專利名稱：一種滸苔香菇多糖復(fù)合物及其制備方法以及其作為保健藥品的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海藻與食用菌中的生物活性成分，更具體地，涉及滸苔多糖與香菇多 糖組成的復(fù)合物、滸苔多糖和香菇多糖制備方法，以及用于提高人體免疫或者抑制腫瘤用 途的含有滸苔香菇多糖復(fù)合物的保健藥品。
背景技術(shù)：
多糖作為來自高等植物、動物和微生物細(xì)胞中的天然高分子化合物，是由多個單 糖分子縮合、失水而成的一類分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜且龐大的糖類物質(zhì)，是構(gòu)成生命的四大基本物 質(zhì)之一。多糖由于其重要的生理功能及廣泛的應(yīng)用被不斷挖掘，多糖作為藥物始于1943 年，目前人們已成功地從許多生物材料中提取出了多糖，這些多糖具有非常重要與特殊的 生理活性。滸苔(Enteromorpha)自古即為食用和藥用藻類，滸苔屬綠藻門石莼目石莼科 植物，長在潮間帶，在我國野生藻類中資源豐富，尤其在東南沿海一帶分布廣泛。香菇 (lentinus edodes)味道鮮美，是藥食兩用真菌。到目前為止，對單種多糖的研究與應(yīng)用已有不少報道，但都是以各自特有的藥效 發(fā)揮其各自的單一作用，而將多種生物材料提取的多糖尤其是對于滸苔多糖和香菇多糖進(jìn) 行復(fù)合的研究和應(yīng)用，通過檢索，目前尚無文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足，而提供一種將滸苔多糖和 香菇多糖進(jìn)行復(fù)合應(yīng)用，并使得的復(fù)合物的生物活性進(jìn)一步增強(qiáng)，起到增效的作用的滸苔 香菇多糖復(fù)合物。本發(fā)明的另一個目的是提供一種滸苔香菇多糖復(fù)合物的制備方法。本發(fā)明的另一個目的是提供能夠提高人體免疫能力且能有效抑制腫瘤的滸苔香 菇多糖復(fù)合物作為保健藥品的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是其由滸苔多糖和香菇多糖組 成。
進(jìn)一步設(shè)置是滸苔多糖，30 50% ； 香菇多糖，50 70%。進(jìn)一步設(shè)置是優(yōu)選該多糖復(fù)合物由下列重量百分比的組分混合而成滸苔多糖， 50% ；香菇多糖，50%。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第二個目的，其技術(shù)方案是分別制備滸苔多糖和香菇多糖，并將 滸苔多糖和香菇多糖進(jìn)行混合制的滸苔香菇多糖復(fù)合物，其中滸苔多糖的制備步驟包括以 下工序
(1)提取，滸苔樣品清洗后，風(fēng)干，切碎，以滸苔與水的質(zhì)量比為1 :15加入蒸餾水，90°C 提取2 h，過濾，濾渣重復(fù)提取三次。合并濾液，濃縮，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜置過夜，離心取沉淀得滸苔粗多糖；
(2)凍融，將滸苔粗多糖溶液，-20°C冷凍過夜，室溫緩慢融化，高速離心去除沉淀物；
(3)乙醇分級，在凍融后的滸苔粗多糖溶液中，加乙醇使其終濃度達(dá)50%，4°C過夜，離心 去除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心取沉淀；
(4)脫蛋白，將70%乙醇沉淀得到的多糖用蛋白酶去除蛋白，按酶與蛋白質(zhì)量比為1 200取蛋白酶加入至多糖溶液中，邊加邊攪拌，混合液裝入透析袋，l%NaCl做激活劑，37°C 保溫24 h。酶處理后的溶液，濃縮，透析，凍干，得滸苔多糖；
其中香菇多糖由以下過程制備
(1)提取，香菇子實(shí)體清洗后，風(fēng)干，粉碎，以香菇與水的質(zhì)量比為1:20加入蒸餾水， 95°C提取2 h，過濾，濾渣重復(fù)提取三次。合并濾液，濃縮，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜 置過夜，離心取沉淀得香菇粗多糖；
(2)乙醇分級純化，在香菇粗多糖溶液中，加乙醇使其終濃度達(dá)30%，4°C過夜，離心去除 沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心取沉淀得香菇多糖。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第三個目的，滸苔滸苔多糖復(fù)合物應(yīng)用于制備免疫增強(qiáng)保健產(chǎn)品 以及抗腫瘤輔助藥物。優(yōu)選地，該，滸苔滸苔多糖復(fù)合物以滸苔多糖占50% (重量)和香菇 多糖占50% (重量)混合而成進(jìn)行應(yīng)用。本發(fā)明采用現(xiàn)代科學(xué)方法，對所述的滸苔多糖和香菇多糖進(jìn)行分離、提純，并將它 們按一定的比例混合制備多糖復(fù)合物。所制得的多糖復(fù)合物安全無毒，原料易得，制備工藝 可靠，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。根據(jù)藥理、藥效學(xué)研究的結(jié)果表明，本發(fā)明所制得的滸苔香菇多糖復(fù)合物對提高 免疫具有明顯的作用，對抑制腫瘤也有一定的效果，可開發(fā)成免疫增強(qiáng)保健產(chǎn)品以及抗腫 瘤的輔助藥物。藥效試驗(yàn)結(jié)果
