專利名稱：治療和預(yù)防神經(jīng)退行性疾病和紊亂的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
總體而言，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病和紊亂的方法。具體來(lái)講， 本發(fā)明涉及使用抑制Lp-PLA2蛋白活性和/或表達(dá)的試劑來(lái)治療和/或預(yù)防與血腦屏障通 透性異常有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病和紊亂的方法。
背景技術(shù)：
脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2 (Lp-PLA2)此前在本領(lǐng)域也被稱為血小板活化因子乙酰水解 酶(PAF乙酰水解酶)，它是參與脂蛋白脂或脂蛋白磷脂水解的磷脂酶A2超家族的成員之 一。它由數(shù)種在對(duì)損傷產(chǎn)生全身性炎癥反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用的細(xì)胞進(jìn)行分泌，所述細(xì)胞包 括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞。在低密度脂蛋白(LDL)轉(zhuǎn)化為其氧化形式期間，Lp-PLA2負(fù)責(zé)將氧化修飾的磷脂酰 膽堿的sn-2酯水解得到溶血磷脂酰膽堿和氧化修飾的脂肪酸。Lp-PLA2水解與氧化型LDL 有關(guān)的截短型磷脂的sn2位置。結(jié)果生成了兩種炎性細(xì)胞歸巢(homing)介體非酯化脂肪 酸(NEFA)和溶血磷脂酰膽堿(LYSO PC)。NEFA和LYSO PC都是用于循環(huán)單核細(xì)胞的趨化 劑(chemoattractants)，起到激活巨噬細(xì)胞的作用，增加氧化應(yīng)激并影響T淋巴細(xì)胞的功 能反應(yīng)和即時(shí)反應(yīng)。在人和豬的體內(nèi)，Lp-PLA2通過(guò)脂蛋白B與LDL分子相結(jié)合，而一旦處 于動(dòng)脈壁中，氧化型LDL則容易被Lp-PLA2水解。這些Lp-PLA2作用的產(chǎn)物都是可用于循環(huán)單核細(xì)胞的潛在的趨化劑。因而該酶被 認(rèn)為造成了負(fù)載有膽固醇酯的細(xì)胞在動(dòng)脈中的積聚，導(dǎo)致了與早期動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)的特 征性“脂肪條紋(fatty streak)”，而對(duì)所述的Lp-PLA2酶的抑制可用于預(yù)防該脂肪條紋的 形成(通過(guò)抑制溶血磷脂酰膽堿的形成)以及治療動(dòng)脈粥樣硬化。此外，人們還提出，Lp-PLA2在LDL氧化過(guò)程中起到直接作用。這是由于在Lp-PLA2 作用下由多不飽和脂肪酸衍生的脂類過(guò)氧化物產(chǎn)物可以促進(jìn)并增強(qiáng)整個(gè)氧化過(guò)程。與這 一想法相一致，Lp-PLA2抑制劑抑制了 LDL的氧化。因此，Lp-PLA2抑制劑通常可應(yīng)用于同 時(shí)涉及脂質(zhì)過(guò)氧化作用和酶活性的任何紊亂，舉例來(lái)說(shuō)除了例如動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病的 病癥之外的其他病癥，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌梗死和再灌注損傷。許多神經(jīng)紊亂的臨床管理失敗的原因在于退行性神經(jīng)疾病、損傷性神經(jīng)疾病或破 壞性神經(jīng)疾病的進(jìn)行性以及可用的藥理學(xué)試劑的有限的功效和嚴(yán)重的副作用。諸如亨廷頓 病、阿爾茨海默病、帕金森病以及嚴(yán)重的發(fā)作性疾病(例如癲癇和家族性自主神經(jīng)異常)等 病癥已經(jīng)逃避了最為常規(guī)的用以緩解或治療所述病癥的藥理學(xué)嘗試。癡呆是一種進(jìn)行性腦功能障礙，會(huì)導(dǎo)致對(duì)日常活性限制的逐漸增加。最廣為人知 的類型為阿爾茨海默病。其影響了 65歲以上人口的大約10 %以及80歲以上人口的大約 40%。目前在美國(guó)大約有四百五十萬(wàn)人正受到這一疾病的折磨；并且由于這一人口統(tǒng)計(jì)的 人數(shù)是我們的社會(huì)中增長(zhǎng)最快的部分，預(yù)計(jì)上述的患病人數(shù)會(huì)在未來(lái)的幾年里迅速上升。 到2050年，如果沒(méi)有可用的預(yù)防性治療手段，患有阿爾茨海默病的美國(guó)人的數(shù)量預(yù)計(jì)將達(dá) 到目前的三倍(從四百六十萬(wàn)到一千四百萬(wàn))，并且在美國(guó)照顧此類患病人群的成本每年
4將達(dá)到1000億美元。從人類的痛苦和金錢(qián)的成本兩方面來(lái)說(shuō)，這一流行病與社會(huì)有極大的關(guān)聯(lián)。血管性癡呆被定義為由因心血管疾病和心血管病變?cè)斐傻娜毖阅X損傷、缺血缺 氧性腦損傷或出血性腦損傷所引起的認(rèn)知功能喪失。請(qǐng)參見(jiàn)例如G. C. Roman, Med. Clin. North. Am. ,86, pp. 477-99 (2002)。血管性癡呆是一種慢性進(jìn)行性紊亂。血管性癡呆的癥 狀包括認(rèn)知喪失、頭痛、失眠和記憶喪失。血管性癡呆可由多個(gè)腔隙引起，也可由低灌注 損害諸如邊緣帶梗死和缺血性腦室周圍腦白質(zhì)病(Binswanger氏癥)引起。請(qǐng)參見(jiàn)上述 G. C. Roman的記載。在亞洲國(guó)家諸如中國(guó)、日本和韓國(guó)，60%以上的癡呆患者觀察到患有血 管性癡呆。典型的對(duì)血管性癡呆的治療包括對(duì)危險(xiǎn)因素的控制(即，高血壓、糖尿病、高脂飲 食、吸煙、高纖維蛋白原血癥、高同型半胱氨酸血癥、直立性低血壓、心律失常)。請(qǐng)參見(jiàn)上 述G. C. Roman的記載。研究人員還研究了激素替代療法和雌激素替代療法是否能夠在婦 女中延緩癡呆的發(fā)病。請(qǐng)參見(jiàn)E. Hogervorst等人，Cochrane Database Syst. Rev.，3， ⑶003799 (2002)。然而，這一激素替代療法具有不利的副作用。此外，雖然阿斯匹林已經(jīng)廣泛地用于治療血管性癡呆，但只有很有限的證據(jù)證明 阿斯匹林在治療血管性癡呆患者方面是切實(shí)有效的。請(qǐng)參見(jiàn)，P. S. Williams等人，Cochrane Database Syst. Rev. ,2, CD001296 (2000)。尼莫地平作為在血管性癡呆患者體內(nèi)短期 見(jiàn)效的藥物可能具有一定作用，但尚未證實(shí)其能夠作為一種長(zhǎng)期的抗癡呆藥物。請(qǐng)參見(jiàn) J. MLopez-Arrieta 禾口 J.Birks，Cochrane Database Syst. Rev. ，3，CD000147 (2002)。此 外，吡拉西坦的臨床功效數(shù)據(jù)并不支持這一藥物在治療癡呆或認(rèn)知障礙方面的用途。請(qǐng)參 見(jiàn) L Flicker 禾口 G. Grimley Evans, CochraneDatabase Syst. Rev.