專利名稱：抗黃瓜黃脈病毒的甜瓜種植物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的甜瓜種棺物,和衍牛的棺物部分。本發(fā)明進(jìn) 一步涉及生產(chǎn)所述植物的方法，及通過所述方法獲得的抗CVYV的植物，和從所述抗CVYV植 物獲得的植物部分。
背景技術(shù)：
CYVY為Potyviridae科番薯屬(Ipomovirus)的病毒。它是一個(gè)相當(dāng)不穩(wěn)定的病 毒，有多個(gè)桿狀的顆粒，一般長(zhǎng)為740-800nm、寬為15-18nm。據(jù)知該CVYV的病毒核酸包括 雙鏈RNA。該病毒的宿主范圍有限,宿主主要限于葫蘆科棺物。該科包括重要的經(jīng)濟(jì)作物如 黃瓜，南瓜類(包括南瓜)、甜瓜類和西瓜。一般來講，盡管CVYV感染是黃瓜產(chǎn)量的一個(gè)難 題，南瓜、西葫蘆、西瓜和甜瓜的產(chǎn)量也會(huì)受影響。CVYV 一般是由白粉虱傳播，感染CVYV的甜i屬植物(甜瓜)會(huì)出現(xiàn)葉脈變黃、或 葉脈透明并阻礙植物的生長(zhǎng)從而導(dǎo)致產(chǎn)量下降。CVYV感染也可以導(dǎo)致植物的死亡。因此，當(dāng)植物被感染時(shí)，CVYV可以對(duì)作物造成災(zāi)難性的影響。通過例如在無白粉 虱的環(huán)境下培育種子，或使用如殺蟲劑處理這樣的方法預(yù)防感染一般是費(fèi)用高和/或?qū)Νh(huán) 境不利。此外，這些方法并不能總是提供令人滿意的結(jié)果。盡管進(jìn)行過多次尋找抗CVYV的嘗試，但至今尚未有關(guān)于抗CVYV的甜瓜種棺 物的報(bào)道。有可抵抗CVYV的其它黃瓜屬棺物的報(bào)道，如C. africanus, C. dipsaceus和 C. prophetarum (Nieto et al. BMC Plant BiologH2007) 7 :34)。本發(fā)明的目的是提供抗 CVYV的甜瓜種棺物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種MJi種植物，該植物中的基因組中含有一個(gè)遺傳成 分，所述遺傳成分包含一抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的數(shù)量性狀基因位點(diǎn)toTL)，或者其 抗CVYV的部分，其至少與一個(gè)分子標(biāo)記基因地連接，在此所述的標(biāo)記是選自包含E13/ M48-259. 69-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 1 和 2，遷移率 259460bp)，E16/M48-377. 36-P2 (擴(kuò) 增引物 SEQ ID Nos :3 和 4，遷移率 377-378bp)，E13/M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 5 和 6，遷移率和 E^/M62_076. 8_P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID NOs 7 和 8，遷移 率76-77bp)的組中，并且，其所述的植物對(duì)CVYV有抗性。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“抗CVYV的”和“CVYV抗性”是指與非抗性植物例如在相似的環(huán) 境條件和病蟲的壓力下易感染的植物相比，植物在正常病原體的壓力下，限制病毒生長(zhǎng)和 發(fā)育的能力?？剐院鸵赘腥局参锏膮^(qū)別能夠通過例如機(jī)械接種的方法確定。為此，一種CVYV接 種混合物，是在磷酸緩沖液(KH2P04pH = 7. 0)中研磨IOg感染CVYV的新鮮甜瓜(C. sativus LJ葉子制得。接著，向混合物中添加活性炭和碳化硅粉末。在接種前，使甜瓜幼苗沾上碳化硅。在此術(shù)語“QTL”用于領(lǐng)域識(shí)別方法中。術(shù)語“抗CVYV的QTL”指的是定位于甜瓜 的一個(gè)特定染色的區(qū)域，該區(qū)域與至少一個(gè)編碼為抗CVYV的基因或至少一個(gè)調(diào)節(jié)區(qū)如一 個(gè)可控制涉及CVYV抗性的的一個(gè)或多個(gè)基因表達(dá)的染色體區(qū)連接。QTL可以例如為包含其產(chǎn)物具有遺傳抗性的一個(gè)或多個(gè)基因。可選擇地，QTL可以 例如為包含調(diào)節(jié)基因或序列，其產(chǎn)物能影響植物的基因組上其他基因位點(diǎn)上的基因表達(dá)， 從而具有CVYV抗性。根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容，術(shù)語“分子標(biāo)記”指的是一種指示劑，用于使各核苷酸序列本 質(zhì)的區(qū)別可見的方法中。