專(zhuān)利名稱(chēng)：：含s-腺苷-l-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法以及口服用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及使用了具有S-腺苷-L-甲硫氨酸(以下記作SAMe)的生產(chǎn)能力的酵母的含SAMe的干燥酵母的制備方法以及口服用組合物。更詳細(xì)地說(shuō)，本發(fā)明涉及能高收率且簡(jiǎn)便地制備含有高濃度的SAMe的干燥酵母的方法、以及將通過(guò)該方法得到的含SAMe的干燥酵母成型而得到的口服用組合
背景技術(shù)：
：作為生物體內(nèi)的由各種甲基轉(zhuǎn)移酶引起的甲基化反應(yīng)的甲基供應(yīng)體，SAMe是起重要作用的水溶性的生理活性物質(zhì)，被廣泛用作抑郁癥、肝病以及關(guān)節(jié)炎等的治療藥、或者保健食品。另外，在酵母菌體中含有很多5'-核苷酸、游離氨基酸、具有抗氧化作用而用作肝病的治療藥的谷胱甘肽、具有提高免疫力作用和調(diào)節(jié)腸胃作用的y8-葡聚糖和食物纖維等的有用成分，被廣泛用作保健食品。以往，SAMe的制備方法一般有使用含有作為前驅(qū)體的L-甲硫氨酸的培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的方法(例如，參照非專(zhuān)利文獻(xiàn)l、2);將菌體內(nèi)蓄積的SAMe提取出來(lái)后，用色譜法進(jìn)行精制，并形成硫酸或?qū)妆交撬岬柠}、或者丁二磺酸(Butanedisulfonicacid)的鹽，從而得到穩(wěn)定的SAMe鹽的方法(例如，參照非專(zhuān)利文獻(xiàn)3、4)。但是，在這樣的以往的制備方法中，菌體內(nèi)蓄積的SAMe的提取精制，要花費(fèi)大量的時(shí)間和費(fèi)用，因此，很難廉價(jià)地制備并提供作為治療藥和保健食品的重要的SAMe。已經(jīng)公開(kāi)了不需要從菌體中提取精制的、代替發(fā)酵法的酶合成法。也就是說(shuō)，使用通過(guò)酵母等的微生物離析并精制后的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基轉(zhuǎn)移酶(methionineadenosyltransferase)),將三磷酸腺苷(ATP)和L-甲硫氨酸作為基質(zhì)，酶合成SAMe的方法(例如，參照專(zhuān)利文獻(xiàn)l，非專(zhuān)利文獻(xiàn)5、10)。該方法與發(fā)酵法相比，具有SAMe的蓄積量多、不需要進(jìn)行從菌體中提取SAMe的操作等的優(yōu)點(diǎn)，但是存在酶的制備復(fù)雜、得到的酶的活性弱、必須除去ATP分解活性等的干擾酶活性、以及作為基質(zhì)的ATP價(jià)格昂貴等各種各樣的問(wèn)題，不一定能成為實(shí)用的方法。此外，根據(jù)近年的基因工程學(xué)的發(fā)展，通過(guò)使用克隆化的SAMe合成酶基因的方法可以使得該酶的制備變得更簡(jiǎn)便(例如，參考非專(zhuān)利文獻(xiàn)6-9)，從而酶的制備問(wèn)題正在被解決，但是，仍然沒(méi)有解決必須使用昂貴的ATP作為基質(zhì)等其它的實(shí)用上的問(wèn)題。專(zhuān)利文獻(xiàn)1:特開(kāi)昭51-125717號(hào)公報(bào)非專(zhuān)利文獻(xiàn)1:SchlenkF.，DePalmaR.E"J.Biol.Chem.,229,1037-1050(1957)非專(zhuān)利文獻(xiàn)2:ShiozakiS.等人，Agric.Biol.Chem.,53,3269-3274(1989)非專(zhuān)利文獻(xiàn)3:SchlenkF.，DePalmaR.E.,J.Biol.Chem.,229,1051-1057(1957)非專(zhuān)禾U文獻(xiàn)4:Kusakabe，H.，Kuninaka,A"Yoshino,H"Agric.BioLChem.，38,1669-1672(1974)非專(zhuān)利文獻(xiàn)5:MuddSH.,CantoniGL.等人，J.Biol.Chem.,231，481-492(1958)非專(zhuān)利文獻(xiàn)6:MarkhamG.D.等人，J.Biol.Chem"255,9082-9092(1980)非專(zhuān)利文獻(xiàn)7:MarkhamDJ.,DeParisisJ.,J.Biol.Chem"259,14505-14507(1984)非專(zhuān)利文獻(xiàn)8:ShiozakiS.等人，J.Biotechnology.,4,345-354(1986)非專(zhuān)利文獻(xiàn)9:ThomasD.,Surdin-KerjanY"J.Biol.Chem"262,16704-16709(1987)非專(zhuān)利文獻(xiàn)10:ThomasD.,CherestH.等人，Mol.Cell.Biol.，8,5132-5139(1988)
