專利名稱：：心血管病癥的診斷和療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及診斷和治療心血管病癥的試劑盒和方法，更具體地，涉及與IL-1基因型模式相關(guān)病癥的診斷有關(guān)的試劑盒和方法。
背景技術(shù)：
：動(dòng)脈粥樣硬化(或動(dòng)脈硬化)為用于描述動(dòng)脈的漸進(jìn)性管腔變窄和硬化的術(shù)語，其可導(dǎo)致動(dòng)脈瘤、局部缺血、血栓形成、栓塞形成或其它血管功能不全。所述疾病過程能在人體任意全身性動(dòng)脈中發(fā)生。例如，供應(yīng)腦的動(dòng)脈(例如，頸動(dòng)脈，大腦內(nèi)的，等等)的動(dòng)脈粥樣硬化可導(dǎo)致中風(fēng)。當(dāng)外周動(dòng)脈堵塞時(shí)可能發(fā)生壞疽，當(dāng)向心肌供氧和營(yíng)養(yǎng)物的動(dòng)脈受影響時(shí)發(fā)生冠狀動(dòng)脈疾病。冠狀動(dòng)脈疾病為多因子病，其導(dǎo)致供應(yīng)心肌的動(dòng)脈粥樣斑塊沉積和漸進(jìn)性管腔變窄。動(dòng)脈粥樣硬化過程涉及動(dòng)脈壁中脂質(zhì)誘導(dǎo)的生物學(xué)變化，導(dǎo)致保持血液腔室的流動(dòng)相與管壁分開的穩(wěn)態(tài)機(jī)制被打破。由于對(duì)所有損傷的正常反應(yīng)是炎癥，所以粥樣硬化病變顯示出復(fù)雜的慢性炎性反應(yīng)，包括單核白細(xì)胞的滲透、細(xì)胞增殖和遷移、細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)和新生血管形成。實(shí)際上，粥樣斑塊由炎性和免疫細(xì)胞的混合物、纖維組織、以及諸如低密度脂質(zhì)(LDL)的脂肪物質(zhì)及其變體和a-脂蛋白構(gòu)成。管腔變窄或堵塞導(dǎo)致向心肌輸氧和營(yíng)養(yǎng)物能力的減弱、產(chǎn)生心肌梗塞、心絞痛、不穩(wěn)定心絞痛、以及突發(fā)的局部缺血性死亡如心力衰竭。盡管閉塞通常進(jìn)展緩慢，但是當(dāng)一部分組合而成的動(dòng)脈斑脫落并沉積在動(dòng)脈的某處而臨時(shí)堵塞時(shí)，或者更經(jīng)常地，當(dāng)在動(dòng)脈腔內(nèi)出現(xiàn)血栓時(shí)，血液供應(yīng)可能被突然中斷。壓在易損斑塊上的纖維帽的破裂為冠狀動(dòng)脈血栓形成的最通常原因。取決于這種發(fā)作期間堵塞遠(yuǎn)端的肌肉量，一部分心肌組織可能死亡、弱化心肌并通常導(dǎo)致個(gè)體死亡。很多年以來，對(duì)諸如心肌梗塞或死亡的心臟病"臨床事件"的來臨風(fēng)險(xiǎn)的最普通衡量是冠狀動(dòng)脈的物理堵塞，如通過諸如血管造影術(shù)的技術(shù)所評(píng)估的。DeWood和同事在80年代早期的研究(N.EngLJ.ofMed.(1980)303:1137-40)中揭示閉塞血栓導(dǎo)致了大多數(shù)的急性心肌梗塞。當(dāng)時(shí)，流行的觀點(diǎn)是心肌梗塞起因于高度狹窄位點(diǎn)的閉塞。1988年，Littleetal.(Circulation(1988)78:1157-66)證實(shí)大多數(shù)的梗塞起因于之前已在血管造影術(shù)上顯示了少于50%狹窄的冠狀堵塞。因此，冠狀動(dòng)脈狹窄的嚴(yán)重性不精確地預(yù)報(bào)隨后的冠狀動(dòng)脈堵塞的位置。由于這些研究，易損動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的重要性變得明顯?，F(xiàn)在已清楚，易損動(dòng)脈粥樣硬化斑塊位點(diǎn)的破裂是急性冠脈綜合征的最通常原因。這種斑塊不引起高度狹窄，但是可以導(dǎo)致急性冠脈綜合征，例如不穩(wěn)定型心絞痛、心肌梗塞或猝死。目前沒有方法能可靠地鑒別易于破裂的斑塊。實(shí)際上，開發(fā)臨床上有用的成像技術(shù)來鑒別易損斑塊是活躍的研究領(lǐng)域。一些方法被用于鑒別這類斑塊，包括例如熱成像(粥樣硬化斑塊顯示熱不均一性)、光鐠學(xué)(用于定量存在于冠狀動(dòng)脈組織的小容積中的膽固醇、膽固醇酯、甘油三酯、磷脂和4丐鹽)、放射性同位素閃爍法(諸如炎癥細(xì)胞的易損斑塊的多種成分可采用》文射性同位素技術(shù)成像)、以及檢測(cè)炎性血清標(biāo)志物如C反應(yīng)性蛋白水平。顯示急性斑塊破裂的動(dòng)脈位點(diǎn)以慢性炎性組分為特征，在穩(wěn)定和不太可能導(dǎo)致臨床事件的動(dòng)脈斑塊中這些組分不存在或以非常低的水平存在。(RossR.Thepathogenesisofatherosclerosis:aperspectiveforthe1990s(動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理二十世紀(jì)九十年代觀點(diǎn)).Nature1993;362:801-809.)(LibbyP.Molecularbasisoftheacutecoronarysyndromes(急性冠脈綜合征的分子基礎(chǔ)).Circulation1995;91:2844-2850)。目前發(fā)表的很多來源的臨床數(shù)據(jù)清楚的證實(shí)多種炎性組分為冠狀動(dòng)脈疾病的嚴(yán)重性和臨床結(jié)果的強(qiáng)有力獨(dú)立影響因素(RossR.Thepathogenesisofatherosclerosis:aperspectiveforthe1990s.Nature1993;362:801-809.)(LibbyP.Molecularbasisoftheacutecoronarysyndromes.Circulation1995;91:2844-2850)。此外，實(shí)驗(yàn)室工作已證明促炎介質(zhì)為動(dòng)脈粥樣硬化過程中的關(guān)鍵元素(RossR.Thepathogenesisofatherosclerosis:aperspectiveforthe1990s.Nature1993;362:801-809.)(LibbyP.Molecularbasisoftheacutecoronarysyndromes.Circulation1995;91:2844-2850)。盡管存在很多學(xué)說，但是動(dòng)脈粥樣化斑塊構(gòu)建的起因和機(jī)制不完全清楚。動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)理的一種理論包括以下階段(l)內(nèi)皮細(xì)胞機(jī)能障礙和/或損傷，(2)單核細(xì)胞募集和巨噬細(xì)胞形成，(3)脂質(zhì)沉積和修飾，(4)血管平滑肌細(xì)胞增殖，以及(5)細(xì)胞外基質(zhì)合成。根據(jù)這些理論，動(dòng)脈粥樣硬化的起始可能是由于損傷形成，可能源自機(jī)械應(yīng)激或源自化學(xué)應(yīng)激。身體對(duì)這些損傷如何反應(yīng)決定該損傷是否以及如何迅速地惡化為粥樣硬化病變。這又可導(dǎo)致動(dòng)脈管腔變窄和對(duì)心臟組織的損傷，這取決于血流的氧和營(yíng)養(yǎng)物。很多年以來，流行病學(xué)研究已經(jīng)表明個(gè)體的遺傳組成為發(fā)生血管疾病的重要風(fēng)險(xiǎn)因子。例如，心臟疾病的家族史與增加的發(fā)生冠狀動(dòng)脈疾病的個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。歷史上曾將脂質(zhì)和膽固醇代謝認(rèn)為是冠狀動(dòng)脈疾病的首要遺傳影響因素。例如，諸如在家族性高膽固醇血癥中低密度脂質(zhì)(LDL)的細(xì)胞受體的缺陷與高水平的血漿LDL和過早出現(xiàn)動(dòng)月永粥樣石更化相關(guān)(Brown&Goldstein,Scz'.，191(4223):150曙4(1976))?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化病理過程中的重要組分(Munro:丄a6/騰仗，58:249-261(1988);Badimon，Wa/"C/腳/a"ow,87:3-16(1993);Liuzzo，Wa/"7V.五.丄M"331(7):417-24(1994);Alexander,iV丄丄M.,331(7):468-9(1994))。作為血管襯里的內(nèi)皮細(xì)胞的損傷導(dǎo)致包括IL-1、TNFa在內(nèi)的炎性細(xì)胞因子的積聚，以及釋放前列腺素類和生長(zhǎng)因子，如前列腺素I2(PGI2)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、堿性成纖維細(xì)胞成長(zhǎng)因子(bFGF)、以及粒細(xì)胞-單核細(xì)胞刺激因子(GM-CSF)。這些因子導(dǎo)致諸如單核細(xì)胞的炎性細(xì)胞的積聚和調(diào)節(jié)，所述炎性細(xì)胞積聚在血管壁內(nèi)。然后單核細(xì)胞釋放其它的炎性介質(zhì)，包括IL-1、TNF、前列&i素E2(PGE2)、bFGF和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a和/5(TGFa、TGFj8)。所有這些炎性介質(zhì)都募集更多的炎性細(xì)胞至損傷區(qū)域，調(diào)節(jié)內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞的行為，并導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣化斑塊的積聚。IL-1(8的幾種炎性產(chǎn)物(Galea,"a/.,羞7%畫6.F亂廳,16:1000-6(1996))。另外，還已發(fā)現(xiàn)患有冠狀動(dòng)脈疾病的患者中IL-1/3血清濃度升高(Hasdai，"a/.，/feaW,76:24-8(1996))。盡管歷史上認(rèn)為炎性劑的存在是響應(yīng)損傷或單核細(xì)胞活化，但是異常炎性反應(yīng)也可能是冠狀動(dòng)脈疾病的病因或者產(chǎn)生對(duì)該疾病增加的易感性。治療血管疾病的關(guān)鍵問題是正確診斷。通常該疾病的第一體征是猝死。例如，大約半數(shù)死于冠狀動(dòng)脈疾病的個(gè)體是猝死。另外，對(duì)于40-60%的最終被診斷為具有冠狀動(dòng)脈疾病的患者，心肌梗塞是該疾病的首次表現(xiàn)。遺憾的是，約40%的這些初發(fā)事件未被患者注意到?，F(xiàn)在認(rèn)為，易損斑塊的鑒定和穩(wěn)定是治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的重要要素。在不同個(gè)體中鑒定單倍性模式將使得處理心血管疾病成為可能，并且治療將致力于斑塊穩(wěn)定而不是血管重建和其它侵入性更強(qiáng)的方法。這是特別重要的，因?yàn)槌鲇诟鞣N原因，患者感受的癥狀并不與冠狀動(dòng)脈疾病的總負(fù)荷很好地相關(guān)(Anderson&Kin,爿m.Z/eaW/.,123(5):1312-23(1992))。經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)被用于通過壓縮動(dòng)脈粥樣化斑塊至血管壁側(cè)來治療梗阻性冠狀動(dòng)脈疾病。PTCA被廣泛使用，最初成功率超過90%。但是，PTCA的長(zhǎng)期成功被管腔內(nèi)操作位點(diǎn)的再變窄或再狹窄所限制。這在操作后6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)在經(jīng)歷了單支操作的約30%至40%患者中和在經(jīng)歷了多支血管成形術(shù)的多于50%的患者中。支架的放置在很大程度上替代了球嚢血管成形術(shù)，因?yàn)槠淠軌蚋鼜V泛地恢復(fù)管腔內(nèi)尺寸，具有減少再狹窄約50%的作用。具有諷刺意味的是，支架放置實(shí)際上增加了治療位點(diǎn)的新生內(nèi)膜生長(zhǎng)，但是由于通過支架放置可實(shí)現(xiàn)更大的內(nèi)腔，該組織生長(zhǎng)可更容易地被容納并且維持足夠的腔尺寸，這樣與單獨(dú)球嚢血管成形術(shù)相比，通過支架放置的再狹窄速率幾乎減半。再狹窄中涉及的病理生理學(xué)機(jī)制還沒有完全清楚。盡管多種臨床、解剖和技術(shù)因素與出現(xiàn)再狹窄有關(guān)系，但是至少有50%的過程還有待闡明。然而，已知在內(nèi)皮損傷后，啟動(dòng)了一系列的修復(fù)機(jī)制。在損傷的幾分鐘內(nèi)，一層血小板和纖維蛋白沉積在損傷的內(nèi)皮上。幾小時(shí)至幾天內(nèi)，炎癥細(xì)胞開始滲入損傷的區(qū)域。在損傷后24小時(shí)內(nèi)，位于血管中膜的血管平滑肌細(xì)胞(SMC)就開始DNA合成。數(shù)天后，這些活化的、合成的SMC穿過內(nèi)彈性膜朝管腔表面遷移。這些細(xì)胞通過它們的連續(xù)復(fù)制和它們產(chǎn)生的細(xì)胞外基質(zhì)形成新生內(nèi)膜。內(nèi)膜厚度的增加與正在進(jìn)行的細(xì)胞增殖基質(zhì)沉積一起發(fā)生。當(dāng)這些血管愈合的過程過度進(jìn)行，則該病理學(xué)狀況稱為內(nèi)膜增生或肌內(nèi)膜增生。參與了再狹窄的血管壁愈合生物學(xué)因此包括傷口愈合的一般過程和肌內(nèi)膜增生的特異過程。炎癥通常被3見為這兩種過程中的重要組分。(MunroandCotran(1993)Lab.Investig.58:249-261;和Badimonetal,(1993),SuppII87:3-6)。因此，了解急性和慢性炎癥在血管壁中的作用可提出診斷和治療再狹窄和相關(guān)狀況的方法。在其初始階段，炎癥的特征是白細(xì)胞對(duì)血管壁的粘附。