，2，CD001011 (2001)。迄今為止，還沒(méi)有治療手段能夠預(yù)防血管性癡呆或終止阿爾茨海默病。對(duì)于處 于所述疾病早期和中期的人來(lái)說(shuō)，當(dāng)前的藥物(Cognex、Aric印t、Exelon、Razadyne和 Namenda)能夠在有限的時(shí)間內(nèi)減輕一部分癥狀。由于腦內(nèi)炎癥能促使阿爾茨海默病，已經(jīng) 在臨床試驗(yàn)中對(duì)非留類抗炎藥物(NSAID、Vioxx, Aleve, Celebrex)進(jìn)行了測(cè)試，并沒(méi)有顯 示出有益效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及通過(guò)對(duì)Lp-PLA2進(jìn)行抑制例如對(duì)Lp-PLA2蛋白活性和/或表達(dá)進(jìn)行抑 制來(lái)治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病和紊亂的方法。在特定的實(shí)施方式中，通過(guò)本發(fā)明所 述方法進(jìn)行治療和/或預(yù)防的神經(jīng)退行性疾病與血腦屏障(BBB)功能異常有關(guān)(例如患有 通透性血腦屏障的神經(jīng)退行性疾病)，所述神經(jīng)退行性疾病包括例如但不限于阿爾茨海 默病、亨廷頓病、帕金森病和血管性癡呆等。在一個(gè)實(shí)施方式中，本文所公開(kāi)的方法包括對(duì)需要治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性疾 病的受試者給予包含抑制Lp-PLA2試劑(例如抑制Lp-PLA2表達(dá)和/或Lp-PLA2蛋白活性 的試劑)的藥物組合物。這并非意味著本發(fā)明僅限于所述疾病的任何特定階段(例如早期 或晚期)。在本文所公開(kāi)的某些實(shí)施方式中，提供了通過(guò)對(duì)Lp-PLA2進(jìn)行抑制，例如對(duì) Lp-PLA2表達(dá)進(jìn)行抑制和/或?qū)p-PLA2蛋白活性進(jìn)行抑制來(lái)預(yù)防血腦屏障滲漏的方法。相
5應(yīng)地，某些實(shí)施方式提供了通過(guò)阻斷酶活性來(lái)抑制Lp-PLA2的方法，某些實(shí)施方式提供了通 過(guò)減少和/或下調(diào)Lp-PLA2RNA的表達(dá)來(lái)抑制Lp-PLA2的方法。在某些實(shí)施方式中，血腦屏 障滲漏或通透性血腦屏障的預(yù)防和/或減輕實(shí)現(xiàn)了與神經(jīng)退行性疾病或紊亂有關(guān)癥狀的 預(yù)防和/或減輕。一方面，本文所公開(kāi)的方法提供了治療和/或預(yù)防受試者體內(nèi)神經(jīng)退行性紊亂或 疾病的方法，其中，所述的方法包括對(duì)有需求的受試者給予包含抑制Lp-PLA2蛋白活性和/ 或表達(dá)的試劑的藥物組合物。在這一實(shí)施方式中，這一神經(jīng)退行性疾病可以為例如阿爾茨 海默病、血管性癡呆、帕金森病和亨廷頓病，但不限于此。在另一實(shí)施方式中，所述的神經(jīng)退 行性疾病或紊亂與血腦屏障異常有關(guān)。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述的被給予抑制所述的 Lp-PLA2蛋白活性或表達(dá)的試劑的受試者為人。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了對(duì)患有血管性癡呆或有患血管性癡呆風(fēng)險(xiǎn)的 受試者進(jìn)行治療和/或預(yù)防的方法，所述方法包括對(duì)所述受試者給予包含抑制Lp-PLA2蛋 白活性和/或表達(dá)的試劑的藥物組合物，其中，對(duì)所述Lp-PLA2蛋白的抑制減輕或終止血管 性癡呆的癥狀。在某些實(shí)施方式中，所述血管性癡呆與阿爾茨海默病有關(guān)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了對(duì)需求的受試者治療和/或預(yù)防與血腦屏障 異常有關(guān)的疾病或紊亂的方法，所述方法包含對(duì)所述受試者給予包含抑制Lp-PLA2蛋白表 達(dá)和/或活性的試劑的藥物組合物。在某些實(shí)施方式中，所述的血腦屏障異常為通透性血 腦屏障；在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述的疾病或紊亂為神經(jīng)退行性疾病或紊亂。這類神經(jīng)退 行性疾病和紊亂例如血管性癡呆、阿爾茨海默病、帕金森病和亨廷頓病等，但不限于此。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了減輕β淀粉樣蛋白(被稱作“Αβ ”)在受試 者腦中積聚的方法，所述方法包括對(duì)所述的受試者給予包含抑制Lp-PLA2蛋白活性和/或 表達(dá)的試劑的藥物組合物，其中，對(duì)Lp-PLA2蛋白的抑制減輕或終止β淀粉樣蛋白在腦中 積聚的癥狀。在某些實(shí)施方式中，所述β淀粉樣蛋白為Αβ-42。在某些實(shí)施方式中，所述抑制Lp-PLA2的試劑能夠抑制Lp-PLA2的表達(dá)，例如對(duì) Lp-PLA2RNA的翻譯以生成Lp-PLA2蛋白的抑制。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述抑制Lp-PLA2的 試劑能夠抑制1^寸1^2蛋白活性。任何試劑均包含在內(nèi)以供本文所公開(kāi)的方法中使用。在某 些實(shí)施方式中，所述試劑可以是小分子、核酸、核酸類似物、蛋白、抗體、肽、適體(aptamer) 或其變體或片段。在某些實(shí)施方式中，所述試劑為核酸試劑，例如但不限于RNAi試劑，例如 siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA或核酶或其變體，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，所述抑制Lp-PLA2蛋白活性的試劑為小分子，例如Lp-PLA2蛋 白的小分子可逆抑制劑或不可逆抑制劑，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，這一小分子為基 于嘧啶酮的化合物。在某些實(shí)施方式中，Lp-PLA2的小分子抑制劑例如1-(Ν-(2-二乙基氨基 乙基)-N-(4-(4-三氟甲基苯基)芐基)_氨基羰基甲基)-2-(4_氟芐基)硫基-5，6-三亞 甲基嘧啶-4-酮(也被稱為SB480848)或其鹽，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，Lp-PLA2的 小分子抑制劑例如N- (2- 二乙基氨基乙基)-2- (2- (2- (2，3- 二氟苯基)乙基)-4-氧代-4， 5，6，7_四氫-環(huán)戊烯并嘧啶-1-基)-N-(4'-三氟甲基-聯(lián)苯基-4-基甲基)乙酰胺或其 鹽，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，Lp-PLA2的小分子抑制劑例如N-(1-(2-甲氧基乙基) 哌啶-4-基)-2- (2- (2，3- 二氟芐基硫基)-4-氧代-4H-喹啉-1-基]-N- (4 ‘-三氟甲基 聯(lián)苯基-4-基甲基)乙酰胺或其鹽，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，Lp-PLA2的小分子抑制