發(fā)明內(nèi)容如上所述，在用以往的使用微生物的發(fā)酵法進(jìn)行提取，精制、或者用酶合成法進(jìn)行合成時(shí)，都需要很大的勞力和費(fèi)用，很難以低成本制備可以口服的SAMe含有物。因此，本發(fā)明的目的在于，作為能以低成本制備該含有物的方法，確立一種能高收率且簡(jiǎn)便地制備含有高濃度的SAMe的干燥酵母的方法，同時(shí)提供將用該制備方法得到的干燥酵母成型而得到的口服用組合物。本發(fā)明人為了達(dá)到上述目的，進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)使用具有SAMe生產(chǎn)能力并且可以口服的酵母，在菌體內(nèi)合成蓄積高濃度的SAMe后，用離心等的分離方法從培養(yǎng)液中分離酵母菌體，再進(jìn)行通過(guò)添加無(wú)機(jī)酸以調(diào)節(jié)至特定的pH的處理、以及進(jìn)行加熱至特定溫度的處理中的至少任意一種處理后，進(jìn)行干燥，可以以低成本簡(jiǎn)便且高收率地制備作為目標(biāo)產(chǎn)物的含有高濃度的SAMe的干燥酵母，從而完成本發(fā)明。也就是說(shuō)，本發(fā)明提供了以下1-9所示的含有高濃度的SAMe的干燥酵母的制備方法、以及將該干燥酵母成型而得到的口服用組合物。1、一種含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，該方法包括使用具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生產(chǎn)能力的酵母來(lái)制備含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，對(duì)從酵母的菌體培養(yǎng)液中分離的酵母菌體濃縮物進(jìn)行(l)通過(guò)添加無(wú)機(jī)酸將pH調(diào)節(jié)至1-5的處理、以及(2)進(jìn)行加熱到40-85'C的處理中的至少任意一種處理后，進(jìn)行干燥。2、根據(jù)上述l所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，使用屬于酵母菌屬的酵母作為所述具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生產(chǎn)能力的酵母。3、根據(jù)上述2所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，所述屬于酵母菌屬的酵母為釀酒酵母。4、根據(jù)上述l所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，在(1)添加無(wú)機(jī)酸的處理中使用的無(wú)機(jī)酸為硫酸。5、根據(jù)上述l所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，在進(jìn)行(1)添加無(wú)機(jī)酸的處理中，將pH調(diào)節(jié)至l-4。6、根據(jù)上述l所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，在進(jìn)行(2)加熱的處理中，加熱至40-8(TC。7、根據(jù)上述l所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，進(jìn)行(1)添加無(wú)機(jī)酸的處理以及(2)加熱處理這兩種處理。8、根據(jù)上述1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，通過(guò)冷凍干燥法或噴霧干燥法進(jìn)行所述干燥。9、一種口服用組合物，其特征在于，該口服用組合物是將通過(guò)上述1-8中任意一項(xiàng)所述的方法制備的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母成型而得到的。