亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

用于抗炎藥物篩選的細(xì)胞模型及利用其篩選藥物的方法

文檔序號(hào):566957閱讀:3338來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:用于抗炎藥物篩選的細(xì)胞模型及利用其篩選藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種抗炎藥物篩選方法。
背景技術(shù)
炎癥是活體組織對(duì)損傷或感染產(chǎn)生的一種以防御反應(yīng)為主的病理過(guò)程。一方 面,炎癥應(yīng)答是機(jī)體針對(duì)損傷因子的防御反應(yīng),表現(xiàn)在局部血供增加,炎癥細(xì)胞 進(jìn)入炎癥部位,血清蛋白滲出,從而控制感染,清除有害抗原異物。但是,炎癥 又是一種病理過(guò)程,異常的免疫應(yīng)答也可能導(dǎo)致組織壞死,造成功能障礙,甚至 危及病人的生命。由于炎癥型疾病具有病程長(zhǎng)、易反復(fù)、難治愈等特點(diǎn),因此抗 炎藥物的開(kāi)發(fā)、評(píng)價(jià)和篩選對(duì)于炎癥性疾病的治療具有重要實(shí)際意義。
隨著大規(guī)模化合物庫(kù)的建立及組合化學(xué)、組合生物合成等新的研究領(lǐng)域的迅 猛發(fā)展,有待篩選的化合物數(shù)目顯著增多,從而對(duì)抗炎藥物篩選技術(shù)提出了更高 的要求,不僅需要更大的篩選規(guī)模和更快的篩選速度,同時(shí)也要求篩選模型能夠 準(zhǔn)確地反映被篩化合物的生物活性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的不同,抗炎藥物的篩選可以 在分子水平、細(xì)胞水平和動(dòng)物整體水平進(jìn)行。分子水平篩選模型能針對(duì)特定靶點(diǎn) 的單指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),但無(wú)法對(duì)化合物的生物活性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。動(dòng)物水平的篩選
模型可以反映藥物在體內(nèi)的整體效果,但成本較高、藥物作用機(jī)制不明確,不適 于高通量篩藥。與分子水平和動(dòng)物水平的篩選模型相比,細(xì)胞水平的篩選成本較 低,作用機(jī)制明確,更能適應(yīng)高通量篩藥的需求。目前,科研人員主要利用永生 化的人或嚙齒類動(dòng)物的細(xì)胞系進(jìn)行抗炎藥物的篩選。這種篩選方式能夠?qū)崿F(xiàn)藥物 的快速篩選,但由于體外培養(yǎng)的永生化細(xì)胞已失去體內(nèi)細(xì)胞的一些活性和特征, 篩選結(jié)果不能完全反映藥物在體內(nèi)的作用情況。
研究表明,原代培養(yǎng)的細(xì)胞與生物體內(nèi)細(xì)胞性狀相似性大,更能反映細(xì)胞在 體內(nèi)真實(shí)的功能狀態(tài)。因此將原代培養(yǎng)的細(xì)胞模型應(yīng)用到抗炎藥物的篩選將會(huì)彌
補(bǔ)當(dāng)前篩藥方法的不足。原代培養(yǎng)的細(xì)胞比永生化的細(xì)胞系更能代表體內(nèi)的炎癥 發(fā)生過(guò)程,因此,用于藥物篩選的原代細(xì)胞模型能夠?yàn)榛衔锟寡谆钚缘脑u(píng)價(jià)提 供更為可靠的工具。
炎癥是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,炎癥發(fā)生過(guò)程涉及到多種細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子的 釋放。其中,巨噬細(xì)胞是參加炎癥反應(yīng)的一種重要的細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是IL-la、 IL-lp、 TNF-a和IL-6等細(xì)胞因子的主要來(lái)源。其中,人白細(xì)胞介素1|3作為前炎性 細(xì)胞因子,是一種強(qiáng)有力的免疫調(diào)節(jié)物質(zhì),它能夠刺激炎癥細(xì)胞黏附分子的表達(dá)、 花生四烯酸釋放、誘導(dǎo)NO合成。IL-lp使機(jī)體對(duì)感染和損傷產(chǎn)生系統(tǒng)或局部的反 應(yīng),在慢性和急性炎癥反應(yīng)、發(fā)熱反應(yīng)及膿毒性休克中起著重要的作用。