專利名稱：Her2信號傳導(dǎo)調(diào)控劑在表達(dá)her2的胃癌患者中的制作方法
HER2信號傳導(dǎo)調(diào)控劑在表達(dá)HER2的胃癌患者中本發(fā)明涉及用于鑒定HER2/neu (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/ neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的手段和方法。本文中還描述了依照本發(fā)明的鑒定方法確定及限定，由此已知或懷疑所述患者組患有或易于患上胃癌，特別是侵入性胃癌的患者組的相應(yīng)治療方法。HER受體酪氨酸激酶家族的成員是細(xì)胞生長、分化和存活的重要介導(dǎo)物。該受體家族包括四種獨(dú)特的成員，包括表皮生長因子受體(EGFR、ErbBl、或HER1)、HER2 (ErbB2或 pl85neu)、HER3 (ErbB3)和HER4(ErbB4)。由erbBl基因編碼的EGFR已經(jīng)有原因地牽涉人惡性腫瘤。特別地，已經(jīng)在乳腺、膀胱、肺、頭、頸和胃癌及成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中觀察到升高的 EGFR表達(dá)。升高的EGFR受體表達(dá)經(jīng)常與相同腫瘤細(xì)胞增加的EGFR配體，即轉(zhuǎn)化生長因子α (TGF- α )生成有關(guān)，導(dǎo)致通過自分泌刺激途徑的受體激活。Baselga和Mendelsohn， Pharmac. Ther. 64 :127-154(1994)。已經(jīng)在此類惡性腫瘤的治療中作為治療劑評估了針對EGFR或其配體TGF-α和EGF的單克隆抗體。參見例如Baselga和Mendelsohn，見上文；Masui 等 Cancer Research 44 :1002-1007(1984)；及 Wu 等 J. Clin. Invest. 95 1897-1905(1995)。HER家族的第二位成員pl85neu最初鑒定為來自化學(xué)處理大鼠成神經(jīng)細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)化基因的產(chǎn)物。在乳腺和卵巢癌中觀察到neu基因(又稱為HER2)的人同系物的擴(kuò)增，并且其與不良預(yù)后相關(guān)聯(lián)(Slamon 等，Science，235 177-182 (1987) ；Slamon 等，Science, 244 :707-712(1989)；及美國專利No. 4，968，603)。還已經(jīng)在其它癌瘤，包括胃、子宮內(nèi)膜、唾液腺、肺、腎、結(jié)腸、甲狀腺、胰腺和膀胱的癌瘤中觀察到HER2的過表達(dá)。參見King 等，Science, 229 :974(1985) ；Yokota 等，Lancet 1 :765-767(1986) ；Fukushige 等，Mol Cell Biol.，6 :955-958(1986) ；Guerin 等，Oncogene Res.，3 :21-31 (1988) ；Cohen 等， Oncogene，4 :81-88(1989) ；Yonemura等，Cancer Res. ,51 :1034(1991) ；Borst等，Gynecol. Oncol. ,38 :364(1990) ；Weiner 等，Cancer Res. ,50 :421-425(1990) ；Kern 等，Cancer Res. ,50 :5184(1990) ；Park 等，Cancer Res. ,49 :6605(1989) ；Zhau 等，Mol. Carcinog.，3 : 254-257(1990) ；Aasland 等 Br. J. Cancer 57 :358-363(1988) ；Williams 等 Pathobiology 59 :46-52(1991)；及 McCann 等，Cancer，65 :88-92 (1990)等。HER2 可以在前列腺癌中過表達(dá)(Gu 等 Cancer Lett. 99 :185-9(1996) ；Ross 等 Hum. Pathol. 28 :827-33(1997) ；Ross 等 Cancer79 :2162-70(1997)；及 Sadasivan 等 J. Urol. 150 126-31 (1993))。已經(jīng)描述了針對大鼠Pl85neu和人HER2蛋白的抗體。Drebin及同事已經(jīng)生成了針對大鼠neu基因產(chǎn)物ρ 185neu的抗體；參見例如 Drebin 等，Cell 41 :695-706(1985) ；Myers 等，Meth. Enzym. 198 :277-290(1991)；及 W094/22478。Drebin 等 Oncogene 2 :273-277(1988)報告了與 pl85neu 的兩個獨(dú)特區(qū)有反應(yīng)性的抗體的混合物對植入裸鼠中的經(jīng)neu轉(zhuǎn)化的NIH-3T3細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效果；還可參見1998年10月20日公告的美國專利5，824，311。Hudziak 等，Mol. Cell. Biol. 9 (3) :1165-1172(1989)描述了生成一組 HER2 抗體， 使用人乳腺腫瘤細(xì)胞系SK-BR-3表征。SK-BR-3細(xì)胞在暴露于抗體后的相對細(xì)胞增殖在72小時后通過結(jié)晶紫單層染色來測定。使用此測定法，用稱作4D5的抗體獲得最大抑制，其將細(xì)胞增殖抑制56%。該組中的其它抗體在此測定法中以較小的程度降低細(xì)胞增殖。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了抗體4D5使HER2過表達(dá)乳腺腫瘤細(xì)胞系對TNF- α的細(xì)胞毒性效應(yīng)敏感；還可參見1997年10月14日公告的美國專利No. 5，677，171。Hudziak等中所討論的HER2抗體在 Fendly 等Cancer Research 50 :1550-1558(1990) ；Kotts等 In Vitro 26(3) :59A(1990)； Sarup 等 Growth Regulation 1 :72-82(1991) ；Shepard 等 J. Cl in. Immunol. 11(3) 117-127 (1991) ；Kumar 等 Mol. Cell. Biol. 11 (2) :979-986(1991) ；Lewis 等 Cancer Immunol. Immunother. 37 :255-263(1993) ；Pietras 等 Oncogene 9:1829—1838(1994)； Vitetta等 Cancer Research 54:5301-5309(1994) ；Sliwkowski 等 J. Biol. Chem. 269 (20) 14661-14665(1994) Jcott 等 J. Biol. Chem. 266 :14300-5 (1991) ；D，souza 等 Proc. Natl. Acad. Sci. 91 :7202-7206(1994) ；Lewis 等 Cancer Research 56:1457-1465(1996)；及 khaefer等Oncogene 15:1385-1394(1997)中進(jìn)一步表征。重組人源化型式的鼠HER2抗體 4D5(huMAb4D5-8、rhuMAb HER2、曲妥單抗(iTrastuzumab)或赫賽汀(HERCEPTIN) ;美國專利No. 5，821，337)在已經(jīng)接受廣泛的在先抗癌癥療法的HER2過表達(dá)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中是有臨床活性的(Baselga等，J. Clin. Oncol. 14 :737-744 (1996))。曲妥單抗在1998 年9月25日自食品和藥物管理局獲得銷售批準(zhǔn)，用于治療腫瘤過表達(dá)HER2蛋白的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者。具有各種特性的其它HER2抗體已經(jīng)記載于Tagliabue等ht. J. Cancer47 933-937(1991) ；McKenzie 等 Oncogene 4:543-548(1989) ；Maier 等 Cancer Res. 51 5361-5369(1991) ；Bacus 等 Molecular Carcinogenesis 3:350-362(1990) ；Stancovski 等 PNAS(USA)88 :8691-8695(1991) ；Bacus 等 Cancer Research52 :2580-2589(1992) ；Xu 等 Int. J. Cancer 53:401-408(1993) ；W094/00136 ；Kasprzyk 等 Cancer Research 52: 2771-2776(1992) ；Hancock 等 Cancer Res.51 :4575-4580 (1991) ；Shawver 等 Cancer Res. 54 :1367-1373(1994) ；Arteaga 等 Cancer Res. 54 :3758-3765(1994) ；Harwerth 等 J. Biol. Chem. 267 :15160-15167(1992)；美國專利 No. 5，783，186 ；及 Klapper 等 Oncogene 14 :2099-2109(1997)。同源性篩選已經(jīng)導(dǎo)致兩種其它HER家族成員HER3 (美國專利No. 5，183，884 和 5，480, 968 及 Kraus 等 PNAS (USA) 86 :9193-9197(1989))和 HER4(歐洲專利申請 No 599, 274 ；Plowman 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 1746-1750 (1993)；及 Plowman 等， Nature, 366 :473-475(1993))的鑒定。這些受體都在至少一些乳腺癌細(xì)胞系上展現(xiàn)出升高的表達(dá)。一般在細(xì)胞中以各種組合找到HER受體，并且認(rèn)為異二聚化提高對各種 HER 配體的細(xì)胞應(yīng)答的多樣性(Earp 等 Breast Cancer Research and Treatment 35: 115-132(1995))。EGFR受到六種不同配體結(jié)合；即表皮生長因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子 α (TGF-α)、雙調(diào)蛋白、肝素結(jié)合表皮生長因子(HB-EGF), β細(xì)胞素(betacellulin)和表皮調(diào)節(jié)蛋白(印 iregul in) (Groenen 等 Growth Factors 11 :235-257 (1994)) 源自單一基因的可變剪接的調(diào)蛋白蛋白質(zhì)家族是HER3和HER4的配體。調(diào)蛋白家族包括α、β禾口 γ 調(diào)蛋白(Holmes 等，Science, 256 :1205-1210(1992)；美國專利 No. 5, 641, 869 ；及 khaefer 等Oncogene 15:1385-1394(1997)) ；neu分化因子(NDF)、膠質(zhì)生長因子(GGF)；乙酰膽堿受體誘導(dǎo)活性(ARIA)；和感覺和運(yùn)動神經(jīng)元衍生因子(SMDF)。關(guān)于綜述，參見Groenen等Growth Factorsll :235-257(1994) ；Lemke，G. Molec. & Cell. Neurosci. 7 :247-262(1996) 及Lee等Pharm. Rev. 47 :51-85 (1995)。最近，鑒定出三種別的HER配體；即報告為結(jié)合 HER3 或 HER4 的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-2 (NRG-2) (Chang 等 Nature 387 509-512(1997)； 及 Carraway 等 Nature 387 :512-516(1997))；結(jié)合 HER4 的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-3 (Zhang 等 PNAS(USA)94(18) :9562-7(1997))；和結(jié)合 HER4 的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-4(Harari 等 Oncogene 18:2681-89(1999))。HB-EGF、β細(xì)胞素和表皮調(diào)節(jié)蛋白也結(jié)合HER4。
