專利名稱：：三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件、其制造方法、成套用具及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于活細(xì)胞貼附、增殖和分化的多孔三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件。本發(fā)明還涉及形成和制造所述插入件的方法，以及使用該插入件在細(xì)胞培養(yǎng)平板(例如塑料培養(yǎng)皿和多孔組織/細(xì)胞培養(yǎng)平板)、細(xì)胞培養(yǎng)瓶和生物反應(yīng)器中培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法。本發(fā)明屬于細(xì)胞、組織培養(yǎng)領(lǐng)域。.
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，常規(guī)使用的主要的細(xì)胞培養(yǎng)方式包括以下兩種1)以單層二維方式培養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)是一種在藥物開發(fā)、細(xì)胞生物學(xué)、毒理學(xué)、生物工程以及組織工程領(lǐng)域中非常有用并且被廣泛使用的技術(shù)。常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)是在細(xì)胞培養(yǎng)平板如2、4、6、24、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行，上述細(xì)胞培養(yǎng)板由非降解性的聚合物例如聚苯乙烯、聚丙烯和聚氯乙烯制成。這些平板往往用等離子體(plasma)處理其表面，這是組織培養(yǎng)平板的生產(chǎn)者通常采用的^t術(shù)，用于改進(jìn)其表面的親水性，^v而偵—得培養(yǎng)的細(xì)胞可以更好地粘附于所述培養(yǎng)平板的二維表面。在一種典型的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，在該聚苯乙烯細(xì)胞培養(yǎng)平板中培養(yǎng)的細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中以一種二維方式單層生長(zhǎng)。2)以三維方式培養(yǎng)細(xì)胞二維(2D)細(xì)胞培養(yǎng)是一種用于制備、觀察和研究細(xì)胞以及它們與藥物、生物因子和生物材料在體外相互作用的方便的方法。但這與所述細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)方式并不相仿。在真實(shí)的活體內(nèi)，細(xì)胞往往是三維(3D)生長(zhǎng)的并且其構(gòu)建形成三維的活組織或器官。越來(lái)越多的證據(jù)表明體外的三維細(xì)胞培養(yǎng)體系可以促進(jìn)對(duì)在正常和病理的組織條件下的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的了解。為了研究這種功能性和形態(tài)學(xué)上的相互作用，一些研究者已經(jīng)探索使用三維的凝膠基質(zhì)，例如膠原凝膠[DouglasWHJ，MoormanGW，和TeelRW,Theformationofhistotypicstructuresfrommonodispersefetalratlungcellsculturedonathreedimensionalsubstrate.ToF7加1976;12:373—381]、明膠、血纖維蛋白、瓊脂糖和藻酸鹽[GruberHE,FisherECJr，DesaiB，StaskyAA,HoelscherG，HanleyEN,Humanintervertebraldisccellsfromtheannulus:ThreedimensionalcultureinagaroseoralginateandresponsivenesstoTGF-(3L腳.Ce"虹1997，235:13—21;GruberHE,StaskyAA，HanleyENJr,Characterizationandphenotypicstabilityofhumandisccellsinvitro.1997;16:285-288]。在這些凝膠體系中，將細(xì)胞培養(yǎng)在凝膠基質(zhì)內(nèi)，它們?cè)谄渲幸匀S的方式生長(zhǎng)。近來(lái)的研究已經(jīng)顯示，與單層生長(zhǎng)的細(xì)胞相比，培養(yǎng)在三維的藻酸鹽或瓊脂糖凝膠體系中的人推間盤細(xì)胞(humanannulusdisccells)顯示出不同的形態(tài)，增加了含蛋白多糖的合成，并且形成帶有沉積在細(xì)胞周圍和之間的胞外基質(zhì)的多細(xì)胞集落[GruberHE,FisherECJr,DesaiB,StaskyAA,HoelscherG,HanleyEN，Humanintervertebraldisccellsfromtheannulus:ThreedimensionalcultureinagaroseoralginateandresponsivenesstoTGF-pl.脈Ce"紐1997，235:13-21;GruberHE,StaskyAA，HanleyENJr，Characterizationandphenotypicstabilityofhumandisccellsinvitro.1997;16:285—288〗。jt匕夕卜，在所述三維藻酸鹽凝膠體系中培養(yǎng)的人推間盤細(xì)胞證實(shí)產(chǎn)生了I型和II型膠原，而該I型和II型膠原在單層細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)未有發(fā)現(xiàn)[GruberHE和HanleyEN,Jr,Humandisccellsinmonolayervs3Dculture:cellshape,divisionandmatrixformation,jM7M/scw/c^e/efa/"/sorcfers,2000;1:l]。體外動(dòng)物細(xì)胞的三維生長(zhǎng)促進(jìn)正常上皮細(xì)胞的極化和分化[RoskelleyCD，BissellMJ,Dynamicreciprocityrevisited:acontinuous,bidirectionalflowofinformationbetweencellsandtheextracellularmatrixregulatesmammaryepithelialcellfunction,》/oc力咖Ce//A/o/1995;73(7-8):391-7]。與活組織細(xì)胞相比較，三維培養(yǎng)的細(xì)胞地移動(dòng)和分裂得更快并且具有一種特征性的不對(duì)稱外形[CukiermanE,PankovR，StevensDR，YamadaKM，Takingcellmatrixadhesionstothethirddimension,Sc/e薦，2001;294(5547):1708-12]。三維的細(xì)胞培養(yǎng)還被用于研究細(xì)胞與生長(zhǎng)因子以及細(xì)胞和藥物之間的相互作用。例如，癌細(xì)胞的三維細(xì)胞培養(yǎng)可用于探索許多與癌生物學(xué)有關(guān)的基礎(chǔ)性問(wèn)題，因?yàn)榕c標(biāo)準(zhǔn)的二維組織培養(yǎng)平板相比，癌細(xì)胞的腫瘤發(fā)展生長(zhǎng)因子的受體在三維細(xì)月包培養(yǎng)時(shí)的表達(dá)方式是不同的[WangF，WeaverVM，Petersen0W，LarabellCA，DedharS,BriandP,LupuR，BissellMJ.Reciprocalinteractionsbetweenbetal-integrinandepidermalgrowthfactorreceptorinthreedimensionalbasementmembranebreastcultures:adifferentperspectiveinepithelialbiology.jPtoc#a〃USA1998;95(25):14821-6;JacksT,WeinbergRA.Takingthestudyofcancercellsurvivaltoanewdimension.6W/，2002;111(7):923-5]。對(duì)于乳腺癌，三維細(xì)胞培養(yǎng)物提供一種用于了解癌細(xì)胞增殖的調(diào)控以及用于評(píng)價(jià)不同抗癌藥物的模型體系[BissellMJ，RizkiA,MianIS,Tissuearchitecture:theultimateregulatorofbreast印ithelialfunction.C釘一'"e//倫/"，2003;15(6):753-62;PadronJM,爆derWiltCL，SmidK,Smitskamp-WilmsE,BackusHH，PizaoPE,GiacconeG,PetersGJ.Themultilayeredpostconfluentcellcultureasamodelfordrugscreening.j<fft7co7化邁s"/，2000;36(2-3):141-57]。大量的證據(jù)表明，與在單層或^t培養(yǎng)物中的細(xì)胞相比，三維培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性試劑具有更高的耐受性。許多研究已經(jīng)揭示，與單層細(xì)胞相比，球體細(xì)胞培養(yǎng)具有更高的耐藥性[HoffmanRM.Three-dimensionalhistoculture:originsandapplicationsincancerresearch.。刀cerCe7/s1991;3(3):86-92]。起初，研究者們將細(xì)胞球體對(duì)藥物的耐受性歸因于藥物向球體內(nèi)部細(xì)胞的不良擴(kuò)散，但是現(xiàn)在已經(jīng)證實(shí)，耐藥性是由三維細(xì)胞培養(yǎng)而引起的，而不是僅僅無(wú)法接觸至'J營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[LawlerEM，MillerFR,H印pnerGH，Significanceofthreedimensionalgrowthpatternsofmammarytissuesincollagengels,W加1983;19(8):600-10;MillerBE,Mi1lerFR，He卯nerGH，F(xiàn)actorsaffectinggrowthanddrugsensitivityofmousemammarytumorlinesincollagengelcultures,tocerWes，1985;45(9):4200-5]。