專(zhuān)利名稱(chēng)：基于生物條碼的核酸納米金生物傳感器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于生物條碼的核酸納米金生物傳感器制備方法。
背景技術(shù)：
自從PCR方法產(chǎn)生，傳統(tǒng)的基因檢測(cè)技術(shù)如Northern雜交法、Southern雜交法等逐漸被其取代，它對(duì)醫(yī)學(xué)診斷系統(tǒng)產(chǎn)生了革命性的突破。但是PCR除了對(duì)靶核酸擴(kuò)增過(guò)程復(fù)雜耗時(shí)外，對(duì)擴(kuò)增后核酸的定量方法也較狹窄，雖然后期發(fā)展的熒光定量PCR能很好的解決靶核酸的定量問(wèn)題，但是它通常需要昂貴的試劑及儀器，而且要求專(zhuān)業(yè)技術(shù)的人員進(jìn)行，而且容易污染，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。近年來(lái)出現(xiàn)的生物條碼技術(shù)以DNA堿基嚴(yán)格互補(bǔ)配對(duì)的特性為原理，通過(guò)生物條碼將對(duì)低豐度靶核酸的檢測(cè)轉(zhuǎn)換到按比例擴(kuò)增后的條碼核酸上，從而越過(guò)了核酸擴(kuò)增過(guò)程，而且通過(guò)納米技術(shù)，將DNA結(jié)合到納米金顆粒上構(gòu)成納米顆?；蛱结?，通過(guò)與條碼核酸之間的互補(bǔ)實(shí)現(xiàn)納米顆粒的組裝進(jìn)一步放大生物信號(hào)，使其具有與傳統(tǒng)PCR相當(dāng)?shù)撵`敏度，而且由于不需要核酸擴(kuò)展，避免了一些貴重儀器的使用，最后檢測(cè)結(jié)果可以通過(guò)目測(cè)而達(dá)到，整個(gè)過(guò)程操作簡(jiǎn)便，不依靠任何儀器和專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員，在很短時(shí)間內(nèi)就能完成檢測(cè)， 非常適合做基層檢測(cè)及大規(guī)模流行病學(xué)篩查。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種用于基于生物條碼檢測(cè)核酸的高靈敏度納米金生物傳感器，通過(guò)微孔板和納米金上的探針與靶核酸形成DNA夾心，將納米金上的條碼核酸固定與孔上，再通過(guò)DTT釋放生物條碼實(shí)現(xiàn)檢測(cè)信號(hào)的轉(zhuǎn)換與放大，然后通過(guò)核酸納米金生物傳感器檢測(cè)條碼信號(hào)而測(cè)定靶核酸濃度。本發(fā)明所述的一種基于生物條碼的核酸納米金生物傳感器，其包括用于富集、轉(zhuǎn)換并放大靶核酸信號(hào)的核酸放大裝置；用于測(cè)定靶核酸濃度的核酸檢測(cè)裝置；以及液體試劑；所述核酸放大裝置包括微孔板，其上固定有第一寡核苷酸探針；以及納米金顆粒，其上偶聯(lián)有第二寡核苷酸探針和條碼寡核苷酸；所述第一寡核苷酸探針與第二寡核苷酸探針?lè)謩e與靶核酸的兩端序列互補(bǔ)，以致通過(guò)第一寡核苷酸探針-靶核酸-第二寡核苷酸探針的核酸夾心方式將納米金顆粒固定在所述微孔板上，再通過(guò)洗滌去除未與微孔板結(jié)合的納米金顆粒，用二硫蘇糖醇釋放出偶聯(lián)在納米金顆粒上的條碼寡核苷酸；所述核酸檢測(cè)裝置包括從左到右依次固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述玻璃纖維上涂有納米金標(biāo)記第三寡核苷酸探針，該第三寡核苷酸探針是由巰基修飾并與膠體金偶聯(lián)形成的，該第三寡核苷酸探針包含與條碼寡核苷酸一端互補(bǔ)的核苷酸序列；所述硝酸纖維素膜上固定有兩種寡核苷酸探針，為第四寡核苷酸探針和第五寡核苷酸探針，這些寡核苷酸探針是用生物素標(biāo)記并與鏈霉親和素偶聯(lián)形成的；其中， 固定于靠近吸水紙一端的第四寡核苷酸探針形成質(zhì)控線(xiàn)，第四寡核苷酸探針與第三寡核苷酸探針互補(bǔ)；固定于靠近玻璃纖維一端的寡核苷酸探針第五寡核苷酸探針形成檢測(cè)線(xiàn)，該第五寡核苷酸探針與條碼寡核苷酸的另一端互補(bǔ)；所述液體試劑包括用于裂解樣品釋放核酸的裂解緩沖液，其成分為100mM Tris-HCl, pH 7. 