專利名稱:氨(氨離子)的測定方法與氨(氨離子)診斷/測定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)/食品檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域,更具體地,本發(fā)明涉及氨(氨離子)診斷/測定方法及其試劑盒。
背景技術(shù):
氨測定的方法有微量擴(kuò)散法、離子交換法、酶法和氨電極法等。目前應(yīng)用最多的方法是酶法和基于離子選擇電極的血氨測定儀分析法。擴(kuò)散法是標(biāo)本堿化后,釋放出NH3,用酸滴定釋放出的氨,或用Nessler反應(yīng)形成棕黃色碘化雙汞胺進(jìn)行比色。這些方法需要堿化,內(nèi)源性的氨形成造成影響,使其準(zhǔn)確性和精密度受到影響,目前已很少應(yīng)用;離子交換法比擴(kuò)散法更準(zhǔn)確,CV為8% 13% ’離子選擇電極法是利用NH3擴(kuò)散到電極表面,引起電極的pH發(fā)生變化進(jìn)行測定,該方法的CV為 3. 5% 4. 8%,回收率高。結(jié)合具體實(shí)際,應(yīng)以酶法測定為實(shí)用。檢索中國專利,僅查出87105593. 7專利申請公開了一種血氨測定速凍杯,卻未發(fā)現(xiàn)比較理想的血氨測定方法。
發(fā)明內(nèi)容
[要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是提供一種氨(氨離子)的測定方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種氨(氨離子)診斷/測定試劑盒。[技術(shù)方案]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)與酶 (偶)聯(lián)法(Couple Reaction)的聯(lián)用技術(shù),利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在 340nm波長處的吸光度變化測定氨(氨離子)的方法。本發(fā)明氨(氨離子)測定方法的的技術(shù)原理是根據(jù)下述氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶的系列催化反應(yīng)完成氨+腺苷三磷酸氨激酶腺苷二磷酸+磷酰胺2腺苷二磷酸+磷酸根+氨甲酰磷酸氨甲酰磷酸合成酶2腺苷三磷酸+氨+ 二氧化碳+水二氧化碳+丙酮酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+輔酶本發(fā)明的方法利用氨激酶(ammonia kinase ;EC 2. 7. 3. 8)酶(偶)聯(lián)氨甲酰磷酸合成酶(carbamyl phosphate synthetase ;EC 6. 3. 4. 16)、蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase ;EC 1. 1. 1. 38 ;EC 1. 1. 1. 39 ;EC 1. 1. 1. 40 ;EC 1. 1. 1. 83)酶促反應(yīng)比色終點(diǎn)法。氨激酶酶解氨反應(yīng)產(chǎn)生腺苷二磷酸,再通過(偶)聯(lián)合氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶的作用,最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰),從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度,這樣可以通過測量340nm 處吸光度下降的程度,可以測算氨(氨離子)的濃度大小。本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明涉及一種氨(氨離子)的測定方法。該氨(氨離子)測定方法的步驟如下A、樣品準(zhǔn)備A. 1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備將一定量的氨鹽溶于水或緩沖液中,再將氨濃度調(diào)整到100微摩爾/升,得到的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)樣品;A. 2待測樣品的制備待測液體樣品直接測試,無須預(yù)處理;將一定量的待測固體樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣溶于水或緩沖液中;A. 3空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品,其氨(氨離子)濃度為0微摩爾/升;B、試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽與丙酮酸,然后將它們混合均勻,用水溶解得到所述的試劑溶液,它們的濃度分別是20-500mmol/L、0. 001-7mol/L、0. 1-0. 35mmol/L、 1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-lOOmmol/L、l-lOOmmol/L、l-100mmol/L 與 l-100mmol/L ;C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進(jìn)行混合,在溫度15-45°C下反應(yīng)5-60分鐘,在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制可以不設(shè)副波長)下進(jìn)行測定,測定其吸光度隨時(shí)間的變化;D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度隨時(shí)間的變化;E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時(shí)間的變化;F、數(shù)據(jù)處理由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時(shí)間的變化,根據(jù)下式計(jì)算得到
氨的含量
ΔΑ (樣品)-ΔΑ(空白)
氨(氨離子)含量=-χ標(biāo)準(zhǔn)濃度(μπιοΙ/L)