進(jìn)一步的研究證實(shí)，三維細(xì)胞培養(yǎng)是一種用于評(píng)價(jià)抗癌藥物的體外細(xì)胞毒性的更好的模型[HarpreetK.Dhiman,AlokRRay,AmulyaKPanda,Three-dimensionalchitosanscaffoldbasedMCF-7cellcultureforthedeterminationofthecytotoxicityoftamoxifen,》/o鵬/e/"/a/51，2005;26979-986]。不斷增加的證據(jù)表明，三維的(3D)環(huán)境也能揭示細(xì)胞功能的基本機(jī)制，而且體外的三維培養(yǎng)體系可以促ii^在正常和病理?xiàng)l件中的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的了解[AbbottA.Cellculture:biology'snewdimension.A^ure,2003;424(6951):870-2;HutmacherDW.Scaffolddesignandfabricationtechnologiesforengineeringtissues—stateoftheartandfutureperspectives./^/謹(jǐn)fer尸o/jtz風(fēng)2001;12:107—24;Schmeichel〖L，BissellMJ.Modelingtissue-specificsignalingandorganfunctioninthreedimensions.2003;116(Ptl2):2377-88;ZahirN，WeaverVM,Deathinthethirddimension:apoptosisregulationandtissuearchitecture.Ci/rr6p/刀6fe刀et"ev2004;14:71—80;Martini,WendtD，HebererM，Theroleofbioreactorsintissueengineering,7^/^5io,e&加/,2004;22:80-6]?，F(xiàn)已被普遍接受的是，骨和軟骨來(lái)源的細(xì)胞在三維(3D)與二維(2D)的環(huán)境中的行為不同，并且，所述三維(3D)體外培養(yǎng)體系比二維(2D)培養(yǎng)體系能更接近地模擬體內(nèi)的情況[KaleS，BiermannS,EdwardsC,TarnowskiC，MorrisM,Long廳，Three—dimensionalcellulardevelopmentisessentialforexvivoformationofhumanbone.5/ofe由o入2000;18:954-8;FerreraD，PoggiS，BiassoniC，DicksonGR,AstigianoS，Barbieri0,FavreA，F(xiàn)ranziAT,StrangioA,FedericiA,ManducaP，Three—dimensionalculturesofnormalhumanosteoblasts:proliferationanddifferentiationpotentialinvitroanduponectopicimplantationinnudemice,加/e2002;30:718—25;TallhedenT，KarlssonC，BrunnerA,VanDerLeeJ，HaggR，To咖asiniR，IAridahlA.Geneexpressionduringredifferentiationofhumanarticularchondrocytes.0"eoar^r/仏for〃/柳，2004;12:525—35;]。在近期的研究中，在一種羥丙基曱基纖維素水凝膠基質(zhì)的內(nèi)部，三維培養(yǎng)三種人成骨細(xì)胞系以及正常的人成骨(HOST)細(xì)胞。已經(jīng)證實(shí)，骨肉瘤細(xì)胞以群落球體的方式而增殖，而且所述的HOST細(xì)胞集落存活至少3周。成骨細(xì)胞標(biāo)記物和細(xì)胞因子的礦化試驗(yàn)和基因表達(dá)分析表明，在所述水凝M質(zhì)中三維培養(yǎng)的所有細(xì)胞比在塑料細(xì)胞培養(yǎng)平板中單層培養(yǎng)的細(xì)胞表現(xiàn)出一種更加成熟的分化狀況[TrojaniC，WeissP，MichielsJF，VinatierC,GuicheuxJ,DaculsiG，GaudrayP,CarleGF，RochetN.，Three—dimensionalcultureanddifferentiationofhumanosteogeniccellsinaninjectablehydroxypropylmethylcellulosehydrogel，"jfo咖"W^51,2005;26(27):5509—17]。迄今為止的證據(jù)已經(jīng)清楚地表明，在三維環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞具有二維細(xì)胞培養(yǎng)不可比擬的巨大優(yōu)點(diǎn)。然而，使用目前的三維凝月交體系，所述培養(yǎng)的細(xì)胞被包埋在凝月^質(zhì)內(nèi)部，由于物質(zhì)在所述凝膠中的擴(kuò)散受到一定的限制，因此該培養(yǎng)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和代謝產(chǎn)物的交換是個(gè)問(wèn)題。并且，由于所述培養(yǎng)的細(xì)胞包埋在所述凝膠內(nèi)部，培養(yǎng)后回收或分離所述細(xì)胞非常困難。這與使用二維細(xì)胞培養(yǎng)平板不同，二維培養(yǎng)的細(xì)胞可以使用胰蛋白酶簡(jiǎn)單地將其從培養(yǎng)平板上脫離并通過(guò)離心加以分離。另外，在^i交基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞要求在每次培養(yǎng)細(xì)胞前制備所述的凝膠體系，這不僅會(huì)給研究者們?cè)斐刹环奖?，尤其是在必須大量培養(yǎng)的時(shí)候；而且由于在不同的研究者和實(shí)驗(yàn)室之間凝膠的制備方式上存在著輕微的差異，從而會(huì)在不同批次的凝膠制備之間造成不一致。盡管三維細(xì)胞培養(yǎng)有更多的優(yōu)點(diǎn)，但由于上面提到的目前使用的三維凝膠培養(yǎng)體系所存在的種種問(wèn)題，二維細(xì)胞培養(yǎng)仍然是主要的細(xì)胞培養(yǎng)方法。因此，一種兼具二維細(xì)胞培養(yǎng)體系的全部便捷之處的三維培養(yǎng)體系，對(duì)于醫(yī)藥、生命科學(xué)以及生物工程研究領(lǐng)域極具價(jià)值。這一理想的三維細(xì)胞培養(yǎng)體系將具有以下特征1.具有一種多孔的三維結(jié)構(gòu)，從而所述細(xì)胞可以同時(shí)貼附于該三維結(jié)構(gòu)的外表面和內(nèi)表面。該多孔的結(jié)構(gòu)能夠允許營(yíng)養(yǎng)物和代謝產(chǎn)物容易地進(jìn)行交換。2.該多孔的三維結(jié)構(gòu)應(yīng)該易于與目前的二維細(xì)胞培養(yǎng)平板一起4吏用。它可以是一種二維細(xì)胞培養(yǎng)平板孔內(nèi)的三維插入件。3.該多孔的三維結(jié)構(gòu)應(yīng)該由非細(xì)胞毒性的和非生物降解的材料來(lái)制造，比如目前的用于二維細(xì)胞培養(yǎng)體系中的材料(特別是聚苯乙烯)。4.該多孔的三維結(jié)構(gòu)應(yīng)當(dāng)足夠結(jié)實(shí)從而能承受細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中正常的機(jī)械才喿作，而在細(xì)胞培養(yǎng)期間該多孔的結(jié)構(gòu)不發(fā)生變形和改變。長(zhǎng)期以來(lái)，聚苯乙烯已經(jīng)成為一種成功地用于二維(2D)細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物基底材料。由聚苯乙烯制造的細(xì)胞培養(yǎng)平板被廣泛地使用并且具有可從許多供應(yīng)商處商購(gòu)獲得的多種尺寸規(guī)格。由于聚苯乙烯培養(yǎng)平板對(duì)做細(xì)胞或組織培養(yǎng)的研究者們來(lái)說(shuō)相當(dāng)熟悉，因此可以想像，一種由聚苯乙烯制造的三維細(xì)胞培養(yǎng)體系將不僅能提供三維培養(yǎng)環(huán)境的優(yōu)點(diǎn)，而且能夠提供聚苯乙烯二維細(xì)胞培養(yǎng)體系的許多其它優(yōu)點(diǎn)，例如具有明確的表面性質(zhì)且易于使用。然而，聚苯乙烯作為三維細(xì)胞培養(yǎng)體系的應(yīng)用在以前卻幾乎從未被探索過(guò)。近來(lái)，Baker等人報(bào)導(dǎo)其使用電場(chǎng)紡絲技術(shù)加工出一種三維多孔的聚苯乙烯纖維基體[BakerSC，AtkinN，GunningPA，GranvilleN,WilsonK,WilsonDandSouthgateJ，Characterisationofelectrospunpolystyrenescaffoldsforthree—dimensionalinvitrobiologicalstudies,Biomaterials,2006;27，3136-46]。他們獲得的三維聚苯乙烯纖維基體類似于一種無(wú)紡墊，其申有內(nèi)部纖維間的空隙就是多孔的空隙。他們將該聚苯乙烯無(wú)紡墊切割成適當(dāng)?shù)目梢苑旁?孔聚苯乙烯培養(yǎng)平板的孔中的尺寸。經(jīng)在氬氣中等離子體處理后，將這些纖維性基體接種細(xì)胞并且在常用的6孔聚苯乙烯細(xì)胞培養(yǎng)平板中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。結(jié)果表明，這些聚苯乙烯三維無(wú)紡墊具有適于細(xì)胞貼附的良好的表面性質(zhì)。該數(shù)據(jù)揭示，這些聚苯乙烯三維纖維性支架可以是二維聚苯乙烯細(xì)胞培養(yǎng)平板體系的一種補(bǔ)充。然而，這些纖維性聚苯乙烯基體的缺點(diǎn)是所述纖維的尺寸難以控制；所述基體的孔徑尺寸和形狀不易確定；其平均孔徑較小(15;微米)，并且該纖維性基質(zhì)在自然狀態(tài)下是軟的，從而令所述基質(zhì)在不發(fā)生變形的情況下進(jìn)行進(jìn)一步的操作產(chǎn)生困難。很顯然，本領(lǐng)域中需要有一種在常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中與二維組織培養(yǎng)平板一起使用的、具有良好的確定孔徑尺寸和孔隙率的、結(jié)實(shí)的三維非降解性聚合物制成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件。