專利名稱：產(chǎn)生細菌素的戊糖乳桿菌及其在食品和藥物組合物中的應用的制作方法
產(chǎn)生細菌素的戊糖乳桿菌及其在食品和藥物組合物中的應
用本發(fā)明涉及戊糖乳桿菌(LactcAacillus pentosus)的選定菌株，其用作用于防治或藥物治療(curative treatment)由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的感染的藥物。特別是，本發(fā)明涉及包含戊糖乳桿菌的所述菌株的組合物，所述組合物用于制備用來抵抗、減少或抑制革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在的食品或藥物組合物。此外，本發(fā)明涉及戊糖乳桿菌的所述選定菌株在制備用于抵抗、減少或抑制革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在的藥物中的應用；特別是在制備用于治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的感染的藥物中的應用。最后，本發(fā)明涉及戊糖乳桿菌的所述選定菌株在制備待添加至乳制品制備用起子培養(yǎng)物的技術(shù)添加劑中的應用。已知大腸桿菌是分布廣泛的革蘭氏陰性菌的一個實例，而革蘭氏陰性菌是造成大多數(shù)細菌感染的原因，有時還會造成嚴重感染，例如細菌性膀胱炎、腸胃炎和胃小腸結(jié)腸炎。通常，由革蘭氏陰性菌引起的感染是使用如抗生素等藥物進行治療的。不過，隨著時間的推移，一些革蘭氏陰性菌已經(jīng)進化得對一些常用藥物有一定程度的抗性，而這有時則限制了這些藥物的使用和得到的結(jié)果。此外，在常見的醫(yī)療實踐中，細菌感染依賴盡可能有效的藥物療法來立即進行治療。該方法往往是在不能夠等待下述微生物測試的情況下采用的，該微生物測試能夠揭示涉及了何種細菌及其對何種抗生素敏感。因而，人們按照經(jīng)驗行事，對于在感染的基礎(chǔ)上假定的細菌科施用設(shè)想最為有效的已知抗生素。然而，上述方法意味著在事先并不知曉此類療法是否會使問題得到解決并隨后恢復的情況下施用可觀量的藥物(例如抗生素)。此外，也不應當忽視與施用抗生素有關(guān)的可能的副作用，如公知的那樣，該抗生素還會作用于對身體積極有用的細菌叢。因此，需要有一種療法來防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌引起的感染，該療法能夠用于代替?zhèn)鹘y(tǒng)藥物或者與傳統(tǒng)藥物組合，從而克服因有時濫用抗生素所產(chǎn)生的缺陷。已知微生物能夠激活一系列的防御系統(tǒng)，例如通過產(chǎn)生細菌素而調(diào)節(jié)的系統(tǒng)。術(shù)語“細菌素”用來表示由革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)化合物，其對于與生產(chǎn)菌菌株不同但與其密切相關(guān)的細菌菌株有抑制作用。細菌素是乳酸菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，它們展示出顯著的抗微生物活性，由此細菌素已經(jīng)引起了越來越多的關(guān)注，尤其是在臨床和技術(shù)/食品領(lǐng)域中。就在臨床領(lǐng)域中的應用而言，細菌素代表了抗生素的一種有效替代品。在食品領(lǐng)域中，細菌素可以用作生物防腐劑來控制并遏制造成中毒和食品基質(zhì) (例如在奶制品中)腐敗的不良細菌群。
因此，細菌素在食品和藥物領(lǐng)域中的應用可能是一種用于生產(chǎn)其定義為“高品質(zhì)” 產(chǎn)品的技術(shù)上正確且有效的工具，其在沒有任何改變下可絕對安全地進行長期保存，從而保持其固有的感官特性。最后，細菌素作為抗微生物物質(zhì)的有效應用包括使用產(chǎn)生細菌素的細菌培養(yǎng)物作為膳食益生菌。因此，仍然需要鑒別并選擇能夠抵抗(通過殺菌作用)和/或減少或抑制(通過抑菌作用)革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在的乳酸菌的菌株。特別是，仍然需要鑒別并選擇能夠抵抗、減少或抑制廣譜革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的乳酸菌的菌株，從而使其能夠在食品或藥物領(lǐng)域中有效地用于完全或部分代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素。