6劑例如2-[4-({[2-[2-(2，3_ 二氟苯基)乙基]-4-氧代吡啶并[2，3_d]嘧啶_1(4H)_基] 乙?；鶀{[4'-(三氟甲基)-4_聯(lián)苯基]甲基}氨基)-1_哌啶基]-2-甲基丙酸甲酯或其 鹽，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，所述的神經(jīng)退行性疾病導(dǎo)致了認(rèn)知功能的衰退，舉例來(lái)說(shuō)所 述神經(jīng)退行性疾病例如阿爾茨海默病和/或血管性癡呆，用本文所公開(kāi)的方法治療和/或 預(yù)防所述疾病的方法可進(jìn)一步包括在給予所述包含抑制Lp-PLA2表達(dá)和/或活性的試劑 的藥物組合物之后，對(duì)受試者的認(rèn)知功能進(jìn)行評(píng)估。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，本文所公開(kāi)的用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病方法 和/或治療和/或預(yù)防受試者血腦屏障異常的方法可進(jìn)一步包括通過(guò)評(píng)估腦血流量或血 腦屏障功能對(duì)治療進(jìn)行監(jiān)控。這類方法可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員進(jìn)行，例如但不限于評(píng)估 tau和A β -42在腦脊液(CSF)中的存在。在某些對(duì)受試者給予包含Lp-PLA2抑制劑的藥物組合物的實(shí)施方式中，所述方法 可進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者給予附加治療劑，例如用于治療神經(jīng)退行性紊亂的治療劑，但 不限于此。舉例來(lái)說(shuō)，在所述神經(jīng)退行性紊亂為例如阿爾茨海默病的情況下，可對(duì)所述受 試者進(jìn)一步給予用于治療阿爾茨海默病的治療劑，所述治療劑例如ARICEPT或多奈哌齊 (donepezil)、⑶GNEX或塔克林(tacrine)、EXEL0N或利伐斯的明(rivastigmine)、REMINYL 或加蘭他敏(galantamine)、抗淀粉樣蛋白疫苗、降Αβ療法、腦力練習(xí)或精神刺激，但不限 于此。在某些實(shí)施方式中，本文所公開(kāi)的用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的方法適 用于受試者例如哺乳動(dòng)物受試者。在某些實(shí)施方式中，所述受試者為人。


圖1顯示出DM/HC誘導(dǎo)的出血和血腦屏障滲漏的證據(jù)。圖A顯示與圖B中的DM/ HC腦相比對(duì)照腦中沒(méi)有出血，黑色箭頭顯示血管外的炎性細(xì)胞，白色箭頭顯示炎性細(xì)胞在 內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附的增加。圖C顯示與圖D所示的DM/HC動(dòng)物的腦中血腦屏障滲漏相比， 對(duì)照動(dòng)物體內(nèi)不具有血管通透性并且血腦屏障無(wú)損傷，C和D中的箭頭顯示小血管周圍免 疫球蛋白(Ig)陽(yáng)性的“滲漏暗影”(leak cloud)的邊緣。圖2顯示了 DM/HC腦中滲漏的免疫球蛋白與神經(jīng)元結(jié)合并誘導(dǎo)樹(shù)突萎陷 (dendrite collapse).左邊和右邊的圖顯示了具有特征性樹(shù)突萎陷的免疫球蛋白陽(yáng) 性(Ig-pos)神經(jīng)元，該樹(shù)突萎陷通過(guò)從神經(jīng)元細(xì)胞體形成的樹(shù)突主干的“螺旋狀形 態(tài)” (corkscrew morphology)所不的那樣。圖3顯示了 DM/HC誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的證據(jù)，顯示了在用DM/HC處理的動(dòng) 物腦中“病態(tài)神經(jīng)元”(sick neurons)附近，作為活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物的GFAP免疫 染色。圖4顯示了 DM/HC誘導(dǎo)的A β -42在神經(jīng)元和局部腦微血管內(nèi)的積聚。圖A顯示 了對(duì)A β -42呈強(qiáng)的免疫陽(yáng)性的神經(jīng)元以及顯示出A β -42在血管平滑肌層沉淀(腦血管淀 粉樣變性)的小動(dòng)脈，圖B顯示了對(duì)Αβ -42呈免疫陽(yáng)性的神經(jīng)元具有能指示樹(shù)突萎縮的 “螺旋狀樹(shù)突”(corkscrewdendrites)。圖5顯示了所述的Lp-PLA2抑制劑可防止血腦屏障滲漏以及免疫球蛋白同神經(jīng)元
7的結(jié)合。圖A至F為未治療的DM/HC動(dòng)物(η = 6)的腦的血腦屏障損傷(通透性)的代表 性圖像，圖G至圖L為用所述的Lp-PLA2抑制劑治療的DM/HC動(dòng)物(η = 6)腦中的類似區(qū) 域的無(wú)損傷血腦屏障的代表性圖像。相比于圖G-L，圖A-F顯示了大量的免疫球蛋白從局部 腦微血管向腦組織中的滲漏以及免疫球蛋白與神經(jīng)元的結(jié)合。圖6顯示了所述的Lp-PLA2抑制劑在DM/HC動(dòng)物體內(nèi)通過(guò)阻斷血漿組分(包括免 疫球蛋白)從血管流出保護(hù)了神經(jīng)元的健康。結(jié)果，免疫球蛋白被封閉于用Lp-PLA2抑制 劑治療的DM/HC動(dòng)物的血管腔，使得小動(dòng)脈壁和神經(jīng)元均對(duì)免疫球蛋白呈免疫陰性。圖7顯示了 Lp-PLA2抑制劑可防止A β-42在神經(jīng)元中的積聚。圖A-F為未治療的 DM/HC動(dòng)物(η = 6)的腦的A β-42免疫染色的代表性圖像，圖G-L為用Lp-PLA2抑制劑治療 的DM/HC動(dòng)物(η = 6)腦中的類似區(qū)域A β-42免疫染色的代表性圖像。如圖A-F所示，與 圖G-L中對(duì)A β -42呈免疫陰性的神經(jīng)元相比，A β-42的免疫反應(yīng)性的增加顯示了 A β -42 與神經(jīng)元的結(jié)合及其在神經(jīng)元中的積聚。圖8顯示出所述Lp-PLA2抑制劑減少了腦血管淀粉樣變性。圖A顯示了在未進(jìn)行 治療的DM/HC動(dòng)物腦中小動(dòng)脈的平滑肌細(xì)胞層中的A β -42免疫染色(即，腦血管淀粉樣變 性)，相比之下，圖B顯示在用Lp-PLA2抑制劑進(jìn)行治療的DM/HC動(dòng)物的腦的類似區(qū)域幾乎 沒(méi)有動(dòng)脈A β-42免疫染色。圖9顯示了豬腦的代表性圖像，圖A中顯示的是完整的無(wú)損傷的腦，而圖B中顯示 的是沿中線對(duì)切的腦，箭頭標(biāo)明了腦干和海馬體的位置，同時(shí)腦部區(qū)域的網(wǎng)格可用于免疫 組織化學(xué)分析。