此外, 人白細(xì)胞介素1P可以刺激機(jī)體產(chǎn)生氧自由基,導(dǎo)致細(xì)胞損害。大量研究表明IL-115 參與炎癥性疾病的發(fā)生,在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性結(jié)腸炎、腦缺血等疾病中是 重要的調(diào)節(jié)介質(zhì)。研究表明,抑制血漿中人白細(xì)胞介素1|3活性可以減輕炎癥反應(yīng) 程度。因此開(kāi)發(fā)以人白細(xì)胞介素1|3基因?yàn)榘袠?biāo)的抗炎藥物將具有重大的社會(huì)意義 和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
IL-Luc轉(zhuǎn)基因小鼠為一種可用于抗炎癥藥物篩選的工具小鼠(Li L, Fei Z, Ren J, et al. Functional imaging of interleukin 1 beta expression in inflammatory process using bioluminescence imaging in transgenic mice.BMC Immunol.2008,9:49)。該小鼠的基因組中含有一基因表達(dá)盒,該表達(dá)盒從5'到3'端依次具有以 下元件白介素1P啟動(dòng)子,報(bào)告基因,終止子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種抗炎藥物篩選的巨噬細(xì)胞模型。 本發(fā)明的另一目的是提供一種含有該巨噬細(xì)胞模型用于抗炎藥物篩選的試
劑盒
本發(fā)明的另一目的是提供一種利用轉(zhuǎn)基因小鼠原代巨噬細(xì)胞進(jìn)行抗炎藥物 篩選的方法。
具體來(lái)說(shuō)本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)達(dá)到本發(fā)明的目的,主要包括以下幾
個(gè)步驟'
第一步分離并培養(yǎng)IL-klC轉(zhuǎn)基因小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞;
第二步在原代培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中加入待篩選的化合物預(yù)處理巨噬細(xì)胞;
第三步利用炎癥激發(fā)因子誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥的發(fā)生,建立巨噬細(xì)胞炎癥模
型;
第四步檢測(cè)化合物處理組與未處理組細(xì)胞報(bào)告基因的表達(dá)水平,評(píng)估化合 物的抗炎效果。
本發(fā)明建立了一種高效、可靠的抗炎藥物篩選細(xì)胞模型。本發(fā)明首先分離 了人白細(xì)胞介素1P啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)熒光素酶報(bào)告基因(IL-LUC)轉(zhuǎn)基因小鼠的腹
腔巨噬細(xì)胞。在該巨噬細(xì)胞中含有一基因表達(dá)盒,該表達(dá)盒從5'到3'端依次具
有以下元件人白細(xì)胞介素1P啟動(dòng)子,熒光素素酶基因,終止子。本發(fā)明實(shí) 施例所使用的炎癥相關(guān)因子的啟動(dòng)子是IL-ip,根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思,其他的炎 癥相關(guān)因子例如IL-la啟動(dòng)子、TNF-a啟動(dòng)子、IL-6啟動(dòng)子也可以應(yīng)用于該方 法。
在原代培養(yǎng)的IL-Luc轉(zhuǎn)基因小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞中加入炎癥激發(fā)因子激 發(fā)細(xì)胞中炎癥的發(fā)生。常規(guī)的炎癥激發(fā)因子包括脂多糖LPS、酵母聚糖、IL-lot、 TNF-ct、 IL-6、唑酮、病原微生物及其代謝產(chǎn)物。在脂多糖LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì) 胞模型中,單孔細(xì)胞量為1.0-9.9 x 104個(gè),每孔R(shí)PMI-1640培養(yǎng)基為10(^1 , 在培養(yǎng)基中加入LPS的終濃度范圍為20ng/ml- 2pg/ml;在酵母聚糖誘導(dǎo)的巨 噬細(xì)胞模型中,單孔細(xì)胞量為1.0-9.9 x 104個(gè),每孔11 ]^1- 1640培養(yǎng)基為10(Hd, 在培養(yǎng)基中加入酵母聚糖的終濃度范圍為5(Vg/ml- 500ng/ml。 