專利名稱：一種組織勻漿增效劑及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種組織勻漿增效劑及其應用。
背景技術：
朊病毒既可引起人類疾病，也可引起動物疾病。人類朊病毒病(Prion Diseases) 或稱為傳染性海綿樣腦病(The Transmissible Spongiform Encephalopathies, TSEs) 克包括雅氏病(CJD)、庫魯病(Kuru)、吉斯綜合癥(GSS)、致死性家族失眠癥(FFI)等，動物 TSEs疾病包括羊瘙癢病(Scrapie)、瘋牛病(BSE)、鹿萎縮病(CWD)等。朊病毒(Prion)是一種傳染性的蛋白質，不含疾病所特有的核酸。這種傳染性的蛋白質是由正常的生理型蛋白質(PrPC)在特定外因和內因的“誘導”下，蛋白質的空間構象發(fā)生改變，由α螺旋變成β片層，形成傳染性的病理型蛋白質(PrPk)，這類疾病的實驗室診斷標志物是I^rPSc。中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織例如大腦和脊髓組織含有高濃度的I^rPSc，是診斷這類疾病理想的組織病理材料，但是使用大腦和脊髓組織進行實驗室檢測時必須殺死動物，而進行臨床上檢測時多用于尸體解剖。非中樞神經(jīng)系統(tǒng)如脾臟、淋巴結、扁桃體、直腸等組織中PrPk含量很低，但是在疾病的早期診斷中非常重要，因為當動物感染疾病時，這類組織最先聚集I^rPSc。由于這類組織含有較多結締組織，制備勻漿時組織細胞不易破碎，很難勻漿徹底，這樣PrPk就不能很好地從細胞碎片中分離出來，而影響檢測診斷的準確性。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的第一個技術問題是提供一種組織勻漿增效劑。該組織勻漿增效劑可以提高勻漿效果而對勻漿液中的化學成分沒有影響。本發(fā)明所要解決的第二個技術問題是提供一種組織勻漿增效劑的制備方法。本發(fā)明所要解決的第三個技術問題是提供一種利用組織勻漿增效劑制備組織勻漿液的方法。該方法尤其適用于非中樞神經(jīng)系統(tǒng)如脾臟、淋巴結、扁桃體、直腸等含有較多結締組織的組織器官，制備勻漿時使組織細胞更易破碎，勻漿徹底。為解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案是 一種組織勻漿增效劑，它是粒徑為廣2mm的沙粒。該組織勻漿增效劑是通過將建筑工程用的沙子原料用水洗滌，然后用雙層紗布過濾，篩選出粒徑為廣2mm的沙粒。本發(fā)明還提供了一種制備組織勻漿液的方法，該方法是在進行組織勻漿時，加入粒徑為廣2mm的沙粒，與勻漿液一起勻漿；所述沙粒重量/勻漿液體積為0. 02、. 05g/mL。進一步地，所述制備組織勻漿液的方法尤其適用于脾臟、淋巴結、扁桃體、直腸或肌肉組織等含有較多結締組織的組織器官。進一步地，所述勻漿的條件為10秒/次，間隔30秒，勻漿3飛次。本發(fā)明的有益效果
(1)對于含有較多結締組織或肌肉組織的樣本檢測來說，因為這些組織細胞不易破碎，很難勻漿徹底，給檢測低含量病毒帶來了困擾。通過本發(fā)明所述的組織勻漿方法，可以達到很好的勻漿效果。(2)本發(fā)明是將建筑工程用的沙子用于組織樣本的勻漿處理，通過控制沙子的粒徑及加入量，有效解決了較難破碎組織的勻漿液制備，增強了組織勻漿效果，而且對于勻漿液中的化學成分沒有任何影響，并且節(jié)約了檢測成本。下面結合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步說明，不以任何方式限制本發(fā)明。凡是依照本發(fā)明公開內容所進行的任何本領域等同替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。具體實施例方式
實施例1動物脾臟組織勻漿液的制備
1.取組織塊(200mg)，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入aiil 的微離心管中。2.用移液管量取1. 8ml預冷的組織勻漿介質(0. 86%冷生理鹽水)，勻漿液終體積為ani，勻漿介質的體積總量應該是組織塊重量的9倍。3.用水洗滌過的沙子再用雙層紗布過濾，篩選粒徑為廣2mm的粗沙粒，稱重已篩選的粗沙粒40-100 mg加入到勻漿液中與脾臟組織一起勻漿。4.用組織勻漿機在冰水中進行上下研磨10%組織勻漿，勻漿時間10秒/次，間隙 30秒，連續(xù)3 5次)，取少量組織勻漿做涂片，顯微鏡下觀察細胞是否磨破，若沒有破則可以延長勻漿時間。5.將制備好的10%勻漿用微型離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心1 分鐘，將離心好的勻漿留下上清液，廢棄下面沉淀的細胞碎片。根據(jù)實驗需要，取適量上清夜進行脾臟組織里PrPk測定。實施例2動物直腸組織勻漿液的制備
1.取組織塊(2g)，在冰冷的生理鹽水中漂洗去除糞便，剪除脂肪等，濾紙拭干，稱重， 放入20ml的離心管中。2.用移液管量取18ml預冷的組織勻漿介質(0. 86%冷生理鹽水)，勻漿液終體積為20ml，勻漿介質的體積總量應該是組織塊重量的9倍。3.用水洗滌過的沙子再用雙層紗布過濾，篩選粒徑為廣2mm的粗沙粒，稱重已篩選的粗沙粒0. 4-1. Og加入到勻漿液中與脾臟組織一起勻漿。4.用組織勻漿機在冰水中進行上下研磨10%組織勻漿，勻漿時間10秒/次，間隙 30秒，連續(xù)3 5次)，取少量組織勻漿做涂片，顯微鏡下觀察細胞是否磨破，若沒有破則可以延長勻漿時間。5.將制備好的10%勻漿用微型離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心1 分鐘，將離心好的勻漿留下上清液，廢棄下面沉淀的細胞碎片。根據(jù)實驗需要，取適量上清夜進行直腸組織里PrPk測定。對比試驗例
不同濃度沙粒對脾臟組織勻漿效果的對比實驗
權利要求
1.一種組織勻漿增效劑，其特征在于，它是粒徑為廣2mm的沙粒。
2.—種組織勻漿增效劑的制備方法，其特征在于，將沙子原料用水洗滌，然后用雙層紗布過濾，篩選出粒徑為廣2mm的沙粒。
3.一種制備組織勻漿液的方法，其特征在于，該方法是在進行組織勻漿時，加入粒徑為廣2mm的沙粒；所述沙粒重量/勻漿液體積為0. 02、. 05g/mL。
4.根據(jù)權利要求3所述的制備組織勻漿液的方法，其特征在于，所述組織為脾臟、淋巴結、扁桃體、直腸或肌肉組織。
5.根據(jù)權利要求3所述的制備組織勻漿液的方法，其特征在于，所述勻漿的條件為10 秒/次，間隔30秒，勻漿；Γ5次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種組織勻漿增效劑及其應用。該組織勻漿增效劑是粒徑為1~2mm的沙粒。在進行組織勻漿時，通過加入沙粒，提高了較難破碎組織的勻漿效果。
文檔編號C12R1/93GK102443657SQ201110370969
公開日2012年5月9日 申請日期2011年11月21日 優(yōu)先權日2011年11月21日
發(fā)明者劉全國, 劉哲明, 史喜菊, 李冰玲, 李炎鑫, 馬貴平 申請人:中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局