的。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于(1)首次揭示一種可特異性鑒定鵝成分的引物，所述的引物特異性良好，對于鵝能夠?qū)崿F(xiàn)特異性擴(kuò)增，而對于鵝以外的其它通常用作仿制鵝成分的物質(zhì)則不能特異性擴(kuò)增。 并且，所述引物具有良好的再現(xiàn)性、結(jié)果穩(wěn)定可靠。(2)利用所述的引物或含有所述引物的檢測試劑盒，可快速、大批量地檢測鵝成分，從待測樣品中快速準(zhǔn)確地區(qū)分真假鵝成分，并且所需樣品量少，操作簡單。(3)較佳地，本發(fā)明應(yīng)用Taqman MGB實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，可快速實(shí)現(xiàn)食品中鵝源性成分的準(zhǔn)確鑒定。(4)本發(fā)明的方法的推廣應(yīng)用對保障產(chǎn)品的質(zhì)量，保護(hù)消費(fèi)者知情權(quán)和選擇權(quán)，維護(hù)正常的經(jīng)濟(jì)秩序等提供了技術(shù)支持。
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下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如J.薩姆布魯克等編著，分子克隆實(shí)驗(yàn)指南，科學(xué)出版社，2002中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。I.材料與方法1. 1樣品收集和制備鵝肉、雞肉、鴨肉、火雞、鴿子、鵪鶉、牛肉、豬肉、山羊肉、綿羊肉、梅花鹿肉、駱駝肉、馬肉、驢肉、兔肉、野兔肉、野豬肉、貉肉、蛇肉、牛蛙、蛤蟆肉、草蝦、螃蟹、甲魚、牡蠣、貽
貝、蝸牛等27種常見動物材料和大豆、玉米、大麥、小麥、大米、馬鈴薯、番茄、豌豆、棉花、油菜等10種常見植物材料購自上海的農(nóng)貿(mào)市場或超市。6種雞肉和蛋產(chǎn)品，各4種鴨肉、火雞肉、鴿子、鵪鶉肉和蛋產(chǎn)品，15批其他成分食品(肉干、肉醬、餅干等)購自上海的超市。12批進(jìn)口鵝肝、鵝脯肉，15批禽肉骨粉飼料，20 批其他成分飼料(包括豬腸膜蛋白粉、多福蛋白、乳清粉、寵物飼料等)由上海市海關(guān)口岸抽樣提供。1. 2 試齊[J(1)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測的引物和MGB熒光探針序列設(shè)計(jì)了許多種引物和探針，經(jīng)過反復(fù)比較篩選，獲得了適用于擴(kuò)增鵝源性成分的特異性PCR引物和探針，序列為正向引物5，-TTAAAACTCTAAGGACTTGGCGGT-3，(SEQID NO 1)；反向引物5，-CTTGTTAGCGGTGTGCTATTGTGT-3，(SEQID NO 2)；探針5，-FAM-CTAGAGGAGCCTGTTCT-MGB-3，(SEQID NO 3)；(2)液氮；(3)CTAB 提取緩沖液20g/L CTAB，，1. 4mol/L NaCL,0. lmol/L Tris-HCL, 0. 02mol/L Na2EDTA, pH8. 0 ； (4)蛋白酶 K 溶液(20mg/mL)；(5) CTAB 沉淀液5g/L CTAB, 40mmol/L NaCl ；(6) NaCl 溶液(1. 2mol/L)；(7)異丙醇；(8) 70% 乙醇；(9)TE 緩沖液，ρΗ8·0 ；(IO)ABI TaqMan Universal PCR Master Mix(Part Number 4304437)；(11)超純水(ddH20)。1. 3儀器設(shè)備ABI 7300實(shí)時(shí)熒光PCR儀；天平；移液槍；離心機(jī)；恒溫孵育器；冷凍碾磨機(jī)；DNA 冷凍干燥離心機(jī)；核酸蛋白濃度分析儀；Eppendorf離心管；PCR反應(yīng)管。1.4樣品的DNA提取
將樣品(各種動物或植物材料)研磨后，稱取200mg左右固體樣品或200 μ L液體樣品于 2mL離心管中，加入 1. 5mL CTAB提取緩沖液(20g/L CTAB, 1. 4mol/L NaCL，0. lmol/L Tris-HCL,0. 02mol/L Na2EDTA,pH8. 0)和 10 μ L 蛋白酶 K(20mg/mL)溶液。60°C振蕩過夜后 13000g離心lOmin，轉(zhuǎn)移上清液到新的離心管中。加入750 μ L氯仿后用力振蕩，13000g離心5min，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中。加入2倍體積的CTAB沉淀溶液(5g/L CTAB, 40mmol/ L NaCl)，室溫靜置60min，13000g離心15min，棄去上清。