這些指示劑的例子有限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)標(biāo)記、擴(kuò)增 片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)標(biāo)記、單核苷酸多態(tài)性(SNPs)、插入突變、小隨體標(biāo)記、特異序列擴(kuò) 增區(qū)域(SCARs)、切割的擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性序列(CAPQ標(biāo)記、或同工酶標(biāo)記、或本發(fā)明所定義 的一種特定基因和染色體定位的標(biāo)記聯(lián)合體。在此所說的“連接QTL的分子標(biāo)記”是指SNPs、插入突變及更多慣用的AFLP標(biāo)記 或用于本領(lǐng)域的任何類型標(biāo)記。使用分子標(biāo)記檢測(cè)本發(fā)明的抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)OiTL)， 或者CVYV抗性的部分的最佳方法是擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)法。AFLP是一種以聚合酶 鏈反應(yīng)(PC 技術(shù)為基礎(chǔ)的遺傳指紋技術(shù)，該技術(shù)是在90年代初由荷蘭的Keygene N. V.， Wageningen開發(fā)出來的。在AFLP方法中，先用用限制性內(nèi)切酶切割基因組DNA，接著把互補(bǔ)的雙鏈接頭與 限制性片斷末端相連，然后使用互補(bǔ)于接頭和限制位點(diǎn)的片段的引物對(duì)，對(duì)一個(gè)限制性片 斷的亞型進(jìn)行擴(kuò)增。使得片段可見，遷移率或片段大小通過預(yù)測(cè)其相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)DNA帶型的 分子量(bp)來測(cè)定。這個(gè)可以在例如變性聚丙烯酰胺凝膠中通過放射自顯影方法或熒光 方法中做到(Vos et al. Nucleic Acids Res. 199523(21) :4407)。一般來講，上述的AFLP方法可以產(chǎn)生大量的不同大小的核酸擴(kuò)增片段。通過對(duì)比 從例如易感植物和抗性植物獲得的核酸擴(kuò)增片段，表明一個(gè)特殊的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)的存 在和分離的核酸擴(kuò)增片段被鑒別出，這樣被識(shí)別區(qū)分的擴(kuò)增片段常被作為一種特殊表型的 標(biāo)記，例如抗性表型。本發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)，在基因組中包含標(biāo)記E13/M48-259. 69-P2 (擴(kuò)增引物SEQ ID Nos 1 和 2，遷移率 259-260bp)，E16/M48-377. 36_P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 3 和 4，遷移 率 377-378bp)，Ε13/Μ48461.30-Ρ2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率和 E26/M62-076. 8-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID NOs :7和8，遷移率76_77bp)的植物都有抗黃瓜黃脈 病毒(CVYV)的表型，而缺少這些標(biāo)記的植物則為黃瓜黃脈病毒(CVYV)的易感表型。因此， 該標(biāo)記遺傳地連接到可識(shí)別的CVYV抗性的遺傳成分。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例，連接到當(dāng)前抗性數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)的標(biāo)記，是選 自包含 E16/M48-377. 36-P2 (擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :3 和 4，遷移率 377_378bp)，E13/ M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率和似6/M62-076. 8-P2 (擴(kuò) 增引物SEQ ID NOs 7和8，遷移率76_77bp)的組。更優(yōu)選地，連接到本發(fā)明的抗性QTL的標(biāo)記為E13/M48461. 30_P2(擴(kuò)增引物SEQ ID Nos 5 和 6，遷移率 261-262bp) ·
