專利名稱：食用百合的脫毒快繁技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用百合的脫毒快繁技術(shù)，尤其是一種針對宜興 百合，具有高脫毒效率和快速繁殖效率的組培快繁技術(shù)。
背景技術(shù)：
百合病毒病分布廣，危害大，是食用百合生產(chǎn)和鮮切花生產(chǎn)中的 主要病害之一，受到全世界的重視。近年來，隨著我國百合引種數(shù)量 和種植面積的迅速增加，以及不規(guī)范的種球自繁自用，病毒病開始在我國各百合種植區(qū)流行， 一般發(fā)病率在40~50%， 二代種球的帶毒率 在90%以上。百合感染病毒后，終身帶毒，長期受害，破壞植株正常 的生理機能，主要表現(xiàn)為生長勢下降，黃化、花葉等病毒癥狀；通過 蟲牙蟲等昆蟲介體傳播，擴大了病毒的危害范圍；由于病毒危害，使食 用百合產(chǎn)量下降，品質(zhì)變劣，觀賞百合的商品花降級；病毒尚難以用 化學藥劑或生物制劑進行直接有效防治。因此，防止百合感染病毒病 的應對策略是采用脫毒培養(yǎng)技術(shù)獲得脫毒苗，隔離繁殖、生產(chǎn)健康種 球，并在各個生產(chǎn)環(huán)節(jié)進行嚴格的病毒檢測。百合品種繁多，根據(jù)用途可分為藥用百合、食用百合和觀賞百合， 此前誘導百合進行快繁的工藝主要集中在對培養(yǎng)基的選擇上。專利申請?zhí)?00710068034.4公開了一種對觀賞型雜交百合的脫 毒快繁方法，誘導培養(yǎng)基為MS + 6BA 1.0~2.0 mg/L + IBA 0.1 0.5 mg/L+AC 1.0 3.0 mg/L，而增殖培養(yǎng)基為MS + 6BA 0.2 1.0mg/L + IBA 0.1~0.5 mg/L。但是觀賞百合與食用百合的表征差別迥異，因此用于快繁技術(shù)的培養(yǎng)基也因品種而異。食用百合作為保健藥用特種蔬菜深受消費者的喜愛，隨著人們消 費水平的提高，生產(chǎn)和消費量逐年遞增。宜興百合、蘭州百合、龍牙 百合是為三大食用百合，其中又以宜興百合種植面積最大、產(chǎn)量最高， 其有味苦而甘的特殊風味，鱗莖富含淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、礦質(zhì)等營 養(yǎng)成份，并有補中益氣、理脾健胃、寧心安神等多種藥用功能，被稱 為補品藥百合，歷史上就享有"太湖之參"的美稱。常用于與銀耳、綠 豆、苡米、蓮心等制作清熱甜品等。常規(guī)百合繁殖方法為小鱗莖繁殖， 繁殖系數(shù)低，易感染病毒，影響其經(jīng)濟價值。安徽霍山縣農(nóng)民在宜興 百合種植過程中由于病毒感染產(chǎn)量下降，栽培面積達幾萬畝的種球需 要更換為脫毒的優(yōu)良種球。專利號ZL03135142.5公開了食用百合中蘭州百合的快速繁殖方 法，其鱗片不定芽的誘導和快繁培養(yǎng)基為MS+BA2mg/L+NAA0.2 mg/L。但該發(fā)明主要集中在快繁工藝上，本發(fā)明是對食用百合脫毒 組培苗進行快繁，繁殖系數(shù)達15倍以上，具有一定的實用價值。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種食用百合脫毒快繁技 術(shù)，在獲得脫毒組培苗的同時進行快速繁殖，迅速建立基數(shù)極大的脫 毒無性系。