具體實(shí)施例方式如本文所公開(kāi)，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了對(duì)于有血管性癡呆病理特點(diǎn)(包括血腦屏障滲 漏、通透性血腦屏障以及出血)傾向的動(dòng)物，當(dāng)用Lp-PLA2抑制劑對(duì)其進(jìn)行治療時(shí)，發(fā)現(xiàn)了 其顯示出血腦屏障通透性病癥和癥狀的減輕以及血腦屏障異常的減輕。例如，用Lp-PLAji 制劑治療的動(dòng)物顯示出血腦屏障通透性的降低、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化的減少以及神經(jīng)元損傷 的減少。特別地，用Lp-PLA2抑制劑治療的動(dòng)物還具有較少的淀粉樣蛋白積聚，例如β-淀 粉樣蛋白(或Αβ-42)在腦以及腦脈管系統(tǒng)中的積聚。因此，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了 Lp-PLA2抑制 劑可用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病和紊亂，尤其是與血腦屏障功能異常有關(guān)的神經(jīng) 退行性疾病和紊亂，例如具有血腦屏障通透性或血腦屏障通透性增加的神經(jīng)退行性疾病。 這類疾病包括例如血管性癡呆、阿爾茨海默病、亨廷頓病和帕金森病等，但不限于此。^JL為方便起見(jiàn)，將在整個(gè)申請(qǐng)(包括說(shuō)明書(shū)、實(shí)施例和附加的權(quán)利要求書(shū))中所使用 的特定術(shù)語(yǔ)集中于此。除非另有定義，本文所使用的全部技術(shù)術(shù)語(yǔ)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本發(fā)明所 屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“神經(jīng)退行性疾病”是指以神經(jīng)組織和/或神經(jīng)組織功能的漸 行性喪失為特性的各類中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂。神經(jīng)退行性疾病是一類神經(jīng)性的紊亂或疾病， 所述神經(jīng)性疾病的特征在于神經(jīng)組織的漸行性喪失和/或神經(jīng)性功能的改變，作為神經(jīng)組 織漸行性喪失的結(jié)果通常造成神經(jīng)性功能的降低。用本文所描述的方法進(jìn)行預(yù)防和/或治 療的神經(jīng)退行性疾病為存在血腦屏障異常例如通透性血腦屏障的神經(jīng)退行性疾病。存在血
8腦屏障缺陷的神經(jīng)退行性疾病的實(shí)例包括例如阿爾茨海默病、亨廷頓病、帕金森病和血管 性癡呆等，但不限于此。術(shù)語(yǔ)“血管性癡呆”在本領(lǐng)域中也被稱為“多梗死性癡呆”，是指一組由全部會(huì)導(dǎo)致 腦內(nèi)血管病變的不同機(jī)理所引起的病癥。血管性癡呆的主要亞型為例如血管性輕微認(rèn)知 障礙、多梗死性癡呆、由于關(guān)鍵性單梗死(影響丘腦、大腦前動(dòng)脈、頂葉或扣帶回)引起的血 管性癡呆、由于出血性病變引起的血管性癡呆、小血管疾病(包括例如由于腔隙性病變引 起的血管性癡呆以及Binswanger氏癥)和混有血管性癡呆的阿爾茨海默病。術(shù)語(yǔ)“疾病，，或“紊亂，，在本文中可互換使用，是指身體或部分器官在狀態(tài)方面的 改變，對(duì)于患病的人或與他接觸的人來(lái)說(shuō)，所述的疾病或紊亂中斷或干擾了功能的進(jìn)行和/ 或?qū)е铝酥T如不適、功能障礙、痛苦乃至死亡等癥狀。疾病或紊亂還涉及身體狀況欠佳、失 常、微恙、痼疾、生病、疾患、病癥、失調(diào)或異常相關(guān)。術(shù)語(yǔ)“血腦屏障”或“BBB”在本文中可互換使用，是指存在于穿過(guò)腦組織的血管中 的通透性屏障，可嚴(yán)格限制并嚴(yán)密調(diào)節(jié)在血液和腦組織之間所交換的物質(zhì)。所述血腦屏障 的組成部分包括構(gòu)成所有血管最內(nèi)層襯里的內(nèi)皮細(xì)胞、在與所述血腦屏障的結(jié)構(gòu)相關(guān)的相 鄰內(nèi)皮細(xì)胞之間的緊密連接、內(nèi)皮細(xì)胞基底膜以及覆蓋了血管幾乎所有暴露的外表面的位 于星形膠質(zhì)細(xì)胞附近延伸的足突。所述的血腦屏障可防止血液中大多數(shù)的物質(zhì)進(jìn)入腦組 織，包括大多數(shù)的大分子(諸如免疫球蛋白、抗體、補(bǔ)體、白蛋白和藥物)以及小分子。術(shù)語(yǔ)“血腦屏障異?！笔侵秆X屏障功能障礙，例如血腦屏障不允許血腦屏障功能 良好時(shí)可正常通過(guò)的分子通過(guò)，所述分子例如營(yíng)養(yǎng)物和糖(如葡萄糖)。血腦屏障異常還可 以指血腦屏障可透過(guò)血腦屏障功能正常時(shí)通常會(huì)排斥的分子，在本文中通常被稱為“通透 性血腦屏障”。術(shù)語(yǔ)“血腦屏障通透性”或“通透性血腦屏障”通常被本領(lǐng)域人員稱為“血腦屏障 滲漏”。上述的兩個(gè)術(shù)語(yǔ)在本文中可互換使用，是指血腦屏障完整性受損以及血管通透性增 加。舉例來(lái)說(shuō)，通透性血腦屏障允許在血腦屏障無(wú)損傷時(shí)通常會(huì)排斥在腦組織外的分子通 過(guò)血腦屏障，這些分子例如免疫球蛋白分子、補(bǔ)體蛋白、血清白蛋白和許多其他的蛋白。用 以測(cè)定存在通透性血腦屏障的分析可以為，例如評(píng)估血管外的免疫球蛋白在腦組織中的存 在，所述免疫球蛋白在血腦屏障功能正常時(shí)(即血腦屏障不具有通透性時(shí))通常被限制于 血管腔。術(shù)語(yǔ)“試劑”是指在所述的細(xì)胞中通常不存在或不以所給予的水平存在的任何實(shí) 體(entity)。試劑可選自于包括下列物質(zhì)的組化學(xué)制劑；小分子；核酸序列；核酸類似 物；蛋白；肽；適體；抗體；或其片段。核酸序列可為RNA或DNA，且可為單鏈的或雙鏈的，并 可選自于包括下列物質(zhì)的組對(duì)所關(guān)注蛋白進(jìn)行編碼的核酸、寡聚核苷酸、核酸類似物(例 如肽核酸(PNA)、假互補(bǔ)PNA(pc-PNA)、鎖核酸(LNA)等)。這類核酸序列包括例如但不限 于對(duì)蛋白例如作為轉(zhuǎn)錄抑制因子的蛋白進(jìn)行編碼的核酸序列、反義分子、核酶、小的抑制性 的核酸序列例如但不限于RNAi、shRNAi, siRNA、微RNAi (mRNAi)、反義寡聚核苷酸等。蛋 白和/或肽或其片段可為任何所關(guān)注的蛋白，例如但不限于突變蛋白；治療蛋白和截短蛋 白，其中，所述的蛋白在所述的細(xì)胞中通常不存在或以較低水平表達(dá)。蛋白還可選自于包 括下列物質(zhì)的組突變蛋白、基因工程蛋白、肽、合成的肽、重組蛋白、嵌合蛋白、抗體、中體 (midibodies)、微型抗體、三鏈抗體(triabodies)、人源化蛋白、人源化抗體、嵌合抗體、修