雖然EGF和TGFa不結(jié)合HER2，但是EGF刺激EGFR與HER2形成異二聚體，這導(dǎo)致異二聚體中EGFR對HER2的轉(zhuǎn)磷酸化以及反之亦然；參見Earp等，見上文。同樣地， 在HER3與HER2共表達(dá)時，形成活性信號傳導(dǎo)復(fù)合物，并且針對HER2的抗體能夠破壞此復(fù)合物(Sliwkowski 等，J. Biol. Chem. ,269(20) :14661-14665 (1994))。另外，在與 HER2 共表達(dá)時，HER3對調(diào)蛋白(HRG)的親和力升高至更高的親和力狀態(tài)。關(guān)于HER2-HER3 蛋白復(fù)合物，還可參見 Levi 等，Journal of Neuroscience 15 :1329-1340(1995)； Morrissey 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1431-1435(1995)；及 Lewis 等，Cancer Res.，56 :1457-1465 (1996)。與HER3 —樣，HER4與HER2形成活性信號傳導(dǎo)復(fù)合物 (Carraway和Cant ley，Cell 78:5-8(1994))。涉及HER抗體的專利公開文本包括US 5，677，171，US 5，720，937，US 5,720,954，US 5，725，856，US 5，770，195，US5, 772，997， US 6， 165，464， US 6，387，371， US 6，399，063， US2002/0192211A1， US6,015，567， US 6，333，169，US 4，968，603，US 5，821，337，US 6，054，297，US6, 407，213，US 6，719，971， US 6，800，738，US2004/0236078A1，US 5，648，237，US6,267，958，US 6，685，940，US 6, 821, 515, W098/17797, US 6，127，526，US6, 333，398，US 6，797，814，US 6，339，142， US 6,417,335， US 6,489,447， W099/31140, US2003/0147884A1， US2003/0170234A1， US2005/0002928A1, US 6，573，043, US2003/0152987A1, W099/48527, US2002/0141993A1, W001/00245, US2003/0086924, US2004/0013667A1, W000/69460, W001/00238, W001/15730, US 6，627，196B1, US6,632，979B1, W001/00244, US2002/0090662A1，W001/89566, US2002/0064785, US2003/0134344, W004/24866, US2004/0082047, US2003/0175845A1， W003/087131, US2003/0228663, W02004/008099A2, US2004/0106161, W02004/048525, US2004/0258685A1, US 5，985，553， US 5，747，261， US 4，935，341， US 5，401，638， US 5，604，107，WO 87/07646，WO 89/10412，WO 91/05264，EP 412，116B1, EP494, 135B1, US 5，824，311，EP 444，181B1，EP 1,006, 194A2, US2002/0155527A1, WO 91/02062， US 5，571，894，US 5，939，531，EP 502, 812B1, WO 93/03741，EP 554, 441B1, EP 656, 367A1, US 5，288，477，US 5，514，554，US5,587，458，WO 93/12220, WO 93/16185， US 5,877, 305, WO 93/21319, W093/21232, US 5,856, 089, WO 94/22478，US 5,910,486， US 6，028，059， W096/07321， US 5，804，396， US 5，846，749， EP 711,565, WO 96/16673， US5, 783，404，US 5，977，322，US 6，512，097，WO 97/00271，US 6，270，765，US6, 395，272， US 5,837,243，WO 96/40789，US 5,783，186，US 6,458,356，W097/20858, WO 97/38731， US 6，214，388，US 5, 925, 519, WO 98/02463, US5, 922, 845, WO 98/18489, WO 98/33914， US 5,994,071, WO 98/45479，US6, 358，682B1，US 2003/0059790, WO 99/55367, WO 01/20033， US2002/0076695A1, WO 00/78347， WO 01/09187， WO 01/21192， WO 01/32155， WO 01/53354, WO 01/56604, WO 01/76630, W002/05791, WO 02/11677， US6,582，919，US2002/0192652ALUS 2003/0211530A1, WO 02/44413，US2002/0142328，US 6，602，670B2， WO 02/45653, WO 02/055106， US2003/0152572, US 2003/0165840, WO 02/087619, WO 03/006509，W003/012072, WO 03/028638，US 2003/0068318，WO 03/041736，EPl, 357，132， US 2003/0202973, US 2004/0138160，US 5，705，157，US 6，123，939，EP 616, 812B1, US 2003/0103973, US 2003/0108545, US 6, 403,630B1, W000/61145, WO 00/61185, US 6,333,348B1, WO 01/05425, WO 01/64246， US2003/0022918， US 2002/0051785A1， US 6,767,541, WO 01/76586, US2003/0144252, WO 01/87336， US 2002/0031515A1, WO 01/87334, W002/05791,WO 02/09754，US 2003/0157097，US 2002/0076408, WO 02/055106， WO 02/070008, WO 02/089842 及 WO 03/86467。基于HER2過表達(dá)/擴(kuò)增，選擇用HER2抗體曲妥單抗治療的乳腺癌患者進(jìn)行治療；參見例如 W099/31140 (Paton 等)、US2003/0170234A1 (Hellmann, S·)、和 US2003/0147884 (Paton 等)；及 W001/89566、US2002/0064785、和 US2003/0134344 (Mass
寸J ο現(xiàn)有技術(shù)聚焦于基于高HER2蛋白表達(dá)水平(例如通過IHC得到的HER2(3+))的乳腺癌患者對于曲妥單抗/赫賽汀療法的合格性(eligibility)。然而，關(guān)于胃癌患者對于此類抗體療法的合格性可獲得很少的信息。本領(lǐng)域中還存在著為篩選和鑒定可響應(yīng)抗體療法的乳腺癌患者開發(fā)的評分系統(tǒng)和標(biāo)準(zhǔn)是否可適用于其它癌癥類型，特別是顯示相當(dāng)不同的組織病理學(xué)樣式并且總體關(guān)注不同病理學(xué)的胃癌的爭論。通過免疫組織化學(xué)(IHC)和熒光原位雜交(FISH)來檢測HER2過表達(dá)和擴(kuò)增的方法也記載于 US2003/0152987，Cohen 等。W02004/053497 和 US2004/024815A1(Bacus 等)及 US 2003/0190689 (Crosby 和Smith)提及測定或預(yù)測對曲妥單抗療法的響應(yīng)。US2004/013297A1 (Bacus等)關(guān)注測定或預(yù)測對ABX0303EGFR抗體療法的響應(yīng)。W02004/000094 (Bacus等)涉及測定對GW572016，即一種小分子EGFR-HER2酪氨酸激酶抑制劑的響應(yīng)。W02004/063709, Amler等提及用于測定對EGFR抑制劑鹽酸埃羅替尼(erlotinib)的敏感性的生物標(biāo)志和方法。US2004/020^90，Cobleigh等關(guān)注供乳腺癌預(yù)后用的基因表達(dá)標(biāo)志物?；贖ER過表達(dá)/擴(kuò)增、激活或二聚化，可以選擇要用帕妥珠單抗(Pertuzumab) (一種HER2 二聚化抑制劑，在下文更為詳細(xì)描述)治療的乳腺癌患者進(jìn)行治療。關(guān)于帕妥珠單抗及用其治療的患者的選擇的專利公開文本包括W001/00245 (Adams 等)；US2003/0086924(Sliwkowski, Μ. ) ；US2004/0013667A1(Sliwkowski, Μ. ) ； R Μ)2004/0080"Α2、和 US2OO4AnO6I6I (Bossenmaier 等)。帕妥珠單抗(以前為2C4)是稱為HER 二聚化抑制劑(HDI)的一類新藥劑中的第一種。帕妥珠單抗在HER2 二聚化域處結(jié)合HER2，由此抑制其形成活性二聚體受體復(fù)合物的能力，并且如此阻斷最終導(dǎo)致細(xì)胞生長和分裂的下游信號級聯(lián)；參見FranklinOO(M)， Cancer Cell 5,317-328.帕妥珠單抗是一種針對HER2的胞外域的完全人源化的重組單克隆抗體。帕妥珠單抗對人表皮細(xì)胞上的HER2的結(jié)合阻止HER2與HER家族的其它成員(包括EGFR、HER3、HER4)形成復(fù)合物及可能還阻止HER2同二聚化。通過阻斷復(fù)合物形成，帕妥珠單抗阻止由HER1、HER3和HER4的配體(例如EGF、TGFa、雙調(diào)蛋白、和調(diào)蛋白)激活的生長刺激效果和細(xì)胞存活信號。帕妥珠單抗的另一個名稱是2C4。帕妥珠單抗是一種基于