ΔΑ (標(biāo)準(zhǔn))-ΔΑ(空白)式中Δ A(樣品)表示步驟C)得到的待測樣品的吸光度變化;Δ A(空白)表示步驟Ε)得到的空白樣品的吸光度變化;Δ A (標(biāo)準(zhǔn))表示步驟D)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度變化。根據(jù)本發(fā)明,在所述的氨(氨離子)測定方法中,所述的緩沖液應(yīng)該理解是能夠使其測定介質(zhì)的PH基本保持穩(wěn)定(一般是6. 0-9.0)的溶液。如果該ρΗ高于9.0或ρΗ低于6. 0,則該測定方法使用的酶的活性達(dá)不到預(yù)期的活性效果,因此需要添加更多的介質(zhì)與酶,才有可能達(dá)到預(yù)期的活性效果。在本發(fā)明中,所述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或 “PBS”緩沖液的緩沖液。優(yōu)選地,所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、 磷酸鹽緩沖液或“PBS”緩沖液。更優(yōu)選地,所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液或磷酸鹽緩沖液。根據(jù)本發(fā)明,在所述的氨(氨離子)測定方法中,所述的穩(wěn)定劑應(yīng)該理解是一種能保護(hù)試劑中的介質(zhì)(底物)與酶,使其不會(huì)隨著時(shí)間推移而改變其性質(zhì),進(jìn)而失去活性的物質(zhì),它會(huì)使得試劑具備很長的活性壽命,通常長達(dá)數(shù)月,甚至一、二年。如果沒有所述的穩(wěn)定劑,則試劑的活性在溶液中只能維持?jǐn)?shù)十小時(shí),頂多數(shù)天,就會(huì)逐漸失去活性而不再具備檢測性能。在本發(fā)明中,所述的穩(wěn)定劑使用量是0.01-7mol/L。如果所述的穩(wěn)定劑使用量不夠,則試劑活性的壽命就會(huì)縮短;如果所述的穩(wěn)定劑使用量過高,則會(huì)增加成本。在本發(fā)明中,所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉或疊氮鈉防腐劑的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地,所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自氯化鈉、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉或疊氮鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地,所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自甘油或雙乙酸鈉的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中,所述的還原型輔酶是一種或多種選自NADPH、NADH或thio_NADH的還原型輔酶。根據(jù)一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式,本發(fā)明使用全自動(dòng)生化分析儀測定氨(氨離子)時(shí),待測樣品、所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述空白樣品由該分析儀在設(shè)定條件下(參數(shù))自動(dòng)取樣,然后在下述條件下進(jìn)行測定測定方法為二點(diǎn)終點(diǎn)法/終點(diǎn)法,溫度37°C,反應(yīng)時(shí)間10 分鐘,測試主波長340nm,測試副波長405nm,被測氨(氨離子)樣品與試劑的體積比例為 1/10-1/500,反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng),延遲時(shí)間1/0分鐘,檢測時(shí)間4/5分鐘。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式,本發(fā)明使用的試劑溶液配制成如下雙劑試劑由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽與丙酮酸組成的試劑1 ;由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶與蘋果酸脫氫酶組成的試劑2 ;其中還原型輔酶、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽、丙酮酸在試劑1或試劑2中的位置是不限定的。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式,本發(fā)明使用的試劑配制成如下三劑試劑由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽與丙酮酸組成的試劑1 ;由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨甲酰磷酸合成酶與蘋果酸脫氫酶組成的試劑2 ;
由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑與氨激酶組成的試劑3 ;其中還原型輔酶、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽、丙酮酸在試劑1、試劑2或試劑3中的位置是不限定的。在本發(fā)明氨(氨離子)測定方法中使用的測定儀器可以是紫外/可見光分析儀, 例如上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計(jì)、天津喀納斯光學(xué)分析儀器有限公司銷售的723可見分光光度計(jì);半自動(dòng)生化分析儀,例如上海偉思醫(yī)用設(shè)備有限公司的BTS-330半自動(dòng)生化分析儀;全自動(dòng)生化分析儀,例如由邁瑞公司以商品名BS-300、奧林帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商品名CB8000或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動(dòng)生化分析儀。本發(fā)明還涉及氨(氨離子)診斷/測定試劑盒。該氨(氨離子)診斷/測定試劑盒由下述粉狀試劑組成,在使用時(shí)用水將它們?nèi)芙獾玫骄哂邢率鰸舛确秶目芍苯邮褂玫?br>
液體試劑
緩沖液20-500mmol/L
穩(wěn)定劑0.001-7mol/L
還原型輔酶0.1-0. 35mmol/L
氨激酶1000-80000U/L
氨甲酰磷酸合成酶1000-80000U/L
蘋果酸脫氫酶1000-80000U/L
腺苷三磷酸l-100mmol/L
氨甲酰磷酸1-1OOmmo1/L
單價(jià)磷酸鹽1-1OOmmo1/L