本發(fā)明提供這樣一種三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種非細(xì)胞毒性的和非降解性的多孔三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，該插入件用于細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用，與目前的二維組織培養(yǎng)體系例如組織培養(yǎng)平板一起使用。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種制造所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法。本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種制造所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的設(shè)備。本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種包括所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的成套用具。本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種使用所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件培養(yǎng)細(xì)胞的方法。針對(duì)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案一方面，本發(fā)明提供一種細(xì)胞培養(yǎng)插入件(細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建體)，該插入件由非降解性的聚合物材料制成，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件具有三維多孔結(jié)構(gòu)，并且其僅由單個(gè)多孔片層構(gòu)成或由多個(gè)多孔片層結(jié)構(gòu)組裝而成。優(yōu)選地，本發(fā)明所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件做成適合細(xì)胞培養(yǎng)平板孔、箱、燒瓶和/或生物反應(yīng)器的尺寸。優(yōu)選地，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件由恒定或不同直徑的聚合物支柱和/或纖維組成。優(yōu)選地，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的孔隙率可以通過(guò)改變所述插入件(構(gòu)建體)中的支柱和/或纖維的數(shù)量和尺寸而改變。所述多孔結(jié)構(gòu)優(yōu)選可通過(guò)改變支柱和/或纖維的三維定位圖案而改變。優(yōu)選地，所述支柱和/或纖維具有圓形、三角形、正方形和/或矩形的橫'所述非降解性的聚合物材料優(yōu)選為聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯和/或聚酰胺，更優(yōu)選為聚苯乙烯。所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件通過(guò)表面改性技術(shù)處理，從而改善所述細(xì)胞插入件的細(xì)胞貼附作用。優(yōu)選地，所述表面改性技術(shù)是物理化學(xué)方式，例如等離子體處理、輝光》文電處理，和/或化學(xué)方式，例如^f吏用H2S04、HNOs等強(qiáng)酸處理。優(yōu)選地，所述的表面改性技術(shù)是一種表面涂覆技術(shù)，通過(guò)施加一種不同于用于制備本發(fā)明所述構(gòu)建體的聚合物的涂層物質(zhì)。優(yōu)選地，所述涂層物質(zhì)是天然存在的聚合物，例如蛋白、肽、糖胺聚糖、膠原、粘連蛋白；和/或合成聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚賴氨酸；和/或無(wú)機(jī)物質(zhì)，例如，磷酸鉤、Ti02、Si02、A1203;和/或兩種或多種有機(jī)材料組成的復(fù)合涂層，例如，凝膠和脫乙酰殼多糖，聚丙烯酸和聚乙二醇，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮；和/或一種無(wú)機(jī)/有機(jī)的復(fù)合物，例如，磷酸鈣/膠原復(fù)合物、鈣磷酸/聚乙二醇復(fù)合物、磷酸鈣/胞外基質(zhì)。優(yōu)選地，所述的表面涂層物質(zhì)是以化學(xué)方式例如共價(jià)鍵、氬鍵、離子鍵或范德華力結(jié)合到所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的支柱和/或纖維上。另一方面，本發(fā)明提供一種制造所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法，所述方法包括(A)使用常規(guī)的聚合物加工方法，例如注塑、纖維織造和粘合技術(shù)制造所述插入件的單個(gè)片層，和(B)根據(jù)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，將步驟(A)所述的多個(gè)多孔片層結(jié)構(gòu)切割或不經(jīng)切割后，組裝成所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件。在本發(fā)明制造所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法中，所述組裝優(yōu)選使用非細(xì)胞毒性的聚合物纖維或夾子等連接件。優(yōu)選地，本發(fā)明所述方法還包括(C)表面處理所述組裝后的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，所述表面處理是例如等離子體處理和表面涂覆等；和(D)包裝并利用輻射滅菌進(jìn)行滅菌。本發(fā)明所述表面涂覆處理優(yōu)選是將所述涂層物質(zhì)化學(xué)交聯(lián)、加熱交聯(lián)、真空加熱交聯(lián)和/或輻射交聯(lián)到所述細(xì)胞插入件上。優(yōu)選地，所述交聯(lián)是化學(xué)進(jìn)行的。優(yōu)選地，所述交聯(lián)是使用加熱進(jìn)行的。優(yōu)選地，所述交聯(lián)是使用真空加熱進(jìn)行的。優(yōu)選地，所述交聯(lián)是使用輻射進(jìn)行的。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述輻射是電子束(e-beam)輻射、y輻射和/或紫外線輻射。本發(fā)明所述涂層優(yōu)選是交聯(lián)的。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述交聯(lián)是使用輻射進(jìn)行的，所述輻射優(yōu)選是電子束輻射、Y輻射和/或紫外線輻射。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述交聯(lián)是化學(xué)進(jìn)行的。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述交聯(lián)是使用加熱和真空進(jìn)行的。另一方面，本發(fā)明提供一種制造所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的設(shè)備，所述設(shè)備包括(A)注塑、纖維織造和/或粘合制造聚合物單個(gè)片層的機(jī)構(gòu)；(B)引導(dǎo)和定向機(jī)構(gòu)，為具有適宜橫截面形狀的管狀物，優(yōu)選為矩形、圓形，帶有可調(diào)整旋轉(zhuǎn)角度的旋轉(zhuǎn)動(dòng)力器件，使得各個(gè)片層結(jié)構(gòu)能夠按照預(yù)先確定的相對(duì)位置疊放和/或按照確定的方式排列。優(yōu)選地，本發(fā)明所述設(shè)備還包括(C)切割機(jī)構(gòu)，優(yōu)選為沖模切割機(jī)或激光束切割機(jī)；(D)組裝機(jī)構(gòu)，將所述疊放好的各個(gè)片層裝配在一起。另一方面，本發(fā)明提供一種成套用具，包括所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件以及其它細(xì)胞培養(yǎng)支持物，例如組織培養(yǎng)平板、培養(yǎng)箱(chamber)、燒瓶和/或生物反應(yīng)器。另一方面，本發(fā)明提供一種使用本發(fā)明所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括(A)使用動(dòng)態(tài)接種或靜態(tài)接種方法，將細(xì)胞接種于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件中；(B)接種細(xì)胞以后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件保持在浸沒(méi)于生長(zhǎng)培養(yǎng)基之中的細(xì)胞培養(yǎng)支持物，例如組織培養(yǎng)平板、培養(yǎng)箱、燒瓶和/或生物反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供一種三維多孔的細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建體(細(xì)胞培養(yǎng)插入件)，該構(gòu)建體由非降解性的聚合物支柱和/或纖維制成，用于使哺乳動(dòng)物細(xì)胞貼附在細(xì)胞培養(yǎng)基上，由于所述聚合物支柱或纖維按照一種確定的三維圖案結(jié)合，所述多孔構(gòu)建體具有一種確定的多孔結(jié)構(gòu)。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三維多孔的構(gòu)建體由恒定直徑的聚合物支柱和/或纖維組成。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三維多孔的構(gòu)建體由不同直徑的聚合物支柱和/或纖維組成。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三維多孔的構(gòu)建體由支柱和/或纖維組成，所述支柱和/或纖維具有非圓形的橫截面，例如，但不限于，三角形、正方形、矩形等。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三維多孔的構(gòu)建體的孔隙率可以通過(guò)改變所述構(gòu)建體中的支柱和/或纖維的數(shù)量和尺寸而改變。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三維多孔的構(gòu)建體的多孔結(jié)構(gòu)可通過(guò)改變支柱和/或纖維的三維定位圖案而改變。