專利名稱：一種用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)α-熊果苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的方法。
二背景技術(shù)：
熊果苷是對苯二酚(氫醌)的葡萄糖苷，化學(xué)名為4-羥苯基-D-吡喃葡萄糖 苷，分為a-熊果苷和(3-熊果苷兩種。熊果苷是皮膚黑色素合成途徑的關(guān)鍵酶酪氨 酸酶的抑制劑，它阻斷多巴及多巴醌的合成，從而抑制黑色素的生成而發(fā)揮其 美白作用，且對皮膚沒有刺激性，毒副作用小，是國際公認(rèn)的高效祛斑美白劑， 其中a-熊果苷的美白作用是卩-熊果苷的10倍。熊果苷還具有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎、 抗菌等生理活性，因而被用作鎮(zhèn)咳藥物和尿道消毒劑等使用。(3-熊果苷可以通 過化學(xué)合成法、天然植物提取法、植物細(xì)胞培養(yǎng)法和微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化法幾種方 法來制備，而a-熊果苷一般只能通過微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化法制備，己有用細(xì)菌發(fā)酵 轉(zhuǎn)化生產(chǎn)熊果苷的報道。目前熊果苷的主要生產(chǎn)方法是化學(xué)合成法，其步驟繁 雜，反應(yīng)條件苛刻，且所得產(chǎn)物大多是a-熊果苷和卩-熊果苷的混合物，分離純化 困難，而且隨著人們崇尚自然綠色化妝品的需求，人們對天然熊果苷的需求將 使得化學(xué)合成法逐漸被生物轉(zhuǎn)化法取代。微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化法作為一種較新的熊 果苷生產(chǎn)技術(shù)，具有原料較簡單，發(fā)酵條件容易控制，生產(chǎn)周期短，合成效率 高，產(chǎn)物純度高， 一般多為cc-熊果苷，生產(chǎn)成本低，易于大規(guī)模生產(chǎn)，生產(chǎn)更 符合環(huán)保和可持續(xù)發(fā)展的要求等優(yōu)點，因此具有工業(yè)化意義，發(fā)展前景非常樂觀。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)cc-熊果苷的方法，該方法能
在常溫常壓下合成熊果苷，原料較簡單，能夠克服化學(xué)合成法反應(yīng)條件要求苛 刻，對環(huán)境污染大的問題。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的 一種用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果
苷的方法，所述方法包括以下步驟-
(1) 制備根霉細(xì)胞
將從淀粉廠周邊、農(nóng)田、果園等地方采集的土壤樣品中篩選所獲得的根霉
接種于根霉種子液中，于31-34 °C、 pH 5.0-6.0、 180 r/m下培養(yǎng)40-46小時， 制備得根霉種子液，將制備得的根霉，中子液過濾得到根霉細(xì)胞。
(2) 接種到熊果苷轉(zhuǎn)化液中
將(1)制備得的根霉細(xì)胞按4一5% (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中， 于31-34 。C、 pH3. 2-4. 2、 170-200 r/m下轉(zhuǎn)化96-120小時，獲得含a-熊果苷 的轉(zhuǎn)化液。
(3) 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 所述根霉的種子液和熊果苷轉(zhuǎn)化液的組成為
(1) 所述根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉，
(2) 所述熊果苷轉(zhuǎn)化液的組成(w/v)為60-80 mmol/L對苯二酚，180-320 mmol/L麥芽糖或180-480 mmol/L葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木薯粉水解液、 玉米粉水解液的一種，50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
所述根霉通過以下方法獲得(1) 篩選
從淀粉廠周邊、農(nóng)田、果園等地方采集土壤樣品，經(jīng)稀釋后涂布于固體平
板培養(yǎng)基上，固體平板培養(yǎng)基的組成(w/v): 2%葡萄糖、5%麩皮浸出液、0.05 %MgS04、 1.2%瓊脂，于pH5.0、 32 'C下培養(yǎng)，待長出根霉單菌落，取根霉孢 子于固體平板培養(yǎng)基上進一步純化，將純化的根霉接種于根霉種子液中，于32 °C、轉(zhuǎn)速為180r/min的搖床中培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的 根霉種子液過濾得到根霉細(xì)胞。按5 %接種量將根霉細(xì)胞接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中， 轉(zhuǎn)化液的組成210 mmol/L麥芽糖、70 mmol/L對苯二酚、50咖ol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，于pH4.0、 32 °C、 180 r/m下轉(zhuǎn)化120小時，測定轉(zhuǎn)化液的 a-熊果苷含量，選取轉(zhuǎn)化成(x-熊果苷含量最高的根霉。
(2) 保存 ， 將根霉接種于固體平板培養(yǎng)基上，于pH5.0，32 "C培養(yǎng)96小時后，于4 °C
冰箱中保存。
本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)點如下
1、 使用的熊果苷轉(zhuǎn)化液的組成成分簡單、經(jīng)濟，能適應(yīng)于范圍較廣的原料 轉(zhuǎn)化。
2、 使用的轉(zhuǎn)化工藝條件溫和、工藝步驟簡單。
四具體實施方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。 實施例1