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是 一種食用百合脫 毒快繁技術(shù)，依序包括取食用百合莖尖經(jīng)啟動、繼代壯苗，獲得脫 毒百合組培苗，經(jīng)檢測為無病毒后，通過壯苗誘導再生鱗球，再生鱗 球片誘導叢生芽或不定芽，叢生芽或不定芽繼代、壯苗后再誘導再生 鱗球，再生鱗球片再誘導叢生芽或不定芽，如此交替循環(huán)，進行批量擴繁，其中，所述的脫毒百合組培苗培養(yǎng)步驟包括第一步，取食用百合種球經(jīng)過沙培7 10天，剝?nèi)ネ鈱喻[片，清洗消毒后，在解剖鏡下剝生長點，剖取0.1 0.2mm大小的莖尖作為擴繁 起始材料；第二步，微莖尖接種在啟動培養(yǎng)基MS + 6BA 0.5 2.5 mg/L+NAA 0.1~0.5 mg/L上培養(yǎng)，暗培養(yǎng)3~4天后轉(zhuǎn)光培養(yǎng)獲得脫毒百合組培苗， 其中，培養(yǎng)溫度均為24±2°C ，光照強度2000 3000 Lx，光照時間12~14 小時/天。本發(fā)明所述的擴繁起始材料為食用百合微莖尖，微莖尖經(jīng)上述培 養(yǎng)獲得脫毒百合組培苗，經(jīng)檢測無病毒后擴繁。在上述方案基礎上，所述的繼代壯苗是將脫毒百合組培苗在繼代 壯苗培養(yǎng)基MS + 6BA0 2.5 mg/L+NAA 0.1-0.5 mg/L上繼代、壯苗， 培養(yǎng)溫度為24士2。C，光照強度2000 3000Lx，光照時間12~14小時/ 天。 .所述的誘導再生鱗球是將所述繼代壯苗后的成苗在誘導再生鱗 球和生根培養(yǎng)基1/2MS + 6BA 0 1.0 mg/L+NAA 0 0.5 mg/L上誘導 再生鱗球，培養(yǎng)條件為溫度24士2t:，光照強度2000 3000 Lx，光照 時間12~14小時/天，生長30 60天可獲得脫毒食用百合組培種球。所述的誘導不定芽是將脫毒食用百合組培種球鱗片植于啟動培 養(yǎng)基上誘導不定芽，培養(yǎng)條件為溫度24±2°C，光照強度2000 3000 Lx，光照時間12~14小時/天。本發(fā)明研究了鱗片誘導不定芽、叢生芽增殖、葉片切塊誘導不定 芽、鱗片誘導鱗球四種增殖方式，并進行比較，其中，(1)鱗片誘導不定芽將百合鱗片橫切成兩段，基端基部接種，尖 端切口接種在培養(yǎng)基上誘導不定芽。(2) 葉片切塊誘導新生芽百合組培無菌苗葉片切成0.5cm左右的小段，在培養(yǎng)基上誘導不定芽，比較葉片不同部位發(fā)生不定芽的能力， 結(jié)果以葉片基部不定芽誘導率最高。(3) 叢生芽增殖在不同培養(yǎng)基上誘導叢生芽增殖。(4) 鱗片誘導鱗球取百合鱗片直接誘導鱗球，通過鱗球直接增殖 的方式進行擴繁。結(jié)論是鱗片誘導不定芽繁殖率最高，繁殖速度最快。 在上述方案的基礎上，所述的食用百合微莖尖經(jīng)啟動、繼代壯苗 后獲得脫毒百合組培苗，經(jīng)檢測為無病毒后，通過壯苗誘導再生鱗球、 再生鱗球片誘導叢生芽或不定芽，叢生芽或不定芽繼代、壯苗后再誘 導再生鱗球、再生鱗球片再誘導叢生芽或不定芽，如此交替循環(huán)，進 行批量擴繁。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明突破了以往的百合脫毒快繁工藝，選取0.1~0.2 mm大小 的百合莖尖培養(yǎng)，由微生長點培養(yǎng)成活、啟動增殖、繁殖成無性系， 經(jīng)檢測，病毒檢測無病毒率高達100%，并在高脫毒成功率的同時實 現(xiàn)百合的工廠化組培快繁。
具體實施方式
一種食用百合脫毒快繁技術(shù)，依序包括取食用百合微莖尖經(jīng)啟動、繼代壯苗后獲得脫毒百合組培苗，經(jīng)檢測為無病毒后，通過壯苗 誘導再生鱗球，再生鱗球片誘導叢生芽，叢生芽繼代、壯苗后再誘導 再生鱗球、再生鱗球片再誘導不定芽，如此交替循環(huán)，進行批量擴繁，其中，所述的脫毒百合組培苗培養(yǎng)包括下述步驟第一步，取食用百合種球經(jīng)過沙培7 10天，剝?nèi)ネ鈱喻[片，清洗消毒后，在解剖鏡下剝生長點，切取0.1-0.2 mm大小的莖尖；第二步，微莖尖接種在啟動培養(yǎng)基MS + 6BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L上培養(yǎng)，暗培養(yǎng)3 4天后轉(zhuǎn)光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度均為24士2。