專(zhuān)利名稱(chēng)：一種五花茶及其制備方法和抗氧化值的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于涼茶領(lǐng)域，涉及一種五花茶及其制備方法和抗氧化值的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
涼茶是具有嶺南特色的中國(guó)民間傳統(tǒng)飲品，近年來(lái)廣東涼茶以其獨(dú)特的文化內(nèi)涵和卓越的保健功效越來(lái)越受到現(xiàn)代飲料市場(chǎng)的關(guān)注。廣東涼茶具有“清熱解毒、下火去濕” 的功效與其富含多酚類(lèi)化合物，具有抗氧化活性，與維持機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的平衡有關(guān)。 目前市場(chǎng)上涼茶種類(lèi)繁多，但關(guān)于產(chǎn)品功能方面還缺少一個(gè)基本的判別標(biāo)準(zhǔn)。研究表明食品抗氧化能力與其清除自由基及提高人體免疫力有很大的關(guān)系，選擇抗氧化能力作為五花茶等涼茶的功效判別之一具有一定的實(shí)用價(jià)值及科學(xué)意義。目前測(cè)定抗氧化能力的方法雖然很多，但還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，其中DPPH法和!^3+ 還原能力法的反應(yīng)環(huán)境與人體生理環(huán)境有較大差異，不能有效反映功能物質(zhì)在體內(nèi)的抗氧化效果。銅離子還原能力(CUPRAC)法是一種簡(jiǎn)單、低成本、廣泛適用的抗氧化活性測(cè)定方法，被用于測(cè)定多酚、V。、VE等抗氧化物的活性。一般的CUPRAC法以新亞銅試劑(Ne)為Cu+ 的螯合劑，近來(lái)有報(bào)道指可用 BCS (Bathocuproinedisulfonic acid disodium salt)代替 Nc作為螯合劑應(yīng)用于CUPRAC法，原理是抗氧化物質(zhì)把反應(yīng)體系中的Cu2+還原成Cu+，BCS 與Cu+螯合生成在480-490nm處有強(qiáng)吸收的有色產(chǎn)物。本方法在此基礎(chǔ)上將酶標(biāo)儀應(yīng)用到 Cu ( I) -BCS體系抗氧化測(cè)定方法 (CUPRAC-BCS法)中，并進(jìn)一步優(yōu)化了 CUPRAC-BCS法的各項(xiàng)測(cè)定參數(shù)，建立一個(gè)快速、準(zhǔn)確、 高通量，能用于測(cè)定涼茶等食品抗氧化能力的新方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種具有抗氧化能力的五花茶及其制備方法，并進(jìn)一步優(yōu)化了 CUPRAC-BCS法的各項(xiàng)測(cè)定參數(shù)，建立一個(gè)快速、準(zhǔn)確、高通量， 能用于測(cè)定涼茶等食品抗氧化能力的檢測(cè)方法。本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)
一種五花茶，其配方包括金銀花10-25份、木棉花10-25份、槐花10-25份、葛花10-25 份和菊花10-25份。一種五花茶的制備方法按配方稱(chēng)取金銀花、木棉花、槐花、葛花和菊花，加入相當(dāng)于原料總重量15倍的水，煮沸后，在100°C保溫lh，立即過(guò)濾，濾液在75°C滅菌30min。本發(fā)明的另一目的在于，提供一種檢測(cè)五花茶的抗氧化值的方法，包括以下步驟；
(1)將1 mM Trolox 溶液，稀釋后得到濃度分別為 0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、 0. 8,0. 9mM的Trolox溶液，在_70°C儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?br> (2)在30 μ L 濃度分別為 0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9,1. OmM 的 Trolox 溶液中，均加入30 μ L、ImM的CuSO4溶液和30 μ L、2mM的BCS溶液，最后加入210 μ L、50mM、PH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液，振蕩10s，反應(yīng)20min，490nm處用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn).