5、500mM LiClUOmM EDTAU% [w/v]十二烷基硫酸鋰、5mM 二硫蘇糖醇、IOU RNase抑制劑；用于洗去微孔中未結(jié)合納米金的洗滌液，其成分為0. 15M NaCUO. OlM磷酸緩沖液、0. 1% SDS, pH 7. 4 ；以及用于釋放結(jié)合在納米金上條碼核酸的轉(zhuǎn)換液，包括0. IM DTT,0. 15麗aCl、0. OlM 磷酸緩沖液、0. 1% SDS, pH 7. 4。根據(jù)本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器的進(jìn)一步特征，在所述核酸放大裝置中，所述微孔板體積為lOO-lOOOmm3，板底包被第一寡核苷酸探針。根據(jù)本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器的進(jìn)一步特征，在所述核酸放大裝置中，所述寡核苷酸標(biāo)記的納米金顆粒的粒徑在20-200nm之間。根據(jù)本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器的進(jìn)一步特征，在所述核酸放大裝置中，所述與靶核酸一端互補(bǔ)的第一寡核苷酸探針的長(zhǎng)度為15-30nt，與靶核酸另一端互補(bǔ)的條碼寡核苷酸的長(zhǎng)度為20-40nt，兩種核酸均在一端進(jìn)行-SH修飾，第一寡核苷酸探針與條碼寡核苷酸的濃度比例從1 50到1 200。根據(jù)本發(fā)明所述的檢測(cè)條碼寡核苷酸的核酸納米金生物傳感器的進(jìn)一步特征，在所述核酸檢測(cè)裝置中，所述質(zhì)控線(xiàn)與檢測(cè)線(xiàn)相距3-10mm。根據(jù)本發(fā)明所述的檢測(cè)條碼寡核苷酸的核酸納米金生物傳感器的進(jìn)一步特征，在所述核酸檢測(cè)裝置中，所述固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙的相鄰部分彼此重疊l_5mm。根據(jù)本發(fā)明所述的檢測(cè)條碼寡核苷酸的核酸納米金生物傳感器的進(jìn)一步特征，在所述核酸檢測(cè)裝置中，所述膠體金的粒徑為8-lOOnm。本發(fā)明的技術(shù)原理是包被在微孔板上的探針1與包被在納米金上的探針2通過(guò)與靶核酸的兩端互補(bǔ)而將連接有標(biāo)簽核酸的納米金結(jié)合在孔上，通過(guò)洗滌除去為結(jié)合的金顆粒，接著用DTT將連接在其上的條碼核酸釋放出來(lái)，成為游離的單鏈核酸。然后將孔中混合液加入核酸檢測(cè)系統(tǒng)，由于毛細(xì)作用，條碼核酸隨樣品液一起向前運(yùn)動(dòng)，到達(dá)檢測(cè)線(xiàn)時(shí)納米金顆粒上結(jié)合的探針3與檢測(cè)線(xiàn)上結(jié)合的探針5通過(guò)與標(biāo)簽核酸兩端互補(bǔ)而聚集金顆粒形成檢測(cè)線(xiàn)，未聚集的金顆粒繼續(xù)向前移動(dòng)，到達(dá)質(zhì)控線(xiàn)處和與條碼核酸互補(bǔ)的探針4結(jié)合而形成質(zhì)控線(xiàn)。如果樣品中沒(méi)有相應(yīng)的靶核酸時(shí)，檢測(cè)區(qū)域不出現(xiàn)紅線(xiàn)，而質(zhì)控線(xiàn)上出現(xiàn)紅線(xiàn)。因此，質(zhì)控線(xiàn)出現(xiàn)紅色線(xiàn)說(shuō)明試紙條可用，而檢測(cè)線(xiàn)出現(xiàn)與否是樣品陰性和陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明所述基于生物條碼的核酸納米金生物傳感器具有很高靈敏度，而且制備簡(jiǎn)便、檢測(cè)迅速，不需要專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員及昂貴的儀器設(shè)備，適合大批量檢測(cè)，適用于基層，對(duì)低濃度的靶核酸能起到很好的快速診斷作用。