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的三維多孔的構(gòu)建體通過(guò)表面改性:技術(shù)處理，從而改善所述構(gòu)建體中的支柱和/或纖維的細(xì)胞貼附作用。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面改性技術(shù)是物理化學(xué)方式，例如等離子體處理、輝光放電等。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面改性技術(shù)是化學(xué)方式，例如使用像1^04、冊(cè)03等強(qiáng)酸處理。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面改性技術(shù)是一種表面涂覆技術(shù)，通過(guò)施加一種不同于用于制備本發(fā)明所述構(gòu)建體的聚合物的涂層物質(zhì)。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面涂層物質(zhì)是蛋白、肽、或糖胺聚糖，或者其它天然存在的聚合物，例如月交原、粘連蛋白等。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所*面涂層物質(zhì)是合成聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚賴氨酸等。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面涂層物質(zhì)是以共價(jià)鍵結(jié)合到本發(fā)明所述構(gòu)建體的支柱和/或纖維的表面。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面涂層物質(zhì)是通過(guò)氬鍵、離子鍵或范德華力結(jié)合到本發(fā)明所述構(gòu)建體的支柱和/或纖維。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所g面涂層物質(zhì)是無(wú)機(jī)物質(zhì)，例如，但不限于，磷酸釣、Ti02、Si02、A1A等。更進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述無(wú)機(jī)涂層物質(zhì)是化學(xué)地結(jié)合到本發(fā)明所述多孔構(gòu)建體的支柱和/或纖維。更進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述無(wú)機(jī)涂層物質(zhì)是通過(guò)氳鍵、離子鍵或范德華力結(jié)合到本發(fā)明所述多孔構(gòu)建體的支柱和/或纖維。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面涂層物質(zhì)是兩種或多種有機(jī)材料組成的復(fù)合涂層，該復(fù)合涂層是例如，但不限于，凝膠和脫乙酰殼多糖，聚丙烯酸和聚乙二醇，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮等。'進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述表面涂層物質(zhì)是一種無(wú)機(jī)/有機(jī)的復(fù)合物，例如，但不限于，磷酸鉀/膠原復(fù)合物、釣磷酸/聚乙二醇復(fù)合物、磷酸釣/胞外基質(zhì)。更進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述有機(jī)復(fù)合涂層是通過(guò)化學(xué)共價(jià)鍵結(jié)合到本發(fā)明所述多孔構(gòu)建體的支柱和/或纖維。更進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述有機(jī)復(fù)合涂層是通過(guò)非共價(jià)鍵，例如離子鍵、氬鍵或范德華力，或上述所有方式，結(jié)合到本發(fā)明所述多孔構(gòu)建體的支柱和/或纖維。更進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述無(wú)機(jī)/有機(jī)復(fù)合涂層是通過(guò)化學(xué)共價(jià)鍵結(jié)合到本發(fā)明所述多孔構(gòu)建體的支柱和/或纖維。更進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述無(wú)機(jī)/有機(jī)復(fù)合涂層是通過(guò)非共價(jià)鍵，例如離子鍵、氳鍵或范德華力，或上述所有方式，結(jié)合到本發(fā)明所述多孔構(gòu)建體的支柱和/或纖維。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供一種制造本發(fā)明所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法，所述方法包括(A)使用常規(guī)的聚合物加工方法，例如注塑、纖維織造和粘合技術(shù)制造所述插入件的單獨(dú)層，(B)根據(jù)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，使用一種預(yù)制部件來(lái)組裝所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件，(c)表面處理所述組裝后的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，所述表面處理是例如等離子體處理和表面涂覆等，(D)包裝并利用輻射滅菌進(jìn)^"滅菌。根據(jù)本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供一種成套用具，包括本發(fā)明所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建體及其它細(xì)胞培養(yǎng)供應(yīng)物，例如組織培養(yǎng)平板。本發(fā)明所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件優(yōu)選由一種非降解性的聚合物材料制成。該聚合物材料優(yōu)選聚苯乙烯，該材料目前用于制造二維多孔細(xì)胞/組織培養(yǎng)平板和燒瓶。通過(guò)所述插入件的設(shè)計(jì)來(lái)確定表面積、孔隙率和孔徑尺寸，包括支柱的尺寸和幾何結(jié)構(gòu)，每單位體積支柱/纖維的數(shù)目，以及該三維插入件結(jié)構(gòu)中支柱/纖維的構(gòu)建圖案。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種由支柱和/或結(jié)實(shí)的纖維在連接處相互垂直結(jié)合而組成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件(圖l-3、5)。.在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種由支柱和/或結(jié)實(shí)的纖維在連接處按角度結(jié)合在一起而組成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件(圖2和4)。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種由支柱和/或纖維組成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件。所述支柱和纖維按照一種預(yù)先設(shè)計(jì)的方式或圖案結(jié)合在一起。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件包括由非細(xì)胞毒性的和非降解性的聚合物制造的支柱和纖維。在一種更加具體的實(shí)施方式中，所述非降解性的聚合物是聚苯乙烯。在一種更加具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件通過(guò)等離子體或輝光放電技術(shù)進(jìn)一步表面處理來(lái)修飾其表面性質(zhì)，從而獲得更好的細(xì)胞貼附效果。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件是一種三維圓盤狀的多孔結(jié)構(gòu)。在另一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件是一種三維立方形多孔結(jié)構(gòu)。.在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件進(jìn)一步用生物分子涂覆其表面，從而增強(qiáng)其細(xì)胞貼附性。所述生物分子是力交原(I、II、III、IV、VII型，等等)、纖連蛋白、層粘連蛋白，以及其它的胞外基質(zhì)。所述生物分子或者以共價(jià)鍵結(jié)合于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。為了提高所述生物分子涂層的穩(wěn)定性，該涂層可以使用各種交聯(lián)技術(shù)如化學(xué)交聯(lián)、輻射或熱處理進(jìn)行交聯(lián)。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件^使用一種天然聚合物如藻酸鹽、脫乙酰殼多糖來(lái)涂覆。所述天然聚合物或者以共價(jià)鍵結(jié)合于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。為了提高所述天然聚合物涂層的穩(wěn)定性，該涂層可以使用各種交聯(lián)技術(shù)如化學(xué)交聯(lián)、輻射或熱處理等進(jìn)行交聯(lián)。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件使用一種合成聚合物涂覆，該合成聚合物是例如，但不限于，聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮(polypyropirilidone)、聚(L-乳酸)等。所述合成聚合物或者以共價(jià)鍵結(jié)合于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。為了提高所述合成聚合物涂層的穩(wěn)定性，該涂層可以使用各種交聯(lián)技術(shù)如化學(xué)交聯(lián)、輻射或熱處理等進(jìn)行交聯(lián)。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件使用一種由兩種或多種有機(jī)材料組成的復(fù)合涂料涂覆，該涂料是例如但不限于，明膠和脫乙酰殼多糖，聚丙烯酸和聚乙二醇，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，等等。