專利名稱：含有刺五加苷類活性成分的組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有刺五加苷類活性成分的組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
刺五力口 Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim. ) Harm,又名——百針(河北)， 為五加科五加屬植物，生長于海拔500-2000m的落葉闊葉林、針闊混交林的林下或林緣。廣泛分布于東北及河北、山西等地。其根莖呈結(jié)節(jié)狀不規(guī)則圓柱形，直徑1. 4-4. 2cm，有分支； 表面灰棕色，有縱皺，彎曲處常有密集的橫皺紋，皮孔橫長，微突起而色淡。刺五加根含刺五加苷(eleutheroside)A、B、Bi、C、D、Ε,刺五加苷A即是胡蘿卜苷(daucosterol)，刺五加苷B即是丁香苷(syringin)；根還含芥子醛葡萄糖苷(sinapaldehyde glucoside)，鵝掌揪苷(Iiriodemdrin)，苦杏仁苷(amydalin), 3 β-
-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-16α-羥基-13β，28_環(huán)氧齊墩果烷， 3 β -
-0- β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — χ) -0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸基]-16 α -羥基-13 β，28-環(huán)氧齊墩果烷。刺五加用于治療和調(diào)節(jié)神經(jīng)衰弱、失眠多夢癥狀由來已久，刺五加苷對體外培養(yǎng)大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元缺氧損傷的保護(hù)作用也取代較好的結(jié)果，提示刺五加苷可以提高體外缺氧損傷的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的細(xì)胞活性，對細(xì)胞的缺氧損傷有明顯的保護(hù)作用。刺五加根的提取物及刺五加苷對多種疲勞動(dòng)物模型均有抗疲勞作用，苷的作用較根的提取物強(qiáng)，其中刺五加苷E的效果最好。刺五加lmg/kg能顯著降低抓握頸背部懸吊24h應(yīng)激法所致大鼠組織中過氧化脂質(zhì)的含量，并使幾乎耗竭的生育酚含量恢復(fù)，其中作用以刺五加苷E最強(qiáng)。 Steinmann等研究結(jié)果顯示，刺五加苷E、B以及它們的混合體，刺五加乙醇提取液均能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生和提高IL-I和IL-6，說明刺五加提取物及其成分刺五加苷E、B均具有較好的免疫藥理活性。現(xiàn)有刺五加苷制備工藝多采用水或含醇水提取，然后經(jīng)醇沉或水沉處理后經(jīng)大孔吸附樹脂柱吸附，用適當(dāng)濃度的含水醇洗脫、濃縮干燥制得。由此工藝的得到含有刺五加苷類活性成分的組合物含有鞣質(zhì)等雜質(zhì)，并且苷的含量低于50%。另一方面，現(xiàn)有技術(shù)對產(chǎn)品中刺五加苷的成份組成并不確定，因而實(shí)際生產(chǎn)中難以獲得組成穩(wěn)定、工藝可控性好的產(chǎn)品。刺五加B和刺五加E在刺五加中的含量極低，同時(shí)富集這兩種成分需要較高的技術(shù)條件；現(xiàn)代藥理研究表明，刺五加B和刺五加E具有顯著的藥理活性，如何制得富含高純度的刺五加B和刺五加E的組合物顯得尤為迫切。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，解決了現(xiàn)有技術(shù)中刺五加苷內(nèi)苷的含量低、刺五加B和刺五加E含量低等問題。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特征在于所述組合物包括刺五加苷B 和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的含量在60% 100%范圍內(nèi)。優(yōu)選的，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的含量在60% 90%范圍內(nèi)。更優(yōu)選的， 所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的含量在70 % 90 %范圍內(nèi)。優(yōu)選的，所述組合物中刺五加苷B含量在40% 80%范圍內(nèi)；刺五加苷E含量在 20% 40%范圍內(nèi)。優(yōu)選的，所述組合物中刺五加苷B含量在40% 70%范圍內(nèi)；刺五加苷E含量在20 % 35%范圍內(nèi)。更優(yōu)選的，所述組合物中刺五加苷B含量在40% 70 % 范圍內(nèi)；刺五加苷E含量在20% 30%范圍內(nèi)。