具體實(shí)施例方式本發(fā)明中使用的酵母的種類(lèi)只要是具有SAMe生產(chǎn)能力且能口服的酵母即可。優(yōu)選可舉出例如屬于酵母菌(saccharomvces)屬的酵母。其中，更4尤選為酉良酒酉孝母(saccharomvcescerevisiae)。在培養(yǎng)上述酵母時(shí)，使用碳源、氮源、各種無(wú)機(jī)鹽類(lèi)、各種添加劑等。作為使用的碳源，只要是能使酵母同化(資化)的碳源就沒(méi)有特別的限制，可舉出例如葡萄糖、蔗糖、淀粉、廢糖蜜等的碳水化合物、乙醇或乙酸等的醇或有機(jī)酸。氮源也只要是能使酵母同化的氮源就沒(méi)有特別的限制，可舉出例如含有氨、硝酸、尿素等的無(wú)機(jī)含氮化合物，或酵母提取物、麥芽提取物等的有機(jī)含氮化合物的物質(zhì)。此外，作為無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，可以使用磷酸鹽、鉀鹽、鈉鹽、以及鎂、鐵、鈣、鋅、錳、鈷、銅、鉬等的金屬鹽。另外，也可以添加參與SAMe的骨架結(jié)構(gòu)的甲硫氨酸、腺嘌呤、腺嘌呤核苷(adenosylribonucleoside)進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度以及培養(yǎng)液的pH根據(jù)所使用酵母的種類(lèi)而不同，但是，培養(yǎng)溫度可以在20-35。C的范圍內(nèi)，培養(yǎng)液的pH可以在4-7的范圍內(nèi)。為了提高菌體內(nèi)的SAMe含量，優(yōu)選進(jìn)行有氧培養(yǎng)。因此，培養(yǎng)槽優(yōu)選為可以通氣并根據(jù)需要能進(jìn)行攪拌的培養(yǎng)槽，例如，可以使用機(jī)械攪拌培養(yǎng)槽、空氣提升式培養(yǎng)槽以及泡罩塔型培養(yǎng)槽等。加入到培養(yǎng)槽中的碳源、氮源、各種無(wú)機(jī)鹽類(lèi)、各種添加劑等的培養(yǎng)成分的供給，可以一起或各自地連續(xù)或間歇地加入。例如，可以將蔗糖、乙醇等的基質(zhì)以與其它的培養(yǎng)成分的混合物的方式供給到培養(yǎng)槽中，或者也可以與其它培養(yǎng)成分各自獨(dú)立地供給到培養(yǎng)槽中。培養(yǎng)液的pH控制通過(guò)酸、堿溶液來(lái)調(diào)節(jié)。作為堿，優(yōu)選使用以下的堿來(lái)進(jìn)行pH控制用作氮源的氨、尿素，或非氮類(lèi)堿，例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀等。作為酸可以使用無(wú)機(jī)酸，例如，磷酸、硫酸、硝酸，或有機(jī)酸。也可以使用作為無(wú)機(jī)鹽類(lèi)的磷酸鹽、鉀鹽、鈉鹽、硝酸鹽等來(lái)控制pH。在這樣的條件下迸行培養(yǎng)，在目標(biāo)量的SAMe在酵母菌體中蓄積的階段，將培養(yǎng)液從培養(yǎng)槽中取出后，分離得到酵母菌體濃縮物。作為分離方法，菌體的分離和洗滌只要是有效的方法就沒(méi)有特別的限定。作為優(yōu)選的例子，可以舉出逆流型的酵母分離器或使用分離膜的超濾裝置。然后，對(duì)分離后的酵母菌體濃縮物，至少進(jìn)行添加硫酸等的無(wú)機(jī)酸的處理、以及加熱的處理中的任意一種處理。通過(guò)進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理，可以增加SAMe的穩(wěn)定性并且提高其收率。作為添加的無(wú)機(jī)酸，只要是能夠口服的無(wú)機(jī)酸就沒(méi)有特別的限制，可舉出鹽酸、硫酸、磷酸等，特別優(yōu)選的例子為硫酸。無(wú)機(jī)酸的添加量有必要為使pH為1-5的量，特別優(yōu)選為使pH為1-4的量。另夕卜，可以通過(guò)進(jìn)行加熱的處理來(lái)進(jìn)行SAMe分解酶的失活或滅菌。所述加熱的處理采用使得到的SAMe含量盡可能高的條件即可，雖然所述加熱的處理的條件也與處理時(shí)間有關(guān)，但是處理溫度有必要為40-85°C，優(yōu)選為40-80°C，更優(yōu)選為40-70。C，進(jìn)一步優(yōu)選為50-70°C。加熱時(shí)間，也隨加熱溫度而變，所以不能一概而論，但是優(yōu)選為30-600秒，更優(yōu)選為30-60秒。通過(guò)進(jìn)行30秒以上的加熱處理，可以進(jìn)行SAMe分解酶的失活或滅菌等。另外，由于可以促進(jìn)無(wú)機(jī)酸根的滲透，因此可以減少無(wú)機(jī)酸的添加量。