滸苔香菇多糖復(fù)合物由50%滸苔多糖和50%香菇多糖組成。A、滸苔香菇多糖復(fù)合物對小鼠S-180細(xì)胞肉瘤生長的影響結(jié)果
將復(fù)蘇的S-180細(xì)胞向小鼠腹腔內(nèi)注射傳代培養(yǎng)，0.3 mL/只。七天后，無菌吸取接 種了 S-180小鼠的腹水，用生理鹽水稀釋成IXlO7個/mL濃度的細(xì)胞懸液，0.2 mL/只 (2X106個細(xì)胞)接種于小鼠(18 22g)右前肢腋窩皮下。24 h后將小鼠隨即分成陰性對 照組、多糖組、陽性對照組，每組5只。將滸苔香菇多糖復(fù)合物樣品溶于生理鹽水，連續(xù)10 天進(jìn)行灌胃給藥(0. 2 ml/只)，陰性對照組每天用等量的生理鹽水灌胃，陽性對照組為環(huán)磷 酰胺。末次給藥的次日，將小鼠稱重，頸椎脫臼處死，剝離瘤塊，并按公式計算抑瘤率 抑瘤率(％)=(陰性對照組瘤重一治療組瘤重)/陰性對照組瘤重X 100% 剖取胸腺和脾臟，稱其重量，按下式計算脾指數(shù)和胸腺指數(shù) 脾指數(shù)SI =脾重/體重 胸腺指數(shù)TI =胸腺重/體重
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，與滸苔多糖單獨(dú)作用組相比，滸苔香菇多糖復(fù)合物的抗腫瘤活性明顯 增強(qiáng)，并且也呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。在低劑量(50mg/kg)給藥時，滸苔香菇多糖復(fù)合物能顯著 抑制S-180肉瘤的生長；當(dāng)給藥計量在100mg/kg時，抗腫瘤活性即達(dá)到極顯著水平。對給予滸苔香菇多糖復(fù)合物的S-180肉瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)測定結(jié)果顯示，滸苔香菇多糖復(fù)合物能夠恢復(fù)腫瘤小鼠的免疫功能。在低濃度給藥處理時，滸苔香菇多 糖復(fù)合物能夠顯著地增強(qiáng)脾指數(shù)，并且脾指數(shù)的增強(qiáng)能力與給藥劑量呈現(xiàn)正相關(guān)。與滸苔 多糖單獨(dú)給藥組相比，活性也明顯提高。對于TI的恢復(fù)能力，滸苔多糖單獨(dú)給藥組與滸苔 香菇多糖復(fù)合物給藥組在較低劑量即可將腫瘤小鼠的胸腺指數(shù)恢復(fù)到生理鹽水對照組的 水平，劑量增加對TI無顯著影響。 表1 滸苔香菇多糖復(fù)合物抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用
叩< 0.05, *叩< O 01 B、滸苔香菇多糖復(fù)合物對淋巴細(xì)胞增殖的影響結(jié)果
雄性ICR小鼠(18 22g)，每組5只。標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境飼養(yǎng)以適應(yīng)新環(huán)境。腹腔注射多糖(不 同劑量，0. 2ml/天)，對照組注射生理鹽水，連續(xù)給藥10天。于最后一次給藥次日頸椎脫臼 處死小鼠，75%酒精浸泡消毒2分鐘，無菌取脾臟，淋巴細(xì)胞分離液分離得到淋巴細(xì)胞，顯微 鏡計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度到5 X 106/ml，鋪96孔板，IOOul/孔。多糖組加入10%NBCS_RPMI_1640 完全培養(yǎng)基IOOul，ConA誘導(dǎo)組加入ConA (終濃度5 μ g/mL) IOOul，LPS誘導(dǎo)組加入LPS (終濃度10 μ g/mL) lOOul，各實(shí)驗(yàn)孔終體積200ul，均設(shè)3復(fù)孔。37°C、5%C02孵箱培養(yǎng)48 h。MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖活性。滸苔香菇多糖復(fù)合物體內(nèi)給藥對正常小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響結(jié)果(表2)顯示， 兩種多糖的協(xié)同作用能力優(yōu)于滸苔多糖的單獨(dú)作用能力，濃度關(guān)系與單獨(dú)給藥組一致。當(dāng) ConA和LPS分別作為T、B淋巴細(xì)胞的絲裂原存在下，滸苔香菇多糖復(fù)合物對T、B淋巴細(xì)胞 仍具有激活作用，也強(qiáng)于滸苔多糖單獨(dú)給藥組。表2 滸苔香菇多糖復(fù)合物對淋巴細(xì)胞增殖的作用
