專利名稱：：一種降解氨氮和亞硝酸鹽的固體制劑的制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及養(yǎng)殖水環(huán)境方法微生物改良劑的制備方法，尤其涉及一種降解養(yǎng)殖水環(huán)境中镅氮和亞硝酸鹽的復合微生物與復合酶固體制劑的制備方法
背景技術：
：無論從養(yǎng)殖產量還是從養(yǎng)殖規(guī)模來說，中國都是世界第一水產養(yǎng)殖大國，但是中國的水產養(yǎng)殖技術水平相對較低，長期以來，我國水產養(yǎng)殖生產經營者多以追求產量和近期經濟效益為目標，養(yǎng)殖密度過高，加上保護養(yǎng)殖環(huán)境意識淡薄，養(yǎng)殖病害呈遂年加重之勢，造成了極大的經濟損失。目前，我國的養(yǎng)殖業(yè)大多為靜水養(yǎng)殖，高密度的養(yǎng)殖造成大量的魚蝦排泄物、殘餌等有機物沉積水底，使池底表層中氧化層變薄，而下層的還原層變厚，氧化還原電位降低。在養(yǎng)殖旺季，由于氣溫高，導致異養(yǎng)微生物大量繁殖，有機物被分解，釋放出大量的氨、亞硝酸鹽等有害物質，從而影響魚蝦的生長、發(fā)育，引發(fā)魚蝦疾病。凈化水質已成為養(yǎng)殖技術的難題和研究熱點。在水體養(yǎng)殖的過程中，加入的飼料以及養(yǎng)殖生物的排泄物的大量的增加，超過水體的最大自凈能力，使水體的生態(tài)系統(tǒng)失衡，就會造成了水體的污染，引起水體富營養(yǎng)化，從而氨氮和亞硝酸鹽超標。養(yǎng)殖水體中的氨氮主要來自于含氮有機物在微生物作用下的分解即氨化作用。氨氮的超標對魚有毒害作用。NH/在天然水中發(fā)生水解反應NH/+H20—NH3+H30+,由于分子態(tài)NH3不帶電荷，有較強的脂溶性，易透過細胞膜，對水生生物有較強的毒性。氨的毒性表現(xiàn)在對水生生物生長的抑制，它能降低魚蝦、鱉等養(yǎng)殖生物的產卵能力，損害鰓組織以至引起死亡。亞硝酸鹽是氨在轉化為硝酸鹽的過程中的中間產物。亞硝酸鹽對魚蝦的毒性較強，可以導致魚蝦缺氧，甚至窒息死亡。亞硝酸鹽還可與仲胺類反應成致癌性的亞硝酸胺,質。因此，如何有效去除水體中的亞硝酸鹽成為研究和探索的熱點。長期以來，人們通常使用抗生素和其他化學藥物來防治由微生物引起的養(yǎng)殖病害。但長期大量使用抗生素和其他化學藥物防治已引發(fā)了一系列環(huán)境和社會問題。近年來，人們開始嘗試在養(yǎng)殖水體中施用有益微生物制劑來改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，提高養(yǎng)殖動物的免疫力，抑制病原微生物，從而減少疾病的發(fā)生。微生物制劑是由一些對人類和養(yǎng)殖對象無致病危害并能改良水質狀況，能抑制水產病害的有益微生物制成。使用微生態(tài)制劑，利用有益微生物群的各種生理生化作用，分解或轉化亞硝酸鹽，從而調節(jié)和凈化水質，不但簡單方便而且能加速水域生態(tài)環(huán)境達到平衡狀態(tài)，提高養(yǎng)殖水體的自凈作用能力。酶是一種具有催化能力的蛋白質，利用蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶分別將養(yǎng)殖水體中殘余的蛋白質、脂肪和淀粉水解成小分子的多肽、脂肪酸和單糖，可以加速微生物的降解作用。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種降解養(yǎng)殖水環(huán)境中氨氮和亞硝酸鹽的復合微生物與復合酶固^t翁j劑的制備方法。本發(fā)明所搌供的復合微生物與復合酶固體制劑的制備方法，是用通用的液體培養(yǎng)基(按重量百分比稱取0.8%1.2%的糖蜜和0.06%0.1%的玉米漿凍干粉作基本培養(yǎng)基，再添加0.001%0.0015%的硫酸胺；將硫酸胺，糖蜜和玉米漿凍干粉用水溶解后，加入到發(fā)酵罐中，加液量為發(fā)酵罐的70%:在高壓滅菌滅菌30分鐘，冷卻到33'C后接種)，在不同的溫度下分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(37°C)、硝化細菌(37°C)、光合細菌(35'C)、反硝化細菌(35'C)、酵母菌(30'C)、放線菌(3(TC)等六個菌種，培養(yǎng)2024小時，將培養(yǎng)液離心分離，收集菌體，向菌^J中添加菌體質量的14倍的麩皮，將菌體與麩皮的混合物在流化床中沸騰千燥，得到復合微生物干菌粉，再按復合微生物干菌粉質量1530%的比例加入由蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶按三者配比為1:1:l組成的復合酶，制得復合微生物與復合酶固體制劑。