專利名稱：一種采用發(fā)光菌毒性試驗準(zhǔn)確檢測水質(zhì)毒性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水質(zhì)毒性的檢測方法，具體涉及一種采用發(fā)光菌毒性試驗準(zhǔn)確檢 測水中有機物質(zhì)和無機物質(zhì)的毒性的方法。
背景技術(shù)：
為了保障飲水安全，降低環(huán)境惡化給飲用水水質(zhì)帶來的威脅，人們常采用各種方 法對水質(zhì)進行評價，以有效的掌握飲用水引起的健康風(fēng)險。發(fā)光菌毒性試驗是經(jīng)典的綜合生物毒性評價方法之一，因細(xì)菌生長周期短，對環(huán) 境變化敏感等特點，其發(fā)光強度的變化程度與毒物質(zhì)量濃度在理論上呈線性相關(guān)。以發(fā)光 菌為代表的細(xì)菌類試驗在國內(nèi)外得到廣泛的應(yīng)用，許多國家已將發(fā)光菌方法作為標(biāo)準(zhǔn)的毒 性測試方法。目前也有發(fā)光菌毒性儀應(yīng)用在了水質(zhì)預(yù)警檢測上，作為水質(zhì)安全的有力屏障 之一。但已有研究表明，不論是海洋發(fā)光菌還是淡水發(fā)光菌，在檢測水質(zhì)中的無機物時非常 靈敏、準(zhǔn)確，但是在檢測有機物時卻表現(xiàn)出不同的效果。用發(fā)光菌對有機物進行檢測時，相 對于陰性對照，有機物不但不抑制發(fā)光菌的發(fā)光性，反而促進其發(fā)光性。由于水中可能含有 有機和無機的多種物質(zhì)，如果用傳統(tǒng)的發(fā)光菌毒性試驗進行水質(zhì)綜合毒性評價的話勢必會 使結(jié)果產(chǎn)生很大的偏差。由于這種原因，發(fā)光菌毒性試驗在檢測水中綜合毒性時受到了很 大的阻礙。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述發(fā)光菌毒性試驗存在的不足，提供了一種采用發(fā)光菌毒性試驗準(zhǔn) 確檢測水質(zhì)毒性的方法，該方法對發(fā)光菌進行了處理，使有機物也同樣的抑制其發(fā)光性，從 而能同時檢測水質(zhì)中無機物質(zhì)和有機物質(zhì)的綜合毒性，使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。本發(fā)明是通過以下措施實現(xiàn)的
發(fā)明人在進行發(fā)光菌毒性試驗時發(fā)現(xiàn)，有機毒物不但不會抑制發(fā)光菌的發(fā)光性，還具 有促進作用，這樣在測定含有有機和無機毒性物質(zhì)的水樣使會使測量結(jié)果發(fā)生錯誤，偏離 真實數(shù)據(jù)，發(fā)明人經(jīng)創(chuàng)造性實驗，發(fā)現(xiàn)在將發(fā)光菌用于檢測毒性物質(zhì)前，先對其進行一定的 培養(yǎng)，則可使發(fā)光菌對有機物質(zhì)也同樣具有發(fā)光抑制性，使檢測水質(zhì)毒性時結(jié)果更加準(zhǔn)確。 其具體技術(shù)方案如下
一種采用發(fā)光菌毒性試驗準(zhǔn)確檢測水質(zhì)毒性的方法，包括用發(fā)光菌對待測水樣進行發(fā) 光菌毒性試驗，以檢測其水質(zhì)綜合毒性，其特征是在試驗前對發(fā)光菌進行以下處理
(1)固體培養(yǎng)將發(fā)光菌在LB固體培養(yǎng)基中進行固體培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度 20-25°C，時間 20-24h ；
(2)液體培養(yǎng)將固體培養(yǎng)得到的發(fā)光菌菌種接種到液體LB培養(yǎng)基中，在20-25°C下 振蕩培養(yǎng)16_24h ；
(3)制備菌懸液取上述步驟(2)的含發(fā)光菌的液體培養(yǎng)基，進行離心分離，然后用無 菌生理鹽水進行懸浮，得OD值為0. 4-0. 9的菌懸液；(4)將待測水樣與菌懸液混合進行發(fā)光菌毒性試驗，測定待測水樣的發(fā)光菌抑制率。本發(fā)明所用的發(fā)光菌為青?；【?。本發(fā)明中，發(fā)光菌毒性試驗的條件為菌懸液與待測水樣的體積比為1:1，反應(yīng)時 間為 10-15min。上述方法中，液體培養(yǎng)時發(fā)光菌的接種量滿足所得發(fā)光菌的發(fā)光量在IO5-IO6的 要求。上述方法中，步驟(3)中離心分離的轉(zhuǎn)速為3000-4000r/min。進一步的，步驟(1)的培養(yǎng)條件為溫度22°C，時間Mh ；步驟(2)的培養(yǎng)條件為 溫度22°C，時間22h。有機毒性物質(zhì)對發(fā)光菌起增強發(fā)光的原因可能是原先發(fā)光菌處于貧營養(yǎng)的狀態(tài)， 一開始接觸有機毒物時將其作為碳源，本發(fā)明對發(fā)光菌進行了處理，發(fā)光菌就不處于原始 的貧營養(yǎng)狀態(tài)，使有機毒性物質(zhì)和無機毒性物質(zhì)均能夠抑制發(fā)光菌的發(fā)光強度，從而提高 了采用發(fā)光菌毒性試驗檢測水質(zhì)毒性的準(zhǔn)確性，解決了發(fā)光菌不能正確反應(yīng)水質(zhì)綜合毒性 的問題。