白細(xì)胞對(duì)損傷內(nèi)皮表面的粘附是通過內(nèi)皮和嗜中性粒細(xì)胞表面的幾種復(fù)合糖蛋白介導(dǎo)的。其中兩種結(jié)合分子已被很好地表征內(nèi)皮白細(xì)胞粘附分子-1(ELAM-1)和細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)。炎癥狀態(tài)期間，中性粒細(xì)胞對(duì)有關(guān)細(xì)胞表面的粘附大大增加，主要是由于這些結(jié)合分子的上調(diào)和增強(qiáng)的表達(dá)。被認(rèn)為是對(duì)組織損傷的炎性反應(yīng)的主要介質(zhì)的物質(zhì)包括白介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子a(TNF)、淋巴毒素和細(xì)菌內(nèi)毒素，它們都增加這些結(jié)合物質(zhì)的產(chǎn)生。在結(jié)合至損傷的血管壁后，白細(xì)胞向其中遷移。一旦達(dá)到血管壁內(nèi)合適位置，則白細(xì)胞、尤其是活化的巨噬細(xì)胞釋放其它的炎性介質(zhì)，包括IL-1、TNF、前列腺素E2(PGE2)、bFGF、以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a和/3(TGFa、TGF/3)。所有這些炎性介質(zhì)都募集更多的炎癥細(xì)胞至損傷區(qū)域，并調(diào)節(jié)平滑肌的進(jìn)一步增殖和遷移。單核-巨噬細(xì)胞加工的公知生長(zhǎng)因子為單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞衍生生長(zhǎng)因子(MDGF)、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖的刺激物。MDGF被認(rèn)為類似于血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF);實(shí)際上，這兩種物質(zhì)可能是相同的。通過刺激平滑肌細(xì)胞增殖，炎癥可促進(jìn)肌內(nèi)膜增生的進(jìn)行。通過上述炎癥化學(xué)介質(zhì)吸引至血管壁的白細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)血管壁有直接影響的物質(zhì)，這可能惡化局部損傷和延長(zhǎng)愈合反應(yīng)。首先，通過炎癥過程被活化的白細(xì)胞分泌溶酶體酶，其可消化膠原和其它的結(jié)構(gòu)蛋白。這些酶在血管壁內(nèi)的釋放可影響其細(xì)胞外基質(zhì)的完整性、允許SMC和其它遷移細(xì)胞更容易地穿過血管壁。因此，這些溶酶體蛋白酶的釋放可增強(qiáng)導(dǎo)致肌內(nèi)膜增生的過程。其次，活化的白細(xì)胞通過NADPH系統(tǒng)的作用在它們的細(xì)胞膜上產(chǎn)生自由基。這些自由基可直接損害細(xì)胞組分，導(dǎo)致局部損傷的擴(kuò)展或損傷-炎癥-愈合周期的延長(zhǎng)。希望的是確定哪些患者會(huì)對(duì)諸如血管造影術(shù)和血管內(nèi)支架放置的對(duì)閉塞血管疾病的侵入性治療反應(yīng)良好。還希望的是鑒定有增加的狹窄風(fēng)險(xiǎn)的患者，這樣可針對(duì)他們采用適合的療法以防止、調(diào)節(jié)或逆轉(zhuǎn)該狀況。此外，還希望的是，鑒定由于再狹窄風(fēng)險(xiǎn)而對(duì)他們而言PTCA和支架放置為亞適治療選擇的那些個(gè)體。那些患者可能成為在較早階段可能與其它藥理學(xué)介入聯(lián)合的血管重建操作的候選者。IL-1基因簇的遺傳學(xué)IL-l基因簇位于染色體2的長(zhǎng)臂上(2q13),在430Kb的區(qū)域內(nèi)含有至少IL-la(IL-1A)、IL-1/3(IL-1B)、和IL-1受體拮抗劑(IL-1RN)的基因(Nicklin,etal.(1994)Genomics,19:382-4)。激動(dòng)劑分子IL-la和IL-l/3具有有效的促炎活性，處于很多炎性級(jí)聯(lián)的開始。它們通常通過誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子如IL-6和IL-8起作用，導(dǎo)致活化和募集白細(xì)胞到損傷組織、血管活性劑的局部產(chǎn)生、腦部的發(fā)熱反應(yīng)和肝急性期反應(yīng)。三種IL-1分子都結(jié)合I型和II型IL-1受體，但是只有I型受體將信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)細(xì)胞內(nèi)部。與此相反，II型受體從細(xì)胞膜脫落，用作誘騙受體。因此，該受體拮抗劑和II型受體就其作用而言是抗炎的。IL-1的不適當(dāng)產(chǎn)生在很多自身免疫和炎性疾病(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病、牛皮癬等)的病理學(xué)中起關(guān)鍵作用。此外，在IL-1的產(chǎn)生速率方面存在穩(wěn)定的個(gè)體間差異，一些這種差異可以通過IL-1基因位點(diǎn)的遺傳差異得到說明。因此，IL-1基因是確定對(duì)炎性疾病的遺傳易感性部分的合適候選者，這些炎性疾病的大部分具有有多基因組分的多因子病因?qū)W。某些來自IL-1基因簇的等位基因已知與特定的疾病狀態(tài)相關(guān)。例如，IL-1RN(NTR)等位基因2已經(jīng)被證實(shí)與骨質(zhì)疏松(美國(guó)專利5，698，399)、糖尿病中的腎病(Blakemore，etal.(1996)Hum.Genet.97(3):369-74)、斑殼(Cork，etal.，(1995)J.Invest.Dermatol.104(5Supp.):15S-16S;Corketal.(1996)DermatolClin14:671-8)、格雷夫斯(Graves)病(Blakemore，etal.(1995)J.Clin.Endocrinol.80(1):111-5)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Blakemore,etal.(1994)ArthritisRheum.37:1380-85)、硬化性莒蘚(Clay，etal.(1994)Hum,Genet.94:407-10)、以及潰瘍性結(jié)腸炎(Mansfield,etal.(1994)Gastoenterol.106(3):637國(guó)42))相關(guān)。此外，來自標(biāo)志物-889的IL-1A等位基因2和來自標(biāo)志物+3954的IL-IB(Taql)等位基因2已被發(fā)現(xiàn)與牙周病相關(guān)(美國(guó)專利5,686,246;KommananddiGiovine(1998)AnnPeriodont3:327-38;HartandKomman(1997)Periodontal200014:202-15;Newman(1997)CompendContinEducDent18:881-4;Kommaneta1.(1997)J.ClinPeriodontal24:72-77)。來自標(biāo)志物-889的IL-1A等位基因2也已被發(fā)現(xiàn)與青少年慢性關(guān)節(jié)炎、尤其是慢性虹膜睫狀體炎相關(guān)(McDowell，etal.(1995)ArthritisRheum.38:221-28)。來自IL-IB的標(biāo)志物+3594的IL-IB(TaqI)等位基因2也已被發(fā)現(xiàn)在DR3/4患者中與牛皮癬和胰島素依賴的糖尿病相關(guān)(diGiovine，etal.(1995)Cytokine7:606;Pociot,etal.(1992)EurJ.Clin.Invest.22:396-402)。此外，該IL-IRN(VNTR)等位基因1被發(fā)現(xiàn)與糖尿病性視網(wǎng)膜病相關(guān)(參見USSN09/037472和PCT/GB97/02790)。此外，IL-IRN(VNTR)的等位基因2被發(fā)現(xiàn)與來自北美和歐洲的高加索人群的潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)(Mansfield,J.etal.,(1994)Gastroenterology106:637-42)。有趣的是，這種相關(guān)性在種族相關(guān)的AshkenaziJews人群中尤其明顯(PCTW097/25445)?；蛐秃Y選傳統(tǒng)的篩選可遺傳疾病的方法依賴于鑒別出異?；虍a(chǎn)物(例如鐮刀形細(xì)胞貧血癥)或異常表型(例如智力遲緩)。這些方法對(duì)于諸如例如血管病的晚期發(fā)作和不容易鑒定表型的遺傳病的作用有限。隨著簡(jiǎn)單和低價(jià)的遺傳篩選方法的出現(xiàn)，現(xiàn)在可能鑒定指示出現(xiàn)疾病的傾向性的多態(tài)性，甚至當(dāng)該疾病是多基因起源時(shí)?？赏ㄟ^分子生物學(xué)方法篩選的疾病數(shù)量隨著對(duì)多因子病癥遺傳基礎(chǔ)的增加的了解而持續(xù)增加。遺傳篩選(也稱為基因分型或分子篩選)可在廣義上被定義為測(cè)試以確定患者是否具有突變(或等位基因或多態(tài)性)，該突變引起疾病狀態(tài)或與引起疾病狀態(tài)的突變"連鎖"。連鎖指這樣的現(xiàn)象，其中基因組中靠近在一起的DNA序列具有一起遺傳的趨勢(shì)。因?yàn)楣策z傳的某些選擇優(yōu)勢(shì)，兩序列可能是連鎖的。但是，更典型的是，因?yàn)閮啥鄳B(tài)性之間的區(qū)域內(nèi)減數(shù)分裂重組事件相對(duì)低頻地發(fā)生，所以兩多態(tài)性序列共遺傳。這些共遺傳的多態(tài)性等位基因被認(rèn)為彼此間連鎖不平衡，因?yàn)樵诮o定的人群中，在該人群的任何特定個(gè)體中它們趨于一起出現(xiàn)或者完全不出現(xiàn)。實(shí)際上，當(dāng)給定染色體區(qū)域中的多重多態(tài)性被發(fā)現(xiàn)彼此連鎖不平衡時(shí)，它們定義了準(zhǔn)穩(wěn)定的遺傳"單倍型"。相反，出現(xiàn)在兩多態(tài)性位點(diǎn)之間的重組事件使得它們被分離至不同的同源染色體中。如果兩物理上連鎖的多態(tài)性之間的減數(shù)分裂重組足夠頻繁地發(fā)生，則該兩多態(tài)性看起來是獨(dú)立分離的，稱為連鎖平衡。盡管兩標(biāo)志物之間的減數(shù)分裂重組的頻率通常與染色體上它們之間的物理距離成比例，但是"熱點(diǎn)"以及染色體重組被抑制區(qū)域的出現(xiàn)可導(dǎo)致兩標(biāo)志物之間物理和重組距離的差異。因此，在某些染色體區(qū)域中，橫跨寬染色體結(jié)構(gòu)域的多重多態(tài)性位點(diǎn)可能彼此是連鎖不平衡的，因此定義了寬跨度的遺傳單倍型。此外，當(dāng)致病突變被發(fā)現(xiàn)位于這種單倍型內(nèi)或與其連鎖時(shí)，單倍型的一個(gè)或多個(gè)多態(tài)性等位基因可被用作出現(xiàn)疾病可能性的診斷或預(yù)測(cè)指示物。如果疾病突變?cè)诓痪们鞍l(fā)生，則其它良性多態(tài)性和致病多態(tài)性之間的關(guān)聯(lián)性出現(xiàn)，這樣沒有經(jīng)過足夠長(zhǎng)的時(shí)間通過重組事件來實(shí)現(xiàn)平衡。因此，對(duì)跨越致病突變變化的或與其連鎖的人單倍型的鑒定用作個(gè)體遺傳了該致病突變的可能性的預(yù)測(cè)性衡量。重要的是，這種預(yù)測(cè)或診斷性操作可在不必鑒定和分離實(shí)際的致病病變下使用。這是有重要意義的，因?yàn)榫_確定涉及疾病過程的分子缺陷可能是困難和費(fèi)力的，特別是對(duì)于諸如炎性病癥的多因子疾病而言。實(shí)際上，炎性病癥和IL-1多態(tài)性之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性不一定表明該多態(tài)性直接導(dǎo)致了該病癥。而是相關(guān)的多態(tài)性可能是良性等位基因變體，其與致病突變連鎖(即與其連鎖不平衡)，該突變?cè)谧罱祟愡M(jìn)化中發(fā)生，這樣沒有經(jīng)過足夠長(zhǎng)的時(shí)間通過介入染色體分離中的重組事件來實(shí)現(xiàn)平衡。因此，出于特定疾病的"^斷和預(yù)測(cè)測(cè)定目的，可利用對(duì)與該疾病相關(guān)的多態(tài)性等位基因的檢測(cè)，無需考慮該多態(tài)性是否直接參與了該疾病的病因?qū)W。而且，當(dāng)給定的良性多態(tài)性位點(diǎn)與明顯的致病多態(tài)性位點(diǎn)連鎖不平衡時(shí)，其它的與該良性多態(tài)性位點(diǎn)連鎖不平衡的多態(tài)性位點(diǎn)也可能與該致病多態(tài)性位點(diǎn)連鎖不平衡。這樣，這些其它的多態(tài)性位點(diǎn)也可預(yù)測(cè)或診斷具有遺傳的該致病多態(tài)性位點(diǎn)的可能性。實(shí)際上，一旦在特定疾病或狀況和對(duì)應(yīng)的人單倍型之間建立了相關(guān)性，則寬跨度的人單倍型(描述一套連鎖的多態(tài)性標(biāo)志物的等位基因共遺傳的典型模式)可為診斷目的的目標(biāo)。因此，可通過表征一個(gè)或多個(gè)疾病相關(guān)多態(tài)性等位基因(或甚至一個(gè)或多個(gè)疾病相關(guān)單倍型)來確定個(gè)體出現(xiàn)特定疾病狀況的可能性，而不必確定或表征致病性遺傳變異。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供了確定個(gè)體是否患有心血管病癥的新方法和試劑盒。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒和方法涉及易碎斑塊病癥的i貪斷。