此外，仍然需要鑒別并選擇能夠在混合物中一起使用的乳酸菌的菌株，這歸因于在各選定的菌株內(nèi)沒有對于該混合物中包含的或是腸內(nèi)腸道菌叢中已經(jīng)存在的其他細菌的抑制作用。本申請人已經(jīng)鑒別并選擇了能夠?qū)ι鲜鲂枨筇峁┻m當響應的戊糖乳桿菌的菌株。鑒于此，本發(fā)明的目的在于戊糖乳桿菌的菌株，該菌株以DSM第21980號保藏在德國DSMZ研究所，其用作用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的感染的藥物。本發(fā)明的另一個目的在于包含所述戊糖乳桿菌DSM第21980號的組合物，所述組合物用于制備用來抵抗、減少或抑制革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在的食品或藥物組合物。本發(fā)明的另一目的在于所述菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號在制備用來抵抗、減少或抑制革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在的藥物中的應用；特別是在制備用于治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的感染的藥物中的應用。本發(fā)明的另一目的在于所述菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號在制備待添加至乳制品制備用起子培養(yǎng)物的技術(shù)添加劑中的應用。本發(fā)明的其他優(yōu)選實施方式將從隨后的詳細描述中變得清楚。表1顯示了實驗測試，其中測試了一組細菌菌株對大腸桿菌的抑制活性。表1中所示如下(_)無暈圈(無抑制)；(+)lmm 2mm的暈圈一(*)斑點內(nèi)有大量大腸桿菌菌落； (++)3mm 5mm的暈圈一(**)斑點內(nèi)有少量大腸桿菌菌落；(+++)大于5mm的暈圈一(***) 無大腸桿菌菌落(最大抑制)。表2顯示了抑制測試。表3顯示了胃抗耐性測試。

圖1顯示了菌株戊糖乳桿菌LPS 01即DSM 21980對大腸桿菌ATCC 8739的生長抑制的測試。圖2顯示了菌株戊糖乳桿菌LPS 01即DSM 21980對大腸桿菌ATCC 10536的生長抑制的測試。圖3顯示了菌株戊糖乳桿菌LPS 01即DSM 21980對大腸桿菌ATCC 35218的生長抑制的測試。
圖4顯示了菌株戊糖乳桿菌LPS 01即DSM 21980對大腸桿菌ATCC 25922的生長抑制的測試。申請人:通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的乳酸菌分離技術(shù)由天然青貯玉米中鑒別并選擇了戊糖乳桿菌的菌株。該菌株由意大利諾瓦拉的益生菌股份公司于2008年11月14日以以下登記號保藏在德國的DSMZ 戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPSOl)。菌株DSM 21980是根據(jù)布達佩斯條約進行保藏的。在一個優(yōu)選實施方式中，戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPSOl)旨在用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的復發(fā)性(再發(fā)性)感染。在另一優(yōu)選實施方式中，戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPSOl)旨在用于防治或藥物治療腸胃炎或胃小腸結(jié)腸炎，優(yōu)選用于防止或藥物治療腹瀉型排泄(diarrheic discharge)及由此產(chǎn)生的伴有發(fā)熱和體虛的脫水、惡心、腹瀉、腹部絞痛。所選定并分離的菌株基于糖發(fā)酵曲線(API 50 CHL bi0M6rieux)進行表征并分類。該物種通過物種特異性PCR擴增(Torriani S.，F(xiàn)elis G. E.，Dellaglio F.， Differentiation of Lactobacillus plantarum, L. pentosus, and L. paraplantarum by recA Gene Sequenze Analysis and Multiplex PCR Assay with recA Gene-Derived Primers. Appl Environ Microbiol. 