本方法費時較少、靈敏度高、操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，能夠?qū)λ|(zhì)污染狀況做出判斷， 為突發(fā)性水質(zhì)污染和水廠的水處理技術(shù)提供支持，降低由于飲用水暴露導(dǎo)致的風(fēng)險。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明僅是 為了解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進行限定。本發(fā)明所用的LB固體培養(yǎng)基的配方如下胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、 氯化鈉10g/L、瓊脂粉18g/L。本發(fā)明所用的LB液體培養(yǎng)基的配方如下胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、 氯化鈉10g/L。實施例1
以青?；【鸀槔瑱z測其進行前處理和不進行處理時對同一種物質(zhì)的發(fā)光抑制率情
況
采用本發(fā)明的方法制備青?；【鷳乙簩⑶嗪；【贚B固體培養(yǎng)基上于22°C培養(yǎng) Mh，將30個單菌落菌種接種到150ml液體LB培養(yǎng)基中，22°C振蕩培養(yǎng)20h ；取含有青海弧 菌的液體培養(yǎng)基在4000r/min的離心條件下進行離心分離，再用無菌生理鹽水進行懸浮， 得OD值為0. 9的菌懸液；
未經(jīng)處理的青?；【苯优涑蒓D為0. 9的菌懸液。將三氯甲烷0. lmg/L、溴氰菊酯0. 02mg/L、四氯化碳0. 02mg/L、鐵0. 25 mg/L分別 于菌懸液按1:1的體積比混合，曝光IOmin后檢測發(fā)光抑制率，其結(jié)果見表1。
權(quán)利要求
1.一種采用發(fā)光菌毒性試驗準(zhǔn)確檢測水質(zhì)毒性的方法，包括用發(fā)光菌對待測水樣進行 發(fā)光菌毒性試驗，以檢測其水質(zhì)綜合毒性，其特征是在試驗前對發(fā)光菌進行以下處理(1)固體培養(yǎng)將發(fā)光菌在LB固體培養(yǎng)基中進行固體培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度20-25°C， 時間 20-24h ；(2)液體培養(yǎng)將固體培養(yǎng)得到的發(fā)光菌菌種接種到液體LB培養(yǎng)基中，在20-25°C下振 蕩培養(yǎng)16-24h ；(3)制備菌懸液取上述步驟(2)的含發(fā)光菌的液體培養(yǎng)基，進行離心分離，然后用無 菌生理鹽水進行懸浮，得OD值為0. 4-0. 9的菌懸液；(4)將待測水樣與菌懸液混合進行發(fā)光菌毒性試驗，測定待測水樣的發(fā)光菌抑制率。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述發(fā)光菌為青?；【?。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是發(fā)光菌毒性試驗的條件為菌懸液與待測水 樣的體積比為1:1，反應(yīng)時間為10-15min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是液體培養(yǎng)時發(fā)光菌的接種量滿足所得發(fā)光 菌的發(fā)光量在IO5-IO6的要求。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是步驟(3)中離心分離的轉(zhuǎn)速為3000-40001·/min0
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項所述的方法，其特征是步驟(1)的培養(yǎng)條件為溫度 22°C，時間Mh ；步驟(2)的培養(yǎng)條件為溫度22°C，時間22h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種采用發(fā)光菌毒性試驗準(zhǔn)確檢測水質(zhì)毒性的方法，包括將發(fā)光菌在LB固體培養(yǎng)基中進行固體培養(yǎng)，然后將得到的發(fā)光菌菌種接種到液體LB培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；取含發(fā)光菌的液體培養(yǎng)基，進行離心分離，然后用無菌生理鹽水進行懸浮，得OD值為0.4-0.9的菌懸液；將待測水樣與菌懸液混合進行發(fā)光菌毒性試驗，測定待測水樣的發(fā)光菌抑制率。本發(fā)明對發(fā)光菌進行了處理，使有機毒性物質(zhì)和無機毒性物質(zhì)均能夠抑制發(fā)光菌的發(fā)光強度，從而提高了采用發(fā)光菌毒性試驗檢測水質(zhì)毒性的準(zhǔn)確性，解決了發(fā)光菌不能正確反應(yīng)水質(zhì)綜合毒性的問題。本方法費時較少、靈敏度高、操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號C12Q1/18GK102071244SQ20101058082
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者孫韶華, 宋艷, 賈瑞寶, 馬中雨 申請人:濟南市供排水監(jiān)測中心