使用時按要求投入到要處理的養(yǎng)殖水體中。本發(fā)明利用蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的分解作用，可以將水體中的殘余營養(yǎng)成分分解為小分子成分，利用枯草芽孢桿菌的氨化作用，將水中小分子的營養(yǎng)物分解成氨氮，氨氮在亞硝化細菌的作用下分解成亞硝基氮，再經硝化細菌的硝化作用變成硝基氮，硝基氮可通過反硝化細菌的作用，變成氮氣釋放到空氣中去，從而起到快速、徹底降解養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸態(tài)氮的作用。通過這樣的處理，可以起到降低養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸態(tài)氮含量的作用，同時不會對魚體造成不良影響。本發(fā)明操作簡單，成本低，效果顯著，具有明顯的經濟效益和社會效益。具體實施方式實施例l:一、試驗方案1.復，生物與復合酶固體制劑的制備按重量百分比稱取1%糖蜜和0.07%玉米漿凍干粉作基本培養(yǎng)基，再添加0.001%硫酸胺；將硫酸胺、糖蜜和玉米漿凍干粉用水溶解后，加入到發(fā)酵罐中，加液量為發(fā)酵罐的70%。在高壓滅菌30分鐘，冷卻到33°C后接種，在不同的溫度下分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(37'C)、硝化細菌(37。C)、光合細菌(35'C)、反硝化細菌(35'C)、酵母菌(30'C)、放線菌(30'C)等六個菌種，培養(yǎng)20小時，將培養(yǎng)液離心分離，收集菌體，向菌體中添加菌體質量3倍的麩皮，將菌體與麩皮的混合物在流化床中沸騰干燥，得到復合微生物干菌粉，再按復合微生物干菌粉質量15%的比例加入蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶(三者配比是l:1:1)，制得復合微生物與復合酶固體制劑。2.制劑的使用方法在江蘇揚州蝦養(yǎng)殖廠進行。實驗挑選兩個鄰近蝦養(yǎng)殖池的精養(yǎng)池，其中一個不添加制劑，作為對照，另外一個加入制劑。將復合微生物與復合酶固體制劑按每畝水面200克左右的使用量，加入十倍重量的水，混合均勻，全塘均勻潑灑，間隔7天再施用1次。3.池塘系統(tǒng)和飼養(yǎng)管理按照農戶自己的習慣進行管理，不改變其原來過程。4.養(yǎng)殖池水體化學指標的測定方法在制劑使用前及使用7天以后，分別在兩個養(yǎng)殖池中用取水器在離岸20米處定點采集水樣500ml，裝滿至瓶口，塞緊，避免空氣進入，避光保存。所采水樣應在2小時內進行檢測分析，采樣期間水溫維持在2932'C之間。亞硝酸鹽含量測定重氮偶氮法，按《中華人民共和國國家標準GB海洋調査規(guī)范海水化學要素觀測17763.4-1992》執(zhí)行。二、試驗結果表1對照池與制劑處理池水體亞硝酸鹽含量的變化處理前pg/L處理后yg/L對照池0.06770.079制劑處理池0.07690.0599從表1可以看出，投放了復合微生物與復合酶固體制劑養(yǎng)殖池水體中亞硝酸鹽濃度呈下降趨勢，而同期對照池中亞硝酸鹽濃度呈上升趨勢，說明復合微生物與復合酶固體制劑具有顯著的降解養(yǎng)殖水體中有機物，降低亞硝酸鹽含量的作用。實施例2:一、試驗方案1.復合微生物與復合酶固體制劑的制備按重量百分比稱取1.2%糖蜜和0.06%玉米漿凍干粉作基本培養(yǎng)基，再添加0.0015%硫酸胺；將硫酸胺、糖蜜和玉米漿凍干粉用水溶解后，加入到發(fā)酵罐中，加液量為發(fā)酵罐的70%。高壓滅菌30分鐘，冷卻到33'C后接種，在不同的溫度下分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(37'C)、硝化細菌(37-C)、光合細菌(35°C)、反硝化細菌(35'C)、酵母菌(30。C)、放線菌(30'C)等六個菌種，培養(yǎng)22小時，將埯養(yǎng)液離心分離，收集菌體，向菌體中添加菌體質量的2倍的麩皮，將菌體與麩皮的混合物在流化床中沸騰干燥，得到復合微生物干菌粉，再按復合微生物干菌粉質量25%的比例加入蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶(三者配比是l:1:1)，制得復合微生物與復合酶固體制劑。2.制劑的使用方法同實施例l。3.池塘系統(tǒng)和飼養(yǎng)管理同實施例1。4.養(yǎng)殖池水體化學指標的測定方法同實施例l。