本發(fā)明還提供了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)以刺五加藥材為原料經(jīng)水提，濃縮，低溫靜置6-M小時(shí)，過濾，濾液備用得到刺五加提取液；(2)將刺五加提取液通過預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂進(jìn)行吸附，依次經(jīng)純水洗脫除去雜質(zhì)，再用10% 100%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得刺五加苷粗品；(3)刺五加苷粗品通過預(yù)處理好的小孔樹脂(MCI)進(jìn)行吸附，先用水洗，棄去雜質(zhì)；繼用5% 20%甲醇洗脫，回收溶劑得浸膏A ；最后用20% 40%甲醇梯度洗脫，回收溶劑得浸膏B ；(4)浸膏A采用ODS填料進(jìn)行柱層析，經(jīng)20%甲醇、30%甲醇梯度洗脫，收集30% 甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分A ；浸膏B采用ODS填料進(jìn)行柱層析，經(jīng)30%甲醇、40%甲醇梯度洗脫，收集40%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分B ；(5)把組分A和組分B按1 1勾兌，即得含有刺五加苷類活性成分的組合物。優(yōu)選的，步驟O)中所述大孔樹脂選用非極性或弱極性苯乙烯型大孔樹脂，所述乙醇-水混合溶媒選用按水、70 %乙醇梯度洗脫。優(yōu)選的，步驟中所述反相碳18填料粒徑為10-120 μ m。優(yōu)選的，步驟(4)中所述反相碳18填料粒徑為40-100 μ m。優(yōu)選的，步驟中所述柱層析采用加壓方式進(jìn)行；壓力范圍在1 lObar。本發(fā)明還提供了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物作為制備具有癌癥化療增效作用或減毒作用的食品或藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明含有刺五加苷類活性成分的組合物由刺五加經(jīng)常規(guī)提取和大孔樹脂柱精制后，再經(jīng)反相柱層析等工序處理獲得。本發(fā)明所述含有刺五加苷類活性成分的組合物保留了原植物中苷類成分，并提高了產(chǎn)品純度，可應(yīng)用于相關(guān)藥品和食品領(lǐng)域。本發(fā)明的組合物中含有刺五加苷B和刺五加苷E，兩種苷總含量大于60%。優(yōu)選的，該組合物中刺五加苷B含量大于40%。更優(yōu)選的，該組合物中刺五加苷E含量大于 20%。含有刺五加苷類活性成分的組合物的制備方法如下(1)選取刺五加藥材，水提，濃縮，低溫靜置6-M小時(shí)，過濾，濾液備用。(2)由(1)所得刺五加提取溶液，采用預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂進(jìn)行吸附，先用水洗，再用10% 100%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得刺五加粗苷。(3)由(2)所得刺五加粗苷，采用預(yù)處理好的小孔樹脂(MCI)進(jìn)行吸附，先用水洗， 棄去；繼用5% 20%甲醇洗脫，回收溶劑得浸膏A(主要含刺五加苷B)；最后用20% 40%甲醇梯度洗脫，回收溶劑得浸膏B (主要含刺五加苷E)。(4)由(3)所得浸膏A，采用ODS填料進(jìn)行柱層析，經(jīng)20%甲醇、30%甲醇梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分A (主要含刺五加苷B)。(5)由(3)所得浸膏B，采用ODS填料進(jìn)行柱層析，經(jīng)30%甲醇、40%甲醇梯度洗脫，收集40%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分B (主要含刺五加苷E)。(6)把組分A和組分B按1 1勾兌，即得類白色刺五加苷。優(yōu)選的，其制備方法步驟(1)中所選取刺五加藥材為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus (Rupret Maxim.) Harms 的干燥根或根蓮或蓮。優(yōu)選的，其制備方法步驟O)中所述大孔樹脂優(yōu)選非極性或弱極性苯乙烯型大孔樹脂，所述乙醇-水混合溶媒優(yōu)選按水、70%乙醇梯度洗脫。優(yōu)選的，其制備方法步驟(4)和(5)中所述柱層析采用加壓方式進(jìn)行。本發(fā)明還提供了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物在制備食品或藥物中的應(yīng)用，可作為食品或藥物的組份或組合物之一。該食品或藥物具有癌癥化療增效作用或癌癥化療減毒作用。本發(fā)明的目的是提供一種組成成份穩(wěn)定、工藝和質(zhì)量可控的含有刺五加苷類活性成分的組合物，組合物中刺五加苷B和刺五加苷E總含量大于60%。本發(fā)明的另一目的是提供含有刺五加苷類活性成分的組合物的制備工藝，具體工藝步驟如下1、藥材提取500kg刺五加藥材切成l-2cm的小段，8倍量水回流提取三次，分別為3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)。合并提取液，回收溶劑，調(diào)整體積為250L。置冷庫中Mh，取上清液用濾紙過濾， 濾液備用。2、AB_8樹脂純化樹脂用量藥材質(zhì)量/樹脂質(zhì)量=3 1上樣速度lml/min. cm2洗脫速度2-3ml/min.cm2樹脂床的徑高比1 5提取液上樣兩次，靜態(tài)吸附12h。先用水洗:3BV，棄去；再用70%乙醇洗!3BV，合并。3、小孔樹脂純化樹脂質(zhì)量/浸膏質(zhì)量=30 1上樣速度lml/min. cm2洗脫速度2-3ml/min.cm2樹脂床的徑高比1 10浸膏用適量水溶解，上樣兩次，靜態(tài)吸附12h。先用水洗:3BV，棄去；再用10%甲醇洗:3BV，濃縮得浸膏A (主要含刺五加苷B)；最后用30 %甲醇洗;3BV，濃縮得浸膏B (主要含刺五加苷E)。