本發(fā)明特別優(yōu)選的方案為，抗CVYV的QTL，或它的部分，是源自甜瓜當(dāng)?shù)仄贩N Cuc6491(編號(hào)為 NCIMB 41582).在此所述甜瓜Cuc6491可用于表示被識(shí)別的抗CVYV的QTL的來源，而且包含該植 物可從任何技術(shù)人員熟知的任何公開的收集和保藏機(jī)構(gòu)獲得，以及從而得到的抗CVYV的 衍生物。隨后，所述的抗性已被引入到顯1種植物中。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)可以提供一種具有完全 抗性的植物，其從Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)確定的抗性標(biāo)記是已穩(wěn)定混合到甜瓜植 物的基因組中，且無壞死癥狀。一旦接種CVYV，包含適當(dāng)?shù)腃uc6491(編號(hào)為NCIMB 41582) 片段的甜瓜植物，與易感對(duì)照植物相反，缺乏典型的CVYV花斑病癥狀。本發(fā)明因此也涉及一種甜瓜種植物，所述植物包含一種遺傳成分，例如，一種基因 滲入片段，其包含一個(gè)抗CVYV的QTL或一個(gè)抗CVYV的部分，所述植物對(duì)CVYV有抗性。在 一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明的抗CVYY植物不是甜瓜Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)。在此所述甜瓜Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)可用于表示抗CVYV的QTL的來源， 而且該植物可從任何技術(shù)人員熟知的任何公開的收集和保藏機(jī)構(gòu)中獲得，正如從而得到的 抗CVYV的衍生物本發(fā)明進(jìn)一步涉及到衍生自所述的抗CVYV甜瓜種植物的植物部分。該植物部分 可以是甜瓜植物的任何一個(gè)組成部分，包括單個(gè)細(xì)胞和細(xì)胞組織例如在植物中是完整的的 植物細(xì)胞，甜瓜植物可再生的細(xì)胞團(tuán)和組織。植物的部分包括，但不限于例如來自于花粉， 胚珠，葉，胚，根，根尖，花藥，花，果，莖芽和種子的單個(gè)細(xì)胞和組織；和花粉，胚珠，葉片，胚， 根，根尖，花藥，花，果，莖，苗，接穗，根莖，種子，原生質(zhì)體，愈傷組織等等。優(yōu)選的，該植物部 分是種子或果實(shí)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及到獲得一個(gè)抗CVYV甜瓜種植物的方法，包括引入一個(gè)遺傳 成分到所述植物的基因組中，該遺傳成分包含一個(gè)抗黃瓜黃脈病毒的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn) (QTL)，或抗黃瓜黃脈病毒的部分，其與至少一個(gè)分子標(biāo)記遺傳地連接，在此所述的分子標(biāo) 記選自包括 E13/M48-259. 69-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 1 和 2，遷移率 259460bp)，E16/ M48-377. 36-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :3 和 4，遷移率 377_378bp)，E13/M48461. 30-P2 (擴(kuò) 增引物SEQ ID Nos :5和6，遷移率和似6/M62-076. 8-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID NOs 7和8，遷移率76-77bp)的組，。根據(jù)本發(fā)明的方法，標(biāo)記優(yōu)選自包括E16/M48-377. 36_P2(擴(kuò)增引物SEQ ID Nos 3 和 4，遷移率 377-378bp)，和 E13/M48-261. 30_P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 5 和 6，遷移率 261-262bp)的組，尤其優(yōu)選的是，該標(biāo)記是E13/M48461. 30-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID Nos :5和 6，遷移率 261-262bp)。特別優(yōu)選的實(shí)施方式是，抗CVYV的QTL或所述的部分是衍生自編號(hào)為NCIMB 41582 的甜瓜 Cuc6491。本發(fā)明的方法的另一個(gè)優(yōu)選具體實(shí)施方式
