專利名稱：一種玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及兩種玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的制備方法及其應(yīng)用，具體來(lái)說(shuō)是 從玉米寡肽混合物中通過(guò)一步分離，制備出含有兩種二肽的玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制 肽。該玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽作為制備降血壓藥物、保健食品或食品的用途，屬醫(yī)藥 和食品保健領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國(guó)是高血壓病高發(fā)的國(guó)家。近年來(lái)，隨著國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展、人均壽命的延長(zhǎng)、人民 生活水平的提高，生活節(jié)奏的加快和生活方式的改變，高血壓及其引發(fā)的冠心病、腦卒中等 高致殘、致命性疾病發(fā)病率日益攀升。研究表明，年齡在40 70歲之間，收縮壓每增加 20mmHg或舒張壓每增加IOmmHg,心血管突發(fā)事件的危險(xiǎn)性就增加一倍。根據(jù)2004年10 月國(guó)家衛(wèi)生部等聯(lián)合發(fā)布的“中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康現(xiàn)狀”調(diào)查報(bào)告顯示，我國(guó)18歲及以上 居民高血壓患病率為18.8%，估計(jì)全國(guó)患病人數(shù)為1.6億多。與1991年相比，患病率上升 了 31%，患病人數(shù)增加了 7000多萬(wàn)。最新的調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)人群高血壓的知曉率為 30.2%,治療率為24. 7%，控制率僅為6.1%，仍處于較差水平。高血壓不僅是一種常見(jiàn)的 心血管疾病，而且也是其他心血管病的主要危險(xiǎn)因素，目前已成為全球范圍內(nèi)的重要公共 衛(wèi)生問(wèn)題。因此提高對(duì)高血壓病的認(rèn)識(shí)，針對(duì)病因進(jìn)行早期預(yù)防、及時(shí)治療具有極其重要的
眉、ο血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(AngiotensinConverting Enzyme Inhibitor, ACEI) 是國(guó)內(nèi)外最常用的一線抗高血壓藥物之一。ACEI通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)移酶的活性，阻止 血管緊張素的生成，從而實(shí)現(xiàn)降低血壓的目標(biāo)。不過(guò)，常規(guī)的ACEI藥物具有非常明顯的副 作用，主要分為兩類。第一類副作用有(1)咳嗽?？人允茿CEI常見(jiàn)的副作用，其發(fā)病率在 白人中約為10%，但在亞洲人中可高達(dá)44%，女性高于男性。其原因可能與ACEI造成緩激 肽堆積有關(guān)。(2)血管水腫。其發(fā)病機(jī)率為0.1% 0.2%，并且可能有生命危險(xiǎn)。(3)低血 壓、高血鉀。在低鈉飲食和利尿劑應(yīng)用等腎素依賴狀態(tài)，ACEI引起低血壓的機(jī)會(huì)較高；ACEI 由于能減少醛固酮，可引起高血鉀；腎功能受損的病人應(yīng)用ACEI，容易發(fā)生高血鉀。(4)孕 婦使用ACEI可致胎兒畸形。另一類副作用與疏基有關(guān)，包括中性白細(xì)胞減少癥(0. 05% )、 腎病綜合和皮癥(1% )o隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人們物質(zhì)生活水平的提高，人們對(duì)ACEI藥物的療效、安全 性及耐受性提出了更高要求。近年來(lái)，為了尋找更理想的ACEI，研究者們開(kāi)始把目標(biāo)轉(zhuǎn)向了 天然產(chǎn)物，尤其是那些安全性高、副作用少的食物及天然藥物資源。血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽(AngiotensinConverting Enzyme Inhibitory Peptide,ACEIP)是一類能降低血壓的生物活性肽。它通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性， 使收縮血管物質(zhì)血管緊張素II濃度降低和舒張血管物質(zhì)緩激肽濃度升高，從而達(dá)到降低 血壓的效果。Ferreira首次在南美茅頭蝮蛇(Bothropsjararaca)毒液中發(fā)現(xiàn)了血管緊張 素轉(zhuǎn)移酶抑制肽，隨后多種ACE抑制肽應(yīng)運(yùn)而生。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，一些食源性蛋白包括乳清蛋白、玉米蛋白、魚類蛋白等，經(jīng)過(guò)酶解后，其水解物表現(xiàn)出降血壓活性，并從中分離出明 確結(jié)構(gòu)和功能的肽段。天然來(lái)源的血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽具有安全性高，毒副作用小，易 吸收等特點(diǎn)，有著合成化學(xué)藥物不可比擬的優(yōu)越性，成為降血壓藥物、保健食品或食品的開(kāi) fJ^-°玉米寡肽是以玉米蛋白為主要原料，經(jīng)蛋白酶水解技術(shù)生產(chǎn)的一組分子量小 于1000的多肽混合物，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)。李素芬等人在 ((Protamex 酶解玉米蛋白質(zhì)制備生物活性玉米肽的研究》(農(nóng)產(chǎn)品加工，2007. 6)的研究 中，黃家音等人在《玉米蛋白制備降血壓肽的研究》(食品科學(xué)，2007.6)的研究中，李世敏 等人在《玉米降血壓肽的分離純化研究》(食品科學(xué)，2006. 7)的研究中，都提出玉米蛋白 通過(guò)蛋白酶水解制備玉米肽混合物，并做了初步的分離發(fā)現(xiàn)對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有抑制作 用，但是都沒(méi)有明確提出其中玉米肽中起降血壓作用的具體血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽序 列。在專利(CN1799395A)中鑒定出一種降血壓九肽，為L(zhǎng)eu-Leu-Pro-Pro-Tyr-Leu-Ser-P ro-Ala。而本發(fā)明提出了兩種新的血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽，分別為Ala-Leu和Ala-Tyr。