1、發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選保存 (1)篩從淀粉廠周邊、農(nóng)田、果園等地方采集土壤樣品，經(jīng)稀釋后涂布于固體平
板培養(yǎng)基上，固體平板培養(yǎng)基的組成(w/v): 2%葡萄糖、5%麩皮浸出液、0.05 %MgS04、 1.2%瓊脂，于pH5.0、 32 。C下培養(yǎng)，待長出根霉單菌落，取根霉孢 子于固體平板培養(yǎng)基上進一步純化，將純化的根霉接種于根霉種子液中，于32 'C、轉(zhuǎn)速為180r/min的搖床中培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的 根霉種子液過濾得到根霉細(xì)胞。按5 %接種量將根霉細(xì)胞接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中， 轉(zhuǎn)化液的組成210 mmol/L麥芽糖、70 mmol/L對苯二酚、50 mmol/L擰檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，于pH4.0、 32 'C、 180r/m下轉(zhuǎn)化120小時，測定轉(zhuǎn)化液的 a-熊果苷含量，選取轉(zhuǎn)化成cc-熊果苷含量最高的根霉。 (2)保存
將根霉接種于固體平板培養(yǎng)基上，于pH5.0，32 "培養(yǎng)96小時后，于4 。C 冰箱中保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于32 'C、 pH 5.0、 180 r/m下培養(yǎng)40小時，制得根霉種子液，將制得的根霉種子液過濾得 到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 60腿ol/L對苯二酚，210 mmol/L麥芽糖，50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按4 % (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于34 'C、 pH4.2、 200 r/m下轉(zhuǎn)化96小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為8. 12 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例2
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31 'C、 pH 5.5、 180 r/m下培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，280腿ol/L麥芽糖，50 mmol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按4% (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于32 'C、 pH3.2、 180r/m下轉(zhuǎn)化120小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為8.83 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例3
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于32 °C、 pH 6.0、 180 r/m下培養(yǎng)42小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，210 mmol/L麥芽糖，50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按5 % (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于31 °C、 pH4.0、 170r/m下轉(zhuǎn)化108小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為9.43 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例4
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于32 'C、 pH 5. 5、 180 r/m下培養(yǎng)40小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，210 mmol/L葡萄糖，50 mmol/L檸檬酸-擰檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按5 % (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中，于31 aC、 pH4.0、 170r/m下轉(zhuǎn)化96小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的cx-熊果苷含量為8.26 g/L。
5、 將所述含(x-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到ct-熊果苷純品。 實施例5
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31 'C、 pH 5.5、 180 r/m下培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，280 mmol/L甘露糖，50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按5 % (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于31 'C、 pH3.2、 200r/m下轉(zhuǎn)化120小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為9.23 g/L。