另一方面，通過(guò)使加熱時(shí)間為600秒以下，可以避免由于SAMe的分解引起的含量下降。另外，所述加熱的處理也可以采用常壓、加壓中的任何一種方法來(lái)實(shí)施。通過(guò)進(jìn)行加熱的處理或進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理，可以得到SAMe含量相對(duì)更高的干燥酵母菌體。另外，通過(guò)配合進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理以及加熱的處理，與只進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理的情況相比，可以減少添加的無(wú)機(jī)酸的量，另外，與只進(jìn)行加熱的處理的情況相比，可以得到SAMe含量更高的干燥菌體，因此更優(yōu)選配合進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理以及加熱的處理。即，作為無(wú)機(jī)酸添加量和加熱溫度的組合，雖然也根據(jù)加熱時(shí)間而不同，但是優(yōu)選為使pH為1-5的無(wú)機(jī)酸添加量和40-85'C的溫度條件的組合，更優(yōu)選為使pH為1-4的無(wú)機(jī)酸添加量和40-8(TC的溫度條件的組合，進(jìn)一步優(yōu)選為使pH為1-4的無(wú)機(jī)酸添加量和40-7(TC的溫度條件的組合，更進(jìn)一步優(yōu)選為使pH為l-4的無(wú)機(jī)酸添加量和50-70"C的溫度條件的組合。將這樣的進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理以及加熱的處理中的至少任意一種處理后得到的酵母菌體濃縮物，通過(guò)例如用噴霧干燥機(jī)的噴霧干燥法或最終擱板溫度為25"C的冷凍干燥等的干燥方法將水分蒸發(fā)，得到干燥酵母。然后，將該干燥酵母粉碎成粉末狀后，或者在粉末狀的干燥酵母中根據(jù)需要加入其它的生理活性成分或賦形劑等的添加劑后，通過(guò)壓片形成片劑狀的口服用組合物，還可以在該片劑的表面進(jìn)行包覆。另外，也可以將粉體進(jìn)行造粒形成顆粒狀，或?qū)⒃炝：蟮念w粒進(jìn)行填充而膠囊化。實(shí)施例下面通過(guò)實(shí)施例以及比較例對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的說(shuō)明，但是，本發(fā)明并不限定于此。實(shí)施例1(a)酵母菌體的培養(yǎng)根據(jù)上述公知的培養(yǎng)法(ShiozakiS.等人，J.Biotechnology,4,345-354(1986)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)8))，用丸菱/《一才工:/、^二7lJ乂夕、、社制的30L的罐培養(yǎng)槽進(jìn)行酵母菌體的培養(yǎng)。在培養(yǎng)基中接種屬于酵母菌屬(saccharomyces)的酉良酒酉孝母(saccharomvcescerevisiae)IF02346'i亥培養(yǎng)基中含有以下培養(yǎng)成分10質(zhì)量％的作為碳源的蔗糖、1質(zhì)量％的酵母提取物、1.8質(zhì)量％的作為氮源的尿素、1質(zhì)量％的L-甲硫氨酸、0.2質(zhì)量％的L-甘氨酰甘氨酸(glycylglycine)、0.4質(zhì)量％的KH2P04，0.01質(zhì)量％的MgS04.7H20，2pg/mL的生物素、0.2質(zhì)量％的混合礦物(混合礦物組成如下2.0質(zhì)量％的CaCl2'2H20、0.05質(zhì)量％的MnS04'5H20、0.05質(zhì)量％的FeS04'7H20、0.1質(zhì)量％的ZnS04'7H20、0.001質(zhì)量。％的CuS04'5H20、0.001質(zhì)量％的CoCl2'6H20、0.001質(zhì)量X的H3B03、0.001質(zhì)量X的Na2Mo04、0.001質(zhì)量％的KI)，在培養(yǎng)溫度為27-29°C、攪拌速度為150rpm下，進(jìn)行冇氧通氣的同時(shí)培養(yǎng)6天。另外，通過(guò)在培養(yǎng)過(guò)程中依次添加變得不足的乙醇、MgS04'7H20，可以提高SAMe含量。其結(jié)果，得到18L的菌體濃度為3.5質(zhì)量％、SAMe含量為205mg/(g干燥酵母)的酵母菌體培養(yǎng)液。