LPS和酵母聚糖 的最佳濃度分別為100ng/ml和125昭/ml。利用原代培養(yǎng)的IL-luc轉(zhuǎn)基因小鼠 的腹腔巨噬細(xì)胞建立細(xì)胞炎癥模型為本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)之一。在這種模型中,熒 光素酶基因的表達(dá)水平可反映出前炎癥因子人白細(xì)胞介素lp的表達(dá)水平,從 而反映出細(xì)胞的炎癥發(fā)生過(guò)程和程度。然后,我們將巨噬細(xì)胞炎癥模型用于抗 炎藥物的篩選。通過(guò)化合物抑制報(bào)告基因表達(dá)的程度來(lái)評(píng)價(jià)化合物的抗炎活 性。
本發(fā)明所建立的抗炎藥物篩選系統(tǒng)兼具了常規(guī)細(xì)胞篩藥模型和動(dòng)物篩藥 模型的優(yōu)點(diǎn)。主要表現(xiàn)在
1、 本發(fā)明以原代培養(yǎng)的轉(zhuǎn)基因小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為工具細(xì)胞,該細(xì)胞能 夠模擬體內(nèi)炎癥發(fā)生過(guò)程,與細(xì)胞株相比更接近生理狀態(tài),結(jié)果更可靠;
2、 本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定的特點(diǎn),適合大規(guī)模篩藥;
3、 本發(fā)明所建立的篩選方法靈敏度高,104個(gè)巨噬細(xì)胞即可進(jìn)行單孔實(shí)驗(yàn);
4、 本發(fā)明所建立的篩選方法成本較低, 一只轉(zhuǎn)基因小鼠可收獲約106個(gè)腹 腔巨噬細(xì)胞,可同時(shí)用于多組藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。
5、 本發(fā)明選用人白細(xì)胞介素1P基因?yàn)榘悬c(diǎn)進(jìn)行藥物篩,作用機(jī)制明確。


圖h LPS誘導(dǎo)熒光素酶表達(dá)的巨噬細(xì)胞數(shù)量梯度
圖2: LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞熒光素酶表達(dá)時(shí)間曲線(11=3;與0小時(shí)比較* <0.01鄭 <0.05)
圖3:酵母聚糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞熒光素酶表達(dá)的時(shí)間曲線(11=3;與0小時(shí)比較* < 0.01;#p<0.05)
圖4: LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥模型中地塞米松對(duì)熒光素酶表達(dá)的抑制效果圖
(11=3;與空白對(duì)照組比較fp〈0.01;與LPS誘導(dǎo)組比較#p<0.05) 圖5:酵母聚糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞模型中地塞米松對(duì)熒光素酶表達(dá)的抑制效果圖 (r^3;與空白對(duì)照比較* <0.01;與酵母聚糖誘導(dǎo)組比較#p<0.05)
具體實(shí)施例方式
一、 分離培養(yǎng)IL-luc轉(zhuǎn)基因小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞
1、 脫臼處死成年IL-luc轉(zhuǎn)基因小鼠(該轉(zhuǎn)基因小鼠由上海南方模式生物科 技發(fā)展有限公司實(shí)驗(yàn)室制備,制備方法參考文獻(xiàn)Li L, Fei Z, Ren J, et al. Functional imaging of interleukin 1 beta expression in inflammatory process using bioluminescence imaging in transgenic mice. BMC Immunol.2008, 9:49),放入75 %酒精中浸泡消毒。腹腔注射無(wú)血清的RPMI-1640培養(yǎng)液5 ml,仰臥平放并輕 揉小鼠腹部,靜置5min。