本方法的檢測(cè)的靈敏度很高，已達(dá)到PCR的水平，而且從上樣到最后結(jié)果的出現(xiàn)只要1個(gè)小時(shí)左右，比常規(guī)PCR要快1小時(shí)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器的第一個(gè)實(shí)施例的制備方法如下1.微孔板的包被用去離子水溶解IOD生物素標(biāo)記的DNA-探針1為100 μ M，探針鏈和親霉素按1 1的比例混合，室溫下反應(yīng)1小時(shí)后，用PBS稀釋到ΙΟηΜ，包被96孔板，37°C孵育兩個(gè)小時(shí)，PBST洗滌3次后37°C烘干2小時(shí)，4°C保存。2.納米金(膠體金)的制備在500ml的圓底燒瓶中加入IOOml 0. 01%的HAuC14溶液，磁力攪拌加熱至沸騰； 然后向上述溶液中加入anl 枸櫞酸鈉，溶液變?yōu)榫萍t色后，繼續(xù)煮沸l(wèi)Omin，停止加熱繼續(xù)攪拌15min ；膠體金溶液4°C避光保存，納米金通過(guò)520nm最大吸光度值鑒定。3.金標(biāo)核酸的制備(1)探針微球的制備用100 μ 1去離子水溶解IOD編碼核酸和探針2，編碼核酸 探針2按1 100摩爾比混合，100 μ 1混合溶液加入到5倍體積濃縮的膠體金GOnm)溶液中，低速振蕩，4°C過(guò)夜；1 %的牛血清白蛋白封閉30分鐘后，加入Na3P04和1 %的SDS，分別至終濃度0. OlM和0. 01 %，在其后3天逐漸將NaCl濃度提高到0. 15M ；8500轉(zhuǎn)/分鐘離心 25分鐘，棄上清，沉淀用洗滌液(0. 15M NaCl,0. OlM sodium phosphate,0. l%SDS,pH 7.4) 洗4遍后用100μ 1含20mM Na3P04,l% BSA,0. 25% Tween，和10%蔗糖重新懸浮，制成懸浮液。(2)檢測(cè)條碼核酸膠體金的制備用100 μ 1去離子水溶解10D探針3，加入到Iml 5倍體積濃縮的膠體金OOnm)溶液中，振蕩均勻后4°C M小時(shí)；10%的牛血清白蛋白封閉 30分鐘后，加入NaCl和1 %的SDS,分別至終濃度0. IM和0. 01 %，4°C過(guò)夜，8500轉(zhuǎn)/分鐘離心 25 分鐘，棄上清，沉淀用 100μ1 含 20mM Na3P04,5% BSA,0. 25% Tween,^P 10%蔗糖重新懸浮，制成懸浮液。4.樣品墊的處理玻璃纖維浸泡0. 25% TritonX-100,0. 05M Tris-HCUO. 15M 氯化鈉溶液后，37°C 烘干備用。5.金標(biāo)墊的制備將本發(fā)明制備的金標(biāo)第三寡核苷酸探針涂于玻璃纖維上，37°C干燥2個(gè)小時(shí)，制成金標(biāo)墊，備用。6.生物素標(biāo)記探針與鏈霉親和素的偶聯(lián)及偶聯(lián)物的固定用10 μ 1濃度為100 μ M生物素標(biāo)記的DNA-探針5，加入5 μ 1 (2mg/ml)鏈和親霉素，室溫下反應(yīng)1小時(shí)后，采用劃膜噴金儀涂于硝酸纖維素膜檢測(cè)線(xiàn)上，37°C干燥兩個(gè)小時(shí)。DNA-探針4采用同樣方法固定于質(zhì)控線(xiàn)上。7.膠體金試紙條的組裝將固定有寡核苷酸探針的硝酸纖維素膜、吸水紙、涂有納米微粒標(biāo)記寡核苷酸探針的玻璃纖維、樣品墊依次固定于膠板上，相鄰部分彼此重疊2mm，經(jīng)切割成寬4mm后即得到本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器。將本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器用于甲型流感病毒樣品的檢測(cè)方法，包括以下步驟1.靶核酸的提取1)取適量的樣品于微孔中。2)加入250 μ 1的裂解緩沖液，反復(fù)震蕩吹吸后加入50 μ 1探針微球，輕微震蕩 30s，室溫孵育5-10min。3)倒扣微孔，棄去上清，加入300 μ 1洗滌液，輕微振蕩混勻10s，吸棄上清，重復(fù)兩次。4)加入100 μ 1轉(zhuǎn)換液，輕微振蕩混勻后室溫孵育20-40min。2.