專利名稱：一種提高益生菌活菌數(shù)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)，具體地是涉及一種提高益生菌活菌數(shù)的方法。
背景技術(shù)：
隨著人民生活水平的提高和健康意識的增強(qiáng)，人們已越來越關(guān)注飲食對機(jī)體生理或其他 方面的影響而促進(jìn)健康的作用，消費(fèi)趨勢正轉(zhuǎn)向具有合理營養(yǎng)及保健功能的食品。由于益生 菌對機(jī)體腸道菌系具有很好的調(diào)節(jié)作用，而腸道菌系平衡則是關(guān)系到人體營養(yǎng)和健康的至關(guān) 重要的因素，這使益生菌的研究逐漸成為功能食品研究中的焦點。乳酸菌是人體腸道內(nèi)重要 的生理性益生菌，具有維持胃腸道正常的微生態(tài)平衡、抑制病原菌的入侵和感染以及增強(qiáng)機(jī) 體免疫力等作用，是多種保健食品和藥品的主要微生態(tài)類原料。商品化的產(chǎn)品有酸奶、乳 酸菌片、乳酸菌粉等。1882年梅氏發(fā)現(xiàn)乳酸菌，1971年閂本森永奶廠生產(chǎn)雙歧酸奶，開始在 歐洲市場出售。1986年法國ST.Hubert公司，從日本森永奶廠引進(jìn)生產(chǎn)技術(shù)，雙歧桿菌酸奶銷 路大暢。20世紀(jì)八十年代，中國開始生產(chǎn)。
雙歧因子是指寡糖等不被人體消化道中的消化酶所消化和吸收，但當(dāng)其進(jìn)入人體腸道后 能有選擇性地促進(jìn)腸道內(nèi)雙歧桿菌等有益菌的生長，維持人體的健康水平，已商品化的產(chǎn)品 有低聚果糖、大豆低聚糖、低聚帕拉金糖、低聚異麥芽糖等。應(yīng)用于乳酸菌產(chǎn)品的雙歧因 子范圍包括..海藻糖、低聚果糖、低聚異麥芽糖、大豆低聚糖、低聚帕拉金糖、低聚木糖、 低聚麥芽糖。
北蟲草也稱蛹蟲草，是北冬蟲夏草的簡稱，又名北冬蟲夏草、蠶蛹蟲草等。20世紀(jì)90
年代以后，許多學(xué)者對北蟲草的馴化和藥理作用進(jìn)行了大量研究，確認(rèn)北蟲草的藥理作用及
功效基本上與冬蟲夏草相同，可以作為冬蟲夏草的代用品。有滋肺益氣、增精補(bǔ)腎、止血化
痰、抑制腫瘤、止咳鎮(zhèn)靜、驅(qū)風(fēng)、散熱、駐容美顏、延緩衰老、補(bǔ)腎壯陽，還原青春，和諧
兩性生活等作用及潤肺平喘，滋陰補(bǔ)肺，促進(jìn)新陳代謝，強(qiáng)身健體，提高機(jī)體免疫力之功效。
研究表明，北冬蟲夏草含有蟲草素、蟲草酸(甘露醇)、蟲草多糖、蛋白質(zhì)、超氧化物歧化酶、
氨基酸、維生素及多種微量元素等化學(xué)成分，蟲草素的它具有抗癌、抗菌、抗病毒等功能；
蟲草酸(甘露醇)可以顯著地降低顱壓、促進(jìn)新陳代謝因而使腦溢血和腦血栓病癥得到緩解；
蟲草多糖被認(rèn)為是當(dāng)前世界上非常好的免疫促進(jìn)劑之一。北蟲草除含有蟲草素、D-甘露醇、
蟲草多糖、腺苷、麥角甾醇、SOD酶，還含蛋白質(zhì)40%以上，十八種氨基酸，氨基酸含量25%
3以上，營養(yǎng)極其豐富。
早期乳酸菌制品還是以液體狀態(tài)產(chǎn)品出現(xiàn)，由于，液體制劑中的活菌數(shù)保存期短及活菌 數(shù)量很難提高，使產(chǎn)品中的活菌數(shù)難以保證。固態(tài)產(chǎn)品均死菌狀態(tài)出現(xiàn)。日本發(fā)明"表飛鳴" 藥品治療胃腸道疾病取得良好效果，但此藥是死菌制劑，后又采取"凍干"技術(shù)生產(chǎn)"新表飛 鳴"，但價格昂貴。
因此，在國內(nèi)上述文獻(xiàn)檢索中，未發(fā)現(xiàn)有利用北蟲草提取物促進(jìn)乳酸菌發(fā)酵，提高發(fā)酵液 活菌數(shù)的文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提高益生菌活菌數(shù)的方法，因益牛菌菌種營養(yǎng)要求高，北蟲草