丙酮酸1-IOOmmo1/L。
根據(jù)一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式,本發(fā)明的氨
試劑1
緩沖液IOOmmol/L
穩(wěn)定劑500mmol/L
還原型輔酶0.25mmol/L
腺苷三磷酸5mmol/L
氨甲酰磷酸5mmol/L
單價(jià)磷酸鹽5mmol/L
丙酮酸5mmol/L ;
組成如下的試劑2
緩沖液IOOmmo1/L
穩(wěn)定劑500mmol/L
氨激酶16000U/L
氨甲酰磷酸合成酶18000U/L
蘋果酸脫氫酶12000U/L。
根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式,本發(fā)明的
試劑1
測定試劑盒有
緩沖液穩(wěn)定劑
IOOmmol/L 500mmol/L 0.25mmol/L還原型輔酶 0.腺苷三磷酸 5η氨甲酰磷酸 5η單價(jià)磷酸鹽 5η丙酮酸5η組成如下的試劑2
5mmol/L 5mmol/L 5mmol/L 5mmol/L ;緩沖液穩(wěn)定劑
1OOmmo1/L 500mmol/L 18000U/L 12000U/L ;氨甲酰磷酸合成酶蘋果酸脫氫酶組成如下的試劑3緩沖液穩(wěn)定劑氨激酶
IOOmmol/L 500mmol/L 16000U/L。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式,在本發(fā)明的氨(氨離子)診斷/測定試劑盒中,所述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、 咪唑-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液。優(yōu)選地,所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、 磷酸鹽緩沖液或“PBS”緩沖液。更優(yōu)選地,所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液或磷酸鹽緩沖液。在本發(fā)明中,所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉或疊氮鈉防腐劑的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地,所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自氯化鈉、丙二醇、甘油、雙乙酸鈉或疊氮鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地,所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自甘油或雙乙酸鈉的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中,無論是單劑試劑、雙劑試劑或三劑試劑,在本發(fā)明測定氨(氨離子) 的方法中,所述的還原型輔酶可以是一種或多種選自NADPH、NADH或thio_NADH的還原型輔酶。使用本發(fā)明的氨(氨離子)診斷/測定試劑盒時(shí),可以使用紫外/可見光分析儀, 例如上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計(jì)、天津喀納斯光學(xué)分析儀器有限公司銷售的723可見分光光度計(jì);半自動(dòng)生化分析儀,例如上海偉思醫(yī)用設(shè)備有限公司的BTS-330半自動(dòng)生化分析儀;全自動(dòng)生化分析儀,例如由邁瑞公司以商品名BS-300、奧林帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商品名CB8000或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動(dòng)生化分析儀。
在采用本發(fā)明方法測定氨(氨離子)時(shí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行多次試驗(yàn),然后將得到的這些試驗(yàn)結(jié)果按照下式計(jì)算出精密度(CV)
權(quán)利要求
1.一種利用酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的氨(氨離子)濃度測定方法,其測定的技術(shù)原理是根據(jù)下述氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶的系列催化反應(yīng)完成氨+腺苷三磷酸氨激酶腺苷二磷酸+磷酰胺 2腺苷二磷酸+磷酸根+氨甲酰磷酸氨甲酰磷酸合成酶2腺苷三磷酸+氨+ 二氧化碳+水二氧化碳+丙酮酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+輔酶
2.一種氨(氨離子)的測定方法,其特征在于該方法的步驟如下 2. 1樣品準(zhǔn)備2. 1. 1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備將一定量的氨鹽溶于水或緩沖液中,再將其濃度調(diào)整到100微摩爾/升; 2. 1.2待測樣品的制備待測液體樣品直接測試,無須預(yù)處理;將一定量的待測固體樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣溶于水或緩沖液中; 2. 1.3空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品,其氨(氨離子)濃度為0微摩爾/升; 2. 2試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽與丙酮酸,然后將它們混合均勻,用水溶解得到所述的試劑溶液,它們的濃度分別是20-500mmol/L、0. 001_7mol/L、0· 1-0. 35mmol/L、 1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-lOOmmol/L、l-lOOmmol/L、l-100mmol/L 與 l-100mmol/L ;2. 3待測樣品與在步驟2. 2)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進(jìn)行混合,在溫度15-45°C下反應(yīng)5-60分鐘,在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制,可以不設(shè)副波長)下進(jìn)行測定,測定其吸光度隨時(shí)間的變化;2. 4在與步驟2. 3)同樣的條件下測定步驟2. 1. 1)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度隨時(shí)間的變化; 2. 5在與步驟2. 3)同樣的條件下測定在步驟2. 1. 3)使用的水或緩沖液作為空白溶液的吸光度隨時(shí)間的變化;2.6數(shù)據(jù)處理由步驟2. 3-2. 5)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時(shí)間的變化,根據(jù)下式計(jì)算得到