C，光 培養(yǎng)的光照強度為2000~3000 Lx，光照時間為12~14小時/天。在上 述條件下培養(yǎng)，微莖尖培養(yǎng)成活率達58.9%，所得組培苗病毒檢測無 病毒率達100%。在繼代壯苗培養(yǎng)基MS + 6BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L繼代、壯 苗，培養(yǎng)溫度為24士2。C，光照強度2000~3000 Lx，光照時間12~14 小時/天。將所述繼代壯苗后的成苗在誘導再生鱗球和生根培養(yǎng)基1/2MS + 6BA0 mg/L+NAA0.1 mg/L上誘導再生鱗球，培養(yǎng)溫度為24±2°C， 光照強度2000 3000Lx，光照時間12 14小時/天，生長45天可獲得 脫毒食用百合組培種球。將食用百合組培種球鱗片植于啟動培養(yǎng)基MS + 6BA 0.8 mg/L + NAA 0.1 mg/L上誘導叢生芽，培養(yǎng)溫度為24±2°C ，光照強度 2000~3000 Lx，光照時間12 14小時/天。叢生芽經(jīng)繼代成苗后又可 誘導再生鱗球，如此交替循環(huán)，可進行大批量擴繁，其擴繁系數(shù)可達 15倍以上。--種食用百合脫毒快繁技術(shù)，在實施例1的基礎上，再生鱗球片誘導不定芽，依序包括取食用百合微莖尖經(jīng)啟動、繼代壯苗后獲得 脫毒百合組培苗，經(jīng)檢測為無病毒后，通過壯苗誘導再生鱗球，再生 鱗球片誘導不定芽，不定芽繼代、壯苗后再誘導再生鱗球、再生鱗球 片再誘導不定芽，如此交替循環(huán)，進行批量擴繁，其中，所述的脫毒百合組培苗培養(yǎng)步驟包括第一步，取食用百合種球經(jīng)過沙培7 10天，剝?nèi)ネ鈱喻[片，清洗消毒后，在解剖鏡下剝生長點，剖取0.1 0.2mm大小的莖尖作為擴繁 起始材料；第二步，微莖尖接種在啟動培養(yǎng)基MS + 6BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L上培養(yǎng)，暗培養(yǎng)3 4天后轉(zhuǎn)光培養(yǎng)獲得脫毒百合組培苗，其中， 培養(yǎng)溫度均為24士2。C，光照強度2000~3000 Lx，光照時間12~14小 時/天，可得脫毒百合組培苗。將脫毒百合組培苗在繼代壯苗培養(yǎng)基MS + 6BA 2.5 mg/L+NAA 0.1mg/L上繼代、壯苗，培養(yǎng)溫度為24士2。C，光照強度2000~3000Lx， 光照時間12~14小時/天。將所述繼代壯苗后的成苗在誘導再生鱗球和生根培養(yǎng)基1/2MS + 6BA 0 mg/L+NAA 0.5 mg/L上誘導再生鱗球，培養(yǎng)條件為溫度 24士2。C，光照強度2000 3000Lx，光照時間12 14小時/天，生長35 天可獲得脫毒食用百合組培種球。將脫毒食用百合組培種球鱗片植于啟動培養(yǎng)基MS + 6BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L上誘導不定芽，培養(yǎng)條件為在光培養(yǎng)溫度為 24±2°C，光照強度2000 3000 Lx，光照時間12 14小時/天。不定芽 經(jīng)繼代成苗后又可誘導再生鱗球，如此交替循環(huán)，可進行大批量擴繁。
權(quán)利要求