為，植物不是編號(hào)為NCIMB 41582的甜 瓜 Cuc6491。根據(jù)本發(fā)明，遺傳成分例如包含本發(fā)明的QTL或抗CVYV的部分的核苷酸(最好是 DNA)被用于生產(chǎn)抗CVYV的甜瓜植物。因此，本發(fā)明提供QTL，或其部分的用途，用于生產(chǎn)抗 CVYV的甜瓜植物，所述用途涉及在一個(gè)易感CVYV的甜瓜植物受體中引種一個(gè)含所述QTL的核苷酸序列。所述核苷酸序列可來自一個(gè)適當(dāng)?shù)目笴VYV的供體甜瓜植物。優(yōu)選的，從甜瓜Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)獲得包含抗CVYV的QTL或其部 分的遺傳成分(核苷酸片段)。其他相關(guān)的甜瓜種，出現(xiàn)CVYV抗性和包含一個(gè)或多個(gè)編碼 CVYV抗性的基因，可以使用如本發(fā)明所述該材料可以被識(shí)別一樣作為CVYV抗性的供體植 物。將遺傳成分例如一個(gè)(單獨(dú)的)包含本發(fā)明QTL的核苷酸或者抗性的部分引入到 一個(gè)甜瓜植物中，可以通過技術(shù)人員知道的任何方法實(shí)行。更好是采用雜交。在一個(gè)具體 的方式中，本發(fā)明的方法可以包含甜瓜Cuc6491或者它的抗CVYV衍生物與一個(gè)易感CVYV 甜瓜植物的雜交步驟；收集雜交的種子，種植所述種子來生產(chǎn)Fl子代植物；所述的FI子代 植物自交或與供體或受體親代回交，去生產(chǎn)F2子二代種子；種植所述F2種子去生產(chǎn)F2子 二代植物；測(cè)定在至少一個(gè)所述F2子代植物的基因組中抗CVYV的QTL存在度。在此的QTL 存在度是通過檢測(cè)所述在至少一個(gè)F2子代植物的DNA中連接所述QTL標(biāo)記的存在度來確 定。所述的遺傳成分還可以是通過轉(zhuǎn)變、原生質(zhì)融合、重雙單倍體技術(shù)或胚胎拯救或 者任何其他核苷酸輸送系統(tǒng)引入，接著隨機(jī)的選擇包含QTL并表現(xiàn)CVYV抗性的子代植物。 用轉(zhuǎn)基因的方法轉(zhuǎn)移，一個(gè)包含本發(fā)明的抗CVYV的QTL或其抗CVYV的部分的核苷酸序列， 可以使用本領(lǐng)域已知的方法從供體植物中分離出來，并且在此被分離出來的核苷酸序列可 以通過基因方法例如通過一個(gè)載體，在一個(gè)配子中，或在任何其它適合的傳遞元件，例如一 個(gè)表面有所述核苷酸序列的沖擊粒子而轉(zhuǎn)移到受體植物，。植物的轉(zhuǎn)變一般包含一個(gè)在植物細(xì)胞中有功能的表達(dá)載體的構(gòu)成。在本發(fā)明中， 這樣的載體包含一個(gè)由本發(fā)明的抗CVYV的QTL或其抗CVYV的部分組成的核苷酸序列，該 載體可以包含一個(gè)抗CVYV基因，該基因是在控制之下的或有效的連接到一個(gè)調(diào)控元件，例 如一個(gè)啟動(dòng)基因。該表達(dá)載體可以包含一個(gè)或多個(gè)這樣的可手術(shù)連接的基因/調(diào)控元件的 聯(lián)合體，提供包含在聯(lián)合體中的至少一個(gè)基因用于抗CVYV編碼。在一種使用本領(lǐng)域公知的 轉(zhuǎn)化方法，例如農(nóng)桿菌屬轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，生產(chǎn)抗CVYV的轉(zhuǎn)基因植物的方法中，載體(們)可以是 質(zhì)粒的形式，并可被單獨(dú)或與其它質(zhì)粒結(jié)合使用。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“引入”或“漸滲現(xiàn)象”是指一個(gè)天然和人工的過程，借此，基因， 或一個(gè)種、變種或栽培變種的核苷酸被轉(zhuǎn)移到另一種、變種或栽培變種的基因組中，例如通 過雜交這些不同種。這個(gè)過程可以隨機(jī)的通過回交親本完成。本發(fā)明進(jìn)一步還涉及通過上述描述的方法獲得的抗CVYV的甜瓜種植物，和從所 述植物得到的任何植物部分，例如，但不限于，種子和/或果實(shí)。所述的抗CVYV甜瓜植物， 或者其部分因此在其基因組中包含與CVYV抗性相關(guān)的QTL，或者它的抗CVYV的部分，鑒于 上述已經(jīng)定義，來自甜瓜Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)，或者它的抗CVYV衍生物的所述 的QTL或所述的抗CVYV的部分是不在它的天然遺傳背景中。這種植物可以通過本領(lǐng)域已 知的各種方法，轉(zhuǎn)基因或非轉(zhuǎn)基因而獲得。
具體實(shí)施例方式在以下的例子中進(jìn)一步說明了本發(fā)明，并不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1
甜瓜中抗CVYV的QTL的定位介紹有300個(gè)個(gè)體的F2個(gè)體群，是由易感CVYV的Galia系ML100_PI和CVYV抗性系 Cuc6491(編號(hào)為NCIMB 41582)雜交構(gòu)成的。在兩個(gè)植物的生長(zhǎng)階段，所有300個(gè)植物的的 表型是抗CVYV。隨后，使用QTL定位的方式，鑒定出連接到控制CVYV抗性的QTLs的標(biāo)記。材料與方法獲得300個(gè)ML100 X Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)的F2子二代個(gè)體葉子和來