9飾蛋白及其片段?；蛘?，所述試劑通過(guò)將核酸序列引入細(xì)胞內(nèi)并在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄使得在 細(xì)胞內(nèi)生成Lp-PLA2的核酸和/或蛋白抑制劑，結(jié)果是該試劑存在于所述細(xì)胞內(nèi)部。在某 些實(shí)施方式中，所述試劑為任何化學(xué)試劑、實(shí)體或基團(tuán)，包括但不限于合成的非蛋白實(shí)體和 天然存在的非蛋白實(shí)體。在特定的實(shí)施方式中，所述試劑為具有化學(xué)基團(tuán)的小分子。舉例 來(lái)說(shuō)，化學(xué)基團(tuán)包括未取代或取代的烷基基團(tuán)、芳香基團(tuán)或雜環(huán)基團(tuán)(包括大環(huán)內(nèi)酯、細(xì)霉 素及相關(guān)天然產(chǎn)物或其類似物)。試劑已知可具有所希望的活性和/或性質(zhì)，或者可選自于 不同化合物的庫(kù)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“抑制”的意思是Lp-PLA2蛋白或其變體或同源蛋白的表達(dá)或活 性降低至一定程度和/或持續(xù)一段時(shí)間，該表達(dá)或活性的降低程度或者持續(xù)時(shí)間足以產(chǎn)生 所需要的效果。所述活性的降低可歸因于對(duì)Lp-PLA2 —個(gè)或多個(gè)特征的影響，包括通過(guò)抑 制Lp-PLA2的輔因子或通過(guò)以某種程度的親合力與Lp-PLA2結(jié)合以減少其催化活性，這樣得 到的結(jié)果可治療或預(yù)防神經(jīng)退行性紊亂或血腦屏障異常例如通透性血腦屏障。特別地，對(duì) Lp-PLA2的抑制可以使用對(duì)Lp-PLA2抑制的進(jìn)行分析的方法進(jìn)行測(cè)量，例如通過(guò)使用本文所 公開(kāi)的對(duì)Lp-PLA2蛋白進(jìn)行生物測(cè)定的方法進(jìn)行測(cè)量，但不限于此。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“Lp_PLA2”是指通過(guò)本文所公開(kāi)的方法所抑制的蛋白靶點(diǎn)。 Lp-PLA2和脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2可互換使用，此前在本領(lǐng)域中其也被稱為血小板活化因子 乙酰水解酶(PAF乙酰水解酶)。對(duì)人的Lp-PLA2進(jìn)行編碼的核酸對(duì)應(yīng)于登錄號(hào)U20157(SEQ ID NO :1)或RefSeq ID :NM_005084 (SEQ ID NO :2)，而人的 Lp-PLA2 所對(duì)應(yīng)的蛋白序列對(duì)應(yīng) 于登錄號(hào)NP_005075 (SEQ ID NO :3)，上述內(nèi)容公開(kāi)于美國(guó)專利申請(qǐng)5，981，252，本文將其 整體具體引入作為參考。本文所使用的“基因沉默”或“沉默的基因”與RNAi分子(例如SiRNA或miRNA) 的活性有關(guān)，是指相對(duì)于不存在miRNA或RNA干擾分子情況下細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的mRNA水平， 對(duì)于靶基因的mRNA水平減少了至少約5 %、約10 %、約20 %、約30 %、約40 %、約50 %、約 60 %、約70 %、約80 %、約90 %、約95 %、約99 %、約100 %。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所 述mRNA水平減少了至少約70%、約80%、約90%、約95%、約99%、約100%。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“RNAi”是指任何類型的干擾RNA，包括但不限于siRNAi、 shRNAi、內(nèi)源性的微RNA(MicroRNA)和人工微RNA。舉例來(lái)說(shuō)，其包括此前被確定為siRNA 的序列，而與所述RNA的下游加工過(guò)程無(wú)關(guān)(即，雖然siRNAs被認(rèn)為具有特異性體內(nèi)加工 從而實(shí)現(xiàn)切割mRNA的方法，但這類序列仍可以被整合到載體中的本文所描述的側(cè)翼序列 的鄰近序列)。本文所使用的“siRNA”是指可形成雙鏈RNA的核酸，當(dāng)所述siRNA存在或被表達(dá) 于相同的細(xì)胞中作為所述靶基因時(shí)，該雙鏈RNA具有能夠減少或抑制基因或靶基因表達(dá)例 如Lp-PLA2W能力。所述的雙鏈RNAsiRNA可由所述互補(bǔ)鏈形成。在一個(gè)實(shí)施方式中，siRNA 是指可形成雙鏈siRNA的核酸。所述siRNA的序列可與全長(zhǎng)靶基因或其子序列相對(duì)應(yīng)。通 常，所述siRNA的長(zhǎng)度為至少約15-50個(gè)核苷酸(例如，所述雙鏈siRNA的每個(gè)互補(bǔ)序列的 長(zhǎng)度為約15-50個(gè)核苷酸，并且所述雙鏈siRNA的長(zhǎng)度為約15-50個(gè)堿基對(duì)，優(yōu)選約19-30 個(gè)堿基的核苷酸，更優(yōu)選約20-25個(gè)核苷酸，例如長(zhǎng)度為20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或30個(gè)核苷酸)。本文所使用的“shRNA”或“小發(fā)夾RNA” (也稱作莖環(huán))是一種siRNA。在一個(gè)實(shí)
10施方式中，這類shRNA按下述方式組成先是短的(例如約19個(gè)至約25個(gè)核苷酸)反義 鏈，接著是約5個(gè)至約9個(gè)核苷酸形成的核苷酸環(huán)和類似的有義鏈?；蛘?，所述有義鏈可先 于所述核苷酸環(huán)結(jié)構(gòu)，所述反義鏈可在該環(huán)結(jié)構(gòu)之后。在本文中可互換使用的術(shù)語(yǔ)“微RNA”或“miRNA”為內(nèi)源性RNA，其中一部分已知 可將蛋白編碼基因調(diào)節(jié)為轉(zhuǎn)錄后水平。內(nèi)源性的微RNA為天然存在于基因組中的、能調(diào)節(jié) mRNA的生產(chǎn)性利用(productiveutilization)的小RNA。術(shù)語(yǔ)“人工微RNA”包括除了內(nèi)源 性的微RNA以外的、能調(diào)節(jié)mRNA的生產(chǎn)性利用的任何種類的RNA序列。微RNA序列已經(jīng)在一 些出版物中進(jìn)行了描述，例如 Lim 等人，Genes&Development，17,p. 991-1008(2003) ；Lim 等 人，Science，299，1540 (2003) ；Lee 和 Ambros，Science, 294，862 (2001) ；Lau 等人，Science， 294,858-861 (2001) ；Lagos-Quintana 等人，Current Biology,12,735-739(2002)； Lagos Quintana 等人，Science, 294，853-857 (2001)；以及 Lagos-Quintana 等人，RNA, 9, 175-179(2003)，在此將其引入作為參考。多重微RNA還可以被整合到前體分子中。此外， 出于通過(guò)miRNA和/或RNAi途徑對(duì)內(nèi)源性基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)的目的，miRNA樣的莖環(huán)可 在細(xì)胞中被表達(dá)出來(lái)作為輸送人工miRNA和短干擾RNA(siRNAs)的載體。本文所使用的“雙鏈RNA”或“dsRNA”是指由兩條鏈組成的RNA分子。雙鏈分子包 括由將自身折回后形成雙鏈結(jié)構(gòu)的單個(gè)RNA分子組成的分子。舉例來(lái)說(shuō)，單鏈miRNA來(lái)源 的祖分子(被稱作前miRNA，Bartel等人，2004，Cell 116 :281_297)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)包括dsRNA 分子。