專利名稱：：一種乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及一種乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基及其制備方法，屬于食品微生物
技術(shù)領域：
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背景技術(shù)：
：乳酸桿菌為乳品工業(yè)微生物中重要的菌種資源之一，具有良好的發(fā)酵特性以及改善或調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的平衡、增強機體免疫力、降低膽固醇水平、緩解乳糖不耐癥以及抑制腫瘤細胞形成等功效。在食品向天然型、功能型發(fā)展的今天，乳酸菌制品正越來越受到人們的重視。發(fā)酵乳制品是乳酸桿菌的天然載體，已被廣大消費者所認知。發(fā)酵制品的品質(zhì)取決于發(fā)酵劑，優(yōu)良的發(fā)酵劑不僅需要菌體自身的發(fā)酵特性和生理功效，同時也需要較高的活菌體濃度。由此，菌體的增殖培養(yǎng)成為制備優(yōu)良發(fā)酵劑的關(guān)鍵因素之一。現(xiàn)階段乳酸桿菌相應的增殖培養(yǎng)基多以番茄汁、胡蘿卜汁等植物汁為主要成分，沒有相應的質(zhì)量標準，致使產(chǎn)品質(zhì)量無法控制與監(jiān)管，造成質(zhì)量不一，因此不利于大工業(yè)生產(chǎn)。培養(yǎng)時間基本為12-18小時，菌體濃度為lxl09cfu/ml左右。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種成本低、安全、且適于乳酸桿菌快速增殖的培養(yǎng)基及制備方法。本發(fā)明提供了一種乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基，包括培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B，其中，以重量比計，所述培養(yǎng)基A包括脫脂乳粉5%-12%、全脂乳粉3%-10%、乳糖1%-4%、水50%-80%;所述培養(yǎng)基B包括酵母浸粉0.4%-2%、抗壞血酸鈉0.02%-0.5%、0.1%-1%的吐溫80、脯氨酸0.02%-0.5%、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.002X-0.05X、甲酸30mg/Kg-150mg/Kg、蛋白胨0.5%-3%、牛肉膏0.5%-3%，水5%-30%。本發(fā)明還提供了一種制備上述的乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基的方法，包括將培養(yǎng)基和B各組分分別溶于水中，分別滅菌，冷卻后將所述培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B在無菌條件下混合均勻。培養(yǎng)基A部分為乳基質(zhì)，培養(yǎng)基B部分為非乳基質(zhì)，將培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別滅菌可以防止高溫條件下物質(zhì)的相互反應。本發(fā)明中，所述所述滅菌條件為110-121°C、15-30分鐘。上述冷卻為降溫至55-30'C以下。上述方法進一步還包括將乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基冷藏儲存，儲存溫度為4'C以下。本發(fā)明的培養(yǎng)基采用脫脂乳粉和全脂乳粉，利用它們?nèi)橹镜膮^(qū)別，來平衡碳氮比。如果只用全脂乳粉培養(yǎng)，菌體不好分離收集，而單純采用脫脂乳，這樣培養(yǎng)效果不好，菌體濃度低。一般的培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體的濃度只能達到109cfu/ml，而采用本發(fā)明的培養(yǎng)基來培養(yǎng)乳酸桿菌，培養(yǎng)4-6h后菌體濃度達到6X10^cfu/ml左右。本發(fā)明的培養(yǎng)基為一種低成本、安全且適于乳酸桿菌快速增殖的培養(yǎng)基，進而能夠滿足乳酸桿菌工業(yè)化的大量應用，同時也降低其產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。此外、本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸桿菌，在菌體濃度和培養(yǎng)時間方面均優(yōu)于現(xiàn)有培養(yǎng)基質(zhì)，而且培養(yǎng)基的各組分均有相應的國家標準、行業(yè)標準或者其他相應質(zhì)量標準，進而可以控制原料的質(zhì)量，因此其更利于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施方案對本發(fā)明的方法做更詳細的說明。本領域技術(shù)人員應當理解，下述實施例均用于對本發(fā)明所要求保護的范圍進行實例性的描述，以此概括本發(fā)明的各參數(shù)的相對范圍，因而不能將之理解為對本發(fā)明的一種具體限制。實施例ll.乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基的配方，見表l:4表1培養(yǎng)基配方<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2.制備300g乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基，采用以下步驟1)按照上述的重量比例，將上述培養(yǎng)基A和B的組分分別溶解于蒸餾水中；2)將培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別混合均勻；3)將培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別滅菌110-121°C、15-30分鐘；4)將培養(yǎng)基分別冷卻至55-30°C以下；5)在無菌條件下將培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B混合均勻，制成乳酸桿菌增殖i肯養(yǎng)基。