易碎斑塊病癥存在的it斷鑒定出有出現(xiàn)易碎斑塊疾病傾向的那些患者，該易碎斑塊疾病的特征在于諸如心肌梗塞和中風(fēng)的臨床事件。對(duì)這些有出現(xiàn)易碎斑塊疾病傾向的個(gè)體的診斷是尤其重要的，因?yàn)樵摷膊〉陌l(fā)作可以是突然的和悲劇性的，沒有預(yù)警體征和癥狀。-使得早期i貪斷疾病狀況并通過適當(dāng)治療劑治療所述病癥和疾病成為可臺(tái)匕叱.在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒和方法涉及診斷閉塞病癥。閉塞病癥存在的i貪斷鑒定出具有出現(xiàn)閉塞疾病傾向的那些患者，該閉塞疾病的特征在于諸如局部缺血、絞痛、跛行、休息痛和壞疽的臨床事件。因此確定哪些患者由于它們具有所述病癥而具有出現(xiàn)所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)使得在受影響血管供應(yīng)的組織中出現(xiàn)不可逆組織變化之前的階段早期診斷和治療性介入成為可能。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒和方法涉及診斷再狹窄病癥。再狹窄病癥存在的診斷鑒別出有出現(xiàn)再狹窄疾病傾向的那些患者，該再狹窄疾病的特征在于與正在通過支架進(jìn)行治療的初始血管狹窄的復(fù)發(fā)相關(guān)的臨床事件。因此確定哪些患者由于它們具有所述病癥而具有出現(xiàn)所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)使得選擇對(duì)于該初始血管狹窄最可能避免隨后的狹窄的療法成為可能。例如這些患者可能是手術(shù)血管重建而不是經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)的候選者，或者這些患者在影響該再狹窄病癥進(jìn)展的早期階段可以受益于藥理學(xué)或局部介入。另一方面，本發(fā)明的方法提供了對(duì)具有上述類型的心血管病癥的患者的治療。治療包括確定患者是否具有與心血管病癥相關(guān)的等位基因模式并向患者給予適于治療該心血管病癥的治療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法可包括對(duì)該心血管病癥風(fēng)險(xiǎn)因子的鑒定和減少該風(fēng)險(xiǎn)因子對(duì)患者影響的治療方案的形成。本發(fā)明的這些和其它實(shí)施方案至少部分地依賴于這樣的新發(fā)現(xiàn)IL-1基因簇中四個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因模式與心血管病癥相關(guān)。這些模式在本文中被稱為模式1、2和3。模式1包括這樣的等位基因模式其包括IL-lA(+4845)或IL-1B(+3954)的等位基因2和IL-1B(-511)或IL-1RN(+2018)的等位基因1,或者與上述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種等位基因模式使得能診斷易碎斑塊病癥。模式2包括這樣的等位基因模式其包括IL-lB(-511)或IL-1RN(+2018)的等位基因2和IL-1A(+4845)或IL-1B(+3954)的等位基因1，或者與上述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種等位基因模式使得能診斷易碎斑塊病癥。模式3包括這樣的等位基因模式其包括IL-lA(+4845)的等位基因1或IL-1B(+3954)的等位基因1、和IL-1B(-511)的等位基因1或IL-1RN(+2018)的等位基因1、或者與上述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種等位基因模式使得能診斷再狹窄病癥。通過多種可利用技術(shù)的任一種可檢測(cè)與心血管病癥相關(guān)的等位基因，包括1)在核酸樣品和能夠與該等位基因雜交的探針之間進(jìn)行雜交反應(yīng)；2)對(duì)該等位基因的至少一部分測(cè)序；或者3)確定該等位基因或其片段(例如通過內(nèi)切酶消化產(chǎn)生的片段)的電泳移動(dòng)率。該等位基因可任選地在檢測(cè)步驟進(jìn)行之前經(jīng)擴(kuò)增步驟。優(yōu)選的擴(kuò)增方法選自聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)、鏈替代擴(kuò)增(SDA)、克隆以及上述方法的變體(例如RT-PCR和等位基因特異的擴(kuò)增)。例如可從IL-1基因座內(nèi)選擇擴(kuò)增所需的寡核苷酸，它們或者鄰接所關(guān)注的標(biāo)志物(如PCR擴(kuò)增所需)或直接重疊標(biāo)志物(如在ASO雜交中的)。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，該樣品與一套引物雜交并經(jīng)受PCR擴(kuò)增，所述引物與血管疾病相關(guān)等位基因的有義或反義序列的5'和3'雜交。也可以間接4企測(cè)與心血管病癥相關(guān)的等位基因，例如通過分析DNA編碼的蛋白產(chǎn)物。例如，當(dāng)所關(guān)心的標(biāo)志物導(dǎo)致翻譯出突變的蛋白，則可通過多種蛋白檢測(cè)技術(shù)的任一種檢測(cè)該蛋白。這類方法包括免疫檢測(cè)和生物化學(xué)試驗(yàn)，例如當(dāng)?shù)鞍子捎诮囟?、延長(zhǎng)、折疊改變或翻譯后修飾改變而具有表觀分子量變化時(shí)，采用大小分級(jí)。另一方面，本發(fā)明的特征在于進(jìn)行上述測(cè)定的試劑盒。該試劑盒可包括核酸樣品收集手段和測(cè)定個(gè)體是否攜帶有心血管病癥相關(guān)等位基因的手段。該試劑盒還可以含有陽性或陰性對(duì)照樣品或標(biāo)準(zhǔn)品和/或評(píng)估結(jié)果的算法裝置以及包括如下的其它的試劑和組分DNA擴(kuò)增試劑、DNA聚合酶、核酸擴(kuò)增試劑、限制酶、緩沖劑、核酸取樣裝置、DNA純化裝置、脫氧核苷酸、寡核苷酸(例如探針和引物)等。如上所述，對(duì)照樣品可為陽性或陰性對(duì)照。此外，對(duì)照樣品可以含有所釆用的等位基因檢測(cè)技術(shù)的陽性(或陰性)產(chǎn)物。例如，當(dāng)?shù)任换驒z測(cè)技術(shù)為PCR擴(kuò)增、隨后是大小分級(jí)時(shí)，該對(duì)照樣品可以包含合適大小的DNA片段。同樣，當(dāng)?shù)任换驒z測(cè)技術(shù)涉及檢測(cè)突變的蛋白時(shí)，對(duì)照樣品可以包括突變蛋白的樣品。^旦是，優(yōu)選對(duì)照樣品包含待才全測(cè)的物質(zhì)。例如，對(duì)照可以為基因組DNA樣品或IL-1基因蔟的克隆部分。但是，當(dāng)帶測(cè)試的樣品為基因組DNA時(shí)，優(yōu)選對(duì)照樣品為基因組DNA的高度純化的樣品。存在于所述試劑盒中的寡核苷酸可以被用于擴(kuò)增所關(guān)注的區(qū)域或指引等位基因特異的寡核苷酸(ASO)雜交到所研究的標(biāo)志物上。因此，該寡核苷酸可以從兩側(cè)鄰接所關(guān)注的標(biāo)志物(如PCR擴(kuò)增所需)或直接重疊標(biāo)志物(如在ASO雜交中的)。采用本文描述的測(cè)定法和試劑盒獲得的信息(單獨(dú)的，或者與風(fēng)險(xiǎn)因子信息聯(lián)合，這些風(fēng)險(xiǎn)因子例如是促進(jìn)血管病癥的并發(fā)疾病、遺傳缺陷或環(huán)境因子)可用于確定無癥狀個(gè)體是否具有心血管病癥或者是否可能出現(xiàn)心血管疾病。此外，該信息使得能夠采用更加個(gè)性化的方法，并且使得能夠確定作用過程是否應(yīng)該涉及使用侵入性更強(qiáng)的操作或者治療是否應(yīng)該針對(duì)斑塊穩(wěn)定性。這種信息使得臨床醫(yī)師能更有效地確定4十對(duì)該病癥的分子或遺傳基礎(chǔ)的療法。另一方面，本發(fā)明的特征在于治療或防止個(gè)體中心血管病癥出現(xiàn)的方法，其通過向該個(gè)體給予適當(dāng)?shù)谋景l(fā)明治療劑來實(shí)現(xiàn)。另一方面，本發(fā)明提供了體外或體內(nèi)測(cè)定法，用于篩選測(cè)試化合物以鑒定治療或防止心血管病癥的治療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該測(cè)定包括讓經(jīng)可梯:作地連接至適當(dāng)啟動(dòng)子的致病突變轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與測(cè)試化合物接觸并測(cè)定存在或不存在測(cè)試化合物下該細(xì)胞中蛋白的表達(dá)水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，該致病突變影響了IL-1受體拮抗劑的系統(tǒng)水平并與增加的IL-1RA的血清水平相關(guān)，這樣特定化合物的治療效果可通過其存在下IL-1RA的血清水平是否下降來判斷。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，如果該心血管病癥致病突變導(dǎo)致IL-la或的產(chǎn)生增加，則測(cè)試化合物存在下IL-la或IL-lj3的產(chǎn)生減少表明該化合物為IL-la或IL-liS活性的拮抗劑。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的特征在于轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物和它們?cè)阼b定IL-la或IL-l/3活性的拮抗劑或IL-lRa活性的激動(dòng)劑方面的用途。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)在以下的詳細(xì)說明和權(quán)利要求中指出。附圖簡(jiǎn)要說明圖1示意性繪出了染色體2上的基因位置。圖2顯示了IL-1基因簇內(nèi)不平衡值表格。圖3給出了顯示單倍型模式頻率的條形圖。圖4給出了IL-1基因型模式2內(nèi)的等位基因示意圖和某些其它臨床相關(guān)性。圖5顯示了與遺傳標(biāo)志物相關(guān)的臨床試驗(yàn)的特征。圖6給出了IL-1基因型和冠狀動(dòng)脈狹窄之間相關(guān)性的條形圖。圖7給出了顯示IL-1基因型模式和再狹窄之間相關(guān)性的條形圖。圖8給出了顯示IL-1RN(+2018)位點(diǎn)的純合和雜合等位基因模式與再狹窄和靶血管重建(TVR)之間相關(guān)性的條形圖。圖9給出了膽固醇水平、IL-1模式和臨床事件之間關(guān)系的示意性流程圖。圖10給出了顯示IL-1多態(tài)性和具有不同總膽固醇水平的易碎斑塊類型臨床事件風(fēng)險(xiǎn)之間關(guān)系的條形圖。圖11給出了IL-1基因型模式1中等位基因的示意性圖以及某些它們的臨床相關(guān)性。圖12顯示了關(guān)聯(lián)IL-1基因型模式2與Lp(a)水平的條形圖。圖13顯示了關(guān)聯(lián)IL-1基因型模式2與LDL水平的條形圖。圖14顯示了說明IL-1基因型與C反應(yīng)性蛋白水平之間關(guān)系的條形圖。，發(fā)明詳細(xì)說明4.1定義為了方便起見，下面提供在本說明書、實(shí)施例、和所附權(quán)利要求中使用的某些術(shù)語和短語的含義。術(shù)語"異?；钚?，當(dāng)應(yīng)用于諸如IL-1的多肽的活性時(shí)，是指這樣的活性其不同于天然多肽的活性或不同于健康個(gè)體中多肽的活性。因?yàn)樗鼜?qiáng)于它的天然對(duì)應(yīng)物的活性，所以多肽活性可以是異常的?；蛘撸?yàn)樗鄬?duì)于它的天然對(duì)應(yīng)物的活性較弱或沒有活性，所以活性可以是異常的。異?；钚赃€可以是活性的變化。例如異常多肽可與不同靶肽相互作用。由于編碼IL-1位點(diǎn)多肽的IL-1位點(diǎn)基因的過表達(dá)或表達(dá)不足，細(xì)胞可具有異常的IL-1活性。術(shù)語"等位基因"指在不同多態(tài)區(qū)域發(fā)現(xiàn)的不同序列變體。例如IL-1RN(VNTR)具有至少5個(gè)不同的等位基因。序列變體可以是單個(gè)或多個(gè)堿基變化，包括但不限于插入、缺失、或取代，或可以是可變數(shù)量的序列重復(fù)。術(shù)語"等位基因模式"指一個(gè)等位基因或多個(gè)等位基因在一個(gè)或多個(gè)多態(tài)區(qū)域的同一性。例如，等位基因模式可以由在多態(tài)位點(diǎn)的單個(gè)等位基因組成，就IL-1RN(VNTR)等位基因1而言，其是在IL-1RN位點(diǎn)的VNTR處具有至少一個(gè)拷貝的IL-1RN等位基因1的等位基因模式?；蛘?，等位基因模式可以由單個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的純合或雜合狀態(tài)組成。例如，IL1-RN(VNTR)等位基因2,2是這樣的等位基因模式其中在IL-1RN的VNTR標(biāo)志物處存在兩拷貝的第二等位基因，其對(duì)應(yīng)于純合IL-RN(VNTR)等位基因2狀態(tài)?；蛘?，等位基因模式可以由在多于一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因的同一性構(gòu)成。用在本文時(shí)，術(shù)語"抗體"意圖指與IL-1B多肽特異性反應(yīng)的結(jié)合劑，其包括整個(gè)抗體或其結(jié)合片段?？墒褂贸Ｒ?guī)技術(shù)將抗體片段化，以與上述對(duì)于完整抗體的相同方式篩選片段的效用。例如，通過用胃蛋白酶處理抗體可以產(chǎn)生F(ab)2片段?？商幚淼玫降腇(ab)2片段以還原二硫鍵產(chǎn)生Fab片段。