專利名稱：：一種咪草煙農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一種咪草煙農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑，屬于生物高
技術(shù)領(lǐng)域：
，是利用微生物的方法降解化學(xué)農(nóng)藥殘留，適用于現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中綠色無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)與加工。二
背景技術(shù)：
：化學(xué)農(nóng)藥的使用大大地促進(jìn)了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)挽回了大量因草害等原因造成的損失，并極大地提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的勞動(dòng)效率和機(jī)械化程度，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的現(xiàn)代化進(jìn)程中起了不可估量的作用。但同時(shí)農(nóng)藥都是一些有毒有害化學(xué)物質(zhì)，它們進(jìn)入生態(tài)環(huán)境后，不僅殺死了對(duì)人類有害的生物，同時(shí)也對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成了嚴(yán)重的危害。農(nóng)藥的大量使用引起農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，嚴(yán)重影響了人民的身體健康及農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯。隨著人們生活水平的提高和環(huán)境保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，全社會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留帶來(lái)的直接危害和潛在影響亦愈來(lái)愈關(guān)注，人們迫切需要無(wú)農(nóng)藥殘留污染的清潔的綠色農(nóng)產(chǎn)品。但從目前我國(guó)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)形式和人口狀況來(lái)看，以停止農(nóng)藥使用降低農(nóng)業(yè)產(chǎn)量為代價(jià)的無(wú)公害生產(chǎn)模式是行不通的，農(nóng)藥作為控制草害的有效手段還將繼續(xù)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮巨大的作用。如何能解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的這個(gè)兩難問題就成為各個(gè)學(xué)科的研究熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室和實(shí)際應(yīng)用研究都表明利用微生物來(lái)降解消除土壤中的農(nóng)藥殘留"庫(kù)"容量，從而降低糧食、蔬菜、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值是可行的?，F(xiàn)有技術(shù)中本課題組已擁有降解菌的發(fā)明專利(ZL96106317.3，公開號(hào)CN1145408A，公開日1997年3月19日)，該專利是一株芽胞桿菌J5,能有效地降解甲胺磷。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于針對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中的實(shí)際問題和需求，開發(fā)研制出一種新型的農(nóng)藥殘留降解菌劑，可以使咪草煙的殘留量降低，生產(chǎn)和使用成本較低。使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)過程中正常使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行草害防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。技術(shù)方案下面為本發(fā)明的主要內(nèi)容本發(fā)明提供一種消除咪草煙農(nóng)藥殘留的降解菌劑，所用菌株為革蘭氏染色陰性菌IM-4，2007年6月18日寄存于中國(guó)微生物菌種保存管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.2093,經(jīng)鑒定為假單胞菌屬(尸w^owomwsp.)。主要生物學(xué)特性為G'，菌體為短桿狀，大小為2.2x0.75um，氧化酶、接觸酶、硝酸鹽還原、檸檬酸利用反應(yīng)為陽(yáng)性；脂酶反應(yīng)V.P.反應(yīng)、M.R反應(yīng)、H引哚反應(yīng)為陰性；不能水解淀粉。使用上述咪草煙除草劑農(nóng)藥殘留降解菌生產(chǎn)菌劑的工藝為:斜面種一搖瓶種一種子罐一生產(chǎn)罐一產(chǎn)品(包裝劑型為液體菌劑或固體吸附菌劑)。本發(fā)明的詳細(xì)實(shí)施步驟為-1.將咪草煙農(nóng)藥殘留降解菌IM-4試管種接種于肉湯培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；2.將上述培養(yǎng)好的菌種按種子罐培養(yǎng)基的10%接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，種子罐所用的培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分比)葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HP040.2%，MgS040.05%，NaCl0.01%，CaC030.3%，酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3.將種子液按生產(chǎn)罐培養(yǎng)基的10%接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無(wú)菌空氣的通氣量為1:0.6—1.2，攪拌速度為180—240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30—35'C，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36—48小時(shí)。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液即為菌劑。有益效果使用該發(fā)明生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑具有生產(chǎn)使用成本低，使用方便，去除效果好的優(yōu)點(diǎn)，適合在全國(guó)糧油蔬菜生產(chǎn)出口基地或有綠色食品商標(biāo)標(biāo)志的地方大面積推廣使用。本發(fā)明對(duì)于保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保護(hù)人民的身體健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的附近值具有重要的意義。試驗(yàn)證明，降解菌IM-4能使土壤中咪草煙的殘留量降低65%以上，可以使5%。LB液體培養(yǎng)基咪草煙的殘留量降低85%以上。使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)過程中正常使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行草害防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。并且該菌為革蘭氏陰性菌，在田間的存活時(shí)間適當(dāng)不會(huì)影響以后農(nóng)藥使用的效果。