自親本品系的葉子。用于QTL分析的表型的數(shù)據(jù)包括每一個(gè)子二代植物的抗性水平。在一個(gè)位點(diǎn)先后 兩天(2007年5月和6月)測(cè)定表型。兩個(gè)表型的等級(jí)區(qū)別如下R =抗性S=易感性結(jié)果對(duì)兩個(gè)親本品系ML 100和Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)進(jìn)行篩選，篩選出48 個(gè)來自EcoRI/Msel基質(zhì)的AFLP引物組合(PCs).表1中列有每個(gè)PC的標(biāo)記數(shù)量。表1:在MLlOOx Cuc6491 (編號(hào)為NCIMB 41582)的基因圖中每個(gè)PC被記分和定 位的標(biāo)記數(shù)
權(quán)利要求
1. 一種Miilt植物，在其染色體中包含一個(gè)遺傳成分，所述的遺傳成分包含一種抗黃 瓜黃脈病毒(CVYV)的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)toTL)，或其抗CVYV的部分，其與至少一個(gè)分子標(biāo) 記基因地連接，在此所述的分子標(biāo)記選自包括E13/M48-259.69-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID Nos 1 和 2，遷移率 259-260bp)，E16/M48-377. 36_P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 3 和 4，遷移率 377-378bp)，Ε13/Μ48461. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率和 E26/M62-076. 8-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID NOs :7和8，遷移率76_77bp)的組，并在此所述的植物對(duì) CVYV有抵抗力，且無壞死癥狀。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物，其特征在于所述的標(biāo)記選自包括E16/ M48-377. 36-P2 (擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 3 和 4，遷移率 377_378bp)和 E13/ M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 5 和 6，遷移率 261-262bp)的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述植物，其特征在于所述標(biāo)記為E13/M48461.30-P2 (擴(kuò)增 引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率 。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的植物，其特征在于所述的抗CVYV的QTL，或抗 CVYV的部分，是來自編號(hào)為NCIMB 41582的甜瓜Cuc6491。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的植物，其特征在于所述的植物不是編號(hào)為NCIMB 41582 的甜瓜 Cuc6491。
6.來自權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的植物的植物部分。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的植物部分，其特征在于所述植物部分是種子或果實(shí)。
8.生產(chǎn)抗CVYV的甜瓜種植物的方法，包括引入一個(gè)遺傳成分到所述植物的基因組 中，，該遺傳成分含有抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的QTL，或者抗CVYV的部分，其至少與一 個(gè)分子標(biāo)記遺傳地連接，所述標(biāo)記選自包括E13/M48-259.69-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID Nos 1 和 2，遷移率 259-260bp)，E16/M48-377. 36_P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 3 和 4，遷移率 377-378bp)，E13/M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率和似6/ M62-076. 8-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID NOs :7 和 8，遷移率 76_77bp)的組。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述標(biāo)記選自包括E16/ M48-377. 36-P2 (擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :3 和 4，遷移率 377_378bp)，和 E13/ M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于所述標(biāo)記為E13/M48461.30_P2(擴(kuò) 增引物SEQ ID Nos :5和6，遷移率。