本發(fā)明的抗體還旨在包括雙特異性的、單鏈的、和嵌合的和人源化的分子，其具有由抗體的至少一個(gè)CDR區(qū)域賦予的對(duì)IL-1B多肽的親和力。出于本文的目的，當(dāng)用于IL-1時(shí)，可以互換使用的"生物學(xué)活性"或"生物活性"或"活性"或"生物學(xué)功能"指通過IL-1多肽(無論是它的天然或變性構(gòu)象)或通過其任何子序列(片段)直接或間接發(fā)揮的效應(yīng)物或抗原功能。生物學(xué)活性可包括結(jié)合、從受體完成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)基因表達(dá)或抗原性效應(yīng)物功能。用在本文時(shí)，術(shù)語"IL-1多肽的生物活性片段"指全長(zhǎng)IL-1多肽的片段，其中該片段特異性地模擬或拮抗野生型IL-1多肽的活性。生物活性片段優(yōu)選能夠與白細(xì)胞介素受體相互作用的片段。"細(xì)胞"、"宿主細(xì)胞"或"重組宿主細(xì)胞，，在本文中是可互換使用的術(shù)語，不僅是指特定的個(gè)體細(xì)胞，而且指該細(xì)胞的后代或潛在的后代。因?yàn)橛捎谕蛔兓颦h(huán)境影響而導(dǎo)致在后代中可以發(fā)生某些改變，這種后代事實(shí)上可能與母細(xì)胞不相同，但仍被包括在本文所用術(shù)語的范圍內(nèi)。"嵌合體"、"鑲嵌型"、"嵌合哺乳動(dòng)物"等指在至少一些含有其基因組的細(xì)胞中具有敲除或敲入構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物。術(shù)語"對(duì)照"或"對(duì)照樣品"指對(duì)于所用檢測(cè)技術(shù)適合的任何樣品。對(duì)照樣品可以包含所用等位基因檢測(cè)技術(shù)的產(chǎn)物或待檢測(cè)的物質(zhì)。另外，對(duì)照可以是陽性或陰性對(duì)照。舉例而言，當(dāng)?shù)任换驒z測(cè)技術(shù)是PCR擴(kuò)增，接著大小分級(jí)時(shí)，則對(duì)照樣品可以包含適當(dāng)大小的DNA片段。同樣，當(dāng)?shù)任换驒z測(cè)技術(shù)涉及檢測(cè)突變蛋白質(zhì)時(shí)，對(duì)照樣品可以包含突變蛋白質(zhì)的樣品。然而，優(yōu)選對(duì)照樣品包含4寺檢測(cè)的物質(zhì)。例如，對(duì)照可以是基因組DNA樣品或IL-1基因簇的克隆部分。然而，當(dāng)待檢測(cè)的樣品是基因組DNA時(shí)，優(yōu)選對(duì)照樣品是高度純化的基因組DNA樣品。由本文定義時(shí)，"心血管疾病，，是指通過包括臨床癥狀和臨床體征的臨床事件表征的心血管病癥。臨床癥狀為患者報(bào)告的那些體驗(yàn)，提示臨床醫(yī)師病狀的存在。臨床體征是那些在身體或者實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中提示臨床醫(yī)師存在病狀的客觀發(fā)現(xiàn)。"心血管疾病"包括"冠狀動(dòng)脈疾病，，和"外周血管疾病"，這兩個(gè)術(shù)語在下文定義。在心血管疾病的臨床癥狀包括胸痛、氣短、虛弱、暈厥發(fā)作、意識(shí)改變、四肢痛、陣發(fā)性夜間呼吸困難、短暫局部缺血發(fā)作和患者經(jīng)歷的其它這樣的的現(xiàn)象。心血管疾病中的臨床體征包括這樣的發(fā)現(xiàn)如EKG異常、改變的周圍脈搏、動(dòng)脈雜音、異常心音、羅音和喘鳴、頸靜脈擴(kuò)張、神經(jīng)學(xué)改變和臨床醫(yī)師確定的其它這樣的發(fā)現(xiàn)。臨床癥狀和臨床體征可以在諸如心肌梗塞(MI)或者中風(fēng)(也稱為"腦血管意外"或者"CVA")的心血管疾病中聯(lián)合，，其中患者將報(bào)告某些現(xiàn)象(癥狀)而且臨床醫(yī)師將察覺其它的現(xiàn)象(體征)，它們都表明了隱含的病理學(xué)。"心血管疾病"包括那些與易碎斑塊病癥、閉塞病癥和狹窄的心血管病癥相關(guān)的疾病。例如，易碎斑塊病癥(如下文對(duì)該術(shù)語的定義)導(dǎo)致的心血管疾病可被稱為"易碎斑塊疾病"。與易碎斑塊疾病相關(guān)的臨床事件包括那些體征和癥狀其中具有后來的急性血栓形成或者有遠(yuǎn)端的栓塞形成的易碎斑塊的破裂是其標(biāo)志。易碎斑塊疾病的例子包括某些中風(fēng)和心肌梗塞。作為另一實(shí)例，由閉塞病癥引起的心血管疾病可稱為"閉塞性疾病"。與閉塞性疾病相關(guān)的臨床事件包括那些體征和癥狀其中動(dòng)脈閉塞的進(jìn)展影響了循環(huán)至靶組織的血液量。進(jìn)行性動(dòng)脈閉塞可能導(dǎo)致進(jìn)行性局部缺血，如果血液循環(huán)量不足以維持該組織，可能會(huì)最終進(jìn)展至組織死亡。閉塞性疾病的體征和癥狀包括跛腳、休息痛、絞痛、和壞疽，以及表明血管狹窄和遠(yuǎn)端灌注降低的身體和實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)。在另一個(gè)實(shí)例中，由再狹窄而引起的心血管疾病可稱為支架內(nèi)狹窄疾病。支架內(nèi)狹窄疾病包括由進(jìn)行性動(dòng)脈支架的堵塞引起的體征和癥狀，動(dòng)脈支架已經(jīng)確定為諸如經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)的程序的一部分，其中支架的存在旨在幫助血管維持其被最新擴(kuò)展的形態(tài)。與支架內(nèi)狹窄疾病相伴的臨床事件是那些可歸于重建動(dòng)脈的再狹窄。"心血管病癥"廣義上指冠狀動(dòng)脈病癥和外周動(dòng)樂jc病癥。術(shù)語"心血管病癥，，可以用于任何動(dòng)脈異常，無論是結(jié)構(gòu)上的、組織學(xué)的、生物化學(xué)的或者任何其它的異常。該術(shù)語包括那些以易碎斑塊為特征的病癥(本文稱為"易碎斑塊病癥")、那些以血管閉塞為特征的疾病(本文稱為"閉塞性病癥")、以及那些以再狹窄為特征的病癥。"心血管病癥"可以先在動(dòng)脈中發(fā)生，即，先于任何醫(yī)療或者外科手術(shù)。主要的心血管病癥尤其包括動(dòng)力永粥樣;哽化、動(dòng)脈閉塞、動(dòng)力永瘤形成和血才全形成等。"心血管病癥，，可以在動(dòng)脈中繼發(fā)發(fā)生，即，在醫(yī)療或者外科手術(shù)以后。繼發(fā)心血管病癥尤其包括創(chuàng)傷后動(dòng)脈瘤的形成、再狹窄、以及手術(shù)后的移植閉塞。"導(dǎo)致心血管病癥的功能性突變，，指引起或促進(jìn)個(gè)體中心血管病癥出現(xiàn)的突變。優(yōu)選的突變發(fā)生在IL-1復(fù)合體內(nèi)。發(fā)生在IL-1基因(例如，IL-1A、IL-1B或IL-1RN)或與其連鎖的位點(diǎn)內(nèi)的導(dǎo)致心血管病癥的功能性突變可以改變例如基因的開放閱讀框或剪接模式，由此導(dǎo)致了無活性或低活性基因產(chǎn)物的形成。例如，發(fā)生在IL-1A位點(diǎn)的內(nèi)含子6內(nèi)的突變對(duì)應(yīng)于可變數(shù)量(對(duì)應(yīng)于5至18重復(fù)單元)的串聯(lián)重復(fù)46bp序列(Bailly,etal.(1993)Eur.J.Immunol.23:1240-45)。這些重復(fù)序列含有三個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)SP1位點(diǎn)、病毒增強(qiáng)子元件和糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件；因此，攜帶具有大量重復(fù)單元的IL-1A內(nèi)含子6VNTR等位基因的個(gè)體可能遭受改變的IL-IA基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和隨后的炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生的紊亂。實(shí)際上，有證據(jù)表明，在該多態(tài)性IL-IA位點(diǎn)處增加的重復(fù)數(shù)量導(dǎo)致降低的IL-la合成(Baillyetal.(1996)MolImmunol33:999-1006)。或者，突變可導(dǎo)致高活性基因產(chǎn)物。例如，IL-1B(G位于+6912)多態(tài)性的等位基因2發(fā)生在IL-lBmRNA的3'UTR(非翻譯區(qū))，并且與IL-1B基因位于+6912)的等位基因1相關(guān)的IL-IBmRNA和IL-IB蛋白的穩(wěn)態(tài)水平相比，與大約4倍的水平增加相關(guān)。此外，IL-IB(-511)突變?cè)卩徑?fù)糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件的啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)處(Zhangetal.(1997)DNACellBiol16:145-52)。這種元件4吏地塞米+>四倍抑制IL-IB表達(dá)成為可能，并且這種負(fù)反應(yīng)元件的缺失引起IL-IB啟動(dòng)子活性2.5倍的增加。因此，該IL-IB(-511)多態(tài)性可能影響到細(xì)胞因子產(chǎn)生和炎性反應(yīng)。這些實(shí)例證明發(fā)生在IL-1A或IL-IB基因中的遺傳性變型可直接導(dǎo)致改變的生成或?qū)L-1細(xì)胞因子活性的調(diào)節(jié)。"心血管病癥治療劑"指防止或推遲個(gè)體中構(gòu)成心血管病癥的異常的出現(xiàn)或降低其程度的任何試劑或治療方案(包括藥物、營(yíng)養(yǎng)制品和外科手#史)。心血管病癥治療劑可涉及對(duì)包括易碎斑塊病癥、閉塞病癥和再狹窄的任何心血管病癥的治療。本文提供了針對(duì)心血管病癥每一類的治療劑的實(shí)例。應(yīng)理解的是，治療劑可以用于一類以上的心血管病癥的治療。該治療劑可為多肽、肽才莫擬物(peptidomimetic)、核酸或其它無機(jī)或有機(jī)分子，優(yōu)選包括維生素、無機(jī)物和其它營(yíng)養(yǎng)物的"小分子"。優(yōu)選地，該治療劑可通過模擬或加強(qiáng)(激動(dòng))或抑制(拮抗)天然存在多肽的作用而調(diào)節(jié)IL-1多肽的至少一種活性，例如與受體的相互作用。IL-1激動(dòng)劑可為野生型蛋白或具有該野生型至少一種生物活性如受體結(jié)合活性的其衍生物。IL-1激動(dòng)劑也可為上調(diào)基因表達(dá)或增強(qiáng)蛋白的至少一種生物活性的化合物。IL-1激動(dòng)劑也可為增強(qiáng)多肽與另一分子如受體的相互作用的化合物。IL-1拮抗劑可為抑制或降低蛋白和另一分子如受體相互作用的化合物，或者阻斷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或翻譯后加工的試劑(例如，IL-1轉(zhuǎn)化酶(ICE)抑制劑)。因此，優(yōu)選的拮抗劑為抑制或減弱與受體結(jié)合并由此阻斷隨后對(duì)受體活化的化合物。IL-1拮抗劑也可為下調(diào)基因表達(dá)或減少存在的蛋白量的化合物。該拮抗劑可為多肽的顯性負(fù)形式(dominantnegativeform),例如，能夠與靶多肽如受體相互作用但是不促進(jìn)受體的活化的多肽形式。該拮抗劑也可為編碼顯性負(fù)形式的多肽的核酸、反義核酸、或能夠與RNA特異相互作用的核酶。其它的拮抗劑為與多肽結(jié)合并抑制其作用的分子。這類分子包括肽，例如不具有生物學(xué)活性并抑制與受體結(jié)合的靶肽的形式。因此，這類肽將與蛋白的活性位點(diǎn)結(jié)合并防止其與靶肽的相互作用。其它的拮抗劑包括與分子的表位特異相互作用的抗體，這種結(jié)合干擾了多肽的生物學(xué)功能。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，拮抗劑為小分子，例如能夠抑制多肽與靶受體相互作用的分子?；蛘?，該小分子可通過與不同于受體結(jié)合位點(diǎn)的位點(diǎn)相互作用而起拮抗劑的作用。優(yōu)選的治療劑包括降脂藥物、抗血小板劑、抗炎劑和抗高血壓劑。用在本文時(shí)，"腦血管疾病，，為一類外周血管疾病(如下文所定義的)，其中阻斷的外周血管為腦循環(huán)的一部分。腦循環(huán)包括頸動(dòng)脈和推動(dòng)脈系統(tǒng)。腦血管疾病的這種定義旨在特意包括顱內(nèi)出血，其并不作為動(dòng)脈堵塞的現(xiàn)象出現(xiàn)。通過諸如斑塊破裂或栓塞形成的機(jī)制，堵塞可突然發(fā)生。堵塞可進(jìn)行性地發(fā)生，通過肌內(nèi)膜增生和斑塊形成而使動(dòng)脈變窄。堵塞可為完全的或部分的。某些程度和持續(xù)時(shí)間的堵塞導(dǎo)致腦缺血，持續(xù)幾秒至數(shù)分鐘的血流減小。腦缺血的時(shí)間延長(zhǎng)可導(dǎo)致腦梗塞。局部貧血和梗塞可為局部的或廣泛的。腦缺血或梗塞可導(dǎo)致稱為"中風(fēng)，，或"腦血管意外(CVA)"的無抽搐性局部神經(jīng)缺損的突然發(fā)作。腦血管疾病具有兩大病理學(xué)種類血栓形成和栓塞。血栓形成性中風(fēng)的發(fā)生在80-90%的患者中沒有預(yù)警癥狀；10-20%的血栓形成性中風(fēng)由短暫腦缺血發(fā)作預(yù)才艮。腦血管疾病可與易碎斑塊病癥相關(guān)。這種類型的腦血管疾病的體征和癥狀為與易碎斑塊有關(guān)的那些體征和癥狀，包括由于具有血栓或栓塞形成的突然動(dòng)脈堵塞導(dǎo)致的中風(fēng)。腦血管疾病可與閉塞病癥有關(guān)。這種類型的腦血管疾病的體征和癥狀涉及具有整體或局部腦缺血的血流的進(jìn)行性堵塞。這種情況下，可看到神經(jīng)學(xué)變化，包括中風(fēng)。"