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種無(wú)機(jī)材料涂覆，該無(wú)機(jī)材料是例如磷酸4丐、Ti02、A1A等。該無(wú)機(jī)涂層或者化學(xué)地鍵合到該細(xì)胞培養(yǎng)物插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種復(fù)合的無(wú)機(jī)材料涂覆，該復(fù)合無(wú)機(jī)材料是例如磷酸4弓和Ti02,磷酸釣和Al203等，該無(wú)機(jī)復(fù)合物涂層或者化學(xué)地鍵合到該細(xì)胞培養(yǎng)物插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種無(wú)機(jī)和有機(jī)材料組成的復(fù)合涂料涂覆，該復(fù)合涂料是例如，但不限于，磷酸鉤/膠原，磷酸鈣/明膠，磷酸鉀/聚乙二醇等。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的涂層用一種或多種生物分子浸漬，該生物分子是例如治療劑，包括但不限于，抗生素、激素、生長(zhǎng)因子、抗腫瘤劑、抗真菌劑、抗病毒劑、止痛藥、抗組胺藥、消炎藥、抗感染藥、創(chuàng)傷愈合劑、傷口密封劑、細(xì)胞引誘劑、細(xì)胞因子及其類似物。下面對(duì)于本發(fā)明的上述各技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述和說(shuō)明。本發(fā)明提供一種三維多孔的培養(yǎng)物插入件，所述插入件由一種非降解性的聚合物材料制造，所述材料優(yōu)選為聚苯乙烯或其它聚合物，該材料已用于制造組織培養(yǎng)平板和燒瓶。所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件由多層互相連接的支柱和/或結(jié)實(shí)的纖維組成，該支柱或纖維按照一種預(yù)先設(shè)計(jì)的方式或圖案而結(jié)合在一起。這種構(gòu)型允許所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件具有iooy。的孔聯(lián)通性。除了所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件之外，本發(fā)明還提供所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的制造方法，以及在一種細(xì)胞培養(yǎng)研究裝置中使用所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法。構(gòu)形本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)插入件可以形成用于實(shí)現(xiàn)具體的應(yīng)用目的的任何大小和形狀，所述應(yīng)用目的是例如，適合細(xì)胞/組織培養(yǎng)平板、燒瓶和生物反應(yīng)器的大小和形狀。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種由支柱和/或纖維組成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件。所述支柱和纖維按照一種預(yù)先設(shè)計(jì)的方式或圖案結(jié)合在一起。通過(guò)所述插入件的設(shè)計(jì)來(lái)確定細(xì)胞培養(yǎng)插入件的表面積、孔隙率和孔徑尺寸，所述插入件的設(shè)計(jì)包括支柱的尺寸和幾何結(jié)構(gòu)，每單位體積內(nèi)支柱的數(shù)目，以及該三維插入結(jié)構(gòu)中支柱的結(jié)構(gòu)圖案。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種由支柱和/或結(jié)實(shí)的纖維在連接處相互垂直結(jié)合而組成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種由支柱和/或纖維組成的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，在該插入件中，所述支柱和/或纖維在連接處并不都是彼此垂直的，而是以不同的角度結(jié)合。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件是一種三維的圓盤形多孔結(jié)構(gòu)。在另一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件是一種三維的立方體形多孔結(jié)構(gòu)。尺寸本發(fā)明所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件可以預(yù)先加工成標(biāo)準(zhǔn)尺寸，或者可以定估文成適合具體的細(xì)胞培養(yǎng)平板孔、箱、燒瓶、生物反應(yīng)器的尺寸。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明才是供一種具有一種尺寸(直徑和高度)的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其適合一種可商購(gòu)的組織培養(yǎng)平板的圓形孔。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供一種具有一種立方形尺寸(長(zhǎng)x寬x高)的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其適合一種組織培養(yǎng)平板的矩形孔。在另一種實(shí)施方式中，該細(xì)胞培養(yǎng)插入件具有適合一種生物反應(yīng)器的腔室的尺寸和形狀。在一種具體實(shí)施方式中，該細(xì)胞培養(yǎng)插入件的尺寸適合一種組織培養(yǎng)燒瓶的立方空間。該三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的支柱/纖維的直徑可以為50nm-lmm。細(xì)胞培養(yǎng)插入件的平均孔徑可以為50nm-lmm。材料本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)插入件主要或?qū)ｉT地由一種非降解性的聚合物來(lái)制造。這種非降解性的聚合物包括，舉例來(lái)說(shuō)，非降解性的合成聚合物，例如，但不限于，聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺等。細(xì)胞培養(yǎng)插入件的表面可以用本領(lǐng)域已知的表面改性技術(shù)進(jìn)一步處理，例如，但不限于，通過(guò)等離子體或輝光放電技術(shù)進(jìn)一步表面處理來(lái)改善其表面性質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)更好的細(xì)胞貼附效果。所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的表面可以進(jìn)一步用生物分子表面涂覆，所述生物分子是，例如，但不限于，膠原(I、II、III、IV、V、VI型，等等)、纖連蛋白、層粘連蛋白或其它的胞外基質(zhì)分子。所述生物分子或者以共價(jià)鍵結(jié)合于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。為了提高所述生物分子涂層的穩(wěn)定性，該涂層可以使用各種交聯(lián)技術(shù)如化學(xué)交聯(lián)、輻射或熱處理等進(jìn)行交聯(lián)。所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的表面可以進(jìn)一步地表面涂覆一種合成聚合物，該合成聚合物是例如，但不限于，聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮(polyvinylpyropirilidone)、聚(L-乳酸)、聚賴氨酸等。所述合成聚合物或者以共價(jià)鍵結(jié)合于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。為了提高所述合成聚合物涂層的穩(wěn)定性，該涂層可以使用各種交聯(lián)技術(shù)如化學(xué)交聯(lián)、輻射或熱處理等進(jìn)行交聯(lián)。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種由兩種或多種有機(jī)材料組成的復(fù)合涂料涂覆，該涂料是例如但不限于，明膠和脫乙酰殼多糖，聚丙烯酸和聚乙二醇，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，等等。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種無(wú)機(jī)材料涂覆，該無(wú)機(jī)材料是例如磷酸釣、Ti02、A1A等。該無(wú)機(jī)涂層或者化學(xué)地鍵合到該細(xì)胞培養(yǎng)物插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種復(fù)合的無(wú)機(jī)材料涂覆，該復(fù)合無(wú)機(jī)材料是例如磷酸釣和Ti02，磷酸鉀和A1A等。該無(wú)機(jī)復(fù)合物涂層或者化學(xué)地4建合到該細(xì)胞培養(yǎng)物插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件用一種無(wú)機(jī)和有機(jī)材料組成的復(fù)合涂料涂覆，該復(fù)合涂料是例如，但不限于，磷酸鈣/膠原、磷酸鈣/凝膠、磷酸鈣/聚乙二醇，等等。該復(fù)合物涂層或者化學(xué)地鍵合到該細(xì)胞培養(yǎng)物插入件表面，或者物理吸附于插入件表面。在一種具體的實(shí)施方式中，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的涂層用一種或多種生物分子浸漬，該生物分子是例如治療劑，包括但不限于，抗生素、激素、生長(zhǎng)因子、抗肺瘤劑、抗真菌劑、抗病毒劑、止痛藥、抗組胺藥、消炎藥、抗感染藥、創(chuàng)傷愈合劑、傷口密封劑、細(xì)胞引誘劑、細(xì)胞因子和類似物。制造細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法該細(xì)胞培養(yǎng)插入件必需是便宜的，從而其制造方法必需是非常經(jīng)濟(jì)合算并且適合于批量生產(chǎn)。該方法是一種我們稱為支架組裝技術(shù)的方法。