5、 將所述含ct-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到ct-熊果苷純品。 實施例6
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)cx-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31 'C、 pH 5.5、 180 r/m下培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，280 mmol/L半乳糖，50 mmol/L擰檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按5 % (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于31 °C、 pH3.8、 170r/m下轉(zhuǎn)化120小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為6.32 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例7
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于33 'C、 pH 5.0、 180 r/m下培養(yǎng)42小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 60 mmol/L對苯二酚，360 mmol/L葡萄糖，50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按4% (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于32 °C、 pH3.6、 180r/m下轉(zhuǎn)化120小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為8.86 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例8
1、 發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。
2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于34 'C、 pH 6.0、 180 r/m下培養(yǎng)40小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 80 mmol/L對苯二酚，320 mmol/L葡萄糖，50 mmol/L擰檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按5 % (w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化 液中，于31 'C、 pH4.0、 200r/m下轉(zhuǎn)化120小時，獲得含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為10.30 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例9
1、發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)ct-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。
培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31 'C、 pH 5.5、 180 r/m下培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過 濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
(1) 熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，木薯粉水解液，50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
(2) 木薯粉水解液制備方法稱取7.5 g淀粉含量為67.5 %( W/W)的木 薯粉，加入60ml自來水調(diào)漿，按照8U/g淀粉的用量加入a-高溫淀粉酶，85 °C-90 'C保溫作用約40分鐘，用碘液檢測淀粉是否水解完全，待水解完全后降 溫至50 °C-60 °C，按照150 U/g淀粉用量加入糖化酶，50 °C-60 。C保溫作用 2-3小時，加入10 ml pH 5. 5、 500腿ol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，加水定 容至100 ml。
(3) 轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按4 % (w/v)的接種量接入熊果 苷轉(zhuǎn)化液中，于32 °C、 pH 4.0、 180 r/m下轉(zhuǎn)化96小時，獲得含a-熊果苷的 轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為9.51 g/L。
5、 將所述含(x-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 實施例10
1、發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)(x-熊果苷的根霉的篩選和保存 采用與實施例1相同的方法篩選和保存。2、 根霉細(xì)胞的制備
根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉。 培養(yǎng)工藝條件將篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31 °C、 pH 5.5、 180 r/m下培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過
濾得到根霉細(xì)胞。
3、 a-熊果苷的轉(zhuǎn)化