4、中壓ODS柱分離ODS 粒徑40-60 μ mODS 孔徑1 aimODS質(zhì)量/浸膏質(zhì)量=50/1上樣速度2ml/min洗脫速度20ml/min浸膏A用適量20%甲醇溶解后，經(jīng)0.45 μ m有機(jī)膜過濾，上樣；先用20%乙醇洗 3BV,棄去，再用30%甲醇洗;3BV，收集30%甲醇部位，回收溶劑得組分A(主要含刺五加苷 B)。浸膏B用適量30%甲醇溶解后，經(jīng)0.45 μ m有機(jī)膜過濾，上樣；先用30%乙醇洗 3BV,棄去，再用40%甲醇洗;3BV，收集40%甲醇部位，回收溶劑得組分B (主要含刺五加苷 E)。把組分A和組分B按1 1勾兌，即得類白色刺五加苷。提取溶媒可采用常規(guī)的水提取，提取液合并，常法濃縮得濃縮液，再加適量水稀釋，過濾，得刺五加提取溶液。為進(jìn)一步提高提取液中苷含量，可優(yōu)選采用冷藏處理，即濃縮液冷藏條件下靜置6-M小時(shí)(優(yōu)選8-16小時(shí))，再過濾，得刺五加粗苷溶液。所述工藝步驟O)中，所述大孔樹脂優(yōu)選非極性或弱極性大孔樹脂，更優(yōu)選弱極性大孔樹脂。大孔樹脂柱梯度洗脫時(shí)更優(yōu)選按水、70%乙醇梯度洗脫并收集70%乙醇洗脫部位洗脫液獲得。
權(quán)利要求
1.一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特征在于所述組合物包括刺五加苷B和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的總含量在609Γ100%范圍內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特征在于所述組合物中刺五加苷B含量在40% 80%范圍內(nèi)；刺五加苷E含量在20% 40%范圍內(nèi)。
3.—種權(quán)利要求1所述的含有刺五加苷類活性成分的組合物的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)以刺五加藥材為原料經(jīng)水提，濃縮，低溫靜置6-Μ小時(shí)，過濾，濾液備用得到刺五加提取液；(2)將刺五加提取液通過預(yù)處理好的ΑΒ-8大孔樹脂進(jìn)行吸附，依次經(jīng)純水洗脫除去雜質(zhì)，再用10% 100%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得刺五加苷粗品；(3)刺五加苷粗品通過預(yù)處理好的小孔樹脂(MCI)進(jìn)行吸附，先用水洗，棄去雜質(zhì)；繼用5% 20%甲醇洗脫，回收溶劑得浸膏A ；最后用20% 40%甲醇梯度洗脫，回收溶劑得浸膏B ；(4)浸膏A采用ODS填料進(jìn)行柱層析，經(jīng)20%甲醇、30%甲醇梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分A ；浸膏B采用ODS填料進(jìn)行柱層析，經(jīng)30%甲醇、40%甲醇梯度洗脫，收集40%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分B ；(5)把組分A和組分B按1 1勾兌，即得含有刺五加苷類活性成分的組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟(2)中所述大孔樹脂選用非極性或弱極性苯乙烯型大孔樹脂，所述乙醇-水混合溶媒選用按水、70%乙醇梯度洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟(4)中所述反相碳18填料粒徑為 10-120 μm。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟(4)中所述反相碳18填料粒徑為 40-100 μm0
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟(4)中所述柱層析采用加壓方式進(jìn)行； 壓力范圍在Γ10 bar。
8.—種權(quán)利要求1所述的含有刺五加苷類活性成分的組合物作為制備具有癌癥化療增效作用或減毒作用的食品或藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特征在于所述組合物包括刺五加苷B和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的總含量在60%~100%范圍內(nèi)。所述含有刺五加苷類活性成分的組合物保留了原植物中苷類成分，并提高了產(chǎn)品純度，可應(yīng)用于相關(guān)藥品和食品領(lǐng)域。
文檔編號A23L1/29GK102283875SQ20111020722
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月25日
發(fā)明者劉江云, 劉艷麗, 張苗苗, 楊世林, 許瓊明, 賈丹, 陳重 申請人:蘇州大學(xué)