術(shù)語(yǔ)“患者”、“受試者”和“個(gè)體”在本文中可互換使用，是指提供給治療(包括預(yù) 防性治療)的動(dòng)物，尤其是人。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“受試者”是指人以及非人動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“非 人動(dòng)物”以及“非人哺乳動(dòng)物”在本文中可互換使用，其包括全部的脊椎動(dòng)物，例如哺乳動(dòng) 物，例如非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(特別是高級(jí)靈長(zhǎng)類動(dòng)物)、綿羊、狗、嚙齒類動(dòng)物(例如小鼠或大 鼠)、豚鼠、山羊、豬、貓、兔、牛；以及非哺乳動(dòng)物，例如雞、兩棲動(dòng)物、爬行動(dòng)物等。在一個(gè)實(shí) 施方式中，所述受試者為人。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述受試者為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或作為疾病模 型的替代動(dòng)物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“基因”可為包含轉(zhuǎn)錄序列和/或翻譯調(diào)節(jié)序列和/或編碼區(qū)域 和/或非翻譯序列的基因組基因(例如內(nèi)含子、5'-及3'-未翻譯的序列和調(diào)節(jié)序列)。 所述的基因編碼區(qū)域可為編碼氨基酸序列的核苷酸序列或功能性RNA例如tRNA、rRNA、 催化RNA、siRNA、miRNA和反義RNA?；蜻€可以是對(duì)應(yīng)于所述編碼區(qū)域(例如外顯子和 miRNA)的mRNA或cDNA，所述編碼區(qū)域可任選包含與之相連接的5 ‘-及3 ‘-未翻譯的序 列?；蜻€可以是體外生成的擴(kuò)增的核酸分子，所述核酸分子包含全部或部分的所述編碼 區(qū)域和/或與之相連接的5'-及3'-未翻譯的序列。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“核酸”或“寡聚核苷酸”或“多聚核苷酸”的意思是以共價(jià)鍵連 接在一起的至少兩個(gè)核苷酸。本領(lǐng)域的人員可以理解的是，對(duì)單鏈的描述也定義了所述互 補(bǔ)鏈的序列。因此，核酸也包含了所描述的單鏈的互補(bǔ)鏈。本領(lǐng)域的人員還可以理解的是， 核酸的多種變體可被用于與給定的核酸相同的目的。因此，核酸也包含了實(shí)質(zhì)上相同的核 酸及其補(bǔ)體。本領(lǐng)域的人員還可以理解的是，單鏈提供了在嚴(yán)格的雜交條件下可雜交至所 述靶序列的探針。因此，核酸也包含了在嚴(yán)格的雜交條件下可進(jìn)行雜交的探針。核酸可為單鏈的或雙鏈的，或可同時(shí)含有雙鏈序列和單鏈序列的部分。所述的核
11酸可為DNA(基因組DNA和cDNA)、RNA或雜合體，其中所述核酸可含有脫氧核糖核苷酸和 核糖核苷酸的組合以及堿基的組合，所述堿基包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌 呤、肌苷、黃嘌呤、次黃嘌呤、異胞嘧啶和異鳥(niǎo)嘌呤。核酸可通過(guò)化學(xué)合成方法或通過(guò)重組方 法得到。核酸通常含有磷酸二酯鍵，盡管至少有一個(gè)不同的鍵的核酸類似物也可包括在 內(nèi)，例如氨基磷酸酯鍵、硫代磷酸酯鍵、二硫代磷酸酯鍵或0-甲基氨基磷酸酯鍵以及肽核 酸的骨架和鍵。其他的核酸類似物包括具有帶正電主鏈的核酸類似物、具有非離子主鏈的 核酸類似物以及具有非核糖主鏈的核酸類似物，包括在美國(guó)專利5，235，033和5，034，506 中所描述的核酸類似物，在此將其引入作為參考。含有一個(gè)或多個(gè)非天然存在的核苷酸或 修飾核苷酸的核酸也包括在核酸的定義之內(nèi)。所述的修飾核苷酸類似物可位于例如所述 核酸分子的5'-端和/或3'-端。核苷酸類似物的代表性實(shí)例可選自糖被修飾的核糖 核苷酸或主鏈被修飾的核糖核苷酸。然而應(yīng)當(dāng)指出，核苷堿基被修飾的核糖核苷酸也是合 適的，核苷堿基被修飾的核糖核苷酸即含有非天然存在的核苷堿基代替天然存在的核苷堿 基的核糖核苷酸，例如在5-位進(jìn)行的尿苷修飾或胞苷修飾，例如5- (2-氨基)丙基尿苷、 5-溴尿苷；在8-位進(jìn)行的腺苷修飾和鳥(niǎo)苷修飾，例如8-溴鳥(niǎo)苷；脫氮核苷酸，例如7-脫氮 腺苷；0-烷基化和N-烷基化的核苷酸，例如N6-甲基腺苷。2' -OH基團(tuán)可由其他基團(tuán)進(jìn) 行取代，所述取代基團(tuán)選自H、OR、R、鹵素、SH、SR、NH2, NHR、NR2或CN，其中R為C_C6的烷 基、烯基或炔基，鹵素為F、Cl、Br或I。對(duì)所述磷酸核糖主鏈的修飾可出于多種原因，例如， 為增加這類分子在生理環(huán)境中的穩(wěn)定性和半壽期、或在生物晶片上作為探針?？芍苽涮烊?存在的核酸與類似物的混合物；或者，可制備不同的核酸類似物的混合物以及天然存在的 核酸與類似物的混合物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“載體”是指含有復(fù)制起點(diǎn)的核酸序列。載體可為質(zhì)粒、噬菌體、 細(xì)菌人工染色體或酵母人工染色體。載體可為DNA載體或RNA載體。載體可為自我復(fù)制的 染色體外載體或能夠整合進(jìn)入宿主基因組中的載體之一。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“治療”包括減少或緩解與通透性血腦屏障和/或血管性癡呆 和/或阿爾茨海默病有關(guān)的病癥、疾病或紊亂的至少一種副作用或癥狀。本文所使用的術(shù) 語(yǔ)“治療”是指阿爾茨海默病的癥狀和/或生化指標(biāo)降低至少10%。舉例來(lái)說(shuō)，阿爾茨海 默病的生化指標(biāo)的減少(例如淀粉樣血小板沉積減少10% )或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化的減少 (細(xì)胞表達(dá)GFAP減少10% )被認(rèn)為是通過(guò)本文所公開(kāi)的方法進(jìn)行了有效的治療，但不限于 此。作為另一個(gè)實(shí)例，癥狀的減輕也被認(rèn)為是通過(guò)本文所公開(kāi)的方法進(jìn)行的有效的治療，所 述癥狀的減輕例如記憶喪失的速率減慢10%、記憶衰退速率的停止、記憶喪失減輕10%或 記憶增加10%。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“有效量”是指能減輕或停止所述疾病或紊亂的至少一種癥狀 的藥物組合物的治療劑的量，所述癥狀例如血腦屏障缺陷或血管性癡呆的癥狀或紊亂。舉 例來(lái)說(shuō)，使用本文所公開(kāi)的方法的有效量被認(rèn)為是足以減輕所述疾病或紊亂的癥狀的量， 例如血管性癡呆或通透性血腦屏障的癥狀減輕至少10%。本文所使用的有效量還包括足以 預(yù)防或延緩所述疾病的癥狀發(fā)展、改變癥狀疾病病程(例如減緩所述疾病癥狀的進(jìn)展，但 不限于此)或逆轉(zhuǎn)所述疾病癥狀的量。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“給予”和“引入”可互換使用，是指通過(guò)能夠?qū)崿F(xiàn)將所述試劑至少部分定位于所希望的位點(diǎn)的方法或途徑，將本文所公開(kāi)的可抑制Lp-PLA2的試劑置入 受試者體內(nèi)。本發(fā)明中的化合物可通過(guò)任何能夠?qū)崿F(xiàn)有效治療的適當(dāng)途徑給予所述受試