標(biāo)簽核酸的檢測(cè)取上述微孔中混合液，滴加至核酸納米金生物傳感器加樣孔上，5min內(nèi)觀(guān)察結(jié)果。質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)(I)C線(xiàn)(質(zhì)控線(xiàn))出現(xiàn)紅色的線(xiàn)證明納米金生物傳感器有效。線(xiàn)(檢測(cè)線(xiàn))出現(xiàn)紅色的線(xiàn)與否，是陽(yáng)性陰性判別的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)(I)C線(xiàn)出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，同時(shí)T線(xiàn)出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，說(shuō)明被檢樣品為陽(yáng)性；(2) C線(xiàn)出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，同時(shí)T線(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，說(shuō)明被檢樣品為陰性；(2) C線(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，說(shuō)明納米金生物傳感器失效。實(shí)施例二 本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器的第二個(gè)實(shí)施例的制備方法如下1.微孔板的包被用100 μ 1濃度為3ηΜ的鏈和親霉素包板，室溫下反應(yīng)2小時(shí)， PBST洗滌3次后加入100 μ 1濃度為IOnM生物素標(biāo)記的DNA-探針1，室溫反應(yīng)30min，PBST 洗滌3次后37°C烘干2小時(shí)，4°C保存。2.納米金(膠體金)的制備在500mL的圓底燒瓶中加入IOOml 0. 01%的HAuC14溶液，磁力攪拌加熱至沸騰； 然后向上述溶液中加入anl 枸櫞酸鈉，溶液變?yōu)榫萍t色后，繼續(xù)煮沸l(wèi)Omin，停止加熱繼續(xù)攪拌15min ；膠體金溶液4°C避光保存，納米金通過(guò)520nm最大吸光度值鑒定。3.金標(biāo)核酸的制備(1)探針微球的制備用100 μ 1去離子水溶解IOD編碼核酸和探針2，編碼核酸探針2按1 100摩爾比混合，50 μ 1混合溶液加入到500 μ 1 5倍體積濃縮的膠體金GOnm)溶液中，低速振蕩4°C過(guò)夜；用1 %的牛血清白蛋白封閉30分鐘后，加入NaCl， Na3P04和的SDS，分別至終濃度0. 15M，0. OlM和0. 01%，4°C過(guò)夜；8500轉(zhuǎn)/分鐘離心 25 分鐘，棄上清，沉淀用洗滌液(0. 15MNaCl,0. OlM sodium phosphate,0. 1% SDS，pH 7.4) 洗 4 遍后用 100μ 1 含 20mMNa3P04，BSA，0. 25% Twee 糖重懸。(2)檢測(cè)標(biāo)簽核酸膠體金的制備用100 μ 1去離子水溶解10D —定比例-SH化的編碼核酸和探針2，加入到5倍體積濃縮的膠體金OOnm)溶液中，4°C 24小時(shí)；10%的牛血清白蛋白封閉30分鐘后，加入NaCl和的SDS，分別至終濃度0. IM和0. 01%，4°C過(guò)夜，8500轉(zhuǎn)/分鐘離心25分鐘，棄上清，沉淀用100μ1含20mM Na3P04，1 % BSA和0. 25%