(1) 熊果苷轉(zhuǎn)化液組成(w/v): 70 mmol/L對苯二酚，玉米粉水解液，50 mmol/L擰檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
(2) 玉米粉水解液制備方法稱取7.5 g淀粉含量為63.5% (w/w)的玉 米粉，加入60ml自來水調(diào)漿，按照8U/g淀粉用量加入a-高溫淀粉酶，85°。-90 °。保溫作用約60分鐘，用碘液檢測淀粉是否水解完全，待水解完全降溫至50 °C-60°C，按照150U/g淀粉用量加入糖化酶，50 °C-60'C保溫作用2-3小時， 加入10mlpH5.5、 500 mmol/L擰檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，加水定容至100ml。
(3) 轉(zhuǎn)化工藝條件將制得的根霉細(xì)胞按4 % (w/v)的接種量接入熊果 苷轉(zhuǎn)化液中，于32 °C、 pH4.0、 180r/m下轉(zhuǎn)化120小時，獲得含a-熊果苷的 轉(zhuǎn)化液。
4、 測得轉(zhuǎn)化液中的a-熊果苷含量為7.08 g/L。
5、 將所述含a-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到a-熊果苷純品。 a-熊果苷和對苯二酚含量的測定方法
待a-熊果苷轉(zhuǎn)化反應(yīng)結(jié)束后，取O. 1 ml轉(zhuǎn)化液加入0.9 ml甲醇，在IOOOO r/min下離心5 min,上清液的a-熊果苷和對苯二酚含量用高效液相色譜法測定， 色譜柱為Kromasil C18柱(4. 6 mmX250 cm)，柱溫30 。C，流動相為水甲醇(v/v) =90:10，流速l ml/min，檢測波長為280 nm。
權(quán)利要求
1、一種用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)α-熊果苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(1)制備根霉細(xì)胞將從淀粉廠周邊、農(nóng)田、果園等地方采集的土壤樣品篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31-34℃、pH 5.0-6.0、180r/m下培養(yǎng)40-46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過濾得到根霉細(xì)胞，(2)接種到熊果苷轉(zhuǎn)化液中將(1)制備得的根霉細(xì)胞按4-5％(w/v)的接種量接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中，于31-34℃、pH 3.2-4.2、170-200r/m下轉(zhuǎn)化96-120小時，獲得含α-熊果苷的轉(zhuǎn)化液，(3)將所述含α-熊果苷的轉(zhuǎn)化液分離、純化，得到α-熊果苷純品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的方法，其特征在 于，所述根霉的種子液和熊果苷轉(zhuǎn)化液的組成為(1) 所述根霉種子液的組成(w/v)為2 %麩皮，3 %木薯粉，(2) 所述熊果苷轉(zhuǎn)化液的組成(w/v)為60-80 mmol/L對苯二酚，180-320 mmol/L麥芽糖或180-480 mmol/L葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木薯粉水解液、 玉米粉水解液的一種，50 mmol/L擰檬酸-擰檬酸鈉緩沖液。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)a-熊果苷的方法，其特征在 于，所述根霉通過以下方法獲得(1)篩選從淀粉廠周邊、農(nóng)田、果園等地方采集土壤樣品，經(jīng)稀釋后涂布于固體平板培養(yǎng)基上，固體平板培養(yǎng)基的組成(w/v): 2%葡萄糖、5%麩皮浸出液、0.05 %MgS04、 1.2%瓊脂，于pH5.0、 32 'C下培養(yǎng)，待長出根霉單菌落，取根霉孢子于固體平板培養(yǎng)基上進一步純化，將純化的根霉接種于根霉種子液中，于32 'C、轉(zhuǎn)速為180r/min的搖床中培養(yǎng)46小時，制備得根霉種子液，將制備得的 根霉種子液過濾得到根霉細(xì)胞，按5 %接種量將根霉細(xì)胞接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中， 轉(zhuǎn)化液的組成210 mmol/L麥芽糖、70 mmol/L對苯二酚、50 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，于pH4.0、 32 °C、 180r/m下轉(zhuǎn)化120小時，測定轉(zhuǎn)化液的 a-熊果苷含量，選取轉(zhuǎn)化成a-熊果苷含量最高的根霉， (2)保存將根霉接種于固體平板培養(yǎng)基上，.于pH 5. 0， 32 。C培養(yǎng)96小時后，于4 。C 冰箱中保存。
全文摘要
一種用根霉發(fā)酵轉(zhuǎn)化生產(chǎn)α-熊果苷的方法，是將從淀粉廠周邊、農(nóng)田、果園等地方采集的土壤樣品中篩選所獲得的根霉接種于根霉種子液中，于31-34℃、pH 5.0-6.0、180r/m下培養(yǎng)40-46小時，制備得根霉種子液，將制備得的根霉種子液過濾得到根霉細(xì)胞。按4-5％(w/v)的接種量將根霉細(xì)胞接入熊果苷轉(zhuǎn)化液中，于31-34℃、pH 3.2-4.2、170-200r/m下轉(zhuǎn)化96-120小時。采用本發(fā)明能在常溫常壓下生產(chǎn)α-熊果苷，原料較簡單，能夠克服化學(xué)合成法反應(yīng)條件要求苛刻，對環(huán)境污染大的問題。
文檔編號C12N1/14GK101597631SQ20091011420
公開日2009年12月9日 申請日期2009年7月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月9日 公開號200910114202.8
發(fā)明者旄 馮, 龐宗文, 梁靜娟 申請人:廣西大學(xué)