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的測定方法,其特征在于使用全自動(dòng)生化分析儀測定時(shí),待測樣品、所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述空白樣品由該分析儀在設(shè)定條件下自動(dòng)取樣,然后在下述條件下進(jìn)行測定測定方法為終點(diǎn)法,溫度37°C,反應(yīng)時(shí)間10分鐘,測試主波長340nm,測試副波長405nm,被測氨樣品與試劑的體積比例為1/10-1/500,反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng),延遲時(shí)間 1/0分鐘,檢測時(shí)間4/5分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的測定方法,其特征在于,所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉、疊氮鈉等防腐劑的穩(wěn)定劑;所述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液;所述的還原型輔酶是一種或多種選自NADPH、NADH或thio_NADH的還原型輔酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的測定方法,其特征在于 5. 1所述的試劑溶液配制成如下單劑試劑它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽、丙酮酸、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶與蘋果酸脫氫酶組成的;5. 2所述的試劑溶液配制成如下雙劑試劑試劑1,它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽與丙酮酸組成的;試劑2,它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶與蘋果酸脫氫酶組成的;其中還原型輔酶、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽、丙酮酸在試劑1或試劑2中的位置是不限定的;5.3所述的試劑配制成如下三劑試劑試劑1,它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽與丙酮酸組成的;試劑2,它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨甲酰磷酸合成酶與蘋果酸脫氫酶組成的;試劑3,它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑與氨激酶組成的;其中還原型輔酶、氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、腺苷三磷酸、氨甲酰磷酸、單價(jià)磷酸鹽、丙酮酸在試劑1、試劑2或試劑3中的位置是不限定的。
6.一種氨(氨離子)診斷/測定試劑盒,其特征在于6. 1它由下述粉狀試劑組成,在使用時(shí)用水將它們?nèi)芙獾玫骄哂邢率鰸舛确秶目芍苯邮褂玫囊后w試劑緩沖液20-500mmol/L穩(wěn)定劑0.001-7mol/L還原型輔酶0.1-0. 35mmol/L氨激酶1000-80000U/L氨甲酰磷酸合成酶1000-80000U/L蘋果酸脫氫酶1000-80000U/L腺苷三磷酸l-100mmol/L氨甲酰磷酸l-100mmol/L單價(jià)磷酸鹽l-100mmol/L丙酮酸l-100mmol/L ;6. 2根據(jù)權(quán)利要求6. 1所述的氨(氨離子)診斷/測定試劑盒,其特征在于它有組成如下的試劑1 緩沖液穩(wěn)定劑還原型輔酶腺苷三磷酸氨甲酰磷酸單價(jià)磷酸鹽丙酮酸20-500mmol/L 0.001-7mol/L 0.1-0. 35mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/L 1一lOOmmol/L ;20-500mmol/L 0. 001-7mol/L 1000-80000U/L 1000-80000U/L 1000-80000U/L ;組成如下的試劑2 緩沖液穩(wěn)定劑氨激酶氨甲酰磷酸合成酶蘋果酸脫氫酶6. 3根據(jù)權(quán)利要求6. 1所述的氨(氨離子)診斷/測定試劑盒,其特征在于它有組成如下的試劑1 緩沖液穩(wěn)定劑還原型輔酶腺苷三磷酸氨甲酰磷酸單價(jià)磷酸鹽丙酮酸組成如下的試劑2 緩沖液穩(wěn)定劑氨甲酰磷酸合成酶蘋果酸脫氫酶組成如下的試劑3 20-500mmol/L 0.001-7mol/L 0.1-0. 35mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/L ;20-500mmol/L 0. 001-7mol/L 1000-80000U/L 1000-80000U/L ;緩沖液穩(wěn)定劑氨激酶20-500mmol/L 0.001-7mol/L 1000-80000U/Lc
全文摘要
本發(fā)明涉及利用酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的氨(氨離子)含量的測定方法、試劑的組成及成分,其測定的技術(shù)原理是依據(jù)氨激酶、氨甲酰磷酸合成酶、蘋果酸脫氫酶的系列催化反應(yīng)完成,本發(fā)明還涉及一種氨(氨離子)診斷/測定試劑盒。本發(fā)明的測定方法靈敏度高、誤差小,因此本發(fā)明的測定方法與試劑盒可以廣泛地應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)/食品檢驗(yàn)。
文檔編號C12Q1/48GK102565332SQ20101058390
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月13日
發(fā)明者王爾中 申請人:蘇州艾杰生物科技有限公司