一入 ，
(3)取30 μ L經(jīng)過(guò)稀釋的涼茶，然后加入30 μ L、ImM的CuSO4溶液與30 μ L、2mM的BCS 溶液，最后加入210 μ L、50mM、pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液，振蕩10s，反應(yīng)20min，490nm處檢測(cè)吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算涼茶的Trolox的濃度，單位ym0l TE/L。單位的含義是每升涼茶相當(dāng)于多少μπιο WjTrolox, TE是iTrolox equivalents 的英文縮寫(xiě)，每升樣液中的抗氧化值是以相當(dāng)于多少ymol的Trolox的抗氧化能力來(lái)表示的。比如50 μπιο TE/L是指每升樣液的抗氧化性相當(dāng)于50 μ mol Trolox的抗氧化能力。BCS (Bathocuproinedisulfonic acid disodium salt (2, 9-Dimethyl-4, 7-diph enyl-1, 10- phenantrolinedisulfonic aciddisodium salt, BCS) 購(gòu)于美 15 Alfa 公司)
步驟(2)所述CuSO4溶液和BCS溶液均用雙蒸水配制。所述1 mM Trolox溶液是稱(chēng)取25 mg Trolox，用pH 7. 4磷酸鹽緩沖液溶解并定容至100 mL得到的。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)所具有的優(yōu)點(diǎn)及有益效果
(1)采用優(yōu)選的配方制得的五花茶具有良好的抗氧化能力，去火去濕的功效更優(yōu)，還可根據(jù)消費(fèi)者的習(xí)慣調(diào)制不同的口味。(2)本方法建立的“CUPRAC-BCS酶標(biāo)儀法”測(cè)定涼茶樣液的抗氧化值，測(cè)定結(jié)果與總酚含量(TPC)、DPPH、Fe3+還原能力法的相關(guān)性均達(dá)到顯著水平(P < 0. 05)。本方法反應(yīng)穩(wěn)定、簡(jiǎn)單快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，測(cè)定條件接近人體生理環(huán)境，可用于大批量樣品的檢測(cè)，可很好地反映涼茶抗氧化值效果。


圖1為本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
具體實(shí)施例方式為更好理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于實(shí)施例表示的范圍。實(shí)施例1
稱(chēng)取金銀花log、木棉花10kg、槐花10g、葛花10kg、菊花IOkg于燒杯中。加15倍水， 煮沸，100°C保溫lh。取出，趁熱過(guò)濾，收集濾液于玻璃瓶中，封蓋，75°C，30min滅菌，常溫保存。搖勻后吸取30 μ L用于抗氧化值檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果為274 μ mol TE/L。實(shí)施例2
稱(chēng)取金銀花10kg、木棉花Mkg、槐花Mkg、葛花Mkg、菊花15kg于燒杯中。加15倍水， 煮沸，100°C保溫lh。取出，趁熱過(guò)濾，收集濾液于玻璃瓶中，封蓋，75°C，30min滅菌，常溫保存。搖勻后吸取30 μ L用于抗氧化值檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果為146 μ mol TE/L。實(shí)施例3
稱(chēng)取金銀花20kg、木棉花Mkg、槐花25kg、葛花20kg、菊花IOkg于燒杯中。加15倍水， 煮沸，100°C保溫lh。取出，趁熱過(guò)濾，收集濾液于玻璃瓶中，封蓋，75°C，30min滅菌，常溫保存。搖勻后吸取30 μ L用于抗氧化值檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果為450 μ mol TE/L。實(shí)施例4
稱(chēng)取金銀花25kg、木棉花25kg、槐花10kg、葛花20kg、菊花15kg于燒杯中。加15倍水， 煮沸，100°C保溫lh。取出，趁熱過(guò)濾，收集濾液于玻璃瓶中，封蓋，75°C，30min滅菌，常溫保存。搖勻后吸取30 μ L用于抗氧化值檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果為415 μ mol TE/L。本發(fā)明涼茶的制作步驟如下
①稱(chēng)樣分別按一定比例稱(chēng)取干的金銀花、木棉花、槐花、葛花、菊花，置于燒杯中。加 15倍水，煮沸，100°C保溫lh。具體配伍組成見(jiàn)表1。②取出，趁熱過(guò)濾，收集濾液于玻璃瓶中，封蓋，75 °C，30min滅菌，常溫保存。表1涼茶配方
1
3#
1# #
# 講
,5
3、抗氧化能力檢測(cè) ①、試劑的配制
Trolox溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取25 mg ο οχ，用pH 7. 4磷酸鹽緩沖液溶解并定容至100 mL, 即為1 mM Trolox溶液，分裝于1. 5mL離心小管中，儲(chǔ)存于_70°C超低溫冰箱中備用，用時(shí)稀釋。其他無(wú)特別說(shuō)明的溶液均用雙蒸水配制。
②、涼茶抗氧化能力檢測(cè)
在96孔酶標(biāo)板中分別加入30 μ L不同濃度Trolox溶液(0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5,0. 6、 0. 7、0· 8、0· 9、1· O mM )，然后各孔加入 30 μ L CuSO4 溶液(ImM)與 30 μ L BCS 溶液(2mM)，最后加入210 μ L ρΗ7. 4磷酸鹽緩沖溶液(50mM)。振蕩10s，反應(yīng)20min，490nm處檢測(cè)吸光值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖1所示。取30 μ L經(jīng)過(guò)稀釋的涼茶，然后加入30 μ L、lmM的CuSO4 溶液與30μ L、2mM的BCS溶液，最后加入210μ L、50mM、pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液，振蕩10s， 反應(yīng)20min，490nm處檢測(cè)吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到?jīng)霾璧腡rolox的濃度，計(jì)算涼茶抗氧化值 CUPRAC-BCS ( μ mol TE/L)。