6)制備好的乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基儲藏于4"C以下備用。實施例2采用表1中的培養(yǎng)基1的配方制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)德氏保加利亞乳桿菌亞種，用于增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)方法接菌量5%，200rpm，42。C條件下培養(yǎng)，以15%(W/V)氫氧化鈉堿液控制發(fā)酵液pH值5.5。發(fā)酵6個小時后，結(jié)束發(fā)酵，乳酸桿菌的菌體濃度為6.2xl(Fcfu/ml。實施例3采用表1中的培養(yǎng)基2的配方制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)德氏保加利亞乳桿菌亞種，用于增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)方法接菌量5%，200rpm，42'C條件下培養(yǎng)，以15%(W/V)氫氧化鈉堿液控制發(fā)酵液pH值5.5發(fā)酵6個小時后，結(jié)束發(fā)酵，乳酸桿菌的菌體濃度為5.9xl01Qcfu/ml。實施例4采用表1中的培養(yǎng)基3的配方制備培養(yǎng)基，培養(yǎng)德氏保加利亞乳桿菌亞種，用于增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)方法接菌量5%，200rpm，42"C條件下培養(yǎng)，以15%(W/V)氫氧化鈉堿液控制發(fā)酵液pH值5.5發(fā)酵6個小時后，結(jié)束發(fā)酵，乳酸桿菌的菌體濃度為5.7xl01Qcfu/ml。一般的培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體的濃度只能達到109cfu/ml，而采用本發(fā)明的培養(yǎng)基來培養(yǎng)乳酸桿菌，培養(yǎng)4-6h后菌體濃度達到6Xl(^cfu/ml左右，培養(yǎng)時間短、菌體濃度高。同時本發(fā)明的培養(yǎng)基具有成本低、能夠滿足乳酸桿菌工業(yè)化的大量應用的優(yōu)點。以上所述僅為本發(fā)明示意性的具體實施方式，并非用以限定本發(fā)明的范圍。任何本領域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和原則的前提下所作的等同變化、修改與結(jié)合，均應屬于本發(fā)明保護的范圍。權(quán)利要求1.一種乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基，包括培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B，以重量比計，其中，所述培養(yǎng)基A包括脫脂乳粉5％-12％、全脂乳粉3％-10％、乳糖1％-4％、水50％-80％；所述培養(yǎng)基B包括酵母浸粉0.4％-2％、抗壞血酸鈉0.02％-0.5％、0.1％-1％的吐溫80、脯氨酸0.02％-0.5％、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.002％-0.05％、甲酸30mg/Kg-150mg/Kg、蛋白胨0.5％-3％、牛肉膏0.5％-3％，水5％-30％。2.—種制備如權(quán)利要求1所述的乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基的方法，包括將培養(yǎng)基A和B各組分分別溶于水中，分別滅菌，冷卻后將所述培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B在無菌條件下混合。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述滅菌條件為110-12rC、15-30分鐘。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述冷卻為降溫至30-55'C以下。5.如權(quán)利要求4所述的方法，進一步還包括將所述乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基冷藏儲存。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述儲存溫度為4"C以下。全文摘要本發(fā)明涉及一種乳酸桿菌增殖培養(yǎng)基，包括培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B，以重量比計，培養(yǎng)基A包括脫脂乳粉5％-12％、全脂乳粉3％-10％、乳糖1％-4％、水50％-80％；養(yǎng)基B包括酵母浸粉0.4％-2％、抗壞血酸鈉0.02％-0.5％、0.1％-1％的吐溫80、脯氨酸0.02％-0.5％、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.002％-0.05％、甲酸30mg/Kg-150mg/Kg、蛋白胨0.5％-3％、牛肉膏0.5％-3％，水5％-30％。本發(fā)明同時公開了該培養(yǎng)基的制備方法。本發(fā)明的培養(yǎng)基具有成本低、培養(yǎng)周期短、菌體濃度高的優(yōu)點。采用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)乳酸桿菌，4-6h后菌體濃度達到6×10¹⁰cfu/ml。文檔編號C12N1/20GK101538547SQ200910135988公開日2009年9月23日申請日期2009年5月8日優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日發(fā)明者劉衛(wèi)星,康小紅,張久龍,胡新宇,南齡申請人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)股份有限公司