2001 年 8 月；3450 3454)得到了確認。使用PFGE(脈沖場凝膠電泳)技術(shù)對該菌株進行生物學分型(Tynlcken S. , Satokari R. , Saarela M. , MattiIa-Sandholm T. , Saxelin M.Comparison of Ribotyping, Randomly Amplified Polymorphic DNA Analysis, and Pulsed-Field Gel Electrophoresis in Typing of Lactobacillus rhamnosus and L. casei strains. Appl And Envirom Microb. 1999 年 9 月；3908 3914)。申請人:測試了上述戊糖乳桿菌DSM第21980號的抗大腸桿菌活性，其中將該菌株放置得與下列大腸桿菌直接接觸ATCC 35218, ATCC 10536, ATCC 8739和ATCC25922。不過，為了獲得比較用結(jié)果，如下所述還測試了益生乳酸菌的其他菌株。1)羅伊氏乳桿菌ATCC 53608，其作為兩種不同的市售產(chǎn)品，即Reuterin(Noos)和 Reuflor(Italchimici)中唯一的微生物組分存在?？紤]到存在于兩種制劑中的菌株ATCC 53608產(chǎn)生對革蘭氏陰性菌具有活性的細菌素(稱為reuterin)的已知能力，因而將1中提及的產(chǎn)品作為對照陽性樣品進行檢測。顯然，為了避免該兩種產(chǎn)品的制劑中存在的賦形劑的任何形式的直接作用，首先分離出微生物ATCC 53608，然后在培養(yǎng)肉湯中進行培養(yǎng)，之后進行檢測。2)鼠李糖乳桿菌DSM第21981號(LR06)，所關(guān)注的另一菌株。3)發(fā)酵乳桿菌CNCM 1-789 (LF5)，其對陰道念珠菌具有活性，因此被看作是制造具有廣譜作用的細菌素的良好候選物。4)鼠李糖乳桿菌GG，ATCC 53103，作為有效腸道菌落而世界公知的且研究最多的
益生菌之一。5)植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)LMG P_21020、LMG P-21021、 LMGP-21022 和 LMG P-21023。上述四個菌株 LMG P_21020、LMG P-21021、LMG P-21022 和 LMG P-21023具有制造有抗菌作用的細菌素(稱為plantaricin)的能力。本發(fā)明的菌株與植物乳桿菌的四個菌株LMG P-21020, LMG P-2102ULMG P-21022和LMGP-21023之間的比較用于說明在操作條件相同的情況下所產(chǎn)生的細菌素的數(shù)量。6)干酪乳桿菌副干酪亞種(Lactobacillus casei sub. paracasei)LPC08, DSM21718，用作陰性對照樣品。7)嗜酸乳桿菌DSM第21717號(LA02)，用作陰性對照樣品。8)乳酸乳桿菌乳脂亞種(Lactobacillus lactis sub. cremoris) DSM 第 19072 號 (NSOl)，用作乳鏈菌肽的生產(chǎn)菌，乳鏈菌肽已知是具有廣譜作用(例如，對李斯特氏桿菌和梭狀芽孢桿菌有效)的細菌素。9)嗜熱鏈球菌DSM第18616號(FP4)，用作陰性對照樣品。目標菌株以大腸桿菌 ATCC 35218,ATCC 10536,ATCC 8739 和 ATCC 25922 為實例， 這些菌株處于凍干形式，且具有至少為lX108CFU/g的裝載量。大腸桿菌的各菌株以Iml的生理溶液(NaCl 0.8%)進行重構(gòu)，并以100 μ 1/皮氏培養(yǎng)皿(容納12ml 15ml的瓊脂化LaptG培養(yǎng)基)的比例使用。1升的LaptG培養(yǎng)肉湯具有細菌蛋白胨15g、細菌胰蛋白胨10g、葡萄糖10g、酵母提取物10g、吐溫801g、蒸餾水至1000ml，pH為6. 5 6. 6。對固相(瓊脂化)中的培養(yǎng)基，加入15g細菌瓊脂。兩種培養(yǎng)基(肉湯培養(yǎng)基和瓊脂)在121°C滅菌15分鐘(Font De Valdez, G和 coll. Influence of the recovery medium on the viability of injured freeze—dried lactic acid bacteria Milchwissenschaft 40(9)518 520 (1985))。