一個(gè)示范性的制造本發(fā)明細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法包括下列步驟。步驟I、根據(jù)其結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，支架的每一層通過(guò)一種適宜的聚合物加工技術(shù)預(yù)先加工成預(yù)制件。所述聚合物加工技術(shù)可以是，但不限于，注塑法以及纖維織造和粘合，上述聚合物加工技術(shù)為制造聚合物部件和聚合物篩網(wǎng)的最有效與經(jīng)濟(jì)的方式。步驟II、然后，通過(guò)將支架的若干層的預(yù)制件相互疊放于彼此之上，將支架的各層組裝到一起。支架的每一層可以具有不同的結(jié)構(gòu)，并且可以在尺寸上比最終的產(chǎn)品更大。在其尺寸比最終產(chǎn)品更大的情況下，通過(guò)^f吏用例如沖模切割機(jī)的機(jī)械裝置(mechanicaldevice)，或激光束進(jìn)行切割，最終的產(chǎn)品可以從組裝的更大尺寸的構(gòu)建體纟皮切割成合適的尺寸和形狀。一種或多種最終的細(xì)胞培養(yǎng)插入件可以由單獨(dú)組裝而成的更大構(gòu)建體切割而得到。在支架的每一層以正確的尺寸預(yù)先加工的情況下，該細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建體可以在一種機(jī)械裝置的輔助下組裝在一起，所述機(jī)械裝置在裝配過(guò)程中起著引導(dǎo)和定向各層預(yù)制件的作用。例如，在制造一種推間盤細(xì)胞培養(yǎng)插入件時(shí)，該機(jī)械裝置是一種具有適當(dāng)直徑的中空管狀物，其可容納若干預(yù)先加工的圓形支架部件。該管狀導(dǎo)向裝置也可具有一種機(jī)械結(jié)構(gòu)，其將預(yù)先加工的部件按照確定的方式排列，從而在組裝后得到預(yù)先確定的構(gòu)造。在一種機(jī)械組裝裝置的幫助下，將支架各部件在適當(dāng)?shù)奈恢蒙辖M裝，然后將所述各部件用非細(xì)胞毒性的聚合物纖維或夾子等連接固定在一起，該聚合物纖維或夾子等優(yōu)選是用與細(xì)胞培養(yǎng)插入件相同類型的材料制造的。在制造一種正方形或矩形截面的細(xì)胞培養(yǎng)插入件時(shí)也可^f吏用一種^L械組裝導(dǎo)向裝置，該裝置具有一種正方形或矩形的橫截面，相同的組裝方法可以用來(lái)組裝立方形的細(xì)胞培養(yǎng)插入件。所述組裝導(dǎo)向裝置也可以是預(yù)先對(duì)準(zhǔn)的聚合物纖維。這些預(yù)先對(duì)準(zhǔn)的纖維將穿過(guò)預(yù)制的支架部件的一些洞或孔，并且最后^1奪這些部件連接在一起，從而在組裝以后獲得預(yù)先確定的構(gòu)型。所述部件經(jīng)組裝后也可使用塑料超聲焊接或熔融焊接的方式連接固定在一起。通過(guò)將若干預(yù)制的具有若干不同結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的部件組裝在一起，該支架組裝技術(shù)還提供組裝一種不均勻結(jié)構(gòu)的細(xì)胞培養(yǎng)物插入件的可能性。還可以通過(guò)改變一個(gè)部件相對(duì)于其它部件的相對(duì)位置，例如^走轉(zhuǎn)一些部件到確定的角度，從而改變?cè)摷?xì)胞培養(yǎng)插入件的結(jié)構(gòu)。使用上述組裝技術(shù)制造的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的好處在于，通過(guò)筒單去除將單獨(dú)層部件固定在一起的組裝夾或組裝纖維，該插入件可以在用于細(xì)胞培養(yǎng)后被容易地拆開。該拆開的部件可以容易地通過(guò)?！芬?jiàn)顯微技術(shù)來(lái)評(píng)價(jià)，所述常規(guī)顯微技術(shù)例如是光學(xué)顯微鏡法、掃描電子顯孩t鏡法等。該組裝的細(xì)胞培養(yǎng)插入件可以通過(guò)各種表面改性技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的表面處理，所述的表面改性技術(shù)是例如所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的等離子體和輝光放電技術(shù)。該細(xì)胞培養(yǎng)插入件還可以用無(wú)機(jī)、有機(jī)和無(wú)機(jī)/有機(jī)材料通過(guò)浸涂、化學(xué)接枝和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它技術(shù)涂覆。最后，可以對(duì)所述最后表面處理過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)插入件進(jìn)行包裝和滅菌。成套用具(kit)本發(fā)明進(jìn)一步包括提供在一個(gè)包裝容器內(nèi)具有一個(gè)或多個(gè)所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件和組織培養(yǎng)平板的成套用具。本發(fā)明的成套用具包括一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)插入件，并且可以包括其它組件，例如一種用于將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件從所述組織培養(yǎng)平^反取出和插入的機(jī)械裝置、無(wú)菌包裝泡沫或其他一次性材料，及其類似物。本發(fā)明的成套用具可以包括單獨(dú)的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，無(wú)菌包裝，并且能開包即用。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的成套用具可以包括兩個(gè)或多個(gè)相同尺寸的細(xì)胞培養(yǎng)插入件。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的成套用具可以包括兩個(gè)或多個(gè)不同尺寸的細(xì)胞培養(yǎng)插入件。本發(fā)明的成套用具可以包括一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)插入件或多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其插入在一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞/組織培養(yǎng)平板的孔中，以及無(wú)菌包裝，并且能開包即用。使用所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件培養(yǎng)細(xì)胞與聚笨乙錄組織培養(yǎng)平板一起使用本發(fā)明還提供使用所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件在一種聚苯乙烯組織培養(yǎng)平板內(nèi)培養(yǎng)活細(xì)胞的方法。該細(xì)胞培養(yǎng)插入件可以是一種圓盤或立方體的形狀，以適合組織培養(yǎng)平板的孔?？梢允褂脛?dòng)態(tài)接種或靜態(tài)接種方法，將細(xì)胞接種于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件中。在一個(gè)實(shí)施例中，使用靜態(tài)接種方法，將一定體積的細(xì)胞懸浮液用吸量管從所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的上表面加入，并讓細(xì)胞有一定的時(shí)間貼附到其上，然后再用培養(yǎng)液灌洗。接種細(xì)胞以后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件放入含有細(xì)胞培養(yǎng)液的孔板中，在37。C下，相對(duì)濕度9(W、二氧化;灰含量5-10°/。的氣氛中于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。在另一個(gè)實(shí)施例中，使用動(dòng)態(tài)接種方法，所述接種是通過(guò)在一種旋轉(zhuǎn)燒瓶中，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件浸入細(xì)胞懸浮液中來(lái)進(jìn)行的。在接種后，將細(xì)胞培養(yǎng)插入件放置到帶有培養(yǎng)基的組織培養(yǎng)平板的孔內(nèi)，在37。C下、5°/。二氧化碳的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)。定期替換細(xì)胞培養(yǎng)基。當(dāng)在某一確定的時(shí)間點(diǎn)完成細(xì)胞培養(yǎng)以后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件從該細(xì)胞培養(yǎng)平板中取出，并進(jìn)行常規(guī)的試驗(yàn)。將細(xì)胞培養(yǎng)插入件拆開，以便在顯微鏡下觀察在所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的不同層或者不同位置上的細(xì)胞貼附和細(xì)力包活性。在所述細(xì)胞需要回收的情形下，使用胰蛋白酶-EDTA溶液對(duì)所述細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化。當(dāng)細(xì)胞從所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件上分離后，將細(xì)胞再次懸浮在小體積的新鮮的包含血清的培養(yǎng)基中，從而使胰蛋白酶失活。然后可以將這些細(xì)胞清洗回收后用于其它目的。與生物反應(yīng)器一起^吏用本發(fā)明還提供使用所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件在生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)活細(xì)胞的方法。該細(xì)胞培養(yǎng)插入件可以是一種圓盤形或立方形，其尺寸和形狀適合放置于所述生物反應(yīng)器。在使用靜態(tài)接種方法的一個(gè)實(shí)施例中，將一定體積的細(xì)胞懸浮液用吸量管從所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的上表面加入，并且在用培養(yǎng)基灌洗前允許細(xì)胞貼附一定的時(shí)間。在使用靜態(tài)接種方法接種以后，將這些接種了細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物插入件放入充滿細(xì)胞培養(yǎng)基的生物反應(yīng)器中，在37。