(b)酵母菌體的集菌用連續(xù)旋轉(zhuǎn)型離心機(jī)(日立HIMACCENTRIFUGECR10B2)處理上述的18L酵母菌體培養(yǎng)液，得到3.49kg用干物換算的相當(dāng)于18質(zhì)量％的菌體濃度的液狀的酵母菌體濃縮物。(c)向酵母菌體濃縮物中添加無(wú)機(jī)酸通過(guò)在上述的3.49kg的酵母濃縮物中添加224g的95質(zhì)量％的硫酸，得到3.71kg的pH為1的酵母菌體濃縮物。(d)千燥酵母的制備用微粒子化裝置一一具有旋轉(zhuǎn)霧化器(旋轉(zhuǎn)圓盤(pán))的噴霧干燥機(jī)(NIPRO社制)，在干燥室的入口溫度為195-205°C、出口溫度為80-90°C、通液速度為38克/分鐘的條件下，對(duì)上述的3.71kg的pH為1的酵母菌體濃縮物進(jìn)行噴霧干燥，得到570g的粉末千燥酵母。所得的粉末干燥酵母中的SAMe含量為174mg/(g干燥酵母)。另外，粉末干燥酵母中的SAMe含量通過(guò)使用高氯酸的公知的方法(例如，ShiozakiS.等人，Agric.Biol.Chem.,48,2293-2300(1984))，從含SAMe的千燥酵母中提取SAMe，再用液相色譜法進(jìn)行定量。另外，液相色譜法使用以下的分析條件。色譜柱于力，^f(nacalaitesque)COSMOSIL4.60xlOOmm洗提液0.2M的KH2P04水溶液/甲醇二95/5(體積比)流速0.7mL/min，檢測(cè)器UV(260nm)，SAMe保留時(shí)間約150秒。實(shí)施例2-4除了通過(guò)在酵母菌體濃縮物中添加硫酸，使pH為2、3或4以外，與實(shí)施例1相同地進(jìn)行處理，研究添加硫酸后的pH和噴霧干燥后的SAMe含量的關(guān)系。結(jié)果如表1所示。比較例1除未進(jìn)行向酵母菌體濃縮物中添加硫酸以外，與實(shí)施例1相同地進(jìn)行處理，得到581g的噴霧干燥后的粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量為136mg/(g干燥酵母)。結(jié)果如表1所示。表1為只進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理的情況下，向酵母菌體濃縮物中添加無(wú)機(jī)酸后的pH和通過(guò)噴霧干燥法得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量的關(guān)系(無(wú)加熱的處理)。表1例子95%的硫酸的添加量(g)添加硫酸后的pH粉末干燥酵母中的SAMe含量(mg/(g干燥酵母))實(shí)施例12241174實(shí)施例21182171實(shí)施例357.53153實(shí)施例423.64144比較例105.2136實(shí)施例5與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行從(a)到(c)的操作，通過(guò)添加硫酸得到3.71kg的pH為1的酵母菌體濃縮物。將酵母菌體不經(jīng)過(guò)加熱，直接注入冷凍干燥器(日本真空技術(shù)株式會(huì)社制)的用于冷凍干燥的不銹鋼制托盤(pán)中，在-5(TC下冷凍后，在最終擱板溫度為25T:的條件下冷凍干燥36小時(shí)。再將所得的冷凍干燥酵母粉碎，得到612g的粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量為170mg/(g干燥酵母)。結(jié)果如表2所示。實(shí)施例6-8除了通過(guò)在酵母菌體濃縮物中添加硫酸，使pH為2、3或4以外，與實(shí)施例5相同地進(jìn)行處理，研究添加硫酸后的pH和冷凍干燥后的SAMe含量的關(guān)系。結(jié)果如表2所示。比較例2除未進(jìn)行向酵母菌體濃縮物中添加硫酸以外，與實(shí)施例5相同地進(jìn)行處理，得到609g的冷凍干燥并粉碎后的粉末干燥酵母。得到的粉末干燥酵母屮的SAMe含量為136mg/(g干燥酵母)。結(jié)果如表2所示。表2為只進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理的情況下，向酵母菌體濃縮物中添加無(wú)機(jī)酸后的pH和通過(guò)冷凍干燥得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量的關(guān)系(無(wú)加熱的處理)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>除將添加到酵母菌體濃縮物中的硫酸變?yōu)辂}酸、硝酸或磷酸(添加后的酵母菌體濃縮物的pH為1)以外，與實(shí)施例5相同地進(jìn)行處理，研究無(wú)機(jī)酸添加量和冷凍干燥后的SAMe含量的關(guān)系。