用熱的瓊脂化Laptg培養(yǎng)基準備皮氏培養(yǎng)皿，并使其在層流凈化罩下固化。隨后， 使用無菌抹刀將100μ1目標菌株均勻地分布在Laptg培養(yǎng)基的整個表面上。溫育前，使由此準備的皮氏培養(yǎng)皿在層流凈化罩下干燥。表1中顯示了抑制檢測的結(jié)果。乳桿菌在液體MRS培養(yǎng)基(肉湯)和LaptG肉湯中培養(yǎng)，而乳球菌則在液體M17 培養(yǎng)基(肉湯)和LaptG肉湯中培養(yǎng)。培養(yǎng)基的成分和組成是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。全部細菌均由母種培養(yǎng)物開始以的速率溫育，并在恒溫浴中于37°C溫育16 18小時。溫育結(jié)束時，測量肉湯培養(yǎng)基的最終pH值(參見表1的欄)。重要的是確定由各細菌產(chǎn)生的乳酸的數(shù)量，因為需要驗證所述酸度不是造成抑制大腸桿菌生長的唯一參數(shù)。溫育結(jié)束時，使各肉湯培養(yǎng)物的等分樣在5000rpm/5分鐘下進行離心，以得到浙濾過(exhausted)的培養(yǎng)肉湯和細胞團塊。浙濾過的培養(yǎng)肉湯使用孔徑為0. 22 μ m的注射器式濾器進行過濾，然后進行測試。隨后，細胞團塊在無菌水中洗滌一次以清除培養(yǎng)基的殘留物。洗滌過的細胞團塊然后再次懸浮于生理溶液中，由此獲得基于McFarland量表為0. 5 的濁度。該值使得可能從對全部測試細菌相等的細胞初始量開始。在進行抑制檢測之前，將要進行測試的各斑點的位置標注在皮氏培養(yǎng)皿的底部， 該皮氏培養(yǎng)皿制備得使目標菌株位于LaptG瓊脂基質(zhì)上。將10 μ 1的各細菌肉湯培養(yǎng)物點(spot)在接種有目標菌株的培養(yǎng)皿的表面上。也對下列物質(zhì)進行分析a)洗滌過的細菌懸浮液。表1中的數(shù)據(jù)(參見洗滌過的細胞一欄)顯示，細菌素的產(chǎn)生是在測試細菌的復制代謝中進行的。這表明本發(fā)明所涉及的菌株DSM 21980能夠抑制、抵抗和/或減少大腸桿菌的生長。因此，凍干的菌株DSM 21980 一旦重構(gòu)并處于產(chǎn)生其基礎(chǔ)代謝的條件下將能夠抑制、抵抗和/或減少大腸桿菌的生長。b)得自多種細菌的浙濾過的培養(yǎng)肉湯。表1中的數(shù)據(jù)(參見過濾的肉湯一欄)顯示出培養(yǎng)肉湯中存在多少細菌素。這說明細菌素是外生的、有活性的并以足夠的量存在以抑制大腸桿菌。c)培養(yǎng)肉湯MRS、M17和LaptG，這些培養(yǎng)肉湯通過加入乳酸進行酸化直至達到接近于培養(yǎng)肉湯的最終PH(3. 9 4. 5)的pH。表1中的數(shù)據(jù)(參見倒數(shù)4行)顯示，對大腸桿菌的抑制作用主要是因為產(chǎn)生了細菌素而非培養(yǎng)基的PH。d)無菌水由此準備的培養(yǎng)皿在恒溫器中于37°C溫育M小時。溫育結(jié)束時，除了存在細菌素的區(qū)域，在整個培養(yǎng)皿其余各處將均勻生長有目標菌株。數(shù)據(jù)顯示在表1中。作為表1中顯示結(jié)果的確認，下面給出的實際例子涉及菌株戊糖乳桿菌LPS 01即 DSM 21980對大腸桿菌的生長抑制的測試。在以下所示的四個圖像中(圖1 4)中，可以注意到-容納有瓊脂化LaptG培養(yǎng)基的皮氏培養(yǎng)皿具有分布在其整個表面上的部分目標菌株大腸桿菌；-符號和黑線限定了屬于各類型測試樣品的扇區(qū)；-“斑點”由10μ 1的各測試樣品構(gòu)成。應當指出的是，在樣品由完整肉湯培養(yǎng)物構(gòu)成的情況中，該斑點與培養(yǎng)皿的剩余部分相比顯得更加不透明，表明已經(jīng)發(fā)生了細菌繁殖；-抑制暈圈，即扇區(qū)1-2-3-4-5中各培養(yǎng)皿中存在的暗色部分(其中目標菌株因細菌素的作用而并未繁殖)與細菌素數(shù)量成正比。各扇區(qū)描述如下扇區(qū)1 菌株戊糖乳桿菌LPS 01即DSM 21980的完整肉湯培養(yǎng)物(細胞+LaptG培養(yǎng)基)的抑制效果。扇區(qū)2 在允許菌株自身生長后，菌株戊糖乳桿菌LPS 01即DSM 21980的過濾肉湯的抑制效果。由暗色暈圈的存在可以推斷出，產(chǎn)生的細菌素是外生的，因為其是由細胞分泌的。 產(chǎn)生的細菌素在培養(yǎng)肉湯中保持活性。