加入350 μ L NaCl溶液將沉淀進(jìn)行懸浮。再加入350 μ L氯仿，渦旋振蕩進(jìn)行混勻，13000g離心IOmin。轉(zhuǎn)移上清后加入0. 6 倍體積的異丙醇用來沉淀核酸，室溫放置20min，13000g離心lOmin，棄去上清。加入500 μ L 70%乙醇溶液洗滌沉淀，溶解于200 μ L TE溶液中用核酸蛋白含量測定儀測定DNA濃度。也可用等效的商業(yè)化DNA提取試劑盒提取模板DNA。其中，鵝肉DNA 溶液分別稀釋成 10ng/yLUng/yL,0. Ing/μ L、0. Olng/μ L、 0. OOlng/μ L、0. OOOlng/μ L、0. OOOOlng/μ L 的 DNA 樣品。用于靈敏度測試。其中，用雞肉粉與鵝肉粉混合，配制成分別含有10%U%>0. 1%,0.01%,0. 001% 和0.0001%鵝肉粉含量(W/W)的混合樣品。上述方法提取DNA。1. 5鵝實(shí)時(shí)熒光PCR測試1. 5. IPCR 反應(yīng)體系進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測的反應(yīng)體系見表1。表1、實(shí)時(shí)熒光PCR檢測的反應(yīng)體系
_試劑名稱_25μ1反應(yīng)體系(JiL)
2 χ Real Time PCR Buffer12.5
正向引物(5μΜ)1.5 正向引物(5μΜ)1.5
探針(5μΜ)0.5
H2O8.0
模板 DNA(約 IOOng DNA)1.01. 5. 2PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)實(shí)時(shí)熒光PCR 反應(yīng)循環(huán)參數(shù)50°C，2min ;95°C，10min ;95°C 15s, 60°C lmin，循環(huán)
40次。1. 618S rRNA基因PCR擴(kuò)增與檢測使用18S rRNA基因擴(kuò)增真核生物內(nèi)源基因，以確保所提取的DNA適合于PCR擴(kuò)增。 檢測所用18S rRNA基因引物序列為5，-TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA-3，(SEQ ID NO 4)；5，-AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT-3，(SEQ ID NO 5)；18S rRNA 基因引物 PCR 反應(yīng)體系1XPCR 緩沖液，2. 5mmol/L Mg2+，IU Taq 酶， 200ymol/L dNTPs，引物100nmol/L，模板lOOng，反應(yīng)體積為25 μ 1。擴(kuò)增條件為-MV, 3min ；94°C，20s, 54°C，40s, 72°C，40s, 40 個(gè)循環(huán)；72°C，5min。
取10 μ L PCR產(chǎn)物，加1 μ LlOX上樣緩沖液點(diǎn)樣進(jìn)行電泳。PCR產(chǎn)物電泳檢測所用的凝膠濃度為1.5-2.0%。II.實(shí)施例實(shí)施例1、真核生物特異引物18S rRNA引物的檢測結(jié)果用真核生物18S rRNA特異引物擴(kuò)增本實(shí)驗(yàn)提取的所有DNA溶液(包括各種動物或植物材料的DNA溶液)，所有DNA溶液均能出現(xiàn)137bp的特異擴(kuò)增條帶。上述結(jié)果表明，所有抽提的DNA溶液適合于PCR測試。實(shí)施例2、鵝成分的實(shí)時(shí)熒光PCR特異性檢測用本發(fā)明建立的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測鵝源性成分的引物和MGB熒光探針，對鵝和供試的其他26種常見動物和10種常見植物進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用所述的特異性引物和探針，僅在鵝DNA中產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物，而在其它物種DNA樣品中均無擴(kuò)增，如圖1。上述結(jié)果說明，本發(fā)明建立的檢測方法具有物種特異性。實(shí)施例3、鵝成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測靈敏度對IOng/μ L(10% )，Ing/μ L(1 % ) ,0. lng/μ L(0. 1 % ) ,0. Olng/μ L(0. 01 % ), 0. OOlng/μ L(0. 001% ) ,0. OOOlng/μ L(0. 0001% ),0. OOOOlng/μ L (0. 00001% )鵝 DNA 進(jìn)行檢測。結(jié)果如圖2，在大于0. 0001%的鵝DNA中出現(xiàn)擴(kuò)增。