者ο術(shù)語(yǔ)“載體”可與“質(zhì)?！被Q使用，是指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)與之連接的另一個(gè)核酸的核酸 分子。能夠?qū)εc其可操作地相連接的基因和/或核酸序列表達(dá)進(jìn)行指導(dǎo)的載體在本文中被 稱為“表達(dá)載體”。通常，應(yīng)用于重組DNA技術(shù)的表達(dá)載體經(jīng)常為“質(zhì)?！钡男问?，是指處于 其載體形式時(shí)不與染色體相結(jié)合的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。其他的表達(dá)載體可被用于本發(fā)明的不 同實(shí)施方式，例如但不限于質(zhì)粒、附加體、噬菌體或病毒性載體，這類載體可整合進(jìn)入宿主 基因組或在特定的細(xì)胞中自主復(fù)制。還可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的、能夠提供等同功 能的表達(dá)載體的其他形式。表達(dá)載體包括用于穩(wěn)定表達(dá)或瞬時(shí)表達(dá)的、對(duì)DNA進(jìn)行編碼的 表達(dá)載體。本文所使用的冠詞“a”和“an”是指一個(gè)或多于一個(gè)(即至少一個(gè))所述冠詞的 語(yǔ)法對(duì)象。舉例來(lái)說(shuō)，“an element”的意思是一種或多于一種的要素。Lp-PLA, 一般信息Lp-PLA2在本領(lǐng)域中也被稱作Lp_PLA2、LDL-PLA2、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、PLA2G7、 磷脂酶A2 (第VII組)或血小板活化因子乙酰水解酶(PAF乙酰水解酶或PAFAH)。對(duì)人的 Lp-PLA2進(jìn)行編碼的核酸對(duì)應(yīng)于GenBank登錄號(hào)U20157 (SEQ ID NO :1)或Ref Seq ID: NM_005084 (SEQ ID NO 2)，而人的Lp-PLA2所對(duì)應(yīng)的蛋白序列對(duì)應(yīng)于GenBank登錄號(hào) NP_005075 (SEQ ID NO :3)，上述內(nèi)容公開(kāi)于美國(guó)專利5，981，252，本文將其整體具體引入作 為參考。磷脂酶A2酶脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2 (Lp-PLA2)；其測(cè)序、分離與提純；所分離出的 對(duì)所述酶進(jìn)行編碼的核酸；以及用對(duì)所述酶進(jìn)行編碼的DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化的重組宿主細(xì)胞公開(kāi) 于WO 95/00649 (SmithKline Beechamplc)，本文將其整體具體引入作為參考。來(lái)自于相 同集團(tuán)的隨后的出版物進(jìn)一步對(duì)該酶進(jìn)行了描述(Tew D等人，Arterioscler Thromb Vas Biol, 1996 :16，591-9)，在該文中它被稱為L(zhǎng)DL-PLA2，之后的專利申請(qǐng)(W095/09921, Icos Corporation)以及 Nature 中的相關(guān)出版物(Tjoelker 等人，374 卷，1995 年 4 月 6 H , 549) 描述了本質(zhì)上與Lp-PLA2具有相同序列的PAFAH酶。已經(jīng)顯示在將低密度脂蛋白(LDL)轉(zhuǎn)化為其氧化形式期間，Lp-PLA2負(fù)責(zé)將磷脂 酰膽堿轉(zhuǎn)化為溶血磷脂酰膽堿。已知所述酶可將所述氧化的磷脂酰膽堿的sn-2酯水解為 溶血磷脂酰膽堿以及氧化修飾的脂肪酸。Lp-PLA2作用的兩種產(chǎn)物均具有生物學(xué)活性，尤 其是溶血磷脂酰膽堿具有數(shù)種致動(dòng)脈粥樣化活性，這歸因于其包含單核細(xì)胞趨化性以及內(nèi) 皮功能障礙的誘導(dǎo)作用，上述兩種作用都可促進(jìn)單核細(xì)胞來(lái)源的巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈壁內(nèi)的積 聚ο本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，用Lp-PLA2抑制劑對(duì)有以血腦屏障滲漏為特征的紊亂傾向的動(dòng)物 進(jìn)行治療時(shí)，發(fā)現(xiàn)所述動(dòng)物顯示出血腦屏障無(wú)損傷以及血腦屏障通透性減少的跡象。這類 用Lp-PLA2抑制劑治療的動(dòng)物與未用所述抑制劑治療的動(dòng)物相比，還顯示出血管性癡呆減 少的跡象以及β-淀粉樣蛋白在腦組織和穿過(guò)腦部的血管中積聚的減少。因此，Lp-PLAji 制劑可用于治療和/或預(yù)防具有通透性血腦屏障的疾病和紊亂，例如但不限于神經(jīng)退行性 疾病。使用本文所公開(kāi)的方法進(jìn)行治療和/或預(yù)防的神經(jīng)退行性疾病的實(shí)例包括血管性癡
13呆、阿爾茨海默病以及其他神經(jīng)退行性疾病例如亨廷頓病和帕金森病，但不限于此。抑制Ld-PLA2的試劑在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及對(duì)Lp-PLA2的抑制。在某些實(shí)施方式中，所述的抑 制為對(duì)編碼Lp-PLA2W核酸轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的抑制，例如對(duì)信使RNA(mRNA)的抑制。在另一個(gè)實(shí) 施方式中，對(duì)Lp-PLA2的抑制為對(duì)Lp-PLA2基因產(chǎn)物表達(dá)的抑制和/或?qū)p-PLA2基因產(chǎn)物 活性的抑制，所述基因產(chǎn)物例如Lp-PLA2多肽或Lp-PLA2蛋白或其同工型(isoforms)。本 文所使用的術(shù)語(yǔ)“基因產(chǎn)物”是指從由基因轉(zhuǎn)錄的RNA、或基因編碼的多肽或由RNA翻譯的 多肽。在某些實(shí)施方式中，對(duì)Lp-PLA2W抑制通過(guò)試劑實(shí)現(xiàn)?？墒褂萌魏卧噭?，例如核酸、 核酸類似物、肽、噬菌體、噬粒、多肽、模擬肽、核糖體、適體、抗體、有機(jī)或無(wú)機(jī)的小分子或大 分子，或其任何組合，但不限于此。在某些實(shí)施方式中，用于本發(fā)明中的方法中的試劑包括 起Lp-PLA表達(dá)抑制劑作用的試劑，例如對(duì)Lp-PLA進(jìn)行編碼的mRNA的抑制劑。用于本文所公開(kāi)的方法中的試劑還可抑制基因表達(dá)(即，抑制和/或壓制所述基 因的表達(dá))，這類試劑在本領(lǐng)域中被稱為“基因沉默子”，通常為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知。 