8人IgGl(K)框架序列的完全人源化重組單克隆抗體。帕妥珠單抗的結(jié)構(gòu)由兩條重鏈G49 個殘基)和兩條輕鏈014個殘基)組成。與曲妥單抗(赫賽汀 )相比，帕妥珠單抗具有輕鏈中的12個氨基酸差異和IgGl重鏈中的四個氨基酸差異。赫賽汀在本領(lǐng)域中是廣泛使用并已知的，用于治療腫瘤過表達(dá)HER2蛋白或者具有HER2基因擴(kuò)增的早期及轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者。在本領(lǐng)域中，用赫賽汀/曲妥單抗治療乳腺癌患者是例如推薦且常規(guī)的，用于患有HER2陽性疾病的患者。若在自患者獲得的樣品諸如乳腺組織活組織檢查或乳腺組織切除中或者在自轉(zhuǎn)移性部位衍生的組織中發(fā)現(xiàn)通過免疫組織化學(xué)法檢出的高HER2(蛋白)表達(dá)水平(例如HER2(+++))或HER2基因擴(kuò)增(例如， 每個腫瘤細(xì)胞高于4個拷貝的HER2基因的HER2基因拷貝數(shù))或兩者，則存在乳腺癌中的 HER2陽性疾病。然而，不知道具有可疑(equivocal)或高的HER2蛋白表達(dá)水平，例如HER2 或 HER2(3+)的胃癌患者是否能用赫賽汀成功治療，及HER2的擴(kuò)增狀態(tài)是否可指示對胃癌治療的敏感性。如此，本發(fā)明根本的技術(shù)問題是提供鑒定可響應(yīng)用HER2/neU (ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑治療胃癌，特別是用HER2抗體諸如曲妥單抗/赫賽汀治療的患有或易于患上胃癌的患者或患者組的手段和方法。通過提供權(quán)利要求書中表征的實(shí)施方案來解決技術(shù)問題。因而，本發(fā)明涉及用于將懷疑患有胃癌的患者鑒定為HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的體外方法， 所述方法包括下列步驟(a)自所述患者獲得樣品；并(b)評估(bl)所述樣品中HER2蛋白的表達(dá)水平；和(b2)所述樣品中HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)；由此HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)指示響應(yīng)性患者或者指示所述患者對所述HER2/neU (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的敏感性。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的是，通過免疫組織化學(xué)法來檢測HER2蛋白的表達(dá)水平，而可以用原位雜交(ISH)法，如熒光原位雜交技術(shù)(FISH)、顯色原位雜交技術(shù)(CISH)或銀原位雜交技術(shù)(SISH)來測量所述HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)。對于蛋白質(zhì)表達(dá)測定法及對于基因擴(kuò)增的檢測，相應(yīng)的測定法和試劑盒是本領(lǐng)域中公知的。本發(fā)明解決上文所鑒定的技術(shù)問題，因?yàn)槿缦挛乃枋龅模钊梭@訝地發(fā)現(xiàn)了，以 HER2蛋白的可疑表達(dá)水平，即HER2 (如例如通過IHC所測定的)和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)(例如每個腫瘤細(xì)胞高于4的HER2基因的平均拷貝數(shù)或(每個腫瘤細(xì)胞)每個染色體17拷貝等于或高于2的HER2基因的平均基因拷貝數(shù))為特征的出于意料的患者組響應(yīng)用HER2/neU(erbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是用HER2抗體，如赫賽汀/曲妥單抗的治療。如本文中所使用的，在例如具有HER2基因的平均拷貝數(shù)的上下文中的術(shù)語“平均”涉及要檢查的生物學(xué)樣品的至少兩個腫瘤細(xì)胞的每個腫瘤細(xì)胞的HER2基因拷貝的平均數(shù)目或在要檢查的生物學(xué)樣品的至少兩個腫瘤細(xì)胞中每個染色體17拷貝的HER2基因拷貝的平均數(shù)目。在本發(fā)明中，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了，具有生物學(xué)樣品(例如活組織檢查或切除)中的HER2蛋白表達(dá)的可疑水平和同時生物學(xué)樣品(例如活組織檢查或切除)中的HER2基因的高擴(kuò)增兩者的胃癌患者響應(yīng)用此類HER2抗體的治療。出乎意料地，這些患者對用HER2/ neu(erbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的治療的響應(yīng)率遠(yuǎn)高于具有HER2基因的高擴(kuò)增，但是在 IHC方面僅具有低的或中等的染色的胃癌患者；參見所附實(shí)施例和附圖，特別是圖2和圖3。 與低HER2蛋白表達(dá)組(例如，通過IHC得到的IHC(O)或IHC(1+))(其另外還以高HER2基因擴(kuò)增為特征)相比，依照本發(fā)明鑒定的新患者組顯示更好的對用HER2調(diào)控劑治療的響應(yīng)。在本領(lǐng)域中，關(guān)于如何對胃癌患者分層以用HER2調(diào)控劑治療沒有清楚的推薦。自患有評估為可疑地表達(dá)HER2蛋白的胃癌的患者獲得的樣品可以通過ISH進(jìn)一步調(diào)查或不進(jìn)行。在本領(lǐng)域中，僅有關(guān)于胃癌中的HER2過表達(dá)和/或基因擴(kuò)增的發(fā)生率的數(shù)據(jù)，但對于HER2蛋白水平及對于HER2基因水平，沒有HER2狀態(tài)關(guān)于HER2調(diào)控劑的治療益處的預(yù)測性的數(shù)據(jù)。因此，現(xiàn)有技術(shù)沒有提示顯示HER2蛋白表達(dá)的可疑或中間水平的樣品的擴(kuò)增狀態(tài)的進(jìn)一步測試。按常規(guī)不在胃癌患者中實(shí)施HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)的ISH測試?，F(xiàn)有技術(shù)沒有提示在測定并找到胃癌樣品中的HER2蛋白的中間或可疑表達(dá)水平后進(jìn)一步測試HER2 基因的擴(kuò)增狀態(tài)。令人驚訝地，在本文中發(fā)現(xiàn)了具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)的患者可以用HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑成功治療。此外，優(yōu)選地， 要依照本發(fā)明鑒定并治療的患者/患者組以HER2蛋白的可疑表達(dá)水平(例如如本文中所限定的“2+”得分，即通過IHC測定的HER2 (2+))(可疑評估，參見下文的表)，同時具有HER2 基因的高擴(kuò)增狀態(tài)為特征。如所附實(shí)施例中所例示的，令人驚訝地，具有如本文中所限定的HER2蛋白的可疑表達(dá)水平(例如通過IHC測定的HER2Q+))和HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài) (例如高于4的HER2基因的拷貝數(shù)或每個染色體17拷貝等于或高于2的HER2的基因拷貝數(shù))的此患者組比具有HER2蛋白的低HER2表達(dá)水平(例如如本文中所限定的“0”或“ 1 ” 得分，即HER2 (0)或HER2 (1+))和高HER2基因擴(kuò)增的患者更響應(yīng)HER2/neu (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是赫賽汀/曲妥單抗或顯示更高的對HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是赫賽汀/曲妥單抗的敏感性。在其它方面中，依照本發(fā)明的方法基于令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，即首先在HER2基因擴(kuò)增方面測試患者樣品可以導(dǎo)致假陽性。如可以自所顯示的結(jié)果看出的，在沒有可疑的HER2蛋白表達(dá)水平的情況中具有HER2基因擴(kuò)增的患者不充分響應(yīng)赫賽汀/曲妥單抗治療。胃癌中的此發(fā)現(xiàn)是更令人驚訝的，因?yàn)橐话阋阎谌橄侔┲袑ER2調(diào)控劑的響應(yīng)與如通過IHC 所檢測的獨(dú)立于HER2蛋白水平的HER2基因的擴(kuò)增水平相關(guān)聯(lián)?，F(xiàn)有技術(shù)中確實(shí)不知道與標(biāo)準(zhǔn)的療法(例如氟嘧啶/順鉬)相比在胃癌患者中的甚至卓越的對HER2調(diào)控劑的響應(yīng)。 此外，與還具有HER2基因擴(kuò)增的低表達(dá)HER2蛋白組相比具有HER2基因的高擴(kuò)增的可疑 HER2基因表達(dá)亞組的至少相當(dāng)?shù)幕蛏踔粮玫捻憫?yīng)是胃癌治療中的出于意料的發(fā)現(xiàn)。因而，本發(fā)明在一個實(shí)施方案中涉及用于將懷疑患有胃癌并且具有HER2蛋白的可疑表達(dá)的患者鑒定為HER2/neU (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/ neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的體外方法，所述方法包括下列步驟
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(a)自所述患者獲得樣品；并(b)評估所述樣品中HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)，由此HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)指示響應(yīng)性患者或者指示所述患者對所述HER2/neU (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的敏感性。如還在所附實(shí)施例中證明的，不僅是具有如本文中所限定的在IHC中的 "HER2 (2+) ”得分和同時HER2基因的擴(kuò)增的患者/患者組，而且具有“3+” IHC得分的患者組可以成功治療，并且響應(yīng)HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是赫賽汀/曲妥單抗或顯示對HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是赫賽汀/曲妥單抗的高敏感性。 具有高水平HER2蛋白表達(dá)(即IHC(3+))的患者組也響應(yīng)用HER2調(diào)控劑的治療并且應(yīng)當(dāng)治療，不管其基因擴(kuò)增狀態(tài)如何。甚至沒有顯示基因擴(kuò)增，但是在HER2蛋白表達(dá)方面測試呈高度陽性(IHC 3+)的患者顯示對治療的良好響應(yīng)(參見圖2和圖3)。在可疑HER2 IHC結(jié)果(例如，如例如通過IHC測量的HER2 (2+))的情況中，通過 HER2 IHC及通過HER2 ISH的連續(xù)測試也代表本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案。換言之，只有在第一步中評估的HER2蛋白的表達(dá)水平是可疑的(例如通過IHC得到的HER2Q+))時，本發(fā)明的方法可以在第一步中評估HER2蛋白的表達(dá)水平后在第二步中包括評估HER2基因的擴(kuò)增狀態(tài)。如提及的，HER2蛋白的過表達(dá)(例如如通過IHC所測量的)或者HER2基因的擴(kuò)增(例如如在ISH法中所測定的)代表乳腺癌中的HER2調(diào)控劑治療的獨(dú)立且同等有價值的合格性標(biāo)準(zhǔn)。然而且令人驚訝地，這對于胃癌患者而言是不正確的。因而，本發(fā)明在又一個實(shí)施方案中涉及用于鑒定HER2/neu (ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的體外方法，所述方法包括下列步驟(a)自懷疑患有或易于患上胃癌的患者獲得樣品；并(b)評估(bl)在第一步中，HER2蛋白的表達(dá)水平；和(b2)若第一步中評估的HER2蛋白的表達(dá)水平是可疑的，則在第二步中，所述樣品中HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)；由此HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)指示響應(yīng)性患者或者指示所述患者對所述HER2/neU (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的敏感性。可以在蛋白質(zhì)或核酸水平上評估HER2蛋白或基因表達(dá)的水平。優(yōu)選地，使用免疫組織學(xué)方法，如“IHC”(免疫組織化學(xué))來評估HER2蛋白表達(dá)水平，還可參見本文中的詳情。可以通過本領(lǐng)域中已知的別的方法來評估HER2基因擴(kuò)增，所述方法包括但不限于測定給定樣品的細(xì)胞中的平均HER2基因拷貝數(shù)或測定HER2/CEP17比率。下文提供了關(guān)于代表性方法的詳情。依照本發(fā)明，優(yōu)選地，通過采用針對HER2蛋白的抗體的免疫組織化學(xué)(IHC)法來測量HER2蛋白的表達(dá)水平，而通過原位雜交(ISH)法，如優(yōu)選地FISH、CISH或SISH來檢測生物學(xué)樣品中的HER2基因擴(kuò)增。