臨床事件"為疾病的臨床上可辨認(rèn)的體征或疾病的臨床上可報(bào)告的癥狀的出現(xiàn)。"臨床上可辨認(rèn)的，，表明該體征可由衛(wèi)生保健提供者鑒別出。"臨床上可報(bào)告的"說明該癥狀是可對(duì)衛(wèi)生保健提供者描述的現(xiàn)象類型。臨床事件可以包括臨床上可報(bào)告的癥狀，即使特定的患者自己不能報(bào)告它們，只要這些類型的現(xiàn)象通常能夠由患者向衛(wèi)生保健提供者描述。"冠狀動(dòng)脈疾病"("CAD")指涉及供應(yīng)心臟的動(dòng)脈的堵塞的血管病癥。堵塞可通過諸如斑塊破裂或栓塞形成的機(jī)制突然發(fā)生。堵塞可進(jìn)行性發(fā)生，通過肌內(nèi)膜增生和斑塊形成使動(dòng)脈變窄。供應(yīng)心臟的動(dòng)脈的堵塞引起的這些臨床體征和癥狀為冠狀動(dòng)脈疾病的表現(xiàn)。冠狀動(dòng)脈疾病的表現(xiàn)包括絞痛、局部貧血、心肌梗塞、心肌病、充血性心力衰竭、心率不齊和動(dòng)l^瘤形成。應(yīng)理解的是，冠狀循環(huán)中易碎斑塊疾病與動(dòng)脈血栓形成或遠(yuǎn)端栓塞有關(guān)，其自身表現(xiàn)為心肌梗塞。應(yīng)理解的是，冠狀循環(huán)中閉塞疾病與伴有絞痛癥狀的動(dòng)脈狹窄有關(guān)，該癥狀為通常釆用藥物介入和血管成形式治療的狀況。"疾病，，為以包括臨床體征和臨床癥狀的臨床事件為特征的病癥。本文討論的疾病包括心血管疾病、外周血管疾病、CAD、腦血管疾病以及那些在與易碎斑塊病癥有關(guān)的、與閉塞病癥有關(guān)的或與再狹窄有關(guān)的任何解剖學(xué)位置中的疾病。"病癥相關(guān)等位基因"或"與病癥相關(guān)的等位基因"指其在個(gè)體中的存在表明該個(gè)體具有或者易于發(fā)生特定病癥的等位基因。一種類型的病癥相關(guān)等位基因?yàn)?心血管病癥相關(guān)等位基因"，其在個(gè)體中的存在表明該個(gè)體具有或易于出現(xiàn)心血管病癥。這些廣義上在其范圍內(nèi)包括與"易碎斑塊病癥"有關(guān)的等位基因、與"閉塞病癥"有關(guān)的等位基因、以及與再狹窄有關(guān)的等位基因。與"易碎斑塊病癥"有關(guān)的等位基因的實(shí)例包括IL-lA+4825的等位基因2;IL-1B的+3954標(biāo)志物的等位基因2;以及IL-1RN的+2018標(biāo)志物的等位基因1;和IL-1B基因的(-511)標(biāo)志物的等位基因1或者與上述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。與"閉塞病癥"有關(guān)的等位基因的實(shí)例包括IL-lA+4825的等位基因1;IL-1B的+3954標(biāo)志物的等位基因1;以及IL-1RN的+2018標(biāo)志物的等位基因2;和IL-1B基因的(-511)標(biāo)志物的等位基因2或者與上述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。與再狹窄有關(guān)的等位基因的實(shí)例包括IL-1A的+4825標(biāo)志物的等位基因1或+3954標(biāo)志物的等位基因1與IL-1B的-511標(biāo)志物的等位基因1或IL-1RN的+2018標(biāo)志物的等位基因1的組合，或者與前述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因的組合。"牙周病癥相關(guān)等位基因"指其在個(gè)體中的存在表明該個(gè)體具有或易于發(fā)生牙周病癥的等位基因。短語"基因破壞"和"靶向破壞"或任何類似的短語指天然DNA序列的位點(diǎn)特異性破壞，以便與野生型拷貝的該基因相比防止在細(xì)胞中該基因的表達(dá)。該中斷可以由基因的缺失、插入或j務(wù)飾或其任何組合所導(dǎo)致。用在本文時(shí)，術(shù)語"栓塞物"、"栓塞"或"栓塞形成"指動(dòng)脈至動(dòng)脈的栓塞或栓塞形成。"易碎斑塊病癥"指這樣的心血管病癥其特征在于在動(dòng)脈內(nèi)作為動(dòng)脈粥樣硬化過程的一部分的易碎斑塊的形成。該易碎斑塊易于斷裂、血栓形成或者破裂。當(dāng)斑塊的完整性被改變時(shí)，其可機(jī)械性地堵塞局部血管，或者其可將片段或相關(guān)的凝塊送至血管下游，以在更遠(yuǎn)端引起堵塞。如果斑塊破裂，其可為局部血栓形成的病灶。易碎斑塊病癥與IL-1位點(diǎn)的等位基因模式1相關(guān)。"易碎斑塊病癥治療劑，，指防止或推遲個(gè)體中構(gòu)成易碎斑塊病癥的異常的出現(xiàn)或降低其程度的任何試劑或治療方案(包括藥物、營(yíng)養(yǎng)制品和外科手段)。該術(shù)語包括某些通過穩(wěn)定易碎斑塊而起作用的試劑、某些具有抗凝血或抗血小板作用的試劑、以及某些具有抗氧化作用的試劑。易碎斑塊病癥相關(guān)治療劑的實(shí)例包括抑制素藥物、具有抗前列腺素作用的抗炎劑、諸如Tenidap的指向IL-1和TNF-a的抗炎劑和細(xì)胞因子抑制劑、包括四環(huán)素和相關(guān)試劑的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)抑制劑以及特異性MMP抑制劑、以及重組IL-1受體拮抗劑。此外，該術(shù)語包括阻斷IL-1的那些營(yíng)養(yǎng)制品，例如魚油、w-3脂肪酸、多不飽和脂肪酸、以及諸如丁羥基茴香醚(BHA)的那些具有抗氧化作用的營(yíng)養(yǎng)制品。用在本文時(shí)，術(shù)語"單倍型"意圖指一組等位基因，其在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平上(Pc^〈0.05)作為一簇(連鎖不平衡)一起遺傳。用在本文時(shí)，短語"IL-1單倍型，，指IL-1位點(diǎn)中的單倍型。用在本文時(shí)，"IL-1激動(dòng)劑"指一種試劑，其模擬、上調(diào)(加強(qiáng)或者補(bǔ)充)或者以其它方式增加IL-1生物活性或IL-1生物學(xué)途徑中基因的生物活性。IL-1激動(dòng)劑可以在多種不同水平的任意水平上起作用，包括在啟動(dòng)于區(qū)域調(diào)節(jié)IL-1基因表達(dá)、調(diào)節(jié)mRNA的剪接機(jī)制、穩(wěn)定mRNA、用于翻譯的蛋白的磷酸化、轉(zhuǎn)化IL-1前體(proIL-l)至成熟的IL-1和分泌IL-1。增加IL-1合成的激動(dòng)劑包括脂多糖、IL-1B、cAMPi秀導(dǎo)劑、NfKB激活劑、AP-1激活劑、TNF-a、氧化型LDL、高級(jí)糖基化終產(chǎn)物(AGE)、剪切力、缺氧、氧過多、缺血再灌注損傷、組胺、前列腺素E2(PGE2)、IL-2、IL-3、IL-12、粒細(xì)胞巨噬細(xì)月包-集落刺激因子(GM-CSF)、單核細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、干細(xì)胞因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、補(bǔ)體C5A、補(bǔ)體C5b9、纖維蛋白降解產(chǎn)物、纖溶酶、凝血酶、9-羥基十八烷酸、13-羥基十八烷酸、血小板活化因子(PAF)、因子H、視黃酸、尿酸、焦磷酸鈣、多聚核苷、c-反應(yīng)性蛋白、Q!-抗胰蛋白酶、煙草抗原、膠原、j3-l整合素、LFA-3、抗-HLA-DR、抗-IgM、抗-CD3、植物血球凝集素(CD2)、sCD23、紫外線B輻射、7-輻射、P物質(zhì)、異丙基腎上腺素、去氧麻黃堿和褪黑激素。穩(wěn)定IL-lmRNA的激動(dòng)劑包括細(xì)菌內(nèi)毒素和IL-1。其它激動(dòng)劑通過增加可以利用的IL-11型受體的數(shù)目來發(fā)揮功能，其包括IL-1、PKC活化劑、地塞米+>、IL-2、IL-4和PGE2。其它優(yōu)選的拮抗劑干擾或者抑制通過IL-1活化的或在IL-1信號(hào)傳導(dǎo)途徑中使用的信號(hào)傳導(dǎo)因子(如，NF口B和AP-1、PI3激酶、石粦酸酶A2、蛋白激酶C、JNK-1、5-脂氧合酶、環(huán)氧化酶2、酪氨酸磷酸化、iNOS途徑、Rac、Ras、TRAF)。其它的激動(dòng)劑還增加被IL-1誘導(dǎo)表達(dá)的基因的生物活性，其包括IL-1、IL-lRa、TNF、IL-2、IL隱3、IL-6、IL-12、GM-CSF、G-CSF、TGF-jS、纖維蛋白原、尿激酶纖溶酶原抑制劑、l型和2型纖溶酶原激活劑抑制劑、p-選擇蛋白(CD62)、纖維蛋白原受體、CD-11/CD18、蛋白酶連接蛋白-1、CD44、基質(zhì)金屬蛋白酶-l(MMP-l)、MMP-3、彈性蛋白酶、膠原酶、金屬蛋白酶-1組織抑制劑(TIM-1)、膠原、增加APoCIII的甘油三酯、載脂蛋白、ICAM-1、ELAM-1、VCAM-1、L-選擇蛋白、核心蛋白多糖、干細(xì)胞因子、白血病抑制因子、IFN口、口.口丄-8、IL-2受體、IL-3受體、IL-5受體、c-A:z7受體、GM-CSF受體、環(huán)氧化酶-2(COX-2)、2型磷脂酶A2、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)、內(nèi)皮素-1，3、7谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶、Mn超氧化物歧化酶、C-反應(yīng)性蛋白、纖維蛋白原、血清淀粉樣蛋白A、金屬硫蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、溶菌酶、黃噤呤脫氫酶、黃嘌呤氧化酶、血小板衍生生長(zhǎng)因子A鏈(PDGF)、黑色素瘤生長(zhǎng)刺激活性(gro-口、□.□)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-l(IGF-l)、活化素A、鴉片-黑色素-皮質(zhì)素前體、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子、B淀粉樣蛋白前體、基底膜蛋白-40、層粘連蛋白B1和B2、組成性的熱休克蛋白p70、P42分裂素、活化蛋白激酶、鳥氨酸脫羧酶、血紅素氧化酶和G-蛋白口亞基)。用在本文時(shí)，"IL-1拮抗劑"指下調(diào)或者以其它方式降低IL-1生物活性的試劑。IL-1拮抗劑可以在多種不同水平的任意水平上起作用，包括在啟動(dòng)于區(qū)域調(diào)節(jié)IL-1基因表達(dá)、調(diào)節(jié)mRNA的剪接機(jī)制、穩(wěn)定mRNA、用于翻譯的蛋白的磷酸化、轉(zhuǎn)化IL-1前體至成熟的IL-1和分泌IL-1。IL-1生成的拮抗劑包括皮質(zhì)類固醇、脂氧合酶抑制劑、環(huán)氧化酶抑制劑，7-干擾素、IL-4、IL-IO、IL-13、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子/3(TGF-|8)、ACE抑制劑、n-3多不飽和脂肪酸類、抗氧化劑和脂還原劑。去穩(wěn)定IL-lmRNA的拮抗劑包括增強(qiáng)去腺苷酸化作用的試劑。抑制或者防止用于翻譯的IL-1蛋白的磷酸化作用的拮抗劑包括吡啶基-咪唑化合物，例如特丁非隆和抑制微管形成的化合物(如秋水仙堿、長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春新石威)。抑制或者阻止IL-1前體轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒霫L-1的拮抗劑包括白細(xì)胞介素轉(zhuǎn)化酶(ICE)抑制劑，例如eICE亞型，ICEa、]8和7亞型抗體，CXrm-A，轉(zhuǎn)錄物X,內(nèi)源的四肽竟?fàn)幮缘孜镆种苿?，胰蛋白酶，彈性蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，糜蛋白酶，和其它的非特異性蛋白酶。阻止和抑制IL-1分泌的拮抗劑包括阻止陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)的試劑。干擾與IL-1受體相互作用的拮抗劑包括抑制1型IL-1受體的糖基化作用的試劑、針對(duì)IL-1RI的反義寡聚核苷酸、針對(duì)IL-1RI的抗體和針對(duì)IL-lRacP的反義寡聚核苷酸。通過減少可用的IL-11型受體的數(shù)目起作用的其它的拮抗劑包括TGF-jS、COX抑制劑、增加IL-1II型受體的因子、地塞米松、PGE2、IL-l和IL-4。其它優(yōu)選的拮抗劑干擾或者抑制被IL-1激活或者在IL-1信號(hào)傳導(dǎo)途徑中使用的信號(hào)傳導(dǎo)因子(如NF口B和AP-1、PI3激酶、石岸脂酶A2、蛋白激酶C、JNK-1、5-脂氧化酶、環(huán)氧化酶-2、酪氨酸石岸酸化、iNOS途徑、Rac、Ras、TRAF)。其它的拮抗劑還千擾被IL-1誘導(dǎo)表達(dá)的基因的生物活性，其包括IL-1、IL-lRa、TNF、IL隱2、IL-3、IL-6、IL畫12、GM-CSF、G-CSF、TGF-/3、纖維蛋白原、尿激酶纖溶酶原抑制劑、l型和2型纖溶酶原激活劑抑制劑、p-選擇素(CD62)、纖維蛋白原受體、CD-11/CD18、蛋白酶連接蛋白-1、CD44、基質(zhì)金屬蛋白酶-l(MMP-l)、MMP-3、彈性蛋白酶、膠原酶、金屬蛋白酶-1組織抑制劑(TIMP-1)、膠原、增加APoCIII的甘油三酯、載脂蛋白、ICAM-1、ELAM-1、VCAM-1、L-選擇蛋白、核心蛋白多糖、干細(xì)胞因子、白血病抑制因子、IFN口、口.