7Tween重懸。4.樣品墊的處理玻璃纖維浸泡0. 25% TritonX-100,0. 05M Tris-HCl.O. 15M NaCl 溶液后，37°C烘干備用。5.金標(biāo)墊的制備將本發(fā)明制備的金標(biāo)第三寡核苷酸探針涂于玻璃纖維上，室溫干燥2個(gè)小時(shí)，制成金標(biāo)墊，備用。6.生物素標(biāo)記探針與鏈霉親和素的偶聯(lián)及偶聯(lián)物的固定用去離子水溶解IOD生物素標(biāo)記的DNA-探針5，加入等摩爾比的鏈和親霉素，室溫下反應(yīng)1小時(shí)后，采用劃膜噴金儀涂于硝酸纖維素膜檢測(cè)線(xiàn)上，37°C干燥兩個(gè)小時(shí)。DNA-探針4采用同樣方法固定于質(zhì)控線(xiàn)上。7.膠體金試紙條的組裝將固定有寡核苷酸探針的硝酸纖維素膜、吸水紙、涂有納米微粒標(biāo)記寡核苷酸探針的玻璃纖維、樣品墊依次固定于膠板上，相鄰部分彼此重疊2mm，經(jīng)切割成寬4mm后即得到本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器。將本發(fā)明所述的核酸納米金生物傳感器用于甲型流感病毒樣品的檢測(cè)方法，包括以下步驟1.靶核酸的提取1)取適量的樣品于微孔中。2)加入250 μ 1的裂解緩沖液，反復(fù)震蕩吹吸后加入50 μ 1探針微球，輕微震蕩 30s，室溫孵育5-10min。3)倒扣微孔，棄去上清，加入300 μ 1洗滌液，輕微振蕩混勻10s，吸棄上清，重復(fù)兩次。4)加入100 μ 1轉(zhuǎn)換液，輕微振蕩混勻后室溫孵育20-40min。2.標(biāo)簽核酸的檢測(cè)取上述微孔中混合液，滴加至核酸納米金生物傳感器加樣孔上，5min內(nèi)觀(guān)察結(jié)果。質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)(I)C線(xiàn)(質(zhì)控線(xiàn))出現(xiàn)紅色的線(xiàn)證明納米金生物傳感器有效。線(xiàn)(檢測(cè)線(xiàn))出現(xiàn)紅色的線(xiàn)與否，是陽(yáng)性陰性判別的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)(I)C線(xiàn)出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，同時(shí)T線(xiàn)出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，說(shuō)明被檢樣品為陽(yáng)性；(2) C線(xiàn)出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，同時(shí)T線(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，說(shuō)明被檢樣品為陰性；(2) C線(xiàn)沒(méi)有出現(xiàn)紅色的線(xiàn)，說(shuō)明納米金生物傳感器失效。
權(quán)利要求
1.一種基于生物條碼的核酸納米金生物傳感器，其特征在于，其包括 用于富集、轉(zhuǎn)換并放大靶核酸信號(hào)的核酸放大裝置；用于測(cè)定靶核酸濃度的核酸檢測(cè)裝置；以及液體試劑；所述核酸放大裝置包括 微孔板，其上固定有第一寡核苷酸探針；以及納米金顆粒，其上偶聯(lián)有第二寡核苷酸探針和條碼寡核苷酸； 其中，所述第一寡核苷酸探針與第二寡核苷酸探針?lè)謩e與靶核酸的兩端序列互補(bǔ)，以致通過(guò)第一寡核苷酸探針-靶核酸-第二寡核苷酸探針的核酸夾心方式將納米金顆粒固定在所述微孔板上，再通過(guò)洗滌去除未與微孔板結(jié)合的納米金顆粒，用二硫蘇糖醇釋放出偶聯(lián)在納米金顆粒上的條碼寡核苷酸；所述核酸檢測(cè)裝置包括從左到右依次固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙；所述玻璃纖維上涂有納米金標(biāo)記第三寡核苷酸探針，該第三寡核苷酸探針是由巰基修飾并與膠體金偶聯(lián)形成的，該第三寡核苷酸探針包含與條碼寡核苷酸一端互補(bǔ)的核苷酸序列；所述硝酸纖維素膜上固定有兩種寡核苷酸探針，為第四寡核苷酸探針和第五寡核苷酸探針，這些寡核苷酸探針是用生物素標(biāo)記并與鏈霉親和素偶聯(lián)形成的；其中，固定于靠近吸水紙一端的第四寡核苷酸探針形成質(zhì)控線(xiàn)，第四寡核苷酸探針與第三寡核苷酸探針互補(bǔ)； 固定于靠近玻璃纖維一端的寡核苷酸探針第五寡核苷酸探針形成檢測(cè)線(xiàn)，該第五寡核苷酸探針與條碼寡核苷酸的另一端互補(bǔ)； 所述液體試劑包括用于裂解樣品釋放核酸的裂解緩沖液，其成分為100mM Tris-HCl, pH 7. 