結(jié)果如表3所示。表3為只進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理的情況下，向酵母菌體濃縮物中添加無(wú)機(jī)酸后的pH和通過(guò)冷凍干燥得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量的關(guān)系(無(wú)加熱的處理)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例12-23以及比較例3-5與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行從(a)到(b)的操作，用玻璃制燒杯、磁力攪拌機(jī)以及加熱水浴槽，在加熱溫度為40°C、50°C、6CTC、7(TC或90。C，加熱處理時(shí)間為60秒、300秒或600秒的條件下，對(duì)該酵母菌體濃縮物進(jìn)行加熱處理后，在水槽中冷卻至25。C。將其注入冷凍干燥器(日本真空技術(shù)株式會(huì)社制)的用于冷凍干燥的不銹鋼制托盤(pán)中，在-5(TC下冷凍后，在最終擱板溫度為25t:的條件下冷凍干燥36小時(shí)。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量如表4所示。表4為在只進(jìn)行加熱的處理的酵母菌體濃縮物中的、加熱溫度和通過(guò)冷凍干燥得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量的關(guān)系(未添加硫酸)。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例24-32與實(shí)施例l相同地進(jìn)行從(a)到(c)的操作，用玻璃制燒杯、磁力攪拌機(jī)以及加熱水浴槽，在加熱溫度為6(TC，加熱處理時(shí)間為60秒、300秒或600秒的條件下，對(duì)通過(guò)添加硫酸調(diào)節(jié)pH為1、2或3后的酵母菌體濃縮物進(jìn)行加熱的處理后，在水槽中冷卻至25。C。將其注入冷凍干燥器(日本真空技術(shù)株式會(huì)社制)的用于冷凍干燥的不銹鋼制托盤(pán)中，在-5(TC下冷凍后，在最終擱板溫度為25'C的條件下冷凍干燥36小時(shí)。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量如表5所示。表5為在進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理和加熱處理這兩種處理的酵母菌體濃縮物中的、加熱溫度和通過(guò)冷凍干燥得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量的關(guān)系(加熱前的酵母菌體濃縮物的pH為1、2、3)。表5例子加熱前的酵母菌體濃縮物的pH加熱溫度rc)加熱時(shí)間(秒)粉末干燥酵母中的SAMe含量(mg/(g干燥酵母))實(shí)施例51未加熱--170實(shí)施例2416060172實(shí)施例25160300171實(shí)施例26160600166實(shí)施例62未加熱--168實(shí)施例2726060175實(shí)施例28260300177260600170實(shí)施例73未加熱--154實(shí)施例3036060176實(shí)施例31360300179實(shí)施例32360600173實(shí)施例33-41以及比較例6-8與實(shí)施例1相同地進(jìn)行從(a)到(c)的操作，通過(guò)添加硫酸得到3.71kg的調(diào)節(jié)pH為3后的酵母菌體濃縮物。用玻璃制燒杯、磁力攪拌機(jī)、加熱水浴槽，在加熱溫度為4(TC、50°C、7(TC或9(TC，加熱處理時(shí)間為60秒、300秒或600秒的條件下，對(duì)該酵母菌體濃縮物進(jìn)行加熱的處理后，在水槽中冷卻至25。C。將其注入冷凍干燥器(日本真空技術(shù)株式會(huì)社制)的用于冷凍干燥的不銹鋼制托盤(pán)中，在-5(TC下冷凍后，在最終擱板溫度為25。C的條件下冷凍干燥36小時(shí)。得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量如表6所示。