C下、90%濕度、5-10%二氧化碳的氣氛中培養(yǎng)。在整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞培養(yǎng)液持續(xù)地流通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)插入件的孔洞，并被定期更換。當(dāng)在某一確定的時(shí)間點(diǎn)完成細(xì)胞培養(yǎng)以后，將所述細(xì)月包培養(yǎng)插入件從該生物反應(yīng)器中取出，并進(jìn)行常規(guī)的試驗(yàn)。將細(xì)胞培養(yǎng)插入件拆開，以便在顯微鏡下觀察在所述細(xì)胞插入件的不同層或者不同位置上的細(xì)胞貼附和細(xì)胞活性。在所述細(xì)胞需要回收的情形下，使用胰蛋白酶-EDTA溶液對(duì)所述細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化。當(dāng)細(xì)胞從所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件上分離后，將細(xì)胞再次懸浮在小體積的新鮮的包含血清的培養(yǎng)基中，從而使胰蛋白酶失活。然后可以將這些細(xì)胞清洗回收后用于其它目的。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)插入件具有以下優(yōu)點(diǎn)所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件具有良好明確的結(jié)構(gòu)，包括孔隙率、孔徑尺寸、表面積和表面化學(xué)性質(zhì)。所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件能夠方便地與常規(guī)二維細(xì)胞培養(yǎng)容器配合使用，共同形成一種能l是供目前的二維細(xì)胞培養(yǎng)體系的全部侵_捷之處的三維培養(yǎng)體系，對(duì)于醫(yī)藥、生命科學(xué)以及生物工程研究領(lǐng)域極具價(jià)值。具體地，該理想的三維培養(yǎng)體系具有以下特征1.其具有一種多孔的三維結(jié)構(gòu)，從而所述細(xì)胞可以同時(shí)貼附于該三維結(jié)構(gòu)的外表面和內(nèi)表面。該100%聯(lián)通的多孔的結(jié)構(gòu)能夠允許營(yíng)養(yǎng)物和代謝產(chǎn)物容易地進(jìn)行交換。2.該多孔的三維結(jié)構(gòu)易于與目前的二維細(xì)胞培養(yǎng)容器一起使用。它可以很方便地以一種二維細(xì)胞培養(yǎng)平板孔內(nèi)放置三維^入件的方式使用。3.該多孔的結(jié)構(gòu)足夠結(jié)實(shí)從而能承受細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中正常的機(jī)械操作，并且在細(xì)胞培養(yǎng)期間該多孔的結(jié)構(gòu)不發(fā)生變形和改變。以下，結(jié)合附圖來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方式，其中圖l表示本發(fā)明細(xì)胞培養(yǎng)插入件的一種實(shí)施方式，其包括結(jié)合并組裝在一起的多層排列的聚合物纖維。圖2表示所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的一種實(shí)施方式的橫截面，顯示所述纖維的取向和所述纖維結(jié)合在一起的方式。圖3表示制造圖1實(shí)施方式的預(yù)制層組裝方式。圖4表示細(xì)胞培養(yǎng)插入件的另一種實(shí)施方式，其包括結(jié)合并組裝在一起的多層排列的聚合物纖維。圖5表示制造不同構(gòu)型的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的預(yù)制層組裝方式。圖6表示制造不同構(gòu)型的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的預(yù)制層組裝方式。圖7表示用于組裝預(yù)制層并確保其在所述三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的適當(dāng)位置的纖維連接件(Fiberclap)。圖8表示制造所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的引導(dǎo)和定向機(jī)構(gòu)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。但這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)于下列實(shí)施例中未注明具體實(shí)驗(yàn)條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。實(shí)施例i:細(xì)胞培養(yǎng)插入件的制造方法使用聚苯乙烯材料制造細(xì)胞培養(yǎng)插入件。將圖5所示的細(xì)胞培養(yǎng)插入件的各部件，用于組裝在細(xì)胞培養(yǎng)插入件中。根據(jù)設(shè)計(jì)將這些部件注射成型。在這些部件制得后，首先將第一層放置到組裝導(dǎo)向裝置中，然后依次在導(dǎo)向裝置中放入第二、第三和第四層部件。這樣，各部件的總數(shù)為4。然后使用一種如圖7所示的聚苯乙烯纖維連接件，將這4個(gè)部件連接在一起。通過(guò)兩端成結(jié)或者兩端變形，將該連接件的兩端進(jìn)一步固定，從而所述兩端不會(huì)從插入件的洞孔中跑出。組裝后，使用一種PolaronPT7300RF等離子體桶狀刻蝕器(QuorumTechnology,EastSussex,UK)，在氬氣氣氛中將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件進(jìn)行等離子體處理。其射頻功率、壓力和處理時(shí)間分別固定為296瓦特、lxl0"毫巴和5分鐘。分別地包裝該等離子體處理過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，并且最終用2OKGy劑量的Y射線輻射進(jìn)行滅菌。實(shí)施例2:使用細(xì)胞培養(yǎng)插入件來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞本發(fā)明還提供在組織培養(yǎng)聚苯乙烯平板中使用該細(xì)胞培養(yǎng)插入件培養(yǎng)活細(xì)胞的方法。用于該研究的細(xì)胞培養(yǎng)插入件具有10ram寬xl0mm長(zhǎng)x0.3mm厚的尺寸，具有200jum的正方形孔和400/am的纖維直徑。使用靜態(tài)接種方法接種平滑肌細(xì)胞用移液管將500jil平滑肌細(xì)胞懸浮液(^105個(gè)細(xì)胞/毫升)從所述插入件的上表面加入，使細(xì)胞在37。C下貼附2小時(shí)后再灌入更多細(xì)胞培養(yǎng)基。接種了細(xì)胞后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件放入含有細(xì)胞培養(yǎng)基的多孔平板中，并且在37。C下，于一種90°/。濕度的含5-10%C02的空氣氣氛內(nèi)于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基由包含5%(v/v)胎牛血清的Dulbecco氏改進(jìn)的Eagle's培養(yǎng)基(Dulbecco，sModifiedEagle'sMedium,DMEM)組成。在使用動(dòng)態(tài)接種方法的情形下，接種是通過(guò)將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件浸沒(méi)于裝在旋轉(zhuǎn)燒瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞懸浮液中，于60rpm下攪拌進(jìn)行的，并且將該旋轉(zhuǎn)燒瓶在37T:下放在濕潤(rùn)的5。/。C02培養(yǎng)箱中。接種以后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件;故置到帶有細(xì)胞培養(yǎng)基的組織培養(yǎng)平板的孔中，于37匸下濕潤(rùn)的5。/。C02培養(yǎng)箱中進(jìn)一步培養(yǎng)。并定期更換培養(yǎng)基。當(dāng)于某一確定的時(shí)間點(diǎn)完成細(xì)胞培養(yǎng)后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件從細(xì)胞培養(yǎng)平板中取出，并進(jìn)行常規(guī)的分析。將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件拆開，從而在顯微鏡下觀察在所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的不同層或位置上的細(xì)胞貼附和細(xì)胞活性。在所述細(xì)胞需要回收的情形下，使用胰蛋白酶-EDTA溶液(SigmaT4049)對(duì)所述細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化。當(dāng)細(xì)胞從所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件上脫離后，將細(xì)胞再次懸浮在小體積的新鮮的包含血清的培養(yǎng)基中，從而使胰蛋白酶失活。然后可以將這些細(xì)JJ包用于其它目的。實(shí)施例3:使用細(xì)胞培養(yǎng)插入件在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞本發(fā)明還提供一種使用所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件在生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)活細(xì)胞的方法。這里使用的細(xì)胞培養(yǎng)插入件是圓盤狀的(IO咖直徑的圓盤，厚度為0.8mm、孔隙率80%,并且纖維直徑為200jam)，且適合所述的生物反應(yīng)器。首先將大鼠骨骨逸基質(zhì)細(xì)胞(MSCs)靜態(tài)地"t妄種于所述細(xì)胞培養(yǎng)物插入件上。將含有250，000只大鼠的MSC的500juL的MSC懸浮液用吸量管從所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的上表面加入，使細(xì)胞于37。C下貼附2小時(shí)，然后再用細(xì)胞培養(yǎng)基沖灌。