扇區(qū)3 菌株鼠李糖乳桿菌DSM第21981號(LR06)的完整肉湯培養(yǎng)基(細胞和 LaptG培養(yǎng)基)的抑制效果。扇區(qū)4 菌株羅伊氏乳桿菌ATCC 53608的完整肉湯培養(yǎng)基(細胞+LaptG培養(yǎng)基) 的抑制效果。扇區(qū)5 通過添加0. IN的蘇打使pH中和至6. 8后的過濾LaptG肉湯(其中生長了菌株戊糖乳桿菌DSM 21980 (LPS 01))的抑制效果，以消除施加于目標物的作用僅由培養(yǎng)基(培養(yǎng)肉湯)的酸度確定的可能性。扇區(qū)6 =LaptG培養(yǎng)肉湯本身的抑制效果。在該情況中未觀察到暈圈的形成，這是因為培養(yǎng)肉湯中不含具有抑制作用的成分。四個圖像涉及在相同操作條件下進行的試驗，不過每次使用了不同的大腸桿菌菌株大腸桿菌 ATCC 8739 (圖 1)、ATCC 10536 (圖 2)、ATCC 35218 (圖 3)禾口 ATCC25922 (圖 4)?；谏鲜鲈囼灴梢酝茢喑?，菌株戊糖乳桿菌DSM 21980 (LPS 01)憑借其產(chǎn)生大量更為有效的細菌素的能力，而對于全部大腸桿菌菌株ATCC 8739、ATCC 10536、ATCC35218 和ATCC 25922均顯示出優(yōu)異的抑制能力。基于以上報道的結(jié)果可以推斷出菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)具有廣譜作用，因為其能夠抵抗、抑制并減少全部四種受測試的大腸桿菌菌株的生長。此外，基于表1和圖1 4中顯示的結(jié)果，可以推斷出菌株戊糖乳桿菌DSM第21980 號(LPS 01)能夠抵抗(通過殺菌作用)和/或減少或抑制(通過抑菌作用)革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在。此外，申請人測試了本發(fā)明涉及的菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)分別對其他益生菌菌株，即鼠李糖乳桿菌DSM第21981號(LR06)和植物乳桿菌第LMGP-21021 號(LPOl)的對抗(against)。該測試的目的在于驗證由戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)產(chǎn)生的細菌素是否會在其他細菌的生長過程中因細菌素的存在而以某種方式抑制所述其他細菌鼠李糖乳桿菌DSM第21981號(LR06)和植物乳桿菌第LMGP-21021號(LPOl)。因此，測試如下進行其中使菌株鼠李糖乳桿菌DSM第21981號(LR06)和植物乳桿菌第LMG P-21021號(LPOl)嚴格按照上述檢測與病原體大腸桿菌進行交叉(cross)。與所用的菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)、鼠李糖乳桿菌DSM第21981 號(LR06)和植物乳桿菌第LMG P-21021號(LPOl)有關(guān)的數(shù)據(jù)顯示在表2中。表2中，將不存在暈圈(無抑制)顯示為(_)。由表2可以看出，沒有細菌顯示出對其他交叉益生菌的抑制能力。菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)并未妨礙益生菌的其他菌株或妨礙有益的細菌叢。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式涉及包含戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)的組合物，所述組合物用作用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的感染的藥物。本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方式涉及用作用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的復發(fā)性(再發(fā)性)感染的藥物的組合物。優(yōu)選的是，所述組合物旨在用于防治或藥物治療腸胃炎或胃小腸結(jié)腸炎。進而更優(yōu)選的是，所述組合物旨在用于防治或藥物治療腹瀉型排泄及由此產(chǎn)生的伴有發(fā)熱和體虛的脫水、惡心、腹瀉、腹部絞痛。在上述組合物中，菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)可以存活或死亡，或者作為另一選擇可以存在其細胞成分。