表6為在進(jìn)行添加無(wú)機(jī)酸的處理和加熱處理這兩種處理的酵母菌體濃縮物中的、加熱溫度和通過(guò)冷凍干燥得到的粉末干燥酵母中的SAMe含量的關(guān)系(加熱前的酵母菌體濃縮物的pH為3)。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明，可以以低成本高收率且簡(jiǎn)便地制備含有高濃度的SAMe的干燥酵母。通過(guò)將該含SAMe的干燥酵母成型而得到的口服用組合物，可以廣泛用作抑郁癥、肝病以及關(guān)節(jié)炎等的治療藥、或者健康食品。權(quán)利要求1、一種含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，該方法包括使用具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生產(chǎn)能力的酵母來(lái)制備含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，對(duì)從酵母的菌體培養(yǎng)液中分離的酵母菌體濃縮物進(jìn)行(1)通過(guò)添加無(wú)機(jī)酸將pH調(diào)節(jié)至1-5的處理、以及(2)進(jìn)行加熱到40-85℃的處理中的至少任意一種處理后，進(jìn)行干燥。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，使用屬于酵母菌屬的酵母作為所述具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生產(chǎn)能力的酵母。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，所述屬于酵母菌屬的酵母為釀酒酵母。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其屮，在(1)添加無(wú)機(jī)酸的處理中使用的無(wú)機(jī)酸為硫酸。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，在進(jìn)行(1)添加無(wú)機(jī)酸的處理中，將pH調(diào)節(jié)至l-4。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，在進(jìn)行(2)加熱的處理中，加熱至40-8(TC。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，進(jìn)行(1)添加無(wú)機(jī)酸的處理以及(2)加熱處理這兩種處理。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的制備方法，其中，通過(guò)冷凍干燥法或噴霧干燥法進(jìn)行所述干燥。9、一種口服用組合物，其特征在于，該口服用組合物是將通過(guò)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的方法制備的的含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母成型而得到的。全文摘要本發(fā)明提供了一種制備含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母的方法以及將用該制備方法得到的干燥酵母成型而得到的口服用組合物，該制備方法包括使用具有S-腺苷-L-甲硫氨酸生產(chǎn)能力的酵母來(lái)制備含S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母，其特征在于，對(duì)從酵母的菌體培養(yǎng)液中分離的酵母菌體濃縮物進(jìn)行(1)通過(guò)添加無(wú)機(jī)酸將pH調(diào)節(jié)至1-5的處理、以及(2)進(jìn)行加熱到40-85℃的處理中的至少任意一種處理后，進(jìn)行干燥。本發(fā)明提供了一種能以低成本、高收率且簡(jiǎn)便地制備含有高濃度的作為水溶性的生理活性物質(zhì)有用的S-腺苷-L-甲硫氨酸的干燥酵母菌體的方法、以及將通過(guò)該制備方法得到的干燥酵母成型而得到的口服用組合物。文檔編號(hào)C12P19/40GK101437934SQ200780016170公開(kāi)日2009年5月20日申請(qǐng)日期2007年5月8日優(yōu)先權(quán)日2006年5月10日發(fā)明者土田敏人,莪山真興,高野健太郎申請(qǐng)人:三菱瓦斯化學(xué)株式會(huì)社;田邊三菱制藥株式會(huì)社