營養(yǎng)豐富，將北蟲草提取物加入發(fā)酵培養(yǎng)基可以為益牛:菌的牛長提供豐富的營養(yǎng)，提高發(fā)酵 液中益生菌的活菌數(shù)。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了以下的技術(shù)方案 一種提高益生菌活菌數(shù)的方法，包括以下步驟
1) 北蟲草提取物的制備
向北蟲草干品中加入其質(zhì)量5-40倍的水，煮沸后打碎成漿，在70-98'C下水解1-6 小時；將水解液的pH調(diào)整為7.5-10，加入北蟲草干品質(zhì)量0.01-0.5%的堿性蛋白酶，在 40-75。C下酶解4-12小時；過濾、真空濃縮至5-20Brix，即得北蟲草提取物；
2) 發(fā)酵培養(yǎng)基的配制
在常規(guī)發(fā)酵乳酸菌培養(yǎng)基(MRS)中，按每100升常規(guī)發(fā)酵乳酸菌培養(yǎng)基中添加 0.1-5kg北蟲草提取物，調(diào)pH為5.0-7.5， 100-12rC滅菌15-40分鐘；
3) 益生菌的發(fā)酵培養(yǎng)
待培養(yǎng)基冷至10-35'C時，將乳酸菌菌種的三級種子按培養(yǎng)基總體積2-20%的接種量 接種，單菌株或合菌株接種；維持在溫度10-45°C、攪拌速度5-100r/min、不通氣或厭氧、 罐壓O.Ol-O.lOMPa、 pH 5.0-7.0的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8-24小時；
4) 益生菌活菌數(shù)測定
發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，采用常規(guī)稀釋平板厭氧培養(yǎng)法進(jìn)行活菌數(shù)測定。 優(yōu)選地，所述步驟(l)中，加入堿性蛋白酶的質(zhì)量是北蟲草干品質(zhì)量的0.02-0.2%。 優(yōu)選地，所述步驟(2)中，按每100升常規(guī)發(fā)酵乳酸菌培養(yǎng)基中添加0.5-2kg北蟲草提取物。所述步驟3)中乳酸菌菌種為兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、 青春雙歧桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、嗜熱鏈球菌、羅伊氏 乳桿菌中的一種或一種以上。
本發(fā)明具有以下有益效果
本發(fā)明將經(jīng)過水解酶解濃縮制得的北蟲草提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)添加到常規(guī)乳酸菌發(fā)酵培 養(yǎng)基中，因益生菌菌種營養(yǎng)要求高，北蟲草營養(yǎng)豐富，將北蟲草提取物加入發(fā)酵培養(yǎng)基可以 為益生菌的生長提供豐富的營養(yǎng)，能顯著地提高發(fā)酵液中乳酸菌的活菌數(shù)。
具體實施例方式
以下通過具體實施例來說明本發(fā)明。 實施例1:
1. 北蟲草提取物的制備
取2kg干北蟲草，加入40升水，煮沸后倒入打漿機(jī)，打漿5分鐘，調(diào)pH至9.5-10，在 95。C下水解6小時；將水解漿的pH調(diào)整為8.5，加入4g堿性蛋白酶，在6(TC下酶解5小時； 過濾、真空濃縮至10Brix即得北蟲草提取物；
2. 益生菌菌種
將嗜酸乳桿菌進(jìn)行菌種活化至三級種子，培養(yǎng)基為常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)基MRS，培養(yǎng)方法為 常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)法；
3. 益生菌發(fā)酵培養(yǎng)
用兩個50升發(fā)酵罐(編號為Al、 A2)分別進(jìn)行發(fā)酵，每罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基30-35升，Al用 常規(guī)MRS培養(yǎng)基另添加北蟲草提取物lkg/100升，A2罐用常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)基(MRS)做對照， 分別于115。C滅菌20分鐘，冷至35。C，將嗜酸乳桿菌三級種子按發(fā)酵培養(yǎng)基總體積10%(v/v) 的接種量分別接種到兩個發(fā)酵罐中進(jìn)行不通氣發(fā)酵，罐壓用無菌空氣維持；保持發(fā)酵罐溫度 37。C、 pH5.5-6.5、攪拌速度30 rpm/min，罐壓0.03MPa發(fā)酵18小時;