如本文中所描述的，已經(jīng)將具有HER2蛋白的可疑表達(dá)(例如HER2Q+))和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)(例如高于4的(平均)拷貝數(shù))的患者組鑒定為響應(yīng)HER2/neU信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。本文中還涵蓋并優(yōu)選的是，具有HER2蛋白的可疑表達(dá)(例如HER2Q+))和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)(例如高于4的(平均)拷貝數(shù))的患者對所述調(diào)控劑敏感。具有HER2蛋白的可疑表達(dá)(例如HER2 (2+))和HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)的患者可以容易地與具有HER2蛋白的低表達(dá)(例如HER2(0)或HER2(1+))的患者分開，因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員知道用于HER2蛋白的表達(dá)水平的此類測定的標(biāo)準(zhǔn)測試，特別是免疫組織化學(xué)測試。這意味著可以將顯示可疑HER2蛋白表達(dá)水平的大患者組的亞組用HER2抗體成功進(jìn)行治療，即，具有可疑的HER2蛋白表達(dá)和HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)的患者。如下文更為詳細(xì)地描述的，現(xiàn)有技術(shù)既沒有描述也沒有提出具有可疑的HER2蛋白表達(dá)水平的胃癌患者，特別是侵入性胃癌患者的成功治療。相反，本領(lǐng)域技術(shù)人員不會認(rèn)為，具有可疑的HER2蛋白表達(dá)水平的分離的患者組中的某些個體可以更成功地治療，若這些患者具有HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)的話。在乳腺癌中，已知基于HER2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平、HER2的基因擴(kuò)增狀態(tài)或兩者(單獨(dú)的或組合的)的多種不同患者納入算法，其中一般認(rèn)為HER2的表達(dá)水平越高，乳腺癌患者越有可能會響應(yīng)治療。然而，胃癌在多個方面與乳腺癌不同，并且不知道關(guān)于HER2基因的擴(kuò)增狀態(tài)作為胃癌中的合格性標(biāo)準(zhǔn)的效用的任何內(nèi)容。與如本領(lǐng)域中已知的乳腺癌的情況形成對比，本文中呈現(xiàn)的研究的結(jié)果(參見圖 2和圖幻清楚地顯示了出于意料地，具有可疑HER2蛋白(HER2 (2+))表達(dá)水平和HER2基因的高擴(kuò)增的患者可以成功治療，而具有HER2蛋白的低表達(dá)(即HER2(0)或HER2(1+))的患者沒有表現(xiàn)出受益于用HER2調(diào)控劑的治療，即使HER2基因是擴(kuò)增的。本發(fā)明第一次描述了，在生物學(xué)樣品中具有可疑HER2蛋白表達(dá)水平(例如生物學(xué)樣品諸如胃癌細(xì)胞/組織中HER2蛋白的免疫組織化學(xué)檢測中的HER2 (2+))和HER2基因的高擴(kuò)增的胃癌患者，特別是侵入性胃癌患者可以用HER2/neU(ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑成功治療。特別有用的是治療性抗體，例如HER2抗體諸如赫賽汀/曲妥單抗。令人驚訝地， 通過本申請的方法鑒定的患者組顯示比具有低水平HER2蛋白表達(dá)(例如通過IHC得到的 HER2 (0)或HER2 (1+))和HER2基因的高擴(kuò)增的患者中的響應(yīng)率高的對HER2治療的響應(yīng)率。 因此，可以將具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平的患者亞組用HER2/neU(erbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑進(jìn)行成功治療，如此提高這些患者的存活率和無進(jìn)展存活。因此，本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)代表對本領(lǐng)域的重大貢獻(xiàn)，而且對許多胃癌患者，特別是侵入性胃癌患者提供了一種重要的益處。此外，本發(fā)明涉及治療具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平(HER2Q+))和高度擴(kuò)增的HER2 基因的患者的方法及相應(yīng)的手段和方法。術(shù)語“HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者”在本發(fā)明的上下文中意指懷疑患有或易于患上胃癌的受試者/患者顯示對用該調(diào)控劑治療的響應(yīng)。技術(shù)人員會容易地能夠確定用調(diào)控劑治療的個體是否顯示響應(yīng)。例如，對調(diào)控劑的響應(yīng)可以在來自胃癌的痛苦減輕，諸如胃癌腫瘤的生長降低和/或停止和/或腫瘤的大小縮小、阻止轉(zhuǎn)移的形成或轉(zhuǎn)移的數(shù)目或大小降低中得到反映。優(yōu)選的是，響應(yīng)在預(yù)防胃癌腫瘤或轉(zhuǎn)移的形成，例如在腫瘤切除后在疾病進(jìn)展前時間延長中，或者在腫瘤和/或轉(zhuǎn)移的大小縮小中，例如在抗轉(zhuǎn)移或新輔助療法中得到反映。類似地，術(shù)語“對HER2/neU (ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者”在本發(fā)明的上下文中指在用調(diào)控劑治療時以某種方式顯示陽性反應(yīng)的患者。在與如上文所描述的響應(yīng)者相比時，患者的此反應(yīng)可以不太明顯。例如，雖然可以沒有測量到腫瘤生長的降低，但是患者可以經(jīng)歷較小的來自胃癌的痛苦?；颊邔φ{(diào)控劑的反應(yīng)也可以僅是瞬時性質(zhì)的，即，腫瘤和/或轉(zhuǎn)移的生長可以僅是暫時降低或停止的。優(yōu)選的是，調(diào)控劑的響應(yīng)者在用調(diào)控劑治療后不會患有胃癌。優(yōu)選地，已經(jīng)用HER2調(diào)控劑治療的胃癌腫瘤和/或胃癌轉(zhuǎn)移不會在終止用調(diào)控劑治療響應(yīng)者后1年內(nèi)，還有優(yōu)選地不在終止治療后的15個月、18個月或2年里復(fù)發(fā)。如本發(fā)明中所使用的，術(shù)語“胃癌”涉及所有類型的胃癌，包括胃-食管接合(GEJ) 癌瘤。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明意義上的胃癌涉及不能手術(shù)的癌癥，例如胃或胃-食管接合的局部晚期或復(fù)發(fā)性和/或轉(zhuǎn)移性癌癥。術(shù)語“抗轉(zhuǎn)移”治療涉及在不實(shí)施手術(shù)的情況中治療患有不能手術(shù)的腫瘤或晚期腫瘤的患者。如熟練技術(shù)人員完全領(lǐng)會的，依照本發(fā)明的HER2蛋白可疑亞組中的HER2基因擴(kuò)增陽性測試沒有1 1地轉(zhuǎn)變?yōu)槌晒χ委?。通過這些方法，鑒定出與沒有顯示這些陽性測試結(jié)果的患者亞組相比對用HER2信號傳導(dǎo)抑制劑治療具有更高機(jī)會的響應(yīng)的患者亞組。例如在響應(yīng)率、腫瘤收縮、無進(jìn)展存活(PFS)方面及在總體存活(OS)方面看到對治療的響應(yīng)的改善。通過本發(fā)明方法鑒定的患者的分離組對HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)的改善是至少15%。還優(yōu)選的是，響應(yīng)的改善是至少18%、或至少20%。還優(yōu)選的是， 響應(yīng)的改善是至少25%或30%。換言之，陽性結(jié)果指示(=是...的指示)與具有例如低 HER2蛋白(優(yōu)選地通過IHC評估的)和高HER2基因擴(kuò)增的患者相比患者具有更高的機(jī)會 (=概率、可能性)來響應(yīng)(=易感)用HER2信號傳導(dǎo)抑制劑的治療。在一個實(shí)施方案中， 響應(yīng)的改善涉及更好的響應(yīng)率，在其它實(shí)施方案中，響應(yīng)的改善分別涉及PFS或0S，如例如分別根據(jù)圖2和圖3明顯的。如上文所提及的，本文中優(yōu)選的是，通過免疫組織化學(xué)法來檢測HER2蛋白的表達(dá)水平。此類方法是本領(lǐng)域中公知的，并且相應(yīng)的商業(yè)試劑盒是容易地可獲得的?？梢砸勒毡景l(fā)明使用的例示性試劑盒是由Dako公司，Denmark生產(chǎn)并銷售的Here印tTest 或由 Ventana, Tucson, USA生產(chǎn)并銷售的稱作Ventana Pattiway 的測試。優(yōu)選地，通過使用 HercepTest 提供的試劑并遵循Here印Test 的方案來評估HER2蛋白表達(dá)水平。技術(shù)人員會知道通過免疫組織化學(xué)法來測定HER2蛋白表達(dá)水平的進(jìn)一步的手段和方法；參見例如TO 2005/117553。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員無需過度負(fù)擔(dān)便可以容易且可再現(xiàn)地測定HER2 蛋白的表達(dá)水平。然而，為了確保精確且可再現(xiàn)的結(jié)果，應(yīng)當(dāng)在可以確保測試規(guī)程有效性的專門實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施測試。胃癌中的HER2蛋白的表達(dá)水平可以在低表達(dá)水平、可疑表達(dá)水平和高表達(dá)水平中分類。在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的是，自懷疑患有或易于患上胃癌的患者獲得的樣品顯示HER2蛋白的可疑表達(dá)水平。最優(yōu)選地，可疑的蛋白質(zhì)表達(dá)水平是HER2Q+)。此外，如本文中所使用的，低蛋白質(zhì)表達(dá)水平是HER2 (0/1+)，而高蛋白質(zhì)表達(dá)水平是HER2 (3+)。不同標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)適用于切除樣品和活組織檢查樣品正是一種新的且令人驚訝的發(fā)現(xiàn)。在本發(fā)明的上下文中，與活組織檢查樣品相比，不同評分系統(tǒng)適用于切除樣品。
13
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，在切除樣品中確定HER2的低的、可疑的或高的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的評分(例如，分別為HER2 (0/1+)、HER2 (2+)或HER2 (3+))，并且評分是基于下
述表的標(biāo)準(zhǔn)。
得分染色樣式(切除樣品)分類0沒有反應(yīng)性或在小于10%的細(xì)胞中有膜反應(yīng)性陰性1+在大于10%的細(xì)胞中有微弱/勉強(qiáng)可察覺的膜反應(yīng)性； 細(xì)胞僅在它們的膜的一部分中有反應(yīng)性陰性2+在大于10%的腫瘤細(xì)胞中有弱至中等的完全或基底外側(cè)膜反應(yīng)性可疑的3+在大于10%的腫瘤細(xì)胞中有中等至強(qiáng)的完全或基底外側(cè)膜反應(yīng)性陽性若切除樣品在覆蓋小于腫瘤面積10%的面積中顯示高蛋白質(zhì)表達(dá)水平(例如通過IHC得到的IHC(3+))，特別地若此樣品中的IHC(3+)克隆是粘著的，則也認(rèn)為胃癌切除樣品呈陽性。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，在活組織檢查樣品中確定HER2的低的、可疑的或高的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的評分(例如，分別為HER2(0/1+)、HER2Q+)或HER2 (3+))，并且評分是基于下述表的標(biāo)準(zhǔn)。