5、500mM LiClUOmM EDTAU % [w/v]十二烷基硫酸鋰、5mM 二硫蘇糖醇、IOU RNase抑制劑；用于洗去微孔中未結(jié)合納米金的洗滌液，其成分為0. 15M NaCl、0.01M磷酸緩沖液、 0. 1% SDS, pH 7. 4 ；以及用于釋放結(jié)合在納米金上條碼核酸的轉(zhuǎn)換液，包括0. IM DTT,0. 15MNaCl、0. OlM磷酸緩沖液、0. 1% SDS, pH 7. 4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸納米金生物傳感器，其特征在于在所述核酸放大裝置中，所述微孔板體積為lOO-lOOOmm3，板底包被第一寡核苷酸探針。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸納米金生物傳感器，其特征在于在所述核酸放大裝置中，所述寡核苷酸標(biāo)記的納米金顆粒的粒徑在20-200nm之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸納米金生物傳感器，其特征在于在所述核酸放大裝置中，所述與靶核酸一端互補(bǔ)的第一寡核苷酸探針的長(zhǎng)度為15-30nt，與靶核酸另一端互補(bǔ)的條碼寡核苷酸的長(zhǎng)度為20-40nt，兩種核酸均在一端進(jìn)行-SH修飾，第一寡核苷酸探針與條碼寡核苷酸的濃度比例從1 50到1 200。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)條碼寡核苷酸的核酸納米金生物傳感器，其特征在于 在所述核酸檢測(cè)裝置中，所述質(zhì)控線(xiàn)與檢測(cè)線(xiàn)相距3-10mm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)條碼寡核苷酸的核酸納米金生物傳感器，其特征在于在所述核酸檢測(cè)裝置中，所述固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙的相鄰部分彼此重疊l_5mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)條碼寡核苷酸的核酸納米金生物傳感器，其特征在于 在所述核酸檢測(cè)裝置中，所述膠體金的粒徑為8-lOOnm。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于基于生物條碼檢測(cè)核酸的高靈敏度納米金生物傳感器。它主要通過(guò)靶核酸富集和生物條碼轉(zhuǎn)換實(shí)現(xiàn)靶核酸的信號(hào)并放大，然后通過(guò)檢測(cè)條碼信號(hào)而測(cè)定靶核酸濃度。它包括兩個(gè)系統(tǒng)1.固定了第一寡核苷酸探針的微孔板和兩種寡核苷酸標(biāo)記的納米金的放大系統(tǒng)，最終釋放出條碼核酸。2.用于檢測(cè)條碼寡核苷酸的檢測(cè)系統(tǒng)，包括從左到右依次固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙。本發(fā)明由于使用生物條碼擴(kuò)大了檢測(cè)信號(hào)，使其具有很高靈敏度，而且制備簡(jiǎn)便、檢測(cè)迅速，不需要專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員及昂貴的儀器設(shè)備，適合大批量快速篩查，適用于基層，對(duì)低濃度的靶核酸能起到很好的快速診斷作用。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102234682SQ20101015707
公開(kāi)日2011年11月9日 申請(qǐng)日期2010年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月20日
發(fā)明者方志遠(yuǎn), 曾令文 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院