4. 測定發(fā)酵液中的活菌數(shù)
分別從兩罐發(fā)酵液取樣通過平板傾注厭氧培養(yǎng)法測定菌數(shù)，Al為109-101()Cfo/ml， A2為 10s-109cfu/ml。
實施例2:
1.北蟲草提取物的制備取10kg干北蟲草，加入250升水，煮沸后倒入打漿機(jī)，打漿5分鐘，調(diào)pH至9.5-10， 在90'C下水解6小時；將水解漿的pH調(diào)整為8.5,加入4g的堿性蛋白酶，在60'C下酶解5 小時；過濾、真空濃縮至12Brix即得北蟲草提取物；
2. 益生菌菌種
將保加利亞乳桿菌進(jìn)行菌種活化至三級種子，培養(yǎng)基為常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)方法為 常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)法；
3. 益生菌發(fā)酵培養(yǎng)
用兩個50升發(fā)酵罐(編號為Bl、 B2)分別進(jìn)行發(fā)酵，每罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基30-35升，Bl用 常規(guī)MRS培養(yǎng)基另添加北蟲草提取物4kg/100升培養(yǎng)基，B2罐用常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)基(MRS) 做對照，分別于115。C滅菌20分鐘，冷至35。C，將保加利亞乳桿菌三級種子按發(fā)酵培養(yǎng)基總 體積10。/。(v/v)的接種量分別接種到兩個發(fā)酵罐中進(jìn)行不通氣發(fā)酵，罐壓用無菌空氣維持；保 持發(fā)酵罐溫度37。C、 pH5.5-6.5、攪拌速度30 rpm/min，罐壓0.03MPa發(fā)酵18小時；
4. 測定發(fā)酵液中的活菌數(shù) 分別從兩罐發(fā)酵液取樣通過平板傾注厭氧培養(yǎng)法測定菌數(shù)，Bl為109-101Qcfu/ml， B2為
108-109cfo/ml。
實施例3:
1. 北蟲草提取物的制備
取lkg干北蟲草，加入15升水，煮沸后倒入打漿機(jī)，打漿5分鐘，調(diào)pH至9.5-10，在 9(TC下水解6小時；將水解漿的pH調(diào)整為8.5，加入4g的堿性蛋白酶，在6(TC下酶解5小 時；過濾、真空濃縮至15Brix即得北蟲草提取物；
2. 益生菌菌種
將嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌分別進(jìn)行菌種活化至三級種子，培養(yǎng)基為常規(guī)乳酸菌培 養(yǎng)基，培養(yǎng)方法為常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)法；
3. 益生菌發(fā)酵培養(yǎng)
用兩個50升發(fā)酵罐(編號為Cl、 C2)分別進(jìn)行發(fā)酵，每罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基30-35升，Cl用 常規(guī)MRS培養(yǎng)基另添加北蟲草提取物0.3kg/100升培養(yǎng)基，C2罐用常規(guī)乳酸菌培養(yǎng)基(MRS) 做對照，分別于115。C滅菌20分鐘，冷至35'C，將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌三級種子按 體積比l: 1的比例混合，將混合菌液按發(fā)酵培養(yǎng)基總體積10n/。(v/v)的接種量分別接種到兩個 發(fā)酵罐中進(jìn)行不通氣發(fā)酵，罐壓用無菌空氣維持；保持發(fā)酵罐溫度37。C、 pH5.5-6.5、攪拌速壓0.03MPa發(fā)酵18小時； 4.測定發(fā)酵液中的活菌數(shù)