2、 無(wú)菌條件下打開(kāi)小鼠腹腔,吸取腹腔液,1000r/min離心10min,棄上清, 用PBS洗滌2遍后顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
3、 用含10。/。胎牛血清和抗生素(青霉素100U/ml,鏈霉素100ng/ml)的 RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞至密度為l()S個(gè)/ml,接種于96孔板內(nèi)(每孔100pl培 養(yǎng)基),置于37匸,5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、 培養(yǎng)2h后吸去上清液,用PBS漂洗兩遍,以去掉未貼壁細(xì)胞。然后在孔 板中加入含10%胎牛血清和抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液,置于在37。C, 5% C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)獲得的巨噬細(xì)胞經(jīng)臺(tái)朌藍(lán)染色可鑒定細(xì)胞存活率達(dá)95%。 一只小鼠可收 獲約106個(gè)腹腔巨噬細(xì)胞。
二、 利用炎癥激發(fā)因子激發(fā)巨噬細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng) 細(xì)胞培養(yǎng)液中加入各種炎癥激活因子(脂多糖LPS或酵母聚糖)后,置于
37°C, 5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)若干小時(shí)。原代培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞在炎癥激發(fā)因子的 刺激下,細(xì)胞內(nèi)的炎癥因子得以大量表達(dá),此時(shí)的巨噬細(xì)胞為發(fā)生炎癥反應(yīng)的巨 噬細(xì)胞。在n,-l"r.轉(zhuǎn)基因小鼠的巨噬細(xì)胞中,人白細(xì)胞介素lp基因的啟動(dòng)子在 炎癥激發(fā)因子的誘導(dǎo)下可驅(qū)動(dòng)熒光素酶基因的大量表達(dá)。熒光素酶基因的表達(dá)狀 況可反映細(xì)胞的炎癥發(fā)生情況。
為了確定完成一次實(shí)驗(yàn)所需的細(xì)胞數(shù)量,本發(fā)明進(jìn)行了細(xì)胞數(shù)量梯度實(shí)驗(yàn) (圖l)。結(jié)果表明,7200個(gè)細(xì)胞即可檢測(cè)到明顯的熒光素酶活性,明顯低于常 規(guī)量。在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中,我們將細(xì)胞數(shù)量控制在1.0-9.9 xW個(gè)/ L。目前在大多 數(shù)篩藥細(xì)胞模型中,每孔細(xì)胞的用量均在105以上。本發(fā)明中104個(gè)/孔細(xì)胞即可 得到理想的結(jié)果,應(yīng)用本發(fā)明所述的巨噬細(xì)胞篩藥模型體現(xiàn)了節(jié)約成本的優(yōu)點(diǎn)。
LPS激發(fā)巨噬細(xì)胞炎癥發(fā)生過(guò)程如圖l所示,LPS誘導(dǎo)3h后,可以檢測(cè)到 熒光素酶在細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá),隨后熒光素酶表達(dá)量下降。加入LPS24h后,細(xì)胞 內(nèi)熒光素酶活性恢復(fù)到本底值。在酵母聚糖誘發(fā)的巨噬細(xì)胞炎癥模型中,細(xì)胞內(nèi) 熒光素酶的表達(dá)量在3h時(shí)達(dá)到峰值,隨后表達(dá)量下降(如圖2)。三、利用巨噬細(xì)胞炎癥模型評(píng)價(jià)化合物的抗炎效果(所有檢測(cè)試劑購(gòu)于Promega 公司)
1、 將分離所得的轉(zhuǎn)基因小鼠巨噬細(xì)胞以104個(gè)/孔接種于96孔板中,37 °C培 養(yǎng)60h。
2、 將細(xì)胞分為a、 b、 c三組。在a組細(xì)胞培養(yǎng)液中加被篩選化合物,b組細(xì) 胞培養(yǎng)液中加安慰劑(例如酵母聚糖),置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min。
3、 在a、 b組細(xì)胞中加入炎癥激發(fā)因子,誘導(dǎo)若干小時(shí)。c組細(xì)胞為空白對(duì) 照組。
4、 吸去三組細(xì)胞的培養(yǎng)液,用PBS洗2遍。