實(shí)例包括但不限于用于RNA、DNA或核酸類似物的核酸序列，該核酸可為單鏈的或雙鏈的， 并可選自于包括下列物質(zhì)的組對(duì)所關(guān)注的蛋白進(jìn)行編碼的核酸、寡聚核苷酸、核酸、核酸 類似物，所述核酸類似物例如肽核酸(PNA)、假互補(bǔ)PNA(pc-PNA)、鎖核酸(LNA)及其衍生物 等，但不限于此。核酸試劑還包括，例如但不限于對(duì)起到轉(zhuǎn)錄阻遏物作用的蛋白進(jìn)行編碼的 核酸序列、反義分子、核酶、小的抑制性的核酸序列，所述小的抑制性的核酸序列例如RNAi、 shRNAi、siRNA、微RNAi (miRNA)、反義寡聚核苷酸等，但不限于此。用于本文所使用的方法中的、作為L(zhǎng)p-PLA2表達(dá)抑制劑和/或抑制Lp-PLA2蛋白功 能的試劑可為任何種類的實(shí)體，例如化學(xué)制劑、核酸序列、核酸類似物、蛋白、肽或其片段， 但不限于此。在某些實(shí)施方式中，所述試劑為任何化學(xué)制劑、實(shí)體或基團(tuán)，包括合成的非蛋 白實(shí)體和天然存在的非蛋白實(shí)體，但不限于此。在特定的實(shí)施方式中，所述試劑為具有化學(xué) 基團(tuán)的小分子。例如，在某些實(shí)施方式中，所述化學(xué)基團(tuán)為如本文所公開(kāi)的基于嘧啶酮的化 合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，用于本文所公開(kāi)的方法中的試劑為能夠抑制Lp-PLA2基因 表達(dá)或Lp-PLA2蛋白功能的蛋白和/或肽或其片段。這類試劑包括，例如蛋白變體、突變蛋 白、治療蛋白、截短蛋白和蛋白片段，但不限于此。蛋白試劑還可以選自包括下列物質(zhì)的組 突變蛋白、基因工程蛋白、肽、合成的肽、重組蛋白、嵌合蛋白、抗體、中體、微型抗體、三鏈 抗體、人源化蛋白、人源化抗體、嵌合抗體、修飾蛋白及其片段?；蛘?，用于本文所公開(kāi)的方法中的、作為L(zhǎng)p-PLA2抑制劑的試劑可為化學(xué)制劑、小 分子、大分子或?qū)嶓w或基團(tuán)，包括合成的非蛋白實(shí)體和天然存在的非蛋白實(shí)體，但不限于 此。在特定的實(shí)施方式中，所述試劑為具有本文所公開(kāi)的所述化學(xué)基團(tuán)的小分子。小分子在某些實(shí)施方式中，可抑制Lp-PLA2的試劑為小分子。Lp-PLA2的不可逆抑制劑或 可逆抑制劑可被用于本發(fā)明的方法中。Lp-PLA2的不可逆抑制劑公開(kāi)于專利申請(qǐng)WO 96/13484、W096/1945U WO 97/02242、WO 97/217675、WO 97/217676、WO 97/41098 和 WO 97/41099(SmithKline Beecham pic)，本文將其整體具體引入作為參考，并公開(kāi)了特別是能夠作為酶Lp-PLA2抑制
14劑的多個(gè)系列的4-亞硫?；?thionyl)/亞磺酰基(sulphinyl)/磺?；谋麅?nèi)酰胺化合 物。這些抑制劑為?；牟豢赡嬉种苿?Tew等人，Biochemistry, 37，10087，1998)。在人體內(nèi)有效的Lp-PLA2抑制劑通常為普通技術(shù)人員所知，包括正接受評(píng)價(jià)的抑 制劑，所述接受評(píng)價(jià)例如接受臨床前評(píng)估和包括第二期臨床試驗(yàn)在內(nèi)的臨床評(píng)估。許多申 請(qǐng)已經(jīng)由SmithKline Beecham及其繼任者Glaxo SmithKline提交并公布。該公司名下 已公布的相關(guān)申請(qǐng)的清單為W0 01/60805、WO 02/30904、WO 03/016287、WO 00/66567、 W003/042218.W0 03/042206, WO 03/042179、WO 03/041712, W003/086400,WO 03/087088、 WO 02/3091UW0 99/24420,WO 00/66566,WO 00/68208,WO 00/10980 和 WO 2005/021002, 本文將其整體具體引入作為參考。此外，請(qǐng)參考美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/829，328和 60/829，327，上述兩份申請(qǐng)均已于2006年10月13日提交，本文也將其整體具體引入作為 參考。用于本文所公開(kāi)的方法中的其他Lp-PLA2抑制劑在所公布的專利申請(qǐng)中進(jìn) 行了 描述，例如 Bayer Healthcare 名下的 WO 2006063791-A1、WO 2006063811-A1、WO 2006063812-AUW0 2006063813-A1 ；以及 Korea Res. Inst. Bioscience&Biotechnology 名 下的US2006106017-A1，本文特其整體具體引入作為參考。Lp-PLA2抑制劑還包括已知的試 劑，例如但不限于包括對(duì)含有煙酸的他汀類(請(qǐng)參見(jiàn)www. genengnews. com/news/bnitem. aspx ？ name = 6724568)禾口非諾貝特(請(qǐng)參見(jiàn) www. genengnews. com/news/bnitem. aspx ？ name = 14817756&taxid = 19)的使用。本文將上述段落中列出的全部申請(qǐng)引入作為參考。并且，認(rèn)為這些文件所公開(kāi)的 任何化合物或全部化合物可用于預(yù)防或治療神經(jīng)退行性疾病和紊亂，包括例如但不限于 血管性癡呆、阿爾茨海默病以及其他本文所公開(kāi)的、發(fā)生有血腦屏障異常的神經(jīng)退行性疾 病。本文在實(shí)施例中舉例所描述的通透性血腦屏障以及神經(jīng)退行性疾病的豬模型可被本 領(lǐng)域普通技術(shù)人員用于確定所公開(kāi)的化合物或其他Lp-PLA2抑制劑，例如可有效用于治療 或本文所要求保護(hù)的預(yù)防神經(jīng)退行性疾病或紊亂的抗體或RNAi。在某些實(shí)施方式中，抑制 Lp-PLA2的試劑可在動(dòng)物模型中評(píng)估其對(duì)于緩解通透性血腦屏障的作用。舉例來(lái)說(shuō)，可使用 如本文實(shí)施例所公開(kāi)的高血糖癥和高膽固醇血癥的豬模型，該模型中血腦屏障通透性異常 例如通透性血腦屏障，所述的血腦屏障通透性可在該模型中通過(guò)本領(lǐng)域人員公知的方法在 Lp-PLA2抑制劑存在以及不存在的情況下對(duì)所述的血腦屏障通透性進(jìn)行評(píng)估。在某些實(shí)施 方式中，可使用用于血腦屏障功能的標(biāo)記物，例如美國(guó)專利6，884，591所公開(kāi)的標(biāo)記物，將 其整體引入作為參考。在特定的實(shí)施方式中，本文將美國(guó)專利6，649，619和7，153,861整體具體引入作 為參考(以及國(guó)際申請(qǐng)WO 01/60805)，并將美國(guó)專利7，169，924整體引入作為參考(以 及國(guó)際專利申請(qǐng)WO 02/30911)，上述專利所公開(kāi)的Lp-PLA2抑制劑可用于本文所公開(kāi)的 預(yù)防或治療血管性癡呆的方法，所述血管性癡呆例如阿爾茨海默病和/或血腦屏障通透性 紊亂。在某些實(shí)施方式中，整體引入本文作為參考的美國(guó)
發(fā)明者史毅, 羅伯特·內(nèi)格勒 申請(qǐng)人:托馬斯杰弗遜大學(xué);新澤西內(nèi)科與牙科大學(xué)