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決目前的降血壓生物活性肽大多是混合物，且不能闡述發(fā)揮降壓作用的血 管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽成分的問(wèn)題，本發(fā)明提供從玉米寡肽混合物中通過(guò)一步分離制備玉 米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的方法，明確提出兩種血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的成分。分離 制備出的含有兩種二肽的玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽作為制備降血壓藥物、保健食品或 食品的用途。血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽是一類能降低血壓的生物活性肽，它通過(guò)抑制血管緊張 素轉(zhuǎn)化酶的活性，使收縮血管物質(zhì)血管緊張素II濃度降低和舒張血管物質(zhì)緩激肽濃度升 高，從而達(dá)到降低血壓的效果。通過(guò)對(duì)玉米寡肽混合物的一步分離純化，篩選出血管緊張 素轉(zhuǎn)移酶抑制高活性組分，其血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制活性IC5tl為14. 8 μ mol/L (IC50是在 一定條件下抑制血管緊張素轉(zhuǎn)移酶活性一半所需要的抑制劑濃度，IC5tl越小說(shuō)明其血管緊 張素轉(zhuǎn)移酶抑制活性越高)。通過(guò)質(zhì)譜鑒定出該組分中含有兩種二肽，分別為Ala-Leu和 Ala-Tyr0該種玉米降血壓肽由于其從天然食用蛋白中提取，無(wú)副作用，較傳統(tǒng)降血壓藥物 有更好的安全性，適合高血壓患者使用。所述降血壓藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。所述降血 壓食品為淀粉制品、乳或乳制品、豆制品或烘焙食品。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例本發(fā)明給出玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的一步分離制備方法及其應(yīng)用。玉米寡肽有北京中食海氏生物技術(shù)有限公司提供，粉末狀，呈淡黃色。將玉 米配制成10mg/mL，進(jìn)行高效液相色譜分離。色譜柱為XBridge BEH130 C18反相柱 (4. 6mmX 250mm，美國(guó)Waters公司)，液相條件為流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為80%乙腈，流 速為0. 6mL/min,柱溫為30°C。洗脫程序見(jiàn)表1.
4
表1液相洗脫程序 通過(guò)液相分離出各組分進(jìn)行血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制率的評(píng)價(jià)，篩選出血管緊張素 轉(zhuǎn)移酶抑制率活性最高的組分，其血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制活性IC5tl為14. 8 μ mol/L(IC50是 在一定條件下抑制血管緊張素轉(zhuǎn)移酶活性一半所需要的抑制劑濃度，IC5tl越小說(shuō)明其血管 緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制活性越高)。將該組分通過(guò)Q-TOF質(zhì)譜鑒定，分別為Ala-Leu和Ala-Tyr。以下給出降血壓活性評(píng)價(jià)原理及方法。1.測(cè)定原理測(cè)定血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽活性的方法普遍采用的是修改自Cushman和 Cheim(1971)的試驗(yàn)方法。血管緊張素轉(zhuǎn)移酶可以把血管緊張素I C端的兩個(gè)氨基酸 (His-Leu)切下，釋放出血管緊張素II。測(cè)定活性就是利用該特性，以Hip-His-Leu(HHL) 為血管緊張素轉(zhuǎn)移酶的底物，經(jīng)血管緊張素轉(zhuǎn)移酶作用后，HHL末端的His-Leu被切下，釋 放出馬尿酸(Hippuric acid)，血管緊張素轉(zhuǎn)移酶活力越強(qiáng)，所釋放的馬尿酸越多。馬尿酸 在228nm有最大吸收峰。根據(jù)這個(gè)原理，在血管緊張素轉(zhuǎn)移酶與底物的反應(yīng)體系中加入抑 制物，通過(guò)計(jì)算馬尿酸的生成量來(lái)進(jìn)行抑制活性的比較。
權(quán)利要求
玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽，其特征在于該玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽包括Ala Leu(中文名稱為丙氨酸 亮氨酸，簡(jiǎn)寫名稱為AL)和Ala Tyr(中文名稱為丙氨酸 酪氨酸，簡(jiǎn)寫名稱為AY)兩種二肽。
2.玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的制備方法，其特征在于通過(guò)對(duì)玉米寡肽混合物的 一步的高效液相色譜分離篩選，就純化出抑制ACE酶的高活性組分，并通過(guò)質(zhì)譜鑒定玉米 血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽，其特征在于以上兩種二 肽與降血壓功能相關(guān)，作為制備降血壓藥物、保健食品或食品的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽，其特征在于所述降血 壓藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4所述的玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽，其特征在于所述降 血壓食品為淀粉制品、乳或乳制品、豆制品或烘焙食品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽的制備方法及其作為制備降血壓藥物、保健食品或食品的用途。通過(guò)對(duì)玉米寡肽混合物一步的分離篩選，就純化出抑制血管緊張素轉(zhuǎn)移酶酶的高活性組分，通過(guò)質(zhì)譜鑒定玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽含有兩種二肽，分別為Ala-Leu和Ala-Tyr。以上玉米血管緊張素轉(zhuǎn)移酶抑制肽由于其均從天然食用蛋白中提取，無(wú)副作用，較傳統(tǒng)降血壓藥物有更好的安全性，適合高血壓患者使用。
文檔編號(hào)A23L1/305GK101906133SQ20091008517
公開(kāi)日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2009年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月3日
發(fā)明者李勇, 林峰, 王軍波 申請(qǐng)人:北京大學(xué)