5、 加入lxCCLR50ul/孔覆蓋細(xì)胞,反應(yīng)10分鐘。
6、 充分吹打細(xì)胞,將裂解后的液體移入離心管,12,000xg離心15s。
7、 將40ul細(xì)胞抽提液與100ul的Luciferase Assay Reagent (室溫平衡)用 槍頭混勻。
8、 將管子放入PCT半自動(dòng)定量分析儀Luninometer中,檢測(cè)熒光值。
9、 評(píng)價(jià)化合物的抗炎效果?;衔飳?duì)炎癥反應(yīng)的抑制率定義為(l-a樣品的 熒光值/b樣品的熒光值)xlOO%。
熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)水平的變化可反映被篩選化合物對(duì)人白細(xì)胞介素1(3 基因表達(dá)的抑制情況。也就是說(shuō)在巨噬細(xì)胞炎癥模型中,加藥組a與對(duì)照組b中 熒光素酶基因表達(dá)水平的差異可用來(lái)評(píng)價(jià)該化合物針對(duì)人白細(xì)胞介素1|3基因耙 點(diǎn)的抗炎效果。 實(shí)施例
地塞米松是一種具有抗炎、抗內(nèi)毒素及增強(qiáng)應(yīng)激反應(yīng)等藥理作用的皮質(zhì)激素 類藥物。在炎癥反應(yīng)中地塞米松可調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放。我們利用 IL-luc轉(zhuǎn)基因小鼠巨噬細(xì)胞炎癥模型評(píng)價(jià)地塞米松的抗炎效果。
1、 將分離所得的轉(zhuǎn)基因小鼠巨噬細(xì)胞以104個(gè)/孔接種于96孔板中。細(xì)胞培 養(yǎng)60h后,加地塞米松于細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi),使其終濃度為lpM。然后將細(xì)胞放于 37 °C , 5 % C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min。
2、 細(xì)胞培養(yǎng)液中分別加入LPS或酵母聚糖使其終濃度分別為100ng/ml或 125嗎/ml,置于37'C, 5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3h。
3、 吸去培養(yǎng)液,以PBS洗滌細(xì)胞2次。
4、 每孔細(xì)胞加入50^1 CCLR裂解細(xì)胞。
5、 充分吹打細(xì)胞,將裂解后的液體移入離心管,12,000xg離心15s。
6、 將40ul細(xì)胞抽提液與100ul的Luciferase Assay Reagent (室溫平衡)用 槍頭混勻。
7、 將管子&AJ ,iminometer中,檢測(cè)熒光值f
結(jié)果如圖4、 5所示,在LPS或酵母聚糖誘發(fā)的巨噬細(xì)胞炎癥模型中,地塞 米松可顯著地(P<0.05, !1=3 =抑制人白細(xì)胞介素1(3基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素 酶基因的表達(dá)。
權(quán)利要求
1. 一種用于抗炎藥物篩選的細(xì)胞模型,是原代培養(yǎng)的人白細(xì)胞介素1β啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)熒光素酶報(bào)告基因轉(zhuǎn)基因小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,該細(xì)胞中含有報(bào)告基因表達(dá)盒,該表達(dá)盒從5’到3’端依次含有以下元件炎癥相關(guān)因子的啟動(dòng)子,熒光素酶基因,PolyA信號(hào)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的細(xì)胞模型,其特征在于所述炎癥相關(guān)因子的啟動(dòng)子選自IL-1(3啟動(dòng)子、IL-la啟動(dòng)子、TNF-a啟動(dòng)子、IL-6啟動(dòng)子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞模型,其特征在于所述炎癥相關(guān)因子的啟動(dòng)子 是人白細(xì)胞介素1P啟動(dòng)子或稱作IL-ip啟動(dòng)子。