C、滸苔香菇多糖復(fù)合物對NK細(xì)胞毒活性的影響結(jié)果
以YAC-I (ATCC, Rochville, MD, USA)細(xì)胞作為檢測NK細(xì)胞毒活性的靶細(xì)胞。按 照效靶比例1 :50加96孔板，S卩脾細(xì)胞(1 X IO6/孔)、YAC-I細(xì)胞(5. OX IO4/孔)。 于C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)6小時之后。MTT法檢測NK細(xì)胞毒活性。細(xì)胞毒活性計算公式如下
η
(ODe :效應(yīng)細(xì)胞單獨(dú)給藥組吸光值；ODt 靶細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組吸光值；0D(e+t)效應(yīng)細(xì)胞 與靶細(xì)胞共培養(yǎng)組吸光值)
將滸苔香菇多糖復(fù)合物作用于正常小鼠體內(nèi)，檢測NK細(xì)胞對YAC-I細(xì)胞的毒性作用， 生理鹽水組、WEP組作為對照。與生理鹽水對照組相比(表3)，滸苔香菇多糖復(fù)合物具有增 強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞毒性的能力，且活性隨著濃度的增大而增強(qiáng)；與滸苔多糖單獨(dú)給藥組相比， 滸苔香菇多糖復(fù)合物的NK細(xì)胞毒活性亦有增強(qiáng)，在50mg/kg給藥濃度下的活性已強(qiáng)于滸苔 多糖單獨(dú)給藥濃度100mg/kg下的活性。
表3 滸苔香菇多糖復(fù)合物對NK細(xì)胞毒活性的影響
D、滸苔香菇多糖復(fù)合物對巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力、巨噬細(xì)胞毒活性、巨噬細(xì)胞分泌 NO及TNF-α的影響結(jié)果
將滸苔多糖與滸苔香菇多糖復(fù)合物分別作用于正常小鼠，頸椎脫臼處死體內(nèi)給藥小 鼠。D-Hanks清洗腹腔，將腹腔中液體收集入離心管中，4°C離心(lOOOrpm/min，10 min)，去 上清，用1640完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞濃度為2X 106個/ml，每孔100 μ 1加入96 孔板中，5 % C02、37 °C預(yù)孵4h后，用37°C預(yù)溫的PBS(pH=7.4)洗2-3遍，去除未貼壁細(xì)胞， 即獲得純化的巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞純化后，加入濃度為0. 075%中性紅溶液，每孔100 μ 1， 繼續(xù)培養(yǎng)1 h，用PBS (PH=7. 4)洗去剩余的中性紅后，加入100 μ 1的細(xì)胞裂解液(無水乙 醇0. lmol/L乙酸=1:1，v/v),24h后用酶標(biāo)儀檢測540nm吸光值。表4顯示，滸苔香菇多糖復(fù)合物對巨噬細(xì)胞的吞噬能力要強(qiáng)于滸苔多糖單獨(dú)給藥 組，作用的濃度關(guān)系與NK細(xì)胞毒活性相似。表4 滸苔香菇多糖復(fù)合物對巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力的影響
將按上述方法制得的腹腔巨噬細(xì)胞(1.0Χ105 /孔)，然后加入完全培養(yǎng)基或靶細(xì)胞 Β16淋巴瘤細(xì)胞(1.0X104/孔；效靶比為10:1)繼續(xù)培養(yǎng)16小時.最后用MTT法對細(xì)胞密度進(jìn)行檢測。細(xì)胞毒活性計算公式如下
(ODe :效應(yīng)細(xì)胞單獨(dú)給藥組吸光值；ODt 靶細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組吸光值；0D(e+t)效應(yīng)細(xì)胞 與靶細(xì)胞共培養(yǎng)組吸光值)
巨噬細(xì)胞毒活性結(jié)果(表5)顯示，滸苔香菇多糖的作用非常顯著，在低濃度下即能達(dá)到 極顯著水平，且各濃度給藥條件下都優(yōu)于滸苔多糖單獨(dú)給藥組。
表5 滸苔香菇多糖復(fù)合物對巨噬細(xì)胞毒活性的影響