本發(fā)明成功地解決了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中咪草煙農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題，既充分發(fā)揮了化學(xué)農(nóng)藥在草害防治中的髙效快速的作用，又可以生產(chǎn)出無(wú)毒無(wú)公害的綠色農(nóng)產(chǎn)品。具體實(shí)施例方式從受咪草煙長(zhǎng)期污染的農(nóng)田土壤中分離到咪草煙高效降解菌iM-4，經(jīng)鑒定為假單胞菌屬(Z^i^o/womwsp.)。2007年6月18日保藏于中國(guó)微生物菌種保存管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.2093。5Q^LB液體培養(yǎng)基中降解菌IM-4降解特性測(cè)定挑取IM-4單菌落于5mlLB液體培養(yǎng)基中，30°C、165r/min振蕩培養(yǎng)24h,獲得新鮮菌液。在100ml的50mg/L咪草煙5^LB液體培養(yǎng)基中，接入5ml離心懸浮后的菌液，于3(TC搖床培養(yǎng)(170r/min)，定時(shí)取樣測(cè)定，測(cè)定咪草煙的含量，結(jié)果見表l，5^LB液體培養(yǎng)基中降解菌IM-4降解咪草煙達(dá)到85.42%。土壤中降解菌咪草煙降解特性測(cè)定稱取1000g土壤，加入咪草煙，使土壤中含藥濃度為10mg/kg,加入IM-4菌液，混勻，置于3(TC培養(yǎng)箱中黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定咪草煙在土壤中的殘留量，結(jié)果見表1，土壤中降解菌IM-4降解咪草煙達(dá)到66.70%。表1:菌株IM-4在5%。LB液體培養(yǎng)基中和土壤中對(duì)咪草煙的降解特性<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注.降解教c)對(duì)照樣品殘留量-處理樣品殘留量::100注.降解煞/。)一對(duì)照樣品殘留量x100將本發(fā)明的除草劑農(nóng)藥殘留的降解菌IM-4的原種在培養(yǎng)皿上活化，并測(cè)定降解性能，接種于試管斜面上備用。試管種接種于含200ml肉湯培養(yǎng)基1000ml搖瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，準(zhǔn)備接種種子罐。種子罐500升，投料量400升，培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分比)葡萄糖0.8%,NH4N031%,K2HPO40.2%，MgSO40,05%，NaC10.01%，CaC030.3%,酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5。投料完畢后12rC高壓濕熱滅菌，冷卻至33'C后，將上述培養(yǎng)好的搖瓶菌種按10%的接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，攪拌速度為220轉(zhuǎn)/分，無(wú)菌空氣通入量為l:0.8。將到達(dá)對(duì)數(shù)期的種子液按10%的接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基成分與種子罐培養(yǎng)基相同。生產(chǎn)罐容量5噸，投料量4.5噸。投料后的生產(chǎn)罐l.lkg/cm2的壓力下，12rC高壓濕熱滅菌，滅菌后冷卻至35'C以下，通無(wú)菌空氣保持無(wú)菌狀態(tài)備用。接種后的生產(chǎn)罐溫度控制在30—35。C，生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無(wú)菌空氣的通氣量為1:O.S—l.O，攪拌速度為240轉(zhuǎn)/分，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36—48小時(shí)。發(fā)酵結(jié)束后菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/ml以上。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。降解菌產(chǎn)品的施用可使使土壤中咪草煙的殘留量降低65%以上。權(quán)利要求1.一種咪草煙農(nóng)藥殘留降解菌，為革蘭氏染色陰性的假單胞菌屬(Pseudomonassp.)的菌株IM-4，2007年6月18日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNO.2093。2.—種用權(quán)利要求1所述的咪草煙農(nóng)藥殘留降解菌生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑，是通過以下方法生產(chǎn)而成1)將咪草煙農(nóng)藥殘留降解菌IM-4試管種接種于肉湯培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；2)將上述培養(yǎng)好的菌種按種子罐培養(yǎng)基的體積比10%接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，種子罐所用的質(zhì)量百分比培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HP040.2%，MgS040.05%，NaCl0.01%，CaC030.3%，酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3)將種子液按生產(chǎn)罐培養(yǎng)基的10%接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；4)在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過程中無(wú)菌空氣的通氣量為1:0.6—1.2,攪拌速度為180—240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30—35'C，全流程培養(yǎng)時(shí)間為36—48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/ml以上，發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。全文摘要本發(fā)明提供一種消除咪草煙農(nóng)藥殘留的降解菌劑，所用菌株為革蘭氏染色陰性菌IM-4，經(jīng)鑒定為假單胞菌屬(Pseudomonassp.)。將IM-4菌種接種量接種入種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；將種子液接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；通氣量為1∶0.6-1.2，攪拌速度為180-240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30-35℃，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)，發(fā)酵完成后培養(yǎng)液即為菌劑。降解菌產(chǎn)品的施用可使使土壤中咪草煙的殘留量降低65％以上，使5‰LB液體培養(yǎng)基咪草煙的殘留量降低85％以上。使可以解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中咪草煙農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題，可生產(chǎn)出無(wú)毒無(wú)公害的綠色農(nóng)產(chǎn)品。文檔編號(hào)C12R1/38GK101348771SQ20071013326公開日2009年1月21日申請(qǐng)日期2007年9月26日優(yōu)先權(quán)日2007年9月26日發(fā)明者李順鵬,青洪,潘繼杰,星黃申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)被以下專利引用(1),