口丄-8、IL-2受體、IL-3受體、IL-5受體、c-A:"受體、GM-CSF受體、環(huán)氧化酶-2(COX-2)、2型磷脂酶A2、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)、內(nèi)皮素-1,3、7谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶、Mn超氧化物歧化酶、C-反應(yīng)性蛋白、纖維蛋白原、血清淀粉樣蛋白A、金屬硫蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、溶菌酶、黃嘌呤脫氫酶、黃噤呤氧化酶、血小板衍生生長(zhǎng)因子A鏈(PDGF)、黑色素瘤生長(zhǎng)刺激活性(gro-口、□.□)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-l(IGF-l)、活化素A、鴉片-黑色素-皮質(zhì)素前體、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子、B淀粉樣蛋白前體、基底膜蛋白-40、層粘連蛋白B1和B2、組成性的熱休克蛋白p70、P42分裂素、活化蛋白激酶、鳥氨酸脫羧酶、血紅素氧化酶和G-蛋白n亞基)。其它優(yōu)選的拮抗劑包括hymenialdisine、除莠霉素(如herbamycinA)、CK-103A及其衍生物(如4，6-二氫噠溱并[4,5-c]噠"秦-5(lH)酮)、CK-119、CK-122、吲哚美辛、黃曲毒素Bl、瘦素、肝素、二環(huán)咪唑(如SB203580)、PD15306HC1、羅漢木>酸書亍生物、M-20、人[Gly2]胰高血糖素樣肽-2、FR167653、類固醇書f生物、糖皮質(zhì)激素、槲皮素、茶堿、NO-合成酶抑制劑、RWJ68354、euclyptol(1.8-按樹腦)、Magnosalin、N-乙酰半胱氨酸、a-褪黑激素-刺激激素(口-MSH)、三氯生(2,4，4，-三氯-2，-羥基二苯醚)、前列腺素E2和4-氨基吡啶依他尼酸和4，4，-二異疏氰酸均二苯乙烯-2,2，-二磺酸(DIDS)、葡萄糖、脂磷聚糖、阿司匹林、代謝阻斷劑、Diacerhein、巰基調(diào)節(jié)劑、鋅、嗎啡、白三烯生物合成抑制劑(如MK886)、血小板活化因子受體拮抗劑(如WEB2086)、胺碘酮、曲尼司特、S-曱基-L-硫瓜氨酸、/3-腎上腺受體激動(dòng)劑(如，丙卡特羅、克侖特羅、非諾特羅、特布他林、透明質(zhì)酸、抗-TNF-口抗體、抗-IL-l::自身抗體、IL-1受體拮抗劑、IL-1R相關(guān)激酶、可溶性TNF受體和抗炎細(xì)胞因子(如IL-4、IL-13、IL-IO、IL-6、TGF-口、血管緊張素II、可溶性IL-1II型受體、可溶性IL-11型受體、組織纖溶酶原激活劑、鋅指蛋白A20IL-1肽(如(Thr-Lys-Pro-Arg)(促吞噬肽)、(Ile隱Thy-Gly-Ser畫Glu)IL-l-a、Val-Thr-Lys-Phe-Tyr-Phe、Val畫Thr-Asp-Phe-Tyr-Phe、干擾素a2b、干擾素/3、IL-1-/3類似物(如IL-1-/3三肽Lys-D-Pro國(guó)Thr)、糖基化的IL-l-a和IL-lra肽。用在本文時(shí)，術(shù)語"IL-1基因簇"和"IL-1位點(diǎn)"包括所有位于或者接近2號(hào)染色體的2ql3區(qū)域的核酸，包括至少IL-1A、IL-1B和IL-1RN基因以及任何其它連鎖序列。(NicklinWa/.，Gewomz'cs19:382-84,1994)。用在本文時(shí)，術(shù)語"IL-1A"、"IL-1B"和"IL-1RN"分別指編碼IL-la、IL-1]8和IL-1受體拮抗劑的基因。IL-1A、IL-1B和IL-1RN的基因登錄號(hào)分別為X03833、X04500、和X64532。"IL-1功能突變"指IL-1基因簇內(nèi)導(dǎo)致改變的表型的突變(即影響IL-1基因或蛋白質(zhì)的功能)。實(shí)例包括IL-lA(+4845)等位基因2、IL-1B(+3954)等位基因2、IL-1B(-511)等位基因1和IL-1RN(+2018)等位基因1。"IL-1X(Z)等位基因Y"指出現(xiàn)在基因X內(nèi)的IL-1位點(diǎn)多態(tài)位點(diǎn)處的特定等位基因型，稱為Y,其中X是IL-1A、B或AN或者IL-1位點(diǎn)中的某個(gè)其它基因，位于或接近核苷酸Z,其中核苷酸Z是相對(duì)于主要轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)被編號(hào)，該起始位點(diǎn)是IL-1基因X的核苷酸+1。如本文另外所用，術(shù)語"IL-1X等位基因(Z)"是指位于或接近核苷酸Z的基因X中IL-1多態(tài)位點(diǎn)處的所有等位基因。例如，術(shù)語"IL-1RN(+2018)等位基因"指在標(biāo)志物+2018處IL-1RN基因的可選擇形式。"IL-1RN(+2018)等位基因1"指在有義鏈的位置+2018處含有半胱氨酸(C)的IL-1RN基因型。Clay"a/.,Z/wm.97:723-26，1996。"IL-1RN(+2018)等位基因2"是指在正鏈的位置+2018處含有胸腺嘧啶(T)的IL-1RN基因型。當(dāng)個(gè)體具有兩個(gè)相同的IL-1RN等位基因時(shí)，該個(gè)體被稱為純合的，或具有純合狀態(tài)。當(dāng)個(gè)體具有兩個(gè)不同的IL-1RN等位基因時(shí)，該個(gè)體被稱為雜合的，或具有雜合狀態(tài)。術(shù)語"IL-1RN(+2018)等位基因2,2"是指純合的IL-1RN(+2018)等位基因2狀態(tài)。相反，術(shù)語"IL-1RN(+2018)等位基因l，l"是指純合的IL-1RN(+2018)等位基因l狀態(tài)。術(shù)語"IL-1RN(+2018)等位基因1,2"指雜合的等位基因l和2狀態(tài)。用在本文時(shí)，"IL-1相關(guān)的"旨在包括與人染色體2(2q12-14)上人IL-1位點(diǎn)基因有關(guān)的所有基因。這些包括位于染色體2(2q13-14)處人IL-1基因簇的IL-1基因，包括編碼白介素-la的IL-1A基因、編碼白介素-l/3的IL-1B基因，以及編碼白介素-1受體拮抗劑的IL-1RN(或IL-lm)基因。此外，這些IL-l相關(guān)基因包括位于人染色體2(2q12)上的I型和II型人IL-1受體基因以及位于小鼠染色體1上位置19.5cM處它們的小鼠同源物。白介素-la、白介素-1/3、和白介素IL-1RN在甚至它們都結(jié)合IL-1I型受體上是相關(guān)的，但是只有白介素-1a和白介素-118為活化IL-1I型受體的激動(dòng)劑配體，而白介素IL-1RN為天然存在的拮抗劑配體。當(dāng)術(shù)語"IL-1"參照基因產(chǎn)物或多肽使用時(shí)，意味著指由人染色體2(2q12-14)上的白介素-1位點(diǎn)編碼的所有基因產(chǎn)物以及來自其它物種的它們相應(yīng)的同源物或其功能變體。因此術(shù)語IL-1包括諸如IL-la和IL-l/3的促進(jìn)炎性反應(yīng)的分泌的多肽，以及諸如IL-1受體拮抗劑和IL-1II型(引誘物)受體的拮抗炎性反應(yīng)的分泌的多肽。"IL-1受體"或"IL-1R"指能夠結(jié)合和/或轉(zhuǎn)導(dǎo)來自IL-1位點(diǎn)編碼的配體的信號(hào)的多種細(xì)胞膜結(jié)合蛋白受體。該術(shù)語應(yīng)用至任何這樣的蛋白，其能夠結(jié)合白介素-1(IL-1)分子，并且以它們作為哺乳動(dòng)物質(zhì)膜蛋白的天然構(gòu)型可能在向細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)IL-1提供的信號(hào)中起作用。用在本文時(shí)，該術(shù)語包括具有IL-1結(jié)合或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的天然蛋白的類似物。實(shí)例包括美國(guó)專利4，968，607中描述的人和鼠IL-1受體。術(shù)語"IL-1核酸"指編碼IL-1蛋白的核酸。"IL國(guó)1多肽"和"IL-1蛋白"旨在包括包含由用于IL-la、IL-lj8和IL-1RN的IL-1基因組DNA序列編碼的氨基酸序列的多肽、或其片段、和其同源物，并且包括激動(dòng)劑和拮抗劑多肽。"支架內(nèi)狹窄"指在血管成形術(shù)期間放置的支架內(nèi)的進(jìn)行性閉塞。支架內(nèi)狹窄為發(fā)生在動(dòng)脈支架內(nèi)的再狹窄形式。"增加的風(fēng)險(xiǎn)"指與群體中疾病或病癥的發(fā)生率比較，個(gè)體中該疾病或病癥在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有更高的發(fā)生率。所鑒定的與增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的因子被稱為"風(fēng)險(xiǎn)因子"。攜帶特定多態(tài)等位基因是針對(duì)特定心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因子，并與特定疾病增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。用在本文時(shí)，術(shù)語"相互作用"旨在包括分子間可檢測(cè)的關(guān)系或結(jié)合(例如生物化學(xué)相互作用)，例如本質(zhì)上的蛋白-蛋白、蛋白-核酸、核酸-核酸和蛋白-小分子或核酸-小分子之間的相互作用。用在本文中就諸如DNA或RNA的核酸而言時(shí)，術(shù)語"分離的"指分別與高分子天然來源中存在的其它DNA或RNA分離的分子。例如，編碼個(gè)體IL-1多肽之一的分離的核酸優(yōu)選地包括基因組DNA中天然地緊鄰IL-1基因的不超過10千堿基(kb)的核酸序列，更優(yōu)選不超過5kb的這種天然存在的鄰接序列，并且最優(yōu)選不超過1.5kb的這種天然存在的鄰接序列。用在本文時(shí)，術(shù)語分離的還指基本上不含細(xì)胞物質(zhì)、病毒物質(zhì)或培養(yǎng)基(通過重組DNA技術(shù)產(chǎn)生時(shí))或化學(xué)前體或其它化學(xué)試劑(通過化學(xué)合成時(shí))的核酸或多肽。此外，"分離的核酸"意味著包括核酸片段，其不是作為片段被天然產(chǎn)生，并且不會(huì)在天然狀態(tài)下被發(fā)現(xiàn)。用在本文時(shí)，術(shù)語"分離的"還指與其它細(xì)胞蛋白分離的多肽，意味著包括純化的和重組的多肽。"敲入(knock-in)"轉(zhuǎn)基因動(dòng)物指具有引入其基因組內(nèi)的經(jīng)修飾基因的動(dòng)物，該經(jīng)修飾的基因可為外源的或內(nèi)源來源的。"敲除(knock-out)"轉(zhuǎn)基因動(dòng)物指內(nèi)源基因的表達(dá)被部分或完全抑制(例如，基于至少一部分基因的刪除、以另一序列對(duì)基因的至少一部分的置換、終止密碼子的引入、編碼關(guān)鍵氨基酸的堿基的突變、或者內(nèi)含子接合處的去除，等等)的動(dòng)物。"敲除構(gòu)建體"指可^t用于減少或抑制由細(xì)胞中內(nèi)源DNA序列編碼的蛋白的表達(dá)的核酸序列。在筒單的實(shí)例中，敲除構(gòu)建體包括在基因的關(guān)鍵部分具有缺失的基因，如IL-1RN基因，這樣不能從其表達(dá)活性蛋白。或者，一定量的終止密碼子可被添加至天然基因，導(dǎo)致蛋白的過早終止，或者內(nèi)含子接合處可被失活。在典型的敲除構(gòu)建體中，基因的一些部分被可選擇標(biāo)志物(例如neo基因)置換，這樣該基因可表示如下IL國(guó)1RN5'/neo/IL-lRN3'，其中IL-1RN5'和IL陽IRN3'分別指相對(duì)于IL-1RN基因部分在其上游和下游的基因組或cDNA序列，以及其中neo指新霉素抗性基因。在另一敲除構(gòu)建體中，另一可選擇標(biāo)志物被加入至側(cè)翼位置，這樣該基因可被表示為IL-lRN/neo/IL-1RN/TK，其中TK為胸苷激酶基因，其可^皮加入至前述構(gòu)建體的IL-1RN5'或IL-1RN3'序列，并且可在合適的培養(yǎng)基中針對(duì)其進(jìn)一步進(jìn)行選擇(即，為負(fù)選擇標(biāo)志物)。這種雙標(biāo)志物構(gòu)建體使得能從非同源重組事件選出同源重組事件，其中同源重組事件除去鄰接的TK標(biāo)志物，而非同源重組事件通常保留該TK序列?；騽h除和/或置換可從外顯子、內(nèi)含子、尤其是內(nèi)含子接合處和/或諸如啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)區(qū)進(jìn)行。"連鎖不平衡，，指兩個(gè)等位基因以大于對(duì)給定對(duì)照群體中每個(gè)等位基因發(fā)生的分開頻率所期望的頻率的共遺傳。獨(dú)立遺傳的兩個(gè)等位基因發(fā)生的期望頻率是第一個(gè)等位基因的頻率乘以第二個(gè)等位基因的頻率。以期望頻率共發(fā)生(co-occur)的等位基因稱為"連鎖不平衡"。連鎖不平衡的原因經(jīng)常是不清楚的。它可以是由于對(duì)特定等位基因組合的選擇或遺傳異種群體的最近混合而引起。另外，在與疾病基因非常緊密連鎖的標(biāo)志物的情形中，如果疾病突變?cè)诮诎l(fā)生以致沒有經(jīng)過足夠的時(shí)間以通過特定染色體區(qū)域的重組事件來達(dá)到平衡，則預(yù)期等位基因(或一組連鎖等位基因)與疾病基因關(guān)聯(lián)。當(dāng)提及由多于一個(gè)等位基因組成的等位基因模式時(shí)，如果包含第一個(gè)等位基因模式的所有等位基因與第二個(gè)等位基因模式的至少一個(gè)等位基因連鎖不平衡，則第一個(gè)等位基因模式與第二個(gè)等位基因模式連鎖不平衡。連鎖不平衡的實(shí)例是在IL-1RN(+2018)和IL-1RN(VNTR)多態(tài)位點(diǎn)的等位基因之間發(fā)生的連鎖不平衡。IL-1RN(+2018)處的兩個(gè)等位基因與IL-1RN(VNTR)的兩個(gè)最頻繁的等位基因(等位基因1和等位基因2)是100%連鎖不平衡。