在一個優(yōu)選實施方式中，處于活菌或死菌、或者作為另一選擇處于其細胞成分形式的菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)可用來制備作為技術(shù)添加劑而在乳品工業(yè)中具有有效應用的膳食組合物。將所述膳食組合物添加至乳制品制備用起子培養(yǎng)物中。在一個優(yōu)選實施方式中，上述組合物還可以包含菌株鼠李糖乳桿菌DSM第21981號(LR06)和/或菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)與菌株戊糖乳桿菌DSM第21980 號(LPS 01)的組合。組合物以相對于組合物的總重量為1 X 106CFU/g 1 X 10nCFU/g,優(yōu)選為 1 X 108CFU/g ι χ 1010CFU/g的量包含作為活菌、死菌或其細胞成分的菌株戊糖乳桿菌DSM 第 21980 號(LPS 01)。在一個優(yōu)選實施方式中，上述組合物以IX IO6CFU/劑量 IX IO11CFU/劑量，優(yōu)選為IX IO8CFU/劑量 IX IOltlCFU/劑量的量包含作為活菌、死菌或其細胞成分的菌株。該劑量可以為例如lg、3g、5g和IOgo所述組合物還可以包含從飲食和藥物的觀點來看能夠接受的添加劑和共配物。所述組合物可含有維生素，例如葉酸、維生素B12、核黃素、吡哆醛磷酸鹽、維生素E 和抗壞血酸；抗氧化劑，例如多酚、類黃酮、原花青素和兒茶酚；氨基酸，例如谷酰胺和蛋氨酸；礦物質(zhì)，例如，硒、銅、鎂和鋅；植物來源的活性物質(zhì)(優(yōu)選干提取物的形式)，例如蔓越莓、紫錐花、葡萄柚籽提取物、木賊、熊果、迷迭香和蜂膠。在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物還以相對于組合物總重量為1重量％ 30重量％、優(yōu)選5重量％ 20重量％的量包含至少一種具有益生菌性質(zhì)的物質(zhì)。所述益生菌物質(zhì)包括低聚果糖(F0Q、低聚木糖0(0 、低聚半乳糖、菊粉、阿拉伯半乳聚糖和葡萄糖寡聚糖。在一個優(yōu)選實施方式中，通過刺激抗大腸桿菌細菌素來誘導菌株戊糖乳桿菌DSM 第21980號(LPS 01)來大規(guī)模地產(chǎn)生細菌素。從上述大規(guī)模生產(chǎn)中提取獲得的細菌素，從而獲得本發(fā)明所述的細菌素。本發(fā)明的細菌素可用在上文所述的組合物中以抵抗(通過殺菌作用)和/或減少或抑制(通過抑菌作用)革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌的存在。此外，準備胃抗耐性測試，以評估菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)以足夠大的數(shù)量到達腸道從而定植于腸壁的能力。這些測試根據(jù)本領(lǐng)域中已知的方法進行，所述方法引用在所附的參考文獻列表中(參考文獻1 幻。在以菌株植物乳桿菌DSM 9843 作為陽性對照物的情況下來準備該測試，因為該菌株是屬于能夠定植于腸道的人類來源的植物科的菌株。此外，測試了菌株鼠李糖乳桿菌ATCC 53103 (LGG)，因為其是一種得到充分研究并良好表征的益生乳桿菌。數(shù)據(jù)顯示在表3中。表3顯示了益生菌菌株在37°C于不同的接觸時間(5分鐘、30分鐘和60分鐘)后對模擬的兩種不同類型的胃液和胰腺分泌物的生存百分比。通過比較在添加了膽汁鹽或人膽汁的培養(yǎng)基中生長的菌落數(shù)與未添加膽汁鹽或人膽汁的培養(yǎng)基中生長的菌落數(shù)來獲得生存率對膽汁分泌物的結(jié)果?；诒?中的數(shù)據(jù)可以推斷出，菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPSOl)在胃與十二指腸通道中顯示出良好的生存率，完全媲美于對照菌株植物乳桿菌DSM第9843號的生存率。因此，菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPSOl)能夠通過胃腸屏障而定植于腸道。表1、圖1 4、表2和表3提供的數(shù)據(jù)支持了菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號 (LPSOl)在食品或藥物領(lǐng)域中作為傳統(tǒng)抗生素的全部或部分代替物而在防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌引起的感染中的應用。參考文獻