得分染色樣式(活組織檢查樣品)分類0在任何腫瘤細(xì)胞中沒有反應(yīng)性或沒有膜反應(yīng)性陰性1+具有微弱/勉強(qiáng)可察覺的膜反應(yīng)性的腫瘤細(xì)胞簇， 不管染色的腫瘤細(xì)胞的百分比陰性2+具有弱至中等的完全、基底外側(cè)或外側(cè)膜反應(yīng)性的腫瘤細(xì)胞簇，不管染色的腫瘤細(xì)胞的百分比可疑的3+具有強(qiáng)的完全、基底外側(cè)或外側(cè)膜反應(yīng)性的腫瘤細(xì)胞簇，不管染色的腫瘤細(xì)胞的百分比陽性 優(yōu)選地，活組織檢查樣品包含至少5個染色的腫瘤細(xì)胞。優(yōu)選地，該至少5個腫瘤細(xì)胞是粘著腫瘤細(xì)胞。若具有弱至中等的完全、基底外側(cè)或外側(cè)膜染色的腫瘤細(xì)胞簇存在于活組織檢查標(biāo)本中，則承認(rèn)中間或可疑的染色。 本文中所使用的術(shù)語HER2 (+)、HER2 (++)和HER2 (+++)等同于術(shù)語HER2 (1+)、 HER2(2+)和HER2(3+)。在本發(fā)明的上下文中所使用的“低蛋白質(zhì)表達(dá)水平”對應(yīng)于“0”或 “ 1+”得分(依照上文所顯示的表的“陰性評估”)，“可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平”對應(yīng)于“2+”得分，而“高蛋白質(zhì)表達(dá)水平”對應(yīng)于“3+”得分。如上文更為詳細(xì)地描述的，蛋白質(zhì)表達(dá)水平的評估(即，如表中所顯示的評分系統(tǒng))基于通過免疫組織化學(xué)法獲得的結(jié)果。因而，作為標(biāo)準(zhǔn)或常規(guī)，通過分別用兩種FDA批準(zhǔn)的商品化試劑盒，即Dako Herceptest 和Ventana Pattway 之一的免疫組織化學(xué)來實(shí)施HER-2狀態(tài)。這些是半定量測定法，其將表達(dá)水平分層成0 (每個細(xì)胞小于20，000個受體，通過IHC染色沒有可見的表達(dá))、1+(每個細(xì)胞約100，000個受體，部分膜染色，小于10%的細(xì)胞過表達(dá)HER2)、2+(每個細(xì)胞約500,000 個受體，微弱的至中等的完全膜染色，大于10%的細(xì)胞過表達(dá)HER2)、和3+(每個細(xì)胞約 2，000，000個受體，強(qiáng)的完全膜染色，大于10%的細(xì)胞過表達(dá)HER2)。或者，可以使用用于評估HER2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的進(jìn)一步的方法，例如Western 印跡、基于ELISA的檢測系統(tǒng)等?？梢酝ㄟ^這些技術(shù)來測定HER2蛋白的可疑或高表達(dá)水平， 并可以對分類為具有HER2蛋白表達(dá)的可疑水平的那些患者的生物學(xué)樣品進(jìn)一步分析HER2 基因擴(kuò)增。如本文中所指出的，通過本發(fā)明的方法鑒定并對治療敏感的患者組以“可疑的”HER2蛋白表達(dá)及另外以高HER2基因擴(kuò)增為特征。僅為了信息的完整性，應(yīng)當(dāng)提及鑒定為具有“高” HER2表達(dá)的患者組也對用HER2信號傳導(dǎo)調(diào)控劑的治療敏感。高HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)可以涉及高于4的HER2基因的基因拷貝數(shù)，特別是每個腫瘤細(xì)胞高于4個拷貝的HER2基因的平均HER2基因拷貝數(shù)(對于那些沒有內(nèi)部著絲粒對照探針的測試系統(tǒng))或(每個腫瘤細(xì)胞)每個染色體17拷貝等于或高于2的HER2基因的平均基因拷貝數(shù)，換言之，涉及高于2的HER2/CEP17比率(對于那些使用內(nèi)部染色體17著絲粒對照探針的測試系統(tǒng))(每個腫瘤細(xì)胞)，等等。優(yōu)選地，高HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)還涉及至少5、6、7、8或更高的HER2基因拷貝數(shù)或至少3、4、5或6的HER2/CEP17比率。HER2基因拷貝數(shù)5可以例如源自2個拷貝的HER2基因的重復(fù)(例如兩條染色體上的兩個基因的重復(fù)或者通過重復(fù)攜帶一個拷貝的HER2基因的染色體)和同一染色體內(nèi)的一個拷貝的HER2基因的額外重復(fù)。優(yōu)選地，樣品在覆蓋大于腫瘤面積10%的面積中顯示HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)。例如，具有如本文中所限定的高擴(kuò)增狀態(tài)的細(xì)胞覆蓋大于依照本發(fā)明評估的腫瘤面積 /細(xì)胞的10%。這些具有高擴(kuò)增狀態(tài)的腫瘤細(xì)胞也可以是粘著的。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過原位雜交(ISH)來評估HER2基因的擴(kuò)增狀態(tài)。優(yōu)選地，原位雜交是熒光原位雜交(FISH)、顯色原位雜交(CISH)和銀原位雜交 (SISH)。這些方法是熟練技術(shù)人員已知的。可以從標(biāo)準(zhǔn)的教科書推導(dǎo)出這些方法的原理。 通過原位雜交來測定HER2擴(kuò)增狀態(tài)的商業(yè)試劑盒是容易地可獲得的。要依照本發(fā)明采用的優(yōu)選的FISH測試是來自Ventana的“Inform ”試劑盒、來自Abbott的“I^athvysion ” 試劑盒和來自Dako的“pharmDx ”試劑盒。優(yōu)選的CISH測定法是來自hvitrogen的 SPoT-Light HER2 CISH 和來自 Zytovision 的ZytoDot SPEC HER2 探針試劑盒。一種優(yōu)選的SISH測定法是與來自Ventana的ultraView SISH檢測試劑盒組合的來自Ventana 的 “ hf orm ” HER2 DNA 探針。HER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑是本領(lǐng)域中公知的，并且技術(shù)人員容易能夠基于其一般的知識和本文中所提供的教導(dǎo)來鑒定此類調(diào)控劑。要依照本發(fā)明使用的調(diào)控劑的非限制性例子是抗體，優(yōu)選地單克隆或人源化抗體，如赫賽汀/曲妥單抗或帕妥珠單抗(參見例如W02007/145862)。依照本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案是對以如本文中所限定的HER2 蛋白的可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平(例如通過IHC得到的HER2Q+))和HER2基因的高擴(kuò)增為特征的胃癌患者亞組施用赫賽汀/曲妥單抗。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，HER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑是 HER 二聚化/信號傳導(dǎo)抑制劑或HER2胞外域(ECD)脫落抑制劑。
15
優(yōu)選地，HER 二聚化/信號傳導(dǎo)抑制劑是HER2 二聚化抑制劑。本文中還優(yōu)選的是， HER 二聚化抑制劑抑制HER異二聚化、HER同二聚化、或兩者。在本發(fā)明的一個具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，HER 二聚化/信號傳導(dǎo)抑制劑是HER抗體。HER抗體可以結(jié)合HER受體，諸如EGFR、HER2和HER3。優(yōu)選地，抗體結(jié)合HER2。HER2 抗體可以結(jié)合HER2胞外域的域II和/或可以結(jié)合HER2胞外域的域I、II和III之間的接
口 O在本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，HER 二聚化抑制劑抑制HER2與EGFR或 HER3或Her4的異二聚化。在又一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，要作為依照本發(fā)明的通過抑制受體二聚化/信號傳導(dǎo)的HER2信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑采用的HER2抗體是帕妥珠單抗。優(yōu)選地，HER 二聚化抑制劑是抗體，優(yōu)選地抗體2C4。貫穿整個申請優(yōu)選的是“抗體2C4”，特別是其人源化變體(WO 01/00M5 ；其由以ATCCHB-U697保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassass, VA, USA的雜交瘤細(xì)胞系生成)，其結(jié)合HER2胞外域中的區(qū)域(例如HER2的約殘基22至約殘基584(包括端點(diǎn))的區(qū)域中的任何一個或多個殘基)。WO 01/00245的實(shí)施例3中提供了人源化2C4抗體的例子。人源化抗體2C4又稱作帕妥珠單抗。優(yōu)選地，HER脫落抑制劑是HER2脫落抑制劑。本文中還優(yōu)選的是，HER脫落抑制劑抑制HER異二聚化或HER同二聚化。在本發(fā)明的一個具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，HER脫落抑制劑是HER抗體。HER抗體可以結(jié)合HER受體，諸如EGFR、HER2和HER3。優(yōu)選地，抗體結(jié)合HER2。還優(yōu)選地，HER2抗體結(jié)合HER2胞外域(EOT)的亞域IV。在又一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，要作為依照本發(fā)明的通過抑制E⑶脫落的HER2信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑采用的HER2抗體是赫賽汀/曲妥單抗。如下文所指出的，特別在本文中所提供的醫(yī)學(xué)用途和方法中，赫賽汀/曲妥單抗是一種優(yōu)選的用于治療如通過上文所敘述的方法鑒定的及如本文中所描述的胃癌患者/ 患者組的HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。此新的胃癌患者/患者組以在使用兩種生物標(biāo)志HER2狀態(tài)(HER2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平和HER2的基因擴(kuò)增狀態(tài))的體外測試中顯示HER2的可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平(HER2Q+))和HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)(例如高于4的拷貝數(shù))的其生物學(xué)樣品/活組織檢查為特征。上文描述了術(shù)語“HER2的可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平”和“HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)”。可以與可以包含正常組織樣品的給定對照樣品，即健康對照樣品相關(guān)聯(lián)地來設(shè)置HER2蛋白的表達(dá)水平和HER2基因數(shù)的所述半定量評估。此類對照樣品可以自例如健康志愿者獲得或者可以是來自要在其HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)和蛋白質(zhì)表達(dá)水平方面評估的患者的限定的、明確健康的對照組織。要在所述HER2狀態(tài)/水平方面測試并評估的生物學(xué)樣品可以特別是經(jīng)由胃組織活組織檢查或切除獲得的組織樣品。本文中的術(shù)語“抗體”以最廣義使用，并且明確涵蓋完整的單克隆抗體、多克隆抗體、自至少兩種完整的抗體形成的多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、和抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性。還包含人的和人源化的及CDR嫁接的抗體。如本文中所使用的，術(shù)語“單克隆抗體”指自基本上同質(zhì)的抗體群體獲得的抗體， 即，除了可以以微小量存在的可能的天然存在的突變外，構(gòu)成群體的個體抗體是相同的。