專利名稱：一種微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法
技術領域：
本發(fā)明提供了一種微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法背景技術我國目前300萬慢性乙型肝炎病人，其中有30萬肝硬化患者，此外每年約有2％～3％的患者發(fā)展至肝硬化.肝硬化患者中每年肝癌的發(fā)生率約為3％～10％.對于肝硬化和肝癌，肝臟移植手術是一種有效的治療手段.但是肝臟移植有許多條件的限制，并非所有的病患皆有等待換肝的機會；再者，肝臟的供體缺乏，體外培養(yǎng)的肝臟組織可以作為的橋梁來幫助末期肝病的病人，讓病人延長生命以等待適當的肝臟捐增者，因此，開發(fā)一個成功的人工肝臟支援系統將在臨床上有重要意義.目前的培養(yǎng)皿上進行的傳統細胞培養(yǎng)無法實現肝臟組織的長時間存活發(fā)明內容本發(fā)明提供了一種微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，它可以使體外肝臟組織細胞在此芯片上長時間體外存活，而且可以實現肝細胞的大規(guī)模培養(yǎng)。
本發(fā)明采用了以下技術方案1、一種微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，它包括以下步驟步驟一，微流體細胞培養(yǎng)皿的制作1)、pdms芯片的制作用光刻蝕的方法做成.首先通過微型脊梁樣板做成基片.基片表面鍍上一層防粘分子，然后將pdms液體灌注在基片上，隨后進行室溫下固化，Pdms的上表面在固化以后會很平滑.再將金屬層用金屬蒸鍍法鍍在pdms液體的表面。然后正光刻膠旋轉到pdms表面，然后用光刻蝕排版，排好版的光刻膠作為下一步的金腐蝕掩膜。腐蝕后金屬電極保留在表面而且光刻膠用丙酮溶解，最后pdms從基片上揭下來切成小芯片；2)、丙烯酸聚酯芯片的制備用激光切割技術制造，首先超平且透明的丙烯酸聚酯被切成直徑為薄片，然后用于感溫的鉑電極和銀電極將會用標準的光刻蝕方法，電子束金屬蒸鍍和溶劑協助抬離法排版在丙烯酸聚酯薄片上。接下來用激光切割方法丙烯酸聚酯片被切成小芯片并且在小芯片上鉆孔。
3)、將pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片結合在一起形成微流細胞培養(yǎng)皿；步驟二，將微流細胞培養(yǎng)皿的pdms表面將與電路芯片的二氧化硅隔離層連接后集成在一起形成微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片，隨后微型細胞培養(yǎng)皿將被封閉。
所述的基片通過標準光刻蝕法進行制作。所述的基片為有機材料或者無機材料制成。防粘分子為聚四氟乙烯。所述的金屬層為鍍金。所述的pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片通過熱擴散的方法結合在一起所述的pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片通過液體的PDMS或膠水粘結合在一起。所述的pdms芯片上設有微流通道，微流通道的兩端設有入口和出口，入口和出口相連，在入口和出口處分別設有管道和連結器與外部的真空泵連接。步驟二中pdms表面與電路芯片的二氧化硅隔離層通過氧離子修飾連接在一起。
采用了以上技術方案后，本發(fā)明制得的培養(yǎng)芯片利用三維組織培養(yǎng)可以使肝細胞在三維組織培養(yǎng)中可以形成體內的結構和功能，而全自動細胞培養(yǎng)芯片為體外細胞培養(yǎng)創(chuàng)造了精確的條件控制，從而實現細胞的長期存活，為肝臟疾病的治療和藥物篩選提供可靠的材料和平臺。
具體實施例方式
本發(fā)明為一種微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，它包括以下步驟步驟一，微流體細胞培養(yǎng)皿的制作1、pdms芯片的制作用光刻蝕的方法做成.首先微型脊梁樣板用標準光刻蝕法做基片上，基片可以為有機材料和無機材料，本實施例采用的是硅片，在硅片表面鍍上一層防粘分子，防粘分子為聚四氟乙烯，然后將1-2毫米厚的pdms液體灌注在硅片上，隨后放在平桌上在室溫下固化，Pdms的上表面在固化以后會很平滑.再將50到100納米厚的金屬層，金屬層為鍍金層，用金屬蒸鍍法鍍在pdms液體的表面。然后正光刻膠旋轉到pdms表面，然后用光刻蝕排版。排好版的光刻膠作為下一步的金腐蝕掩膜。腐蝕后金屬電極保留在表面而且光刻膠用丙酮溶解。最后pdms從硅片上揭下來切成小芯片，2、丙烯酸聚酯芯片的制備用激光切割技術制造，首先超平且透明的丙烯酸聚酯被切成直徑為4英尺的薄片，然后用于感溫的鉑電極和銀電極將會用標準的光刻蝕方法，電子束金屬蒸鍍和溶劑協助抬離法排版在4英尺的丙烯酸聚酯薄片上。接下來用激光切割方法4英尺的丙烯酸聚酯片被切成小芯片并且在小芯片上鉆孔，3、將pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片通過熱擴散的方法結合一起，PDMS芯片中心部分被移除來作為一個個小的細胞培養(yǎng)皿。pdms芯片上設有微流通道，微流通道的兩端設有入口和出口，入口和出口相連，在入口和出口處分別設有管道和連結器與外部的真空泵連接。