Griess法測定巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的NO的水平。細(xì)胞以5 X IO5個/孔的濃度加入24孔板中。 培養(yǎng)48 h后，吸取細(xì)胞培養(yǎng)液上清(50 μ 1)加入另一96孔培養(yǎng)板中，并加入100 μ 1 Griess 試劑，30min后用酶標(biāo)儀檢測540nm處吸光值，根據(jù)NaN02溶液繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出NO 的產(chǎn)量。將腹腔巨噬細(xì)胞與待測樣品共培養(yǎng)，取上清液用ELISA試劑盒檢測TNF-α。巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的毒性作用大都是因?yàn)榫奘杉?xì)胞分泌的因子。從巨噬細(xì)胞分 泌NO (表6)及TNF- α (表7)的能力來看，TOP-WLDP的作用要顯著強(qiáng)于WEP單獨(dú)作用組。 上述結(jié)果與巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用結(jié)果一致。表6 滸苔香菇多糖復(fù)合物對巨噬細(xì)胞分泌NO能力的影響
*P< 0.05, _P< 0.01 下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明做進(jìn)一步介紹。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，只用于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不 能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定，該領(lǐng)域的技術(shù)工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對本發(fā)明 作出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。實(shí)施例1 滸苔多糖制備
滸苔樣品清洗后，風(fēng)干，切碎，取500g滸苔材料，加入7. 5L蒸餾水，90°C提取2 h，過濾， 濾渣重復(fù)提取三次。合并濾液，濃縮至500mL，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜置過夜，離心 (3000r/min)取沉淀得滸苔粗多糖。將2%的滸苔粗多糖溶液，_20°C冷凍過夜，室溫緩慢融 化，高速離心(7000r/min)去除沉淀物。將凍融后的滸苔多糖配成5%的溶液，加乙醇使其終濃度達(dá)50%，4°C過夜，離心 (3000r/min)去除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心(3000r/min)取沉淀。將70%乙醇沉淀得到的多糖用蛋白酶去除蛋白，按酶與蛋白質(zhì)量比為1 :200取蛋白酶 加入至多糖溶液中，邊加邊攪拌，混合液裝入透析袋，l%NaCl做激活劑，37°C保溫24 h。酶 處理后的溶液，濃縮至200mL，透析，冷凍干燥，得滸苔多糖23. 6g。實(shí)施例2 滸苔多糖制備
滸苔樣品清洗后，風(fēng)干，切碎，取5000g滸苔材料，加入75L蒸餾水，90°C提取2 h，過濾， 濾渣重復(fù)提取三次。合并濾液，濃縮至1. 5L，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜置過夜，離心 (3000r/min)取沉淀得滸苔粗多糖。將2%的滸苔粗多糖溶液，_20°C冷凍過夜，室溫緩慢融 化，高速離心(7000r/min)去除沉淀物。將凍融后的滸苔多糖配成5%的溶液，加乙醇使其終濃度達(dá)50%，4°C過夜，離心 (3000r/min)去除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心(3000r/min)取沉 淀。將70%乙醇沉淀得到的多糖用蛋白酶去除蛋白，按酶與蛋白質(zhì)量比為1 :200取蛋白酶 加入至多糖溶液中，邊加邊攪拌，混合液裝入透析袋，l%NaCl做激活劑，37°C保溫24 h。酶 處理后的溶液，濃縮至600mL，透析，凍干，得滸苔多糖272g。實(shí)施例3:香菇多糖制備
香菇子實(shí)體清洗后，風(fēng)干，粉碎，取200g香菇與加入4L蒸餾水，95°C提取2 h，過濾，濾 渣重復(fù)提取三次。合并濾液，濃縮至500mL，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜置過夜，離心 (3000r/min)取沉淀得香菇粗多糖。配制10%的香菇粗多糖溶液中，加乙醇使其終濃度達(dá) 30%, 4°C過夜，離心(3000r/min)去除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心 (3000r/min)取沉淀，冷凍干燥，得香菇多糖20. 8g。實(shí)施例4 香菇多糖制備