針對單一抗原性位點(diǎn)，單克隆抗體是高度特異性的。此外，與包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物形成對比，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在其特異性外，單克隆抗體的有利之處在于它們可以在不被其它抗體污染的情況中合成。修飾語“單克隆”指示抗體為自基本上同質(zhì)的抗體群體獲得的特征，并且不應(yīng)解釋為需要通過任何特定的方法來生成抗體。例如，要依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過由Kohler， G.等，Nature 256 (1975) 495首先描述的雜交瘤方法來生成，或者可以通過重組DNA方法 (參見例如美國專利No. 4，816，567)來生成。“抗體片段”包括完整抗體的一部分。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選地，要在本文中所提供的手段和方法中且特別是在治療如本文中所限定的新鑒定的胃癌組中采用的HER2途徑抗體調(diào)控劑是人源化的、完全人的或CDR嫁接的抗體分子。一種優(yōu)選的抗體是赫賽汀/曲妥單抗。術(shù)語“樣品” 一般應(yīng)當(dāng)意指自個體/患者獲得的任何生物學(xué)樣品。本發(fā)明的方法中可以省略獲得樣品的步驟，使得本發(fā)明方法僅包括評估步驟。因此，本發(fā)明在一個實(shí)施方案中涉及用于將懷疑患有胃癌并且具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平的患者鑒定為HER2/ neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neU (ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的體外方法，所述方法包括評估樣品中HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)的步驟，由此 HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)指示響應(yīng)性患者或者指示所述患者對所述HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的敏感性。優(yōu)選地，樣品是切除樣品或活組織檢查樣品。術(shù)語“活組織檢查”和“切除”是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在本發(fā)明的上下文中，活組織檢查樣品是使用針、刷、刮刀或打孔器通過自受試者取出單一細(xì)胞或組織(的一部分) 獲得的生物學(xué)樣品。例子是吸出活組織檢查、刷拭活組織檢查、芯活組織檢查、真空活組織檢查、芯針活組織檢查、針活組織檢查或打孔活組織檢查。切除樣品是使用手術(shù)刀、刀、剪或?yàn)榍懈疃O(shè)計(jì)的其它器械通過自受試者手術(shù)切除或切割器官或組織(的一部分)獲得的生物學(xué)樣品。例子是胃組織切除(其至少包含原發(fā)性腫瘤的一部分)和轉(zhuǎn)移性損傷切除。生物學(xué)樣品也可以包含循環(huán)腫瘤細(xì)胞。依照本發(fā)明，生物學(xué)樣品可以包含胃癌細(xì)胞和非胃癌細(xì)胞(其它細(xì)胞)。熟練病理學(xué)家能夠區(qū)分癌細(xì)胞與正常胃組織細(xì)胞。用于自哺乳動物獲得組織活組織檢查、切除和體液的方法是本領(lǐng)域中公知的。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，如本文中所限定的并且以顯示HER2蛋白表達(dá)的可疑表達(dá)水平(一定水平的HER2(HER2Q+))和HER2基因的高基因擴(kuò)增(例如每個細(xì)胞核/ 腫瘤細(xì)胞大于4的平均基因拷貝數(shù))的其生物學(xué)樣品/活組織檢查為特征的新的胃癌患者亞組可以患有侵入性胃癌，特別是腸型腺癌、混合型腺癌或彌漫型腺癌。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，要在其HER2水平/狀態(tài)方面依照本發(fā)明測試的所述患者的樣品在抗轉(zhuǎn)移療法前，即在啟動用HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑治療前獲得。然而，還涵蓋新輔助或輔助療法和相應(yīng)樣品的測試。在本發(fā)明的又一個實(shí)施方案中，提供了用于治療胃癌患者(特別是侵入性胃癌) 的方法，所述治療包括對通過如上文所提供的方法鑒定的受試者和需要此類治療的受試者施用有效量的HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的步驟。依照本發(fā)明，所述受試者優(yōu)選地是人受試者。生物學(xué)樣品，特別是所述受試者/患者的胃組織活組織檢查/切除以具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高擴(kuò)增/擴(kuò)增水平為特征。如本文中證明的，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易能夠測定所述生物學(xué)樣品中的所述HER2蛋白表達(dá)水平，特別是通過本領(lǐng)域中已知的免疫組織化學(xué)法來進(jìn)行。加以必要的變更，其適用于測定給定的HER2擴(kuò)增 /擴(kuò)增水平。在這里，如上文指出的，優(yōu)選的(但不是限制性的)測定方法是原位雜交技術(shù)， 如熒光原位雜交(FISH)、顯色原位雜交(CISH)或銀原位雜交(SISH)。優(yōu)選地，要依照本發(fā)明治療的患者是人患者，并且在體外測定HER2蛋白的所述表達(dá)水平和HER2基因的所述擴(kuò)增狀態(tài)的所述生物學(xué)樣品是來自人患者的生物學(xué)樣品，如本文中所描述的。此外，本發(fā)明的要點(diǎn)涉及如下的實(shí)情，即令人驚訝地，患有胃癌并且僅顯示HER2 蛋白表達(dá)的可疑狀態(tài)/水平和高HER2基因擴(kuò)增的患者可以通過HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑成功治療。特別地，所述調(diào)控劑包括針對HER2蛋白的抗體分子。在這方面優(yōu)選的抗體分子是赫賽汀/曲妥單抗及帕妥珠單抗(如記載于WO 2007/145862的，等等)。要依照本發(fā)明對顯示如本文中所限定的HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和高HER2基因擴(kuò)增的患者使用的其它HER2信號傳導(dǎo)調(diào)控劑或HER2劑還包含酪氨酸激酶抑制劑，如口服酪氨酸激酶抑制劑Tykerb (二對甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate))、HKI272或 BIBW2290如上文所限定的，在用于鑒定HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的本發(fā)明體外方法的上下文中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地用已知方法推導(dǎo)出哪個“HER2表達(dá)狀態(tài)”存在于所述患者的生物學(xué)樣品中。要用本文中所限定的HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑治療的患者在生物學(xué)樣品中顯示HER2基因的可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平和高擴(kuò)增水平/狀態(tài)。此外，在自所述懷疑患有或易于患上胃癌的患者獲得的樣品中，HER2的“可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平”對應(yīng)于如上文所描述的免疫組織學(xué)測試中的2+得分(“可疑分類”，參見上述表)，而高HER2擴(kuò)增狀態(tài)涉及每個腫瘤細(xì)胞高于4個拷貝的HER2基因的平均HER2基因拷貝數(shù)(對于那些沒有內(nèi)部著絲粒對照探針的測試系統(tǒng))或每個拷貝高于2的HER2/CEP17比率(對于那些使用內(nèi)部染色體 17著絲粒對照探針的測試系統(tǒng))。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以容易地檢測和/或證實(shí)HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)。這也通過原位雜交，如熒光原位雜交(FISH)或明視野原位雜交來常規(guī)地完成。因而，在測試HER2 的基因擴(kuò)增狀態(tài)時，常規(guī)地使用FISH測試，并且讀出可以包含平均HER2基因拷貝數(shù)或所謂的HER2/CEP17比率的測定，由此所述HER2/CEP17比率設(shè)置與用著絲粒探針(CEP17)獲得的信號有關(guān)的HER2信號。在本發(fā)明的上下文中，適于用本文中所限定的HER2信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑治療的新的患者組是顯示HER2的高基因擴(kuò)增和可疑的HER2蛋白表達(dá)的胃癌患者。依照本發(fā)明，提供了治療優(yōu)選地人胃癌患者的方法，其中對所述患者評估HER2蛋白的表達(dá)水平和HER2基因擴(kuò)增水平，若HER2蛋白的表達(dá)水平是可疑的話。依照本發(fā)明涵蓋的是，懷疑患有或易于患上胃癌，還有侵入性胃癌的顯示HER2的“可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平”(對應(yīng)于2+得分或“可疑分類”，參見上述表)并顯示“高HER2基因擴(kuò)增水平”(優(yōu)選地高于4的拷貝數(shù)或高于2的HER2/CEP17比率，如本文中所限定的)的患者依照本發(fā)明顯示正面的存活益處，即進(jìn)展前時間延長，和/或在用本文中所限定的HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是赫賽汀/曲妥單抗治療時顯示較少的復(fù)發(fā)性胃癌。如本文中所描述的醫(yī)學(xué)用途和方法涉及本文中所描述的HER2/neU(ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是針對HER2的抗體，如且優(yōu)選地赫賽汀/曲妥單抗對如下患者的用途，所述患者顯示本文中所確定的HER2 “可疑蛋白質(zhì)表達(dá)狀態(tài)”(對“低蛋白質(zhì)表達(dá)水平”， 如上文所限定的)并具有如本文中所限定的“高HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)”，例如平均每個腫瘤細(xì)胞大于4個拷貝。在本發(fā)明的上下文中，可以在抗轉(zhuǎn)移、輔助及新輔助胃癌療法中采用所述 HER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑，特別是針對HER2的抗體，如且優(yōu)選地赫賽汀/曲妥單抗。 因而，可以在癌性組織的手術(shù)干預(yù)/切除之前、期間或之后對需要此類治療并具有本文中所限定的生物標(biāo)志狀態(tài)的患者施用所述“HER2調(diào)控劑”。因此，本發(fā)明在抗轉(zhuǎn)移、及新輔助療法，即在手術(shù)前對本文中所限定的胃癌患者組給予本文中所限定的HER2信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑(如赫賽汀/曲妥單抗)的治療中，及在輔助療法中是有用的。此外，要通過本文中所提供的手段和方法(特別是用赫賽汀/曲妥單抗)治療的本發(fā)明的患者組是胃癌患者， 其中評估兩種生物標(biāo)志，即HER2蛋白表達(dá)和HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)，且其中治療具有“可疑表達(dá)狀態(tài)”(HER2Q+))和高HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)(即，高于4個拷貝或者換言之每個腫瘤細(xì)胞至少5個拷貝)的患者。