步驟二，將微流細胞培養(yǎng)皿的pdms表面將與另外的電路芯片的二氧化硅隔離層連接后集成在一起形成微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片，pdms表面與電路芯片的二氧化硅隔離層通過氧離子修飾連接在一起，隨后微型細胞培養(yǎng)皿將被封閉。
pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片也可以通過液體的PDMS或膠水粘結合在一起。
權利要求
1.一種微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，它包括以下步驟步驟一，微流體細胞培養(yǎng)皿的制作1)、pdms芯片的制作用光刻蝕的方法做成.首先通過微型脊梁樣板做成基片.基片表面鍍上一層防粘分子，然后將pdms液體灌注在基片上，隨后進行室溫下固化，Pdms的上表面在固化以后會很平滑，再將金屬層用金屬蒸鍍法鍍在pdms液體的表面，然后正光刻膠旋轉到pdms表面，然后用光刻蝕排版，排好版的光刻膠作為下一步的金腐蝕掩膜，腐蝕后金屬電極保留在表面而且光刻膠用丙酮溶解，最后pdms從基片上揭下來切成小芯片；2)、丙烯酸聚酯芯片的制備用激光切割技術制造，首先超平且透明的丙烯酸聚酯被切成直徑為薄片，然后用于感溫的鉑電極和銀電極將會用標準的光刻蝕方法，電子束金屬蒸鍍和溶劑協助抬離法排版在丙烯酸聚酯薄片上，接下來用激光切割方法丙烯酸聚酯片被切成小芯片并且在小芯片上鉆孔；3)、將pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片結合在一起形成微流細胞培養(yǎng)皿；步驟二，將微流細胞培養(yǎng)皿的pdms表面將與電路芯片的二氧化硅隔離層連接后集成在一起形成微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片，隨后微型細胞培養(yǎng)皿將被封閉。
2.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是所述的基片通過標準光刻蝕法進行制作。
3.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是所述的基片為有機材料或者無機材料制成。
4.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是防粘分子為聚四氟乙烯。
5.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是所述的金屬層為鍍金。
6.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是所述的pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片通過熱擴散的方法結合在一起。
7.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是所述的pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片通過液體的PDMS或膠水粘結合在一起。
8.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是所述的pdms芯片上設有微流通道，微流通道的兩端設有入口和出口，入口和出口相連，在入口和出口處分別設有管道和連結器與外部的真空泵連接。
9.根據權利要求1所述的微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，其特征是步驟二中pdms表面與電路芯片的二氧化硅隔離層通過氧離子修飾連接在一起。
全文摘要
本發(fā)明公開一種微型集成體外人肝臟組織培養(yǎng)芯片的制作方法，它包括以下步驟步驟一，微流體細胞培養(yǎng)皿的制作1)pdms芯片的制作，2)丙烯酸聚酯芯片的制備3)將pdms芯片與丙烯酸聚酯芯片結合在一起形成微流細胞培養(yǎng)皿；步驟二，將微流細胞培養(yǎng)皿的pdms表面將與電路芯片的二氧化硅隔離層連接后集成在一起形成微型集成體外肝臟組織培養(yǎng)芯片，隨后微型細胞培養(yǎng)皿將被封閉。
文檔編號C12N5/08GK101063084SQ20071002284
公開日2007年10月31日 申請日期2007年5月24日 優(yōu)先權日2007年5月24日
發(fā)明者徐韌, 黃金麟 申請人:泰州伯克利生物技術有限公司, 江蘇省納米生命醫(yī)學工程技術研究中心