11.根據(jù)權(quán)利要求8-10中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述抗CVYV的QTL或抗 CVYV的部分，是來自編號(hào)為NCIMB 41582的甜瓜Cuc6491。
12.根據(jù)權(quán)利要求8-11中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述植物不是編號(hào)為NCIMB 41582 的甜瓜 Cuc6491。
13.抗黃瓜黃脈病毒的甜瓜種棺物,可以根據(jù)權(quán)利要求8-12所述的任一方法獲得。
14.使用至少一分子標(biāo)記用于獲得一個(gè)抗黃瓜黃脈病毒的Miffi植物的應(yīng)用，所述標(biāo) 記選自包括 E13/M48-259. 69-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :1 和 2，遷移率 259460bp)，E16/ M48-377. 36-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :3 和 4，遷移率 377_378bp)，Ε13/Μ48461. 30-P2 (擴(kuò) 增引物SEQ ID Nos :5和6，遷移率和似6/M62-076. 8_P2 (擴(kuò)增引物SEQ ID NOs 7和8，遷移率76-77bp)的組。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于所述標(biāo)記選自包括E16/ M48-377. 36-P2 (擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :3 和 4，遷移率 377_378bp)，和 E13/ M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率的組。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的應(yīng)用，其特征在于所述標(biāo)記為E13/ M48-261. 30-P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos 5 和 6，遷移率 261-262bp)。
17.抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)WTL)，或其抗黃瓜黃脈病毒的部分， 遺傳地連接至少一個(gè)分子標(biāo)記，所述標(biāo)記選自包括E13/M48-259.69-P2(擴(kuò)增引物SEQ ID Nos :1 和 2，遷移率 259460bp)，E16/M48-377. 36-P2 (擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :3 禾口 4，遷移 率 377-378bp)，E13/M48-261. 30-P2 (擴(kuò)增引物 SEQ ID Nos :5 和 6，遷移率和 E26/M62-076. 8_P2(擴(kuò)增引物 SEQ ID NOs 7 和 8，遷移率 76_77bp)的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的甜瓜種植物，及其衍生的各部分，且無壞死癥狀。本發(fā)明進(jìn)一步涉及到生產(chǎn)所述植物的方法，以及根據(jù)所述方法獲得的抗黃瓜黃脈病毒的植物，及衍生自所述具有抗黃瓜黃脈病毒植物的植物部分。尤其是，本發(fā)明涉及到一種特殊的甜瓜種植物，在其染色體中包含一種遺傳成分，所述的遺傳成分包含抗黃瓜黃脈病毒(CVYV)的數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)(QTL)，或者其抗CVYV的部分，因此，其基因地連接至少一個(gè)分子標(biāo)記，所述的標(biāo)記選自包括E13/M48-259.69-P2，E16/M48-377.36-P2，E13/M48-261.30-P2和E26/M62-076.8-P2的組。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102149274SQ200880130968
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2008年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月2日
發(fā)明者南內(nèi)·馬希爾·法貝爾, 威爾斯徹·卡西斯, 安娜·貝倫·查帕塔·巴雷拉, 特雷莎·瑪莉亞·蒙托羅·蓬索達(dá), 雅各布·皮特·馬澤利烏 申請(qǐng)人:安莎種子公司