依照本文中所提供的醫(yī)學(xué)及診斷(體外)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過本領(lǐng)域中已知的手段和方法來測定給定樣品中的HER2擴(kuò)增狀態(tài)/水平和HER2蛋白的表達(dá)水平/ 狀態(tài)等。這些方法還包括比較給定的樣品與正常的對照樣品，即不是癌性的，并且自健康 (對照)個體或自非患病組織等衍生的生物學(xué)樣品。因而，本發(fā)明涉及供在通過本文中所描述并限定的方法鑒定的患者中治療胃癌用的HER2/neu(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。還涵蓋HER2/neu (ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑用于制備供在通過本發(fā)明的方法鑒定的患者中治療胃癌用的藥物組合物的用途。在本文中所提供的醫(yī)學(xué)實(shí)施方案，即方法和用途的上下文中，要對本文中所限定的患者組(具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平(HER2Q+))和同時“高”HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)并且患有侵入性胃癌的患者/胃癌患者)施用的HER2/neU(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑可以作為單一抗腫瘤劑施用。然而，還涵蓋共治療方法及用途，其包括施用別的藥物，特別是抗癌藥等，例如以聯(lián)合療法形式。此類別的療法可以是化學(xué)療法，并且可以包括施用藥物，如與順鉬組合的氟嘧啶、抗代謝劑(例如吉西他濱)、抗激素化合物、酪氨酸激酶抑制劑、raf抑制劑、ras抑制劑、雙重酪氨酸激酶抑制劑、泰素、紫杉烷(如帕利他塞(paclitaxel)或多西他賽(docetaxel))、蒽環(huán)類，如多柔比星或表柔比星、或順鉬。還可以在本發(fā)明共治療辦法中使用長春瑞濱(vinorelbine)。此外，用特別是赫賽汀/曲妥單抗的共治療辦法可以包括施用個別或聯(lián)合療法形式的環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、甲氨蝶呤(methotrexate)或氟尿嘧啶(f Iuorouraci 1)(其又稱為5-FU)，所述聯(lián)合療法包含這三種藥物(“CMF療法”)。 HER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，特別是赫賽汀/曲妥單抗與氟嘧啶和順鉬的聯(lián)合療法也代表本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案。本文中所提供的優(yōu)選的治療方法(即使用HER2信號傳導(dǎo)調(diào)控劑)也可以與另一種療法組合。優(yōu)選地，此類聯(lián)合療法也可以依賴于化療劑的使用，或者它也可以包含抗血管生成劑，其包括(但不限于)施用VEGF阻斷劑，如例如貝伐單抗(bevacizumab)/Avastin 或索坦(sutent)(蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate)-SU-11248)。本領(lǐng)域技術(shù)人員，例如主治內(nèi)科醫(yī)生容易能夠?qū)θ绫疚闹兴薅ǖ幕颊?患者組施用本文中所限定的HER2/neU(ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。此類施用可以包括胃腸外路徑、口服路徑、靜脈內(nèi)路徑、皮下路徑、鼻內(nèi)路徑或經(jīng)皮路徑。在赫賽汀/曲妥單抗的情況中，優(yōu)選的施用路徑是靜脈內(nèi)施用。此外，可以在抗轉(zhuǎn)移、新輔助或輔助背景中施用HER2/ neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。在如本文中所限定的新的胃癌患者(組)/侵入性胃癌患者(患者組)中，赫賽汀/曲妥單抗的此類施用可以包括每天、每隔一天、每三天、每四天、每五天、一周一次、每兩周一次、每三周一次、每月一次的施用，等等。此外，主治內(nèi)科醫(yī)生可以依照他/她的專業(yè)經(jīng)驗(yàn)來變更、改變或修改HER2/ neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的施用方案。在本發(fā)明的一個具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了用于治療胃癌患者或患者組的方法，所述方法包括對所述患者/患者組施用赫賽汀/ 曲妥單抗，由此在生物學(xué)樣品(特別是活組織檢查或切除)評估中表征所述患者/患者組， 所述樣品顯示HER2蛋白的可疑表達(dá)水平(HER2Q+))和“高HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)”。因此，本發(fā)明還提供了赫賽汀/曲妥單抗在制備供治療胃癌患者用的藥物組合物中的用途，所述胃癌患者以本文中所公開的生物標(biāo)志狀態(tài)(HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和“高HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)”，如上文所限定的)為特征，或者已經(jīng)通過本文中所描述的用于鑒定HER2/neU(ErbB2) 信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的體外方法鑒定。所述胃癌患者/患者組也可以患有侵入性胃癌。本發(fā)明通過參照以下非限制性圖和實(shí)施例來進(jìn)一步描述。方法研究設(shè)計(jì)ToGA試驗(yàn)是為了調(diào)查與順鉬加氟嘧啶(卡培他濱或5-氟尿嘧啶)組合的曲妥單抗對單獨(dú)的順鉬加氟嘧啶在HER2陽性晚期GC中的安全性和功效而設(shè)計(jì)的隨機(jī)化的、開放標(biāo)簽的、多中心的、III期研究。SS納入標(biāo)準(zhǔn)-經(jīng)組織學(xué)確認(rèn)的胃或胃-食管接合(GEJ)的腺癌及不能手術(shù)的局部晚期或復(fù)發(fā)性和/或轉(zhuǎn)移性疾病，其不適合治愈性療法-使用成像技術(shù)(計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)或磁共振成像)評估的依照實(shí)體瘤響應(yīng)評估標(biāo)準(zhǔn)(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, RECIST)的可測量疾病，或不可測量的可評估的疾病-HER2陽性腫瘤(原發(fā)性腫瘤或轉(zhuǎn)移)，如通過中心實(shí)驗(yàn)室所評估的。 在中心實(shí)驗(yàn)室中對所有患者的樣品(切除或活組織檢查)實(shí)施IHC和FISH兩者。-東部腫瘤學(xué)協(xié)作組(EasternCooperative Oncology Group)性能狀態(tài)為 0、1 或 2-3個月的生命期望。-一般納入標(biāo)準(zhǔn)_男性或女性，年齡為18歲-簽署的知情同意。碰主要的終點(diǎn)是總體存活；次要的終點(diǎn)包括無進(jìn)展存活、總體響應(yīng)率和響應(yīng)的持續(xù)時間。關(guān)于功效評估的更多信息，參見摘要LBA4509. 10HER2測試。將GC腫瘤樣品進(jìn)行福爾馬林固定，并進(jìn)行石蠟包埋。在中心實(shí)驗(yàn)室使用IHC(經(jīng)修改的Here印Test )和FISH(pharmDX ;Dako)兩者來分析樣品(切除或活組織樣品)以測定HER2狀態(tài)，如由GC中的HER2測試的確認(rèn)研究所推薦的。IHC HER2評分使用下列經(jīng)修改的Here印Test 參數(shù)染色強(qiáng)度；完全/不完全膜染色；染色細(xì)胞的百分比；由于腔/其它原因所致的不完全膜染色。對于FISH分析，HER2陽性定義為2或更大的HER2 CEP17 比率。在此研究中，HER2陽性結(jié)果定義為IHC 3+和/或FISH陽性。結(jié)果現(xiàn)在完成ToGA中的HER2篩選方法已經(jīng)在中心實(shí)驗(yàn)室中使用所描述的經(jīng)修改的系統(tǒng)對來自M個地區(qū)的3807個腫瘤樣品評估HER2狀態(tài)。這些之中，3667個樣品是可評估的，并且810個已經(jīng)定義為HER2陽性，給出22. 的總體HER2陽性率。發(fā)現(xiàn)高得出乎意料數(shù)目的病例是FISH陽性/IHC 0/1+，并且將這些在治療臂間隨機(jī)化(

圖1)。在乳腺癌 HER2測試中，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)IHC0/1+樣品是FISH陰性，但是在ToGA中，IHC 0/1+/FISH陽性樣品的頻率幾乎與IHC 2+/FISH陽性樣品一樣高(分別為25%對)。在作為IHC 3+ 的病例中，發(fā)現(xiàn)5 %是FISH陰性。HER2陽性率在歐洲(23. 6% )和亞洲(23. 5% )間是相似的。HER2陽性率在地區(qū)間有所變化，從臺灣的5. 9% (n = 34)至澳大利亞的32. 8% (n = 61)。HER2陽性隨腫瘤部位而變化，HER2陽性率在GEJ (胃食管接合)癌癥中比在胃癌中高(分別為 33. 2%對 20. 9% ；ρ < 0. 001)。一般地，發(fā)現(xiàn)具有最高GEJ 胃癌比率的地區(qū)具有平均值之上的HER2陽性率，盡管患者數(shù)是低的。這些包括法國(比率0. 56 ;26.9% HER2陽性)、德國(比率0. 53 ;23. 7% HER2陽性)和英國(比率0. 33 ；25.8% HER2陽性)。相似地，基于組織學(xué)亞型(Lauren 分類)的HER2陽性有顯著差異(ρ < 0. 001)腸中的32. 2%對彌漫性/混合性癌癥中的 6. 1/20.4%。此外，具有較高的腸彌漫性/混合性癌癥比率的地區(qū)具有升高的HER2陽性率，諸如英國(比率3. 4 ；25. 8% HER2陽性)、澳大利亞(比率2. 6 ；32. 8% HER2陽性)、日本(比率2. 8 ；28. 1% HER2陽性)和葡萄牙(比率3. 33 ；22. 4% HER2陽性)。ToGA試驗(yàn)是在晚期GC中以前瞻方式提供關(guān)于HER2陽性發(fā)生率的信息的第一個 III期試驗(yàn)。ToGA篩選項(xiàng)目在晚期GC中觀察到22. 的HER2陽性率，其與先前在乳腺癌中觀察到的比率相當(dāng)。數(shù)據(jù)還顯示了，地區(qū)間GC的HER2陽性變化可以通過組織學(xué)亞型和腫瘤部位的差異來解釋。胃腫瘤趨于比乳腺腫瘤異質(zhì)得多得多，因此GC中的HER2測試與乳腺癌中的HER2測試不同。針對ToGA功效比較此篩選數(shù)據(jù)已經(jīng)導(dǎo)致新的治療算法，如本發(fā)明中所公開的。附圖簡述圖 1已經(jīng)在中心實(shí)驗(yàn)室中使用上述表中所描述的改良系統(tǒng)對來自M個地區(qū)的ToGA研究的3807個腫瘤樣品評估HER2狀態(tài)。這些之中，將584名患者納入研究。圖 2HER2亞組的危害比(HR)和CI 總體存活(OS)圖 3HER2亞組的危害比(HR)和CI 無進(jìn)展存活(PFS)
權(quán)利要求
1.一種用于將懷疑患有胃癌并且具有HER2蛋白的可疑表達(dá)水平的患者鑒定為HER2/ neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neU (ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的體外方法，所述方法包括下列步驟(a)自所述患者獲得樣品；并(b)評估所述樣品中HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)，由此HER2蛋白的可疑表達(dá)水平和HER2基因的高基因擴(kuò)增狀態(tài)指示響應(yīng)性患者或者指示所述患者對所述HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的敏感性。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述HER2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平是通過免疫組織化學(xué)(IHC)法來測定的。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述HER2的可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平是HER2(2+)，如在活組織檢查樣品中所測定的。