術(shù)語"標(biāo)志物"指基因組中的已知在個(gè)體間不同的序列。例如，IL-1RN基因具有由可變數(shù)量的串聯(lián)重復(fù)(VNTR)構(gòu)成的標(biāo)志物。"調(diào)節(jié)"指調(diào)控生物活性的物質(zhì)的能力。當(dāng)應(yīng)用至IL-1生物活性時(shí)，激動(dòng)劑或拮抗劑例如可通過激動(dòng)或拮抗IL-1合成、受體相互作用或IL-1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制而調(diào)節(jié)生物活性。"突變的基因"或"突變"或"功能性突變"指基因的等位基因因的個(gè)體的表型。由突變導(dǎo)致的改變的表型可通過某些試劑矯正或補(bǔ)償。如果對(duì)于該突變個(gè)體必須是純合的以具有改變的表型，則突變稱為隱性的。如果一個(gè)拷貝的突變基因足以改變個(gè)體的表型，則突變稱為顯性的。如果個(gè)體具有一個(gè)拷貝的突變基因并且具有介于純合和雜合個(gè)體之間的表型(對(duì)于該基因)，則該突變稱為共顯性的。本發(fā)明的"非人動(dòng)物"包括哺乳動(dòng)物如嚙齒類、非人靈長(zhǎng)類、綿羊、狗、牛、山羊等，兩棲類如非洲爪蟾屬成員，以及轉(zhuǎn)基因鳥類(例如雞、鳥等)。術(shù)語"嵌合動(dòng)物"在本文中用來指其中發(fā)現(xiàn)重組基因、或者其中重組基因在動(dòng)物的一些但不是全部細(xì)胞中表達(dá)的動(dòng)物。術(shù)語"組織特異性嵌合動(dòng)物"表示重組IL-1基因之一在一些組織但不在其它組織中存在和/或表達(dá)或被破壞。術(shù)語"非人類哺乳動(dòng)物，，是指哺乳動(dòng)物綱中除了人以外的任何成員。用在本文時(shí)，術(shù)語"核酸"指多核香酸或寡核苷酸如脫氧核糖核酸(DNA)，并且適當(dāng)時(shí)，指核糖核酸(RNA)。該術(shù)語應(yīng)當(dāng)也^皮理解為包括，作為等^f介物的由核苷酸類似物制成的RNA或DNA類似物(例如肽核酸)，以及如果適用于描述的實(shí)施方案時(shí)，還包括單鏈(有義或反義)和雙鏈多核苦酸。"閉塞病癥，，指心血管病癥，其以動(dòng)脈壁的進(jìn)行性變厚為特征，與動(dòng)脈內(nèi)存在的動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)膜病變有關(guān)。閉塞病癥導(dǎo)致動(dòng)脈的進(jìn)行性堵塞。由于足夠的進(jìn)展，閉塞病癥可減少動(dòng)脈中的流動(dòng)，直至在該動(dòng)脈灌注的組織中產(chǎn)生臨床體征和癥狀。這些臨床事件涉及被灌注組織的局部缺血。嚴(yán)重時(shí)，局部缺血伴有組織死亡，稱為梗塞或壞疽。閉塞病癥與IL-1位點(diǎn)處的等位基因模式2s有關(guān)。"閉塞病癥治療劑"指防止或推遲個(gè)體中構(gòu)成閉塞病癥的異常的出現(xiàn)或降低其程度的任何試劑或治療方案(包括藥物、營(yíng)養(yǎng)制品和外科手段)。閉塞病癥治療劑的實(shí)例包括抗氧化劑試劑、降低血清脂質(zhì)的試劑、阻斷氧化的脂質(zhì)的作用的試劑和影響脂代謝或者以其它方式具有脂活性作用的其它試劑。"外周血管疾病"("PVD")為外周(即非冠狀)動(dòng)脈堵塞引起的心血管疾病。堵塞可通過諸如斑塊破裂或栓塞形成的機(jī)制突然發(fā)生，如在易碎斑塊疾病中發(fā)生的。堵塞可進(jìn)行性發(fā)生，通過肌內(nèi)膜增生和斑塊形成使動(dòng)脈變窄，如在閉塞疾病中發(fā)生的。堵塞可為完全的或部分的。外周動(dòng)脈的堵塞引起的這些臨床體征和癥狀為外周血管疾病的表現(xiàn)。外周血管疾病的表現(xiàn)尤其包括跛行、局部貧血、腸絞痛、基于血管的腎機(jī)能不全、短暫缺血發(fā)作、動(dòng)脈瘤、外周栓塞和中風(fēng)等。缺血性腦血管疾病為一類外周血管疾病。術(shù)語"多態(tài)性，，指基因或其部分(例如等位基因變體)的一種以上形式的共存。存在至少兩種不同形式，即存在兩種不同核苷酸序列，的基因的一部分被稱為"基因的多態(tài)區(qū)"?；蚨鄳B(tài)區(qū)的特異遺傳序列是等位基因。多態(tài)區(qū)域可以是單核苷酸，其在不同等位基因中不同。多態(tài)區(qū)域也可以是幾個(gè)核苷酸長(zhǎng)。術(shù)語"疾病傾向"，以及疾病的"素因"或"易感性"或任何相似的短語，含義是某些等位基因因此被發(fā)現(xiàn)與個(gè)體出現(xiàn)特定疾病(本文中，心血管病)的發(fā)生有關(guān)或預(yù)示該發(fā)生。因此與健康個(gè)體相比，等位基因在患病個(gè)體中經(jīng)常過表達(dá)。因此，這些等位基因可以用來預(yù)測(cè)疾病，甚至在癥狀發(fā)生前或疾病發(fā)生前的個(gè)體中預(yù)測(cè)疾病。這些等位基因凈皮理解為涉及疾病下的病癥。前正常的血管，其在血管分流后變得部分閉塞。再狹窄指在針對(duì)動(dòng)脈的治療介入后發(fā)生的任何管腔變窄。導(dǎo)致再狹窄的損傷因此可包括對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化病變的創(chuàng)傷(如在血管成形術(shù)中看到的)、病變的切除(如在動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)中看到的)、外部創(chuàng)傷(例如，橫形鉗閉損傷)、或手術(shù)吻合。再狹窄可作為任何時(shí)間的血管重建的結(jié)果出現(xiàn)，無論是在冠狀脈管系統(tǒng)還是在外周(ColburnandMoore(1998)MyointimalHyperplasiapp.690-709inVascularSurgery:AComprehensiveReview(Philadelphia:Saunders,1998))。例如，研究已報(bào)告在冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)后有30-50%比例的有癥狀再狹窄(參見BerkandHarris(1995)Adv.Intern.Med.40:455-501)。作為另一實(shí)例，在頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)后，所研究患者的20%具有大于50。/。的管腔變窄(Clagettetal.(1986)J.Vase.Surg.3:10-23)。再狹窄的另一實(shí)例在腹股溝下血管分流術(shù)中看到，其中40-60。/。的修復(fù)移植物和20-40。/。的靜脈移植物在三年時(shí)閉塞(DalmanandTaylor(1990)Ann.Vase.Surg.3:109-312,Szilagyietal.(1973)Ann.Surg.178:232-246)。不同程度的癥狀伴隨不同解剖學(xué)位置的閉塞前病變，這是由于一些因子的組合，這些因子包括涉及的血管的不同管徑、殘留病的程度和局部血流動(dòng)力學(xué)。支架內(nèi)狹窄是再狹窄的一種類型。"再狹窄病癥治療劑"指防止或推遲患者中構(gòu)成再狹窄病癥的異常的出現(xiàn)或降低其程度的任何試劑或治療方案(包括藥物、營(yíng)養(yǎng)制品和外科手段)。再狹窄被認(rèn)為包括三個(gè)階段。第一階段的特征是涉及募集白細(xì)胞至損傷位點(diǎn)的炎性反應(yīng)和在第一個(gè)48小時(shí)期間血栓的形成。隨著表達(dá)粘附分子ICAM-1、E-選擇蛋白、P-選擇蛋白和VCAM-的表達(dá)，內(nèi)皮被活化。同時(shí)，巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞通過上調(diào)整合素而遷移至損傷位點(diǎn)。第二階段的特征是血管壁中層中平滑肌細(xì)胞的增殖以及這些細(xì)胞遷移至內(nèi)膜，移居在這里。從血小板、白細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞釋放調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子。最后階段包括來自平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)的分泌階段。再狹窄病癥治療劑可以在調(diào)節(jié)再狹窄過程中影響到任意這些過程。再狹窄病癥治療劑可以包括那些影響NO合成過程的試劑，例如曲格列酮和曲尼司特。再狹窄病癥療法包括影響再狹窄或支架內(nèi)再狹窄進(jìn)展的物理介入，例如放射治療。再狹窄病癥療法包括支架修飾技術(shù)，例如給支架接種遺傳修飾的內(nèi)皮細(xì)胞、以肝素或相關(guān)試劑包被支架、提供負(fù)載藥物的聚合物支架、構(gòu)建釋放血小板糖蛋白受體抗體的聚合物包被的支架、或其它的支架修飾。再狹窄病癥療法包括遺傳工程技術(shù)，例如，涉及治療基因轉(zhuǎn)移的技術(shù)或和涉及在水凝膠包被醫(yī)療裝置中并入質(zhì)粒DNA的技術(shù)。再狹窄病癥療法還包括手術(shù)操作或旨在最小化再狹窄發(fā)病率或避免再狹窄的手術(shù)治療方案的一部分。再狹窄病癥被認(rèn)為是在所有的經(jīng)血管內(nèi)操作的天然動(dòng)脈中和在用作血管移植物的自身靜脈中發(fā)生。例如，近端或遠(yuǎn)端吻合或靜脈移植物自身的內(nèi)膜增生一直是腹股溝下血管重建最終失敗的主導(dǎo)原因。在修復(fù)移植物重建中，這種問題及其少見。對(duì)閉塞病癥傾向性的診斷可能指導(dǎo)外科醫(yī)生選擇用于血管重建的移植材料類型，或者可能影響到對(duì)用作該過程的附屬物的藥理學(xué)試劑的選擇。"風(fēng)險(xiǎn)因子"為被鑒定為與增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的因子。心血管病癥或心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因子為任何被鑒定為與出現(xiàn)這些狀況或與這些狀況惡化增加的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的因子。風(fēng)險(xiǎn)因子還可與患有心血管病癥的患者中不利臨床事件或不利臨床結(jié)果增加的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)因子包括抽煙、不利的脂質(zhì)狀況、升高的脂質(zhì)或膽固醇、糖尿病、高血壓、易凝狀態(tài)、升高的高半胱氨酸水平以及缺乏鍛煉。攜帶特定的多態(tài)性等位基因?yàn)樘囟ㄐ难懿“Y的風(fēng)險(xiǎn)因子，并且與特定病癥增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。用在本文時(shí)，術(shù)語"小分子"指分子量小于5kD并最優(yōu)選小于4kD的化合物。小分子可為核酸、肽、肽模擬物、碳水化合物、脂質(zhì)或其它有機(jī)或無機(jī)分子。用在本文時(shí)，術(shù)語"特異雜交"或"特異檢測(cè)"指核酸分子與樣品核酸的至少約6個(gè)連續(xù)核苷酸雜交的能力。如本文所理解的，"狹窄"指動(dòng)脈變窄，如在閉塞病癥或在再狹窄中看到的。狹窄可伴隨有反映穿過變窄的動(dòng)脈節(jié)段的血流減小的那些癥狀，這種情況下導(dǎo)致狹窄的病癥稱為疾病(即，閉塞疾病或再狹窄疾病)。狹窄可在血管中無癥狀地存在，僅通過諸如血管造影術(shù)的診斷介入或血管實(shí)驗(yàn)室研究才檢測(cè)到。"轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列"為遍及本說明書使用的總稱，指DNA序列，如起始信號(hào)、增強(qiáng)子和啟動(dòng)子，它們誘導(dǎo)或控制與它們可操作地連接的蛋白編碼序列的轉(zhuǎn)錄。用在本文時(shí)，術(shù)語"轉(zhuǎn)基因"指被引入細(xì)胞的核酸序列(編碼例如IL-1多肽之一或其反義轉(zhuǎn)錄本)。轉(zhuǎn)基因可對(duì)其被引入其中的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或細(xì)胞來說是部分或完全異源的，即外來的，或者與其被引入其中的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或細(xì)胞的內(nèi)源基因同源，但是其被設(shè)計(jì)為被插入或被插入進(jìn)動(dòng)物的基因組，使得改變其所插入細(xì)胞的基因組(例如，其被插入在不同于天然基因所在的位置或其插入導(dǎo)致基因敲除)。轉(zhuǎn)基因也可以附加體的形式存在于細(xì)胞中。轉(zhuǎn)基因可包括一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列和任何其它核酸，例如內(nèi)含子，其可能是所選核酸的最佳表達(dá)所必需的。"轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，，是指任何動(dòng)物，優(yōu)選非人哺乳動(dòng)物、鳥或兩棲動(dòng)物，其中一個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞包含通過人干預(yù)的方式如本領(lǐng)域/>知的轉(zhuǎn)基因技術(shù)引入的異源核酸。通過經(jīng)計(jì)劃的遺傳操作，如通過顯微注射或通過用重組病毒感染，直4妄或間接導(dǎo)入細(xì)胞前體而將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。術(shù)語遺傳操作不包括傳統(tǒng)的雜交育種，或體外受精，而涉及重組DNA分子的引入。該分子可以整合到基因組中，或可以是染色體外復(fù)制的DNA。