不同配伍涼茶抗氧化值檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2?？偡雍坎捎胕^olin-Ciocalteu法測(cè)定，參考文獻(xiàn)Singleton VL, Orthofer r, & Lamuela-Raventos RM. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent [J]. Method in Enzymology, 1999，299: 152 - 178.記載的測(cè)定方法。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，涼茶原液稀釋10倍。以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)物繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(25-200 mg/L)。結(jié)果以沒(méi)食子酸當(dāng)量(gallic acid equivalents) 表示，單位為mg GAE/ L0與DPPH法、ORAC法、Fe3+還原能力法的比較，分別取不同的涼茶樣液，用DPPH法、 ORAC法、Fe3+還原能力法檢測(cè)抗氧化活性，并與BCS法進(jìn)行相關(guān)性分析。與DPPH法、ORAC法、Fe3+還原能力法比較，結(jié)果見(jiàn)表3。計(jì)算表3結(jié)果發(fā)現(xiàn)， CUPRAC-BCS法與總酚(TPC)、DPPH、Fe3+還原能力法的相關(guān)性均達(dá)到顯著水平(P < 0. 05)， 其中最高為T(mén)PC/CUPRAC-BCS (0. 997 )，達(dá)到了極顯著的水平，其次是DPPH/CUPRAC-BCS (0. 7436)，最低為 Fe3+還原能力 /CUPRAC-BCS (0. 7415)。ORAC 與 CUPRAC-BCS 法之間的相關(guān)性不顯著(R2=O. 3081)。本方法反應(yīng)穩(wěn)定、簡(jiǎn)單快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，測(cè)定條件接近人體生理環(huán)境，可用于大批量樣品的檢測(cè)，可很好地反映涼茶抗氧化值效果。表2涼茶樣品的抗氧化性
權(quán)利要求
1.一種五花茶，其特征在于，其組成包括金銀花10-25份、木棉花10-25份、槐花 10-25份、葛花10-25份和菊花10-25份。
2.權(quán)利要求1所述五花茶的制備方法，其特征在于，按配方稱(chēng)取金銀花、木棉花、槐花、 葛花和菊花，加入相當(dāng)于原料總重量15倍的水，煮沸后，在100°C保溫lh，立即過(guò)濾，濾液在 75°C 滅菌 30min。
3.—種檢測(cè)權(quán)利要求1五花茶的抗氧化值的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將1 mM Trolox 溶液，稀釋后得到濃度分別為 0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、 0. 8,0. 9mM的Trolox溶液，在_70°C儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?2)在30 μ L 濃度分別為 0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9,1. OmM 的 Trolox 溶液中，均加入30 μ LUmM的CuSO4溶液和30 μ L、2mM的BCS溶液，最后加入210 μ L、50mM、 pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液，振蕩10s，反應(yīng)20min，490nm處用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn).一入 ，(3)取30μ L經(jīng)過(guò)稀釋的涼茶，然后加入30 μ L、ImM的CuSO4溶液與30 μ L、2mM的BCS 溶液，最后加入210 μ L、50mM、pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液，振蕩10s，反應(yīng)20min，490nm處檢測(cè)吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算涼茶的Trolox的濃度，單位ym0l TE/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述CuSO4溶液和BCS溶液均用雙蒸水配制。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或或4所述的方法，其特征在于，所述1mM Trolox溶液是稱(chēng)取25 mg Trolox，用pH 7. 4磷酸鹽緩沖液溶解并定容至100 mL得到的。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種五花茶及其制備方法和抗氧化值的檢測(cè)方法。本發(fā)明五花茶組成為金銀花10-25份、木棉花10-25份、槐花10-25份、葛花10-25份和菊花10-25份，經(jīng)過(guò)配伍調(diào)制，制得具有良好抗氧化能力的五花茶。通過(guò)優(yōu)化配方，可以使該茶達(dá)到最佳抗氧化效果。利用本方法提供的“CUPRAC-BCS酶標(biāo)儀法”測(cè)定抗氧化值，可以對(duì)其抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。
文檔編號(hào)A23F3/34GK102246878SQ20111013250
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月23日
發(fā)明者余以剛, 古志平, 吳暉, 吳聰俊, 李曉鳳, 肖性龍, 賴(lài)富饒 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)