上述結(jié)果表明，鵝源性檢測引物具有物種特異性，且檢測靈敏度為0. OOOlng/ UL(0. 0001% )鵝DNA，可見本發(fā)明的檢測引物及檢測方法靈敏度高。用雞肉粉10倍系列混合配制不同含量的鵝肉粉樣品，提取獲得DNA溶液。使用鵝成分引物和探針對對應(yīng)于10%u%>0. 1%,0.01%,0. 001%和0. 0001%鵝肉粉含量(W/W) 的樣品DNA分別進(jìn)行檢測。結(jié)果如圖3，10%、1 %、0. 1%、0. 01 %和0.001 %鵝肉粉均出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，而 0. 0001%鵝肉粉未出現(xiàn)擴(kuò)增曲線。上述結(jié)果表明，在重量百分比水平上，該方法的檢測靈敏度為0.001%鵝肉粉(W/ W)，可見本發(fā)明的檢測引物及檢測方法靈敏度高，不受相近成分的影響。實(shí)施例4、食品中鵝成分檢測的應(yīng)用采用本方法對12批海關(guān)口岸的進(jìn)口鵝肝、鵝脯肉進(jìn)行檢測，均檢出鵝成分。在6 種雞肉和蛋產(chǎn)品，各4種鴨肉、火雞、鴿子、鵪鶉肉和蛋產(chǎn)品，15批其他成分食品中未檢出鵝成分。在1批美國進(jìn)口的禽肉骨粉和1批澳大利亞進(jìn)口的禽肉骨粉飼料檢出鵝成分，在其他的14批禽肉骨粉飼料和20批其他成分飼料未檢出鵝成分。經(jīng)比較和跟蹤，這些分析檢測結(jié)果是準(zhǔn)確的。綜上，本發(fā)明的食品和飼料中鵝成分實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法，特異性強(qiáng)，靈敏度高，能準(zhǔn)確檢測出食品和飼料中的鵝成分，為食品和飼料中鵝成分檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化提供了依據(jù)。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種鑒定鵝成分的方法，其特征在于，所述方法包括以待測樣品的DNA為模板，以SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增； 若發(fā)生特異性擴(kuò)增，則表明待測樣品中包含鵝成分。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在以SEQID NO 1和SEQ ID NO 2所示的引物以及SEQ ID NO :3所示的Taqman MGB探針進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的待測樣品是食品或飼料。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的檢測靈敏度為lOlng/yLDNA0
5.一種引物，其特征在于，所述引物是引物對，其序列如SEQ ID NO :1和SEQ ID NO 2 所示。
6.一種Taqman MGB探針，其特征在于，所述的探針序列如SEQ ID N0:3所示。
7.權(quán)利要求5所述的引物或權(quán)利要求6所述的TaqmanMGB探針的用途，用于從待測樣品中鑒定鵝成分。
8.一種鑒定鵝成分的試劑盒，其特征在于，其中包括權(quán)利要求5所述的引物；和/或權(quán)利要求6所述的Taqman MGB探針。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括含有鵝成分的檢測標(biāo)準(zhǔn)品。
10.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括選自以下的試劑 DNA提取試劑，Taq酶，PCR緩沖液，DNA聚合酶，和/或說明鑒定鵝成分的方法的使用說明書。
全文摘要
本發(fā)明涉及食品及飼料中鵝成分的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法和試劑盒。本發(fā)明首次揭示一種可特異性鑒定鵝成分的引物及探針，所述引物及探針針對含有鵝成分的DNA可發(fā)生特異性擴(kuò)增，而對沒有鵝成分的DNA不發(fā)生特異性擴(kuò)增。因而，所述引物可良好地應(yīng)用于鑒定鵝成分，并且具有良好的再現(xiàn)性、靈敏度。
文檔編號C12Q1/68GK102382897SQ201110403988
公開日2012年3月21日 申請日期2011年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月7日
發(fā)明者張舒亞, 蔣靜, 韓麗, 高琴 申請人:上海出入境檢驗(yàn)檢疫局動植物與食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心