二、試驗結果表2對照池與制劑處理池水體亞硝酸鹽含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表2可以看出，投放了復合微生物與復合酶固體制劑養(yǎng)殖池水體中亞硝酸鹽濃度呈下降趨勢，而同期對照池中亞硝酸鹽濃度呈上升趨勢，說明復合微生物與復合酶固體制劑具有顯著的降解養(yǎng)殖水體中有機物，降低亞硝酸鹽含量的作用。實施例3:一、試驗方案1.復合微生物與復合酶固體制劑的制備按重量百分比稱取0.9%糖蜜和0.09%玉米漿凍干粉作基本培養(yǎng)基，再添加0.0012%硫酸胺；將硫酸胺、糖蜜和玉米漿凍干粉用水溶解后，加入到發(fā)酵罐中，加液量為發(fā)酵罐的70%。高壓滅菌30分鐘，冷卻到33'C后接種，在不同的溫度下分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(37'C)、硝化細菌(37'C)、光合細菌(35'C)、反硝化細菌(35。C)、酵母菌(30'C)、放線菌(30'C)等六個菌種，培養(yǎng)24小時，將培養(yǎng)液離心分離，收集菌體，向菌體中添加菌體質量的4倍的麩皮,將菌體與麩皮的混合物在流化床中沸騰干燥，得到復合微生物干菌粉，再按復合微生物干菌粉質量的30%的比例加入蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶(三者配比是l:1:1),制得復合微生物與復合酶固體制劑。2.制劑的使用方法同實施例l。3.池塘系統(tǒng)和飼養(yǎng)管理同實施例l。4.養(yǎng)殖池水體化學指標的測定方法同實施例l。二、試驗結果表2對照池與制劑處理池水體亞硝酸鹽含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表3可以看出，投放了復合微生物與復合酶固體制劑養(yǎng)殖池水體中亞硝酸鹽濃度呈下降趨勢，而同期對照池中亞硝酸鹽濃度呈上升趨勢，說明復合微生物與復合酶固體制劑具有顯著的降解養(yǎng)殖水體中有機物，降低亞硝酸鹽含量的作用。權利要求1、一種降解養(yǎng)殖水環(huán)境中氨氮和亞硝酸鹽的復合微生物與復合酶固體制劑的制備方法，其特征在于是用通用的液體培養(yǎng)基，即按重量百分比稱取0.8％～1.2％的糖蜜和0.06％～0.1％的玉米漿凍干粉作基本培養(yǎng)基，再添加0.001％～0.0015％的硫酸胺；將硫酸胺，糖蜜和玉米漿凍干粉用水溶解后，加入到發(fā)酵罐中，加液量為發(fā)酵罐的70％在高壓滅菌滅菌30分鐘，冷卻到33℃后接種，在不同的溫度下分別培養(yǎng)六個菌種即37℃枯草芽孢桿菌、37℃硝化細菌、35℃光合細菌、35℃反硝化細菌、30℃酵母菌、30℃放線菌培養(yǎng)20～24小時，將培養(yǎng)液離心分離，收集菌體，向菌體中添加菌體質量的1～4倍的麩皮，將菌體與麩皮的混合物在流化床中沸騰干燥，得到復合微生物干菌粉，再按復合微生物干菌粉質量的15～30％的比例加入復合酶，制得復合微生物與復合酶固體制劑，其中復合酶由蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶三者按配比1∶1∶1組成。全文摘要本發(fā)明公開了一種降解養(yǎng)殖水環(huán)境中氨氮和亞硝酸鹽的復合微生物與復合酶固體制劑的制備方法。其用通用的液體培養(yǎng)基在不同的溫度下分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、硝化細菌、光合細菌、反硝化細菌、酵母菌、放線菌等六個菌種，將培養(yǎng)液離心分離，收集菌體，向菌體中添加麩皮作為吸附劑，將菌體與麩皮的混合物在流化床中沸騰干燥，得到復合微生物干菌粉，再加入蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，制得復合微生物與復合酶固體制劑。本發(fā)明投入到要處理的養(yǎng)殖水中，利用蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的分解作用，枯草芽孢桿菌的氨化作用，硝化細菌的硝化作用變成硝基氮，再變成氮氣釋放到空氣中去，從而起到快速、徹底降解養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸態(tài)氮的作用。文檔編號C12N1/00GK101157892SQ200710020499公開日2008年4月9日申請日期2007年3月6日優(yōu)先權日2007年3月6日發(fā)明者張紅印,斌徐,英董,路懷燈申請人:揚州市綠科生物技術有限公司;江蘇大學