4. 一種用于抗炎藥物篩選的試劑盒,其特征在于含有權(quán)利要求1或2或3所 述的腹腔巨噬細(xì)胞和炎癥激發(fā)因子;所述炎癥激發(fā)因子選自脂多糖LPS、酵 母聚糖、IL-la、 TNF-a、 IL-6、唑酮、病原微生物及其代謝產(chǎn)物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于其中單孔細(xì)胞量為1.0-9.9 x 104 個(gè)腹腔巨噬細(xì)胞,每孔R(shí)PMI-1640培養(yǎng)基為lOOpl;使用脂多糖時(shí),LPS的 終濃度范圍為20ng/ml-2嗎/ml,優(yōu)選80-120 ng/ml;使用酵母聚糖時(shí),酵母 聚糖的濃度范圍為50ixg/ml-500^ig/ml,優(yōu)選100-150嗎/ml。
6. —種利用巨噬細(xì)胞炎癥模型篩選抗炎藥物的方法,包括1) 分離并原代培養(yǎng)人白細(xì)胞介素1P啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)熒光素酶報(bào)告基因IL-Iuc轉(zhuǎn) 基因小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞;將分離所得的轉(zhuǎn)基因小鼠巨噬細(xì)胞以1.0-9.9 x 104 個(gè)/孔接種于%孔板中,37 °C培養(yǎng)50-70h;2) 在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入待篩選的化合物,放于37'C, 5%C02培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)20-60min;3) 細(xì)胞培養(yǎng)液中加入炎癥激發(fā)因子,誘導(dǎo)若干小時(shí),利用炎癥激發(fā)因子激 發(fā)巨噬細(xì)胞炎癥的發(fā)生;洗滌后測(cè)定報(bào)告基因的表達(dá)水平,評(píng)估化合物的抗 炎效果。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于炎癥激發(fā)因子包括脂多糖LPS、 酵母聚糖、IL-la、 TNF-a、 IL-6、唑酮、病原微生物及其代謝產(chǎn)物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法,其特征在于其中單孔細(xì)胞量為1.0-9.9 x 104個(gè)腹腔巨噬細(xì)胞,每孔R(shí)PMI-1640培養(yǎng)基為IOO叫使用脂多糖時(shí),LPS 的終濃度范圍為20ng/ml-2嗎/ml,優(yōu)選80-120 ng/ml;使用酵母聚糖時(shí),酵 母聚糖的濃度范圍為5(Htg/ml-50(Hig/ml,優(yōu)選100-150嗎/ml。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法,其特征在于用熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá) 水平來(lái)反映人白細(xì)胞介素lp的表達(dá)水平;以被篩化合物抑制熒光素酶報(bào)告 基因表達(dá)的程度來(lái)評(píng)價(jià)該待篩選化合物針對(duì)人白細(xì)胞介素1|3靶標(biāo)的抗炎效 果。
全文摘要
本發(fā)明建立了一種以人白細(xì)胞介素1β基因?yàn)榘袠?biāo)的高效、可靠的抗炎藥物篩選原代細(xì)胞模型及篩選方法。本發(fā)明分離并原代培養(yǎng)了一種導(dǎo)入了人白細(xì)胞介素1β啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞,經(jīng)炎癥激發(fā)因子誘導(dǎo)建立了巨噬細(xì)胞炎癥模型。在該模型中可通過(guò)測(cè)定被篩選化合物抑制報(bào)告基因表達(dá)的程度來(lái)評(píng)價(jià)化合物的抗炎活性。本發(fā)明所建立的藥物篩選模型是一種靈敏、高效、可靠、適于高通量抗炎藥物篩選的細(xì)胞模型。
文檔編號(hào)C12N5/10GK101463343SQ200810205078
公開(kāi)日2009年6月24日 申請(qǐng)日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者李利妹, 王鑄鋼, 華 荊, 儉 費(fèi) 申請(qǐng)人:同濟(jì)大學(xué);上海南方模式生物科技發(fā)展有限公司
網(wǎng)友詢問(wèn)留言 已有0條留言
  • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1