1.人胃液-Met. ht. 006 (DAS)文獻Del Piano M·，Morelli L. , Strozzi GP.，Allesina S.，Barba Μ. , Deidda F.，Lorenzini P.，Ballare Μ.，Montino F.，Orsello Μ.，Sartori Μ.，Garello Ε.， Carmagnola S. ， Pagliarulo Μ. ， Capurso S. Probiotics :from research to consumer. Dig Liver Dis. 2006 年 12 月；38Suppl 2 :S248 55. Review。2.人造胃液-Met. ht. 022 (DAS)文■ Charteris WP.等，Development and application of an in vitro methodology to determine the transit tolerance of potentially probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium species in the upper human gastrointestinal tract. J Appl Microbiol. 1998 年 5 月；84 (5) :759 68。3.模擬胰液-Met. Int. 023 (DAS)文■ Charteris WP.等，Development and application of an in vitro methodology to determine the transit tolerance of potentially probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium species in the upper human gastrointestinal tract. Journal of Applied Microbiology 1998 ^5^ ；84(5) :759 68。Del Piano M.，Strozzi GP.，Barba Μ. ；Allesina S. ；Deidda F. Lorenzini P.， Morelli L ；CarmagnoIa S. ；Pagliarulo Μ. ；Balzarini Μ. ；Ballare Μ. ；Orsello Μ.； Montino F. ；Sartori Μ. ；Garello Ε. ；Capurso L In Vitro Sensitivity of Probiotics to Human Pancreatic Juice. Journal of Clinical Gastroenterology· 2008年8月 5 日。4.人膽汁-Met. Int. 024 (DAS)JC^ :Del Piano M. ，Morelli L. ，Strozzi GP. ，Allesina S. ，Barba Μ. ，Deidda F.，Lorenzini P.，Ballare Μ.，Montino F.，Orsello Μ.，Sartori Μ.，Garello Ε.， Carmagnola S.，Pagliarulo Μ.，S. Capurso Probiotics :from research to consumer. Dig Liver Dis. 2006 年 12 月；38Suppl 2 :S248 55. Review。5.膽汁鹽-Met. Int. 024 (DAS)文■ Charteris WP.等，Development and application of an in vitro methodology to determine the transit tolerance of potentially probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium species in the upper human gastrointestinal tract. J Appl Microbiol. 1998 年 5 月；84 (5) :759 68。
權(quán)利要求
1.戊糖乳桿菌LPS01，于2008年11月14日保藏在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)， 保藏號DSM第21980號。