分別從兩罐發(fā)酵液取樣通過平板傾注厭氧培養(yǎng)法測定菌數(shù)，Cl為109-101QCfti/ml， C2為 108-109cfu/ml。
根據(jù)本發(fā)明方法得到的發(fā)酵液益生菌活菌數(shù)達(dá)109 cfu/ml以上，而在常規(guī)MRS培養(yǎng)基中 的活菌數(shù)108cfu/ml左右。
權(quán)利要求
1.一種提高益生菌活菌數(shù)的方法，其特征在于包括以下步驟1)北蟲草提取物的制備向北蟲草干品中加入其質(zhì)量5-40倍的水，煮沸后打碎成漿，70-98℃下水解1-6小時；將水解液的pH調(diào)整為7.5-10，加入北蟲草干品質(zhì)量0.01-0.5％的堿性蛋白酶，40-75℃下酶解4-12小時；過濾、真空濃縮至5-20Brix，即得北蟲草提取物；2)發(fā)酵培養(yǎng)基的配制每100升常規(guī)發(fā)酵乳酸菌培養(yǎng)基中添加0.1-5kg北蟲草提取物，調(diào)pH為5.0-7.5，滅菌即得發(fā)酵培養(yǎng)基；3)益生菌的發(fā)酵培養(yǎng)待發(fā)酵培養(yǎng)基冷卻至10-35℃，將乳酸菌菌種的三級種子按發(fā)酵培養(yǎng)基總體積2-20％的接種量接種；之后維持在10-45℃、5-100rpm/min、不通氣或厭氧、罐壓0.01-0.10MPa、pH5.0-7.0的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8-24小時。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的提高益生菌活菌數(shù)的方法，其特祉在于所述歩驟(l)中，加入堿性 蛋白酶的質(zhì)量是北蟲草干品質(zhì)量的0.02-0.2%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高益生菌活菌數(shù)的方法，其特征在于所述步驟(2)中，每100升 常規(guī)發(fā)酵乳酸菌培養(yǎng)基中添加0.5-2kg北蟲草提取物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高益生菌活菌數(shù)的方法，其特征在于所述步驟(3)中，乳酸齒菌 種為兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、保加利亞乳 桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、嗜熱鏈球菌、羅伊氏乳桿菌中的一種或一種以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提高益生菌活菌數(shù)的方法，所述方法為將北蟲草提取物加入常規(guī)乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)乳酸菌菌種8-24小時后，采用常規(guī)稀釋平板厭氧培養(yǎng)法進(jìn)行活菌數(shù)測定，本發(fā)明將經(jīng)過水解酶解濃縮制得的北蟲草提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)添加到常規(guī)乳酸菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，北蟲草營養(yǎng)豐富，可以為益生菌的生長提供豐富的營養(yǎng)，能顯著地提高發(fā)酵液中乳酸菌的活菌數(shù)。
文檔編號A23L1/29GK101524146SQ20091003855
公開日2009年9月9日 申請日期2009年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月10日
發(fā)明者丘明泉, 吳清平, 張菊梅, 柏建玲, 胡文杰, 莫樹平 申請人:廣東省微生物研究所;廣東環(huán)凱微生物科技有限公司