香菇子實(shí)體清洗后，風(fēng)干，粉碎，取5000g香菇與加入100L蒸餾水，95°C提取2 h，過濾， 濾渣重復(fù)提取三次。合并濾液，濃縮至2000mL，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜置過夜，離 心(3000r/min)取沉淀得香菇粗多糖。配制10%的香菇粗多糖溶液中，加乙醇使其終濃度 達(dá)30%，4°C過夜，離心(3000r/min)去除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離 心(3000r/min)取沉淀，冷凍干燥，得香菇多糖537g。
權(quán)利要求
一種滸苔香菇多糖復(fù)合物，其特征在于其由滸苔多糖和香菇多糖組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滸苔香菇多糖復(fù)合物，其特征在于滸苔多糖，30 50% ； 香菇多糖，50 70%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種滸苔香菇多糖復(fù)合物，其特征在于其組分按以下重量 百分比混合而成，滸苔多糖 50%香菇多糖 50%。
4.一種制備權(quán)利要求1中的滸苔香菇多糖復(fù)合物的制備方法，其特征在于分別制備滸 苔多糖和香菇多糖，并將滸苔多糖和香菇多糖進(jìn)行混合制的滸苔香菇多糖復(fù)合物，其中滸苔多糖的制備步驟包括以下工序(1)提取，滸苔清洗后，風(fēng)干，切碎，以滸苔與水的質(zhì)量比為1 :15加入蒸餾水，90°C提 取2 h，過濾，濾渣重復(fù)提取三次，合并濾液，濃縮，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜置過夜， 離心取沉淀得滸苔粗多糖；(2)凍融，將滸苔粗多糖溶液，零下20°C冷凍過夜，室溫緩慢融化，高速離心去除沉淀物；(3)乙醇分級，在凍融后的滸苔粗多糖溶液中，加乙醇使其終濃度達(dá)50%，4°C過夜，離心 去除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心取沉淀；(4)脫蛋白，將70%乙醇沉淀得到的多糖用蛋白酶去除蛋白，按酶與蛋白質(zhì)量比 為1 :200取蛋白酶加入至多糖溶液中，邊加邊攪拌，混合液裝入透析袋，l%NaCl做激活劑， 37°C保溫24 h ；酶處理后的溶液，濃縮，透析，凍干，得滸苔多糖； 其中香菇多糖制備步驟包括以下工序(1)提取，香菇子實(shí)體清洗后，風(fēng)干，粉碎，以香菇與水的質(zhì)量比為1:20加入蒸餾水， 95°C提取2 h，過濾，濾渣重復(fù)提取三次；合并濾液，濃縮，加入3倍體積的95%乙醇，4°C靜 置過夜，離心取沉淀得香菇粗多糖；(2)乙醇分級純化，在香菇粗多糖溶液中，加乙醇使其終濃度達(dá)30%，4°C過夜，離心去 除沉淀，上清繼續(xù)加乙醇使其濃度達(dá)70%，4°C過夜，離心取沉淀得香菇多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的滸苔香菇多糖復(fù)合物的制備方法，其特征在于所述的滸苔 多糖和香菇多糖按各自50%質(zhì)量比混合。
6.一種如權(quán)利要求1所述的滸苔滸苔多糖復(fù)合物作為保健藥品的應(yīng)用，其特征在于 滸苔滸苔多糖復(fù)合物應(yīng)用于制備免疫增強(qiáng)保健產(chǎn)品以及抗腫瘤輔助藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種滸苔滸苔多糖復(fù)合物作為保健藥品的應(yīng)用，其特征在 于所述的滸苔多糖和香菇多糖按以下質(zhì)量比混合而成，滸苔多糖50% 香菇多糖 50%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種滸苔香菇多糖復(fù)合物及其制備方法以及其作為保健藥品的應(yīng)用，本發(fā)明的滸苔香菇多糖復(fù)合物由滸苔多糖和香菇多糖組成。本發(fā)明采用現(xiàn)代科學(xué)方法，對所述的滸苔多糖和香菇多糖進(jìn)行分離、提純，并將它們按一定的比例混合制備多糖復(fù)合物。所制得的多糖復(fù)合物安全無毒，原料易得，制備工藝可靠，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
文檔編號A23L1/09GK101919875SQ20101026082
公開日2010年12月22日 申請日期2010年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月24日
發(fā)明者于萍, 吳明江, 廖志勇, 李楠, 楊海龍 申請人:溫州大學(xué)