2.戊糖乳桿菌LPS01，于2008年11月14日保藏在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)， 保藏號DSM第21980號，所述戊糖乳桿菌LPS 01用作藥物。
3.戊糖乳桿菌LPS01，于2008年11月14日保藏在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)， 保藏號DSM第21980號，所述戊糖乳桿菌LPS 01用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選由腸球菌、大腸型細菌或大腸桿菌引起的感染。
4.如權(quán)利要求3所述的戊糖乳桿菌LPS01，所述戊糖乳桿菌LPS 01用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選由腸球菌、大腸型細菌或大腸桿菌引起的復發(fā)性感染。
5.戊糖乳桿菌LPS01，于2008年11月14日保藏在德國微生物菌種保藏中心(DSMZ)， 保藏號DSM第21980號，所述戊糖乳桿菌LPS 01用于防治或藥物治療腸胃炎或胃小腸結(jié)腸炎。
6.如權(quán)利要求5所述的戊糖乳桿菌LPS01，所述戊糖乳桿菌LPS 01用于防治或藥物治療腹瀉型排泄及由此產(chǎn)生的具有發(fā)熱和虛弱的脫水、惡心、腹瀉和腹部絞痛。
7.一種包含權(quán)利要求1所述的菌株的組合物，所述組合物用于制備用來抵抗、減少或抑制革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸型細菌或大腸桿菌的存在的營養(yǎng)組合物或藥物組合物。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，所述藥物組合物用作用來防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選由腸球菌、大腸型細菌或大腸桿菌引起的感染的藥物。
9.如權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，所述藥物組合物用作用來防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選由腸球菌、大腸型細菌或大腸桿菌引起的復發(fā)性感染的藥物。
10.如權(quán)利要求7 9中任一項所述的組合物，所述組合物用于防治或藥物治療腸胃炎或胃小腸結(jié)腸炎。
11.如權(quán)利要求7 10中任一項所述的組合物，所述組合物用于防治或藥物治療腹瀉型排泄及由此產(chǎn)生的具有發(fā)熱和虛弱的脫水、惡心、腹瀉和腹部絞痛。
12.如權(quán)利要求7所述的營養(yǎng)組合物，所述營養(yǎng)組合物用作待添加至乳制品制備用起子培養(yǎng)物的技術(shù)添加劑。
13.如權(quán)利要求7 11中任一項所述的組合物，所述組合物包含菌株鼠李糖乳桿菌 DSM第21981號(LR06)和/或菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)與菌株戊糖乳桿菌DSM第21980號(LPS 01)的組合。
14.權(quán)利要求1所述的菌株在制備用來抵抗、減少或抑制革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、 大腸型細菌或大腸桿菌的存在的藥物中的應用。
15.如權(quán)利要求14所述的應用，所述應用用來治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選由腸球菌、大腸型細菌或大腸桿菌引起的感染。
16.權(quán)利要求1所述的菌株在制備待添加至乳制品制備用起子培養(yǎng)物的技術(shù)添加劑中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及戊糖乳桿菌的選定菌株，所述菌株用作用于防治或藥物治療由革蘭氏陰性菌，優(yōu)選腸球菌、大腸菌和大腸桿菌引起的感染的藥物。
文檔編號C12N1/20GK102458426SQ201080033176
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日
發(fā)明者G·P·斯特羅齊, G·莫格納, L·莫格納 申請人:益生菌股份公司