4.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述HER2的可疑蛋白質(zhì)表達(dá)水平是HER2(2+)，如在切除樣品中所測定的。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述HER2基因的基因擴(kuò)增狀態(tài)是通過原位雜交(ISH)法來檢測的。
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的方法，其中所述HER2基因的高擴(kuò)增狀態(tài)是高于4的HER2 基因的平均基因拷貝數(shù)或每個染色體17拷貝等于或高于2的HER2的平均基因拷貝數(shù)。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的方法，其中通過權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的方法鑒定的患者組對HER2/neu(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)率是至少20%。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的方法，其中所述樣品選自下組胃組織切除、胃組織活組織檢查、來自轉(zhuǎn)移性損傷切除的組織和循環(huán)腫瘤細(xì)胞。
9.權(quán)利要求2至8中任一項(xiàng)的方法，其中用Here印tTest 測定法來實(shí)施所述免疫組織化學(xué)法。
10.權(quán)利要求5的方法，其中所述原位雜交選自下組熒光原位雜交(FISH)、顯色原位雜交(CISH)和銀原位雜交(SISH)。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述FISH測試選自下組“Inform ”試劑盒、 "Pathvysion "試劑盒或 “pharmDx ” 試劑盒。
12.權(quán)利要求10的方法，其中所述CISH測試選自下組SPoT-Light HER2CISH 知 ZytoDot SPEC HER2 探針試劑盒。
13.權(quán)利要求10的方法，其中所述SISH測試是與ultraView SISH檢測試劑盒組合的 “ hf orm ” HER2DNA 探針。
14.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的方法，其中所述樣品是在抗轉(zhuǎn)移、新輔助或輔助療法前獲得的。
15.一種HER2/neU (ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑，其供在治療通過權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)的方法鑒定的患者中的胃癌中使用。
16.HER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑用于制備供治療通過權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)的方法鑒定的患者中的胃癌用的藥物組合物的用途。
17.一種用于治療胃癌的方法，包括對需要此類治療的通過權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)的方法鑒定的受試者施用有效量的HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述受試者是人。
19.權(quán)利要求17或18的方法、權(quán)利要求15的調(diào)控劑或權(quán)利要求16的用途，其中所述 HER2/neu (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑作為單一抗腫瘤劑施用。
20.權(quán)利要求17或18的方法、權(quán)利要求15的調(diào)控劑或權(quán)利要求16的用途，其中所述 HER2/neu (ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑以聯(lián)合療法形式施用。
21.權(quán)利要求20的方法、權(quán)利要求20的調(diào)控劑或權(quán)利要求20的用途，其中所述聯(lián)合療法中所使用的療法是化學(xué)療法。
22.權(quán)利要求21的方法、權(quán)利要求21的調(diào)控劑、或權(quán)利要求21的用途，其中所述化學(xué)療法選自下組與順鉬組合的氟嘧啶、蒽環(huán)類/紫杉烷化學(xué)療法、用抗代謝劑的療法、用抗激素化合物的療法、用酪氨酸激酶抑制劑的療法、用raf抑制劑的療法、用ras抑制劑的療法、用雙重酪氨酸激酶抑制劑的療法、用泰素的療法、用紫杉烷的療法、用多柔比星的療法、 用輔助(抗)激素藥物的療法、和用順鉬的療法。
23.權(quán)利要求17至22中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求15和19至22中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求16和19至22中任一項(xiàng)的用途，其中通過胃腸外路徑、口服路徑、靜脈內(nèi)路徑、皮下路徑、鼻內(nèi)路徑或經(jīng)皮路徑之任一種來施用所述HER2/neU(ErbB》信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。
24.權(quán)利要求17至23中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求15和19至23中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求16和19至23中任一項(xiàng)的用途，其中在抗轉(zhuǎn)移、新輔助或輔助背景中施用所述HER2/ neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑。
25.權(quán)利要求1至14和17至M中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求15和19至M中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求16和19至M中任一項(xiàng)的用途，其中所述HER2/neu (ErbB^信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑是HER 二聚化/信號傳導(dǎo)抑制劑或HER脫落抑制劑。
26.權(quán)利要求25的方法、權(quán)利要求25的調(diào)控劑或權(quán)利要求25的用途，其中所述HER二聚化抑制劑是HER2 二聚化抑制劑。
27.權(quán)利要求25或沈的方法、權(quán)利要求25或沈的調(diào)控劑或權(quán)利要求25或沈的用途，其中所述HER 二聚化抑制劑抑制HER異二聚化或HER同二聚化。
28.權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求25至27中任一項(xiàng)的用途，其中所述HER 二聚化抑制劑是HER抗體。
29.權(quán)利要求觀的方法、權(quán)利要求觀的調(diào)控劑或權(quán)利要求觀的用途，其中所述HER抗體結(jié)合選自下組的HER受體EGFR、HER2和HER3。
30.權(quán)利要求四的方法、權(quán)利要求四的調(diào)控劑或權(quán)利要求四的用途，其中所述抗體結(jié)合 HER2。
31.權(quán)利要求30的方法、權(quán)利要求30的調(diào)控劑或權(quán)利要求30的用途，其中所述HER2 抗體結(jié)合HER2胞外域的域II。
32.權(quán)利要求31的方法、權(quán)利要求31的調(diào)控劑或權(quán)利要求31的用途，其中所述抗體結(jié)合HER2胞外域的域I、II和III之間的接合。
33.權(quán)利要求四至32中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求四至32中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求四至32中任一項(xiàng)的用途，其中所述HER2抗體是帕妥珠單抗。
34.權(quán)利要求25的方法、權(quán)利要求25的調(diào)控劑或權(quán)利要求25的用途，其中所述HER脫落抑制劑是HER2脫落抑制劑。
35.權(quán)利要求25或34的方法、權(quán)利要求25或34的調(diào)控劑或權(quán)利要求25或34的用途，其中所述HER脫落抑制劑抑制HER異二聚化或HER同二聚化。
36.權(quán)利要求25、34和35中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求25、34和35中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求25、34和35中任一項(xiàng)的用途，其中所述HER脫落抑制劑是HER抗體。
37.權(quán)利要求36的方法、權(quán)利要求36的調(diào)控劑或權(quán)利要求36的用途，其中所述HER抗體結(jié)合選自下組的HER受體EGFR、HER2和HER3。
38.權(quán)利要求37的方法、權(quán)利要求37的調(diào)控劑或權(quán)利要求37的用途，其中所述抗體結(jié)合 HER2。
39.權(quán)利要求38的方法、權(quán)利要求38的調(diào)控劑或權(quán)利要求38的用途，其中所述HER2 抗體結(jié)合HER2胞外域的亞域IV。
40.權(quán)利要求37至39中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求37至39中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求37至39中任一項(xiàng)的用途，其中所述HER2抗體是赫賽汀/曲妥單抗。
41.權(quán)利要求1至14和17至40中任一項(xiàng)的方法、權(quán)利要求15和19至40中任一項(xiàng)的調(diào)控劑或權(quán)利要求16和19至40中任一項(xiàng)的用途，其中所述胃癌是侵入性胃癌。
42.權(quán)利要求41的方法、權(quán)利要求41的調(diào)控劑或權(quán)利要求41的用途，其中所述胃癌選自下組腸型腺癌、混合型腺癌和彌漫型腺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于鑒定HER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑的響應(yīng)者或?qū)ER2/neu(ErbB2)信號傳導(dǎo)途徑調(diào)控劑敏感的患者的手段和方法。本文中還描述了依照本發(fā)明的鑒定方法確定及限定，由此已知或懷疑所述患者組患有或易于患上胃癌，特別是侵入性胃癌的患者組的相應(yīng)治療方法。
文檔編號C12Q1/68GK102421448SQ201080020699
公開日2012年4月18日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月29日
發(fā)明者A.基爾梅爾, J.魯肖夫, M.皮克爾 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司