1、一種食用百合的脫毒快繁技術(shù)，依序包括取食用百合莖尖經(jīng)啟動、繼代壯苗，獲得脫毒百合組培苗，經(jīng)檢測為無病毒后，通過壯苗誘導再生鱗球，再生鱗球片誘導叢生芽或不定芽，叢生芽或不定芽繼代、壯苗后再誘導再生鱗球，再生鱗球片再誘導叢生芽或不定芽，如此交替循環(huán)，進行批量擴繁，其特征在于，所述的脫毒百合組培苗培養(yǎng)步驟包括第一步，取食用百合種球經(jīng)過沙培7～10天，剝?nèi)ネ鈱喻[片，清洗消毒后，在解剖鏡下剝生長點，剖取0.1～0.2mm大小的莖尖作為擴繁起始材料；第二步，微莖尖接種在啟動培養(yǎng)基MS+6BA 0.5～2.5mg/L+NAA0.1～0.5mg/L上培養(yǎng)，暗培養(yǎng)3～4天后轉(zhuǎn)光培養(yǎng)獲得脫毒百合組培苗，其中，培養(yǎng)溫度均為24±2℃，光照強度2000～3000Lx，光照時間12～14小時/天。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用百合的脫毒快繁技術(shù)，其特征在于 所述的繼代壯苗是將脫毒百合組培苗在繼代壯苗培養(yǎng)基MS + 6BA 0 2.5 mg/L+NAA 0.1~0.5 mg/L上繼代、壯苗，培養(yǎng)溫度為24士2。C ， 光照強度2000 3000 Lx，光照時間12 14小時/天。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的食用百合的脫毒快繁技術(shù)，其特征在于 所述的誘導再生鱗球是將所述繼代壯苗后的成苗在誘導再生鱗球和 生根培養(yǎng)基1/2MS + 6BA 0~1.0 mg/L+NAA 0 0.5 mg/L上誘導再生 鱗球，培養(yǎng)條件為溫度24士2。C，光照強度2000-3000 Lx，光照時間 12 14小時/天，生長30 60天可獲得脫毒食用百合組培種球。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用百合的脫毒快繁技術(shù)，其特征在于 所述的再生鱗球片誘導不定芽是將脫毒的食用百合組培種球鱗片植于啟動培養(yǎng)基上誘導叢生芽，培養(yǎng)條件為溫度24士2。C，光照強度2000 3000Lx，光照時間12 14小時/天。
5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的食用百合的脫毒快繁技術(shù)，其特征在于 所述的擴繁起始材料為食用百合微莖尖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種食用百合的脫毒快繁技術(shù)，依序包括取食用百合莖尖經(jīng)啟動、繼代壯苗，獲得脫毒百合組培苗，通過壯苗誘導再生鱗球，再生鱗球片誘導叢生芽或不定芽，叢生芽或不定芽繼代、壯苗后再誘導再生鱗球，再生鱗球片再誘導叢生芽或不定芽，如此交替循環(huán)，進行批量擴繁，所述的脫毒百合組培苗培養(yǎng)步驟包括取食用百合種球經(jīng)過沙培7～10天，剝?nèi)ネ鈱喻[片，清洗消毒后，在解剖鏡下剝生長點，剖取0.1～0.2mm大小的莖尖作為擴繁起始材料；微莖尖接種在啟動培養(yǎng)基MS+6BA 0.5～2.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L上培養(yǎng)，暗培養(yǎng)3～4天后轉(zhuǎn)光培養(yǎng)獲得的脫毒百合組培苗病毒檢測病毒率高達100％，可實現(xiàn)工廠化組培快繁。
文檔編號C12N5/04GK101233826SQ20081003418
公開日2008年8月6日 申請日期2008年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月3日
發(fā)明者寅 唐, 宋學孟, 張承妹, 章振華, 麗 陳, 陳明亮 申請人:上海光兆植物速生技術(shù)有限公司