接種細(xì)胞以后，將這些接種了的細(xì)胞培養(yǎng)物插入件保持在流量灌注細(xì)胞培養(yǎng)器中。將這些接種了細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物插入件浸沒(méi)在一種完全的骨分化培養(yǎng)基中，并且于37。C下、90%濕度的、含有5-10%二氧化碳的空氣氣氛中培養(yǎng)。該生物反應(yīng)器體系的流體流動(dòng)操作是通過(guò)一種設(shè)定速度為lml/分鐘的蠕動(dòng)泵來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在培養(yǎng)期間，所述培養(yǎng)基液流通過(guò)插入件的孔從而穿過(guò)所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件。因此，所述細(xì)胞是在動(dòng)態(tài)剪切條件下培養(yǎng)的。所述細(xì)胞在該生物反應(yīng)器中培養(yǎng)4、8和16天，每48小時(shí)進(jìn)行一次完全的培養(yǎng)基更換。說(shuō)明書第21/21頁(yè)在培養(yǎng)期間結(jié)束時(shí)，將所有的細(xì)胞培養(yǎng)插入構(gòu)建體用PBS沖洗，并在-20°C下貯存于l.5ml的蒸餾的去離子水中，直到進(jìn)行進(jìn)一步的分析。在進(jìn)行進(jìn)一步的分析時(shí)，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件拆開，從而在顯微鏡下觀察在所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的不同層或位置上的細(xì)胞貼附形態(tài)和細(xì)胞活性。權(quán)利要求1.一種三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件由非降解性的無(wú)細(xì)胞毒性的聚合物材料制成，該插入件具有確定的和規(guī)則的三維多孔結(jié)構(gòu)，并且其由單個(gè)多孔片層構(gòu)件構(gòu)成或由多個(gè)多孔片層構(gòu)件固定在一起而成，優(yōu)選地，所述三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件做成適合細(xì)胞培養(yǎng)平板孔、培養(yǎng)室、培養(yǎng)瓶和/或生物反應(yīng)器的尺寸。2.權(quán)利要求1所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其特征在于，所述三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件由恒定或不同直徑的聚合物支柱和/或纖維組成；優(yōu)選地，所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的孔隙率可以通過(guò)改變所述插入件中的支柱和/或纖維的數(shù)量和尺寸而改變；和/或優(yōu)選地，多孔結(jié)構(gòu)可通過(guò)改變支柱和/或纖維的三維定位圖案而改變。3.權(quán)利要求2所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其特征在于，所述支柱和/或纖維具有圓形、三角形、正方形和/或矩形的橫截面。4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其特征在于，所述非降解性的聚合物材料為聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯和/或聚酰胺，優(yōu)選為聚苯乙烯；和/或所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件通it^面改性:忮術(shù)處理，從而改善所述細(xì)胞插入件的細(xì)胞貼附作用，優(yōu)選地，所述表面改性才支術(shù)是物理化學(xué)方式，例如等離子體處理、輝光放電處理，和/或化學(xué)方式，例如使用H2S04、HNO;等強(qiáng)酸處理。5.權(quán)利要求4所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其特征在于，所述的表面改性技術(shù)是一種表面涂覆技術(shù)，通過(guò)施加一種不同于用于制備權(quán)利要求l所述構(gòu)建體的聚合物的涂層物質(zhì)，優(yōu)選地，所述涂層物質(zhì)是天然存在的聚合物，例如，蛋白、肽、糖胺聚糖、膠原、粘連蛋白；和/或合成聚合物，例如，聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚賴氨酸；和/或無(wú)才幾物質(zhì)，例如，磷酸4丐、Ti02、Si02、A1203;和/或兩種或多種有機(jī)材料組成的復(fù)合涂層，例如，凝膠和脫乙酰殼多糖，聚丙烯酸和聚乙二醇，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮；和/或一種無(wú)機(jī)/有機(jī)的復(fù)合物，例如，磷酸釣/膠原復(fù)合物、鈞磷酸/聚乙二醇復(fù)合物、磷酸釣/胞外基質(zhì)。6.權(quán)利要求5所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件，其特征在于，所述的表面涂層物質(zhì)是以化學(xué)方式例如共價(jià)鍵、氫鍵、離子鍵或范德華力結(jié)合到所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件的支柱和/或纖維上。7.—種制造權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法，所述方法包括(A)使用常規(guī)的聚合物加工方法，例如注塑、纖維織造和粘合技術(shù)制造所述插入件的單獨(dú)層；(B)根據(jù)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，將步驟(A)所述的多個(gè)多孔片層結(jié)構(gòu)切割或不經(jīng)切割后，組裝成所述的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，優(yōu)選地，所述組裝使用非細(xì)胞毒性的聚合物纖維或夾子等連接件。8.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法還包括(C)表面處理所述組裝后的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，所述表面處理是例如等離子體處理和表面涂覆等，優(yōu)選地，所述表面涂覆處理是將所述涂層物質(zhì)化學(xué)交聯(lián)、加熱、真空交聯(lián)和/或輻射交聯(lián)到所述細(xì)胞插入件上，進(jìn)一步優(yōu)選地，所述輻射是電子束輻射、Y輻射和/或紫外線輻射；和/或(D)包裝并利用輻射滅菌進(jìn)行滅菌。9.一種制造權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的設(shè)備，其特征在于，所述設(shè)備包括(A)注塑、纖維織造和/或粘合制造聚合物單個(gè)多孔片層構(gòu)件的機(jī)構(gòu)；當(dāng)所述三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件由多個(gè)多孔片層構(gòu)件構(gòu)成時(shí)，所述設(shè)備還包括(B)引導(dǎo)和定向機(jī)構(gòu)，為具有適宜橫截面形狀的管狀物，優(yōu)選為矩形、圓形，帶有可調(diào)整旋轉(zhuǎn)角度的導(dǎo)向定位機(jī)構(gòu)，使得各個(gè)多孔片層構(gòu)件能夠按照預(yù)先確定的相對(duì)位置疊放和/或按照確定的方式排列。10.權(quán)利要求9所述的設(shè)備，其特征在于，所述設(shè)備還包括(C)切割機(jī)構(gòu)，優(yōu)選為沖模切割機(jī)或激光束切割機(jī)，在將所述的多孔片層構(gòu)件送入到所述引導(dǎo)和定向機(jī)構(gòu)之前切割成為適宜的尺寸；(D)組裝機(jī)構(gòu)，將所述疊放好的各個(gè)多孔片層構(gòu)件裝配在一起。11.一種成套用具，包括權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件及其它細(xì)胞培養(yǎng)支持物，例如組織培養(yǎng)平板、培養(yǎng)室、燒瓶和/或生物反應(yīng)器。12.使用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞的用途。13.—種使用權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)所述的三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件培養(yǎng)細(xì)胞的方法，所述方法包括(A)使用動(dòng)態(tài)接種或靜態(tài)接種方法，將細(xì)胞接種于所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件中；(B)接種細(xì)胞以后，將所述細(xì)胞培養(yǎng)插入件保持在浸沒(méi)于生長(zhǎng)培養(yǎng)基之中的細(xì)胞培養(yǎng)支持物，例如組織培養(yǎng)平板、培養(yǎng)室、培養(yǎng)l瓦和/或生物反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)。全文摘要本發(fā)明涉及一種三維多孔的細(xì)胞培養(yǎng)插入件，由非生物降解性的聚合物形成，用于活細(xì)胞的貼附、增殖和分化。該插入件由聚合物支柱和/或纖維組成，該支柱和/或纖維按照一種設(shè)計(jì)好的三維圖案結(jié)合在一起。該三維的細(xì)胞培養(yǎng)插入件將會(huì)在標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)條件下，與細(xì)胞/組織培養(yǎng)平板、組織培養(yǎng)燒瓶、生物反應(yīng)器及其類似物一起使用。本發(fā)明進(jìn)一步提供制造該三維細(xì)胞培養(yǎng)插入件的方法。最后，本發(fā)明提供包括一種或更多種的三維多孔細(xì)胞培養(yǎng)插入件與其它細(xì)胞培養(yǎng)支持物如組織培養(yǎng)平板和燒瓶，共同在一個(gè)包裝內(nèi)的成套用具。文檔編號(hào)C12M1/26GK101245313SQ20071030069公開日2008年8月20日申請(qǐng)日期2007年12月21日優(yōu)先權(quán)日2007年2月13日發(fā)明者青劉申請(qǐng)人:青劉