在本文所述的典型轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中，轉(zhuǎn)基因?qū)е录?xì)胞表達(dá)重組形式的IL-1多肽之一，例如激動(dòng)劑或拮抗物形式。然而，還考慮其中重組基因是沉默的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，例如以下描述的FLP或CRE重組酶依賴性構(gòu)建體。此外，"轉(zhuǎn)基因動(dòng)物"還包括其中一個(gè)或多個(gè)基因的基因破壞是由人干預(yù)導(dǎo)致的那些重組動(dòng)物，所述人干預(yù)包括重組和反義技術(shù)。該術(shù)語意味著包括所有后代。因此，包括起始動(dòng)物及所有的Fl、F2、F3等其后代。用在本文時(shí)，術(shù)語"治療"旨在包括治愈以及改善疾病的至少一種癥狀或與病癥有關(guān)的至少一種異常。通過給予心血管病癥治療劑可進(jìn)行對(duì)心血管病癥的治療。還可通過改變與心血管病癥有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因子而進(jìn)行對(duì)的心血管病癥的治療。"治療計(jì)劃"指進(jìn)行的改變風(fēng)險(xiǎn)因子對(duì)患者的影響的至少一種介入。用于心血管病癥或疾病的治療計(jì)劃可處理那些與心血管病癥或疾病相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因子。治療計(jì)劃可包括致力于改變患者行為的介入，例如戒煙。治療計(jì)劃可包括向患者給予治療劑的介入。作為實(shí)例，可通過適當(dāng)?shù)乃幬镏委煻档湍懝檀妓?，可通過胰島素控制糖尿病?？赏ㄟ^斷癮藥物治療尼古丁成癮。治療計(jì)劃可包括診斷介入。例如，高血壓風(fēng)險(xiǎn)因子的存在可導(dǎo)致診斷介入，由此確定高血壓的病因?qū)W。在鑒定了高血壓的原因后，可以給予進(jìn)一步的治療。術(shù)語"載體"指核酸分子，其能夠輸送已與其連接的另一核酸。一類優(yōu)選載體是附加體，即能夠在染色體外復(fù)制的核酸。優(yōu)選的載體是能夠自主復(fù)制和/或表達(dá)與其連接的核酸的那些。能夠指導(dǎo)與其可操作連接的基因的表達(dá)的載體在此處被稱為"表達(dá)載體"。通常，用于重組DNA技術(shù)的表達(dá)載體經(jīng)常是"質(zhì)粒"形式，其通常是指環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)，為載體形式時(shí)它們不與染色體結(jié)合。在本說明書中，"質(zhì)粒"和"載體"可以互換使用，因?yàn)橘|(zhì)粒是最常用的栽體形式。然而，本發(fā)明意圖包括這種其它形式的表達(dá)載體，其起相同的作用并且之后為本領(lǐng)域所知。術(shù)語"野生型等位基因"是指基因的等位基因，當(dāng)以兩個(gè)拷貝存在個(gè)體中時(shí)其導(dǎo)致野生型表型。因?yàn)榛蛑械哪承┖塑账嶙兓赡懿挥绊懢哂泻塑账嶙兓木哂袃蓚€(gè)拷貝基因的個(gè)體的表型，所以可以存在特定基因的多個(gè)不同野生型等位基因。4.2概述本發(fā)明的試劑盒和方法至少部分地依賴于這樣的新發(fā)現(xiàn)IL-1基因簇中四個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的等位基因模式與心血管病癥相關(guān)。這些模式在本文中稱為模式1、2和3。模式1包括這樣的等位基因模式其包括IL-lA(+4845)或IL-1B(+3954)的等位基因2和IL-1B(-511)或IL-1RN(+2018)的等位基因1,或者與前述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種等位基因模式使得能診斷易碎斑塊病癥。才莫式2包括這樣的等位基因才莫式其包括IL-1B(-511)或IL-1RN(+2018)的等位基因2和IL畫lA(+4845)或IL-1B(+3954)的等位基因1,或者與前述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種等位基因模式使得能診斷易碎斑塊病癥。模式3包括這樣的等位基因模式其包括IL-1A(+4845)的等位基因1或IL-1B(+3954)的等位基因1以及IL-1B(-511)的等位基因1或IL-1RN(+2018)的等位基因1，或者與前述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種等位基因模式使得能診斷再狹窄病癥。一方面，本發(fā)明提供了確定個(gè)體是否患有心血管病癥的新方法和試劑盒。一方面，本發(fā)明7>開了確定個(gè)體是否患有易碎斑塊病癥的方法和試劑盒。一方面，本發(fā)明公開了確定個(gè)體是由患有閉塞病癥的方法和試劑盒。一方面，本發(fā)明公開了確定個(gè)體是由患有再狹窄病癥的方法和試劑盒。用于IL-la、IL-1/3和IL-1RN的基因位于染色體2上的基因簇中，如圖l所示。某些IL-1位點(diǎn)處的基因被認(rèn)為是連鎖不平衡，如圖2所示。此外，如圖3所示，單倍型模式可被鑒定，并且它們?cè)谌后w中的頻率可^皮確認(rèn)?？梢酝ㄟ^顯示在表l中的IL-1基因簇中的四個(gè)多態(tài)位點(diǎn)定義這三個(gè)單倍型模式，模式l、2和3。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>單倍型模式1與易碎斑塊病癥相關(guān)。單倍型才莫式2與閉塞病癥相關(guān)。單倍型模式3與再狹窄病癥相關(guān)。如以上所討論的，因?yàn)檫@些等位基因與其它等位基因?yàn)檫B鎖不平衡，對(duì)這些其它連鎖等位基因的檢測(cè)也可表明該個(gè)體患有或易于出現(xiàn)心血管病癥。易于石皮裂的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊(易碎斑塊，如在易碎斑塊病癥中看到的)具有某些結(jié)構(gòu)、細(xì)胞和分子特征。壓在易碎斑塊上的纖維帽的破裂是冠狀動(dòng)脈血栓形成的最普通病因。通常，易碎斑塊具有大的脂質(zhì)核心和通常被炎癥細(xì)胞滲入的薄纖維帽。形成核心的脂質(zhì)的性質(zhì)也是重要的；例如，膽固醇酯形式的脂質(zhì)軟化斑塊而晶體膽固醇可能具有相反作用。此外，發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞滲入為斑塊易碎的標(biāo)志。諸如氧化的脂蛋白、病原體或自身抗原如熱休克蛋白的幾種因子可能在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中激起慢性炎癥反應(yīng)?；罨木奘杉?xì)胞和T淋巴細(xì)胞向斑塊中的流入、以及隨后細(xì)胞因子和基質(zhì)降解蛋白的流入導(dǎo)致斑塊的結(jié)締組織框架弱化?；|(zhì)金屬蛋白酶和某些細(xì)胞因子為斑塊易碎致病的重要因素。在診斷出易碎斑塊病癥后，可設(shè)計(jì)治療劑來處理如上所述的易碎斑塊的特征。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明公開了顯著的冠狀動(dòng)脈狹窄、增加的頸動(dòng)脈壁內(nèi)膜-中層厚度與IL-1基因模式2之間的相關(guān)性。可測(cè)量模式2的存在來確定出現(xiàn)CAD的風(fēng)險(xiǎn)因子。這種模式以及其病理生理學(xué)關(guān)聯(lián)顯示在圖4中。進(jìn)^f亍臨床試-驗(yàn)來確定遺傳標(biāo)志物和有癥狀的冠狀動(dòng)脈狹窄的存在之間的相關(guān)性，該臨床試驗(yàn)的發(fā)現(xiàn)概述在圖5中。該臨床試驗(yàn)的結(jié)果顯示在圖6中，其中對(duì)IL-1RN位點(diǎn)處等位基因2純合的患者約75%被確定具有顯著的冠狀動(dòng)脈狹窄。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明公開了再狹窄和IL-1位點(diǎn)處模式3基因型的相關(guān)性。如圖7所示，研究顯示，模式3基因型與約3-4倍的再狹窄風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，而對(duì)于模式2基因型該風(fēng)險(xiǎn)為0.5，對(duì)于模式l基因型為1.0。描述來自相同研究的數(shù)據(jù)的圖8顯示，對(duì)ILlRN(+2018)處等位基因1純合的個(gè)體的約40%具有顯著的再狹窄，25%已經(jīng)需要耙血管的血管成形術(shù)。應(yīng)理解在某些風(fēng)險(xiǎn)因子對(duì)患有上述心血管病癥之一的患者的影響和出現(xiàn)相關(guān)疾病之間可能具有關(guān)聯(lián)性，以及風(fēng)險(xiǎn)因子和相關(guān)疾病的進(jìn)展之間可能具有關(guān)聯(lián)性。對(duì)潛在的單倍型模式的診斷可在給出建議或者在設(shè)計(jì)降低該風(fēng)險(xiǎn)因子對(duì)特定病癥或疾病的影響方面指導(dǎo)臨床醫(yī)師。例如，患者中的IL-1基因型模式可與總膽固醇水平對(duì)心血管病癥和疾病的影響有關(guān)。在某種IL-1基因型模式存在下某個(gè)血清膽固醇水平的存在與統(tǒng)計(jì)學(xué)上可確定的冠狀閉塞疾病和易碎斑塊疾病的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。這些相關(guān)性概要地顯示在圖9中。圖IO總結(jié)了一些支持該相關(guān)性的數(shù)據(jù)。這些數(shù)據(jù)表明，即使在低血清膽固醇存在下，模式1的存在也是易碎斑塊類型事件風(fēng)險(xiǎn)的強(qiáng)烈預(yù)兆。易碎斑塊類型事件也可在具有模式2的患者中觀察到，盡管與血清膽固醇水平有高相關(guān)性。11-1基因型模式2的一般關(guān)聯(lián)概要地總結(jié)在圖11中。采用本發(fā)明的方法和試劑盒，可以將11-1基因型模式與個(gè)體中的Lp(a)水平聯(lián)系以確定閉塞CAD的優(yōu)勢(shì)比。已知膽固醇在血流中是以脂蛋白顆粒的形式輸送。這些聚集體的蛋白組分具有特異的細(xì)胞靶向能力。每種脂蛋白顆粒通過密度分類，含有l(wèi))作為核心的主要種類的脂質(zhì)和2)作為顆粒外殼的特異載脂蛋白。例如，LDL具有膽固醇核心以及載脂蛋白B-100外殼。脂蛋白(a)[Lp(a)]為含有LDL和模擬纖溶酶原的蛋白鏈的脂蛋白。Lp(a)表現(xiàn)為具有致動(dòng)脈粥樣硬化和促血栓形成作用，其干擾纖溶酶原和tPA結(jié)合纖維蛋白并刺激纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)合成。研究已顯示了Lp(a)和冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)之間的關(guān)系。相對(duì)于Lp(a)濃度對(duì)11-2基因型模式的確定顯示了有癥狀的冠狀動(dòng)脈狹窄和模式2患者中Lp(a)水平之間的關(guān)系，圖12顯示了這種關(guān)系。那些IL-1B(-511)等位基因2純合的患者對(duì)有癥狀的狹窄有大大增加了的風(fēng)險(xiǎn)，盡管有低的Lp(a)水平。圖13顯示了升高的LDL和冠狀動(dòng)脈閉塞風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系，表明了模式2和升高的血清脂質(zhì)水平之間的相互關(guān)系。本發(fā)明的方法和試劑盒可以被用于將C反應(yīng)性蛋白(CRP)與IL-1基因型模式聯(lián)系起來。這種模式1個(gè)體(對(duì)IL-lB(+3954)處的等位基因2純合)超過50°/4皮發(fā)現(xiàn)具有高于0.20的CRP,而此時(shí)對(duì)IL-lB(+3954)處的等位基因1純合的^t式2個(gè)體CRP高于0.20僅有約28%。這些數(shù)據(jù)顯示在圖14中4.3預(yù)測(cè)醫(yī)學(xué)4.3.1.與心血管病癥有關(guān)的多態(tài)性本發(fā)明至少部分地基于與個(gè)體中出現(xiàn)心血管病癥相關(guān)的(統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的程度)等位基因的鑒定。因此，個(gè)體中的這些等位基因的單獨(dú)檢測(cè)，或者與另一手段聯(lián)合，表明該個(gè)體患有或易于出現(xiàn)心血管病癥。例如，如以下實(shí)施例中所顯示的，與易于出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈病癥或其它血管閉塞引起的血管病癥有關(guān)的IL-1多態(tài)等位基因包括IL-1B(-511)的等位基因2、IL-1RN(VNTR)的等位基因2、IL-IRN(+2018)的等位基因2、IL-1A(+4845)的等位基因1或IL-1B(+3954)的等位基因1或者與前述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。本發(fā)明還公開了與由于易碎斑塊破裂引起的心血管疾病的傾向或更大風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的IL-1多態(tài)等位基因。這些等位基因包括IL-lA(+4845)的等位基因2、IL-1B(+3954)的等位基因2、IL-1B(-511)的等位基因1和IL-1RN(+2018)的等位基因1或者與前述等位基因之一連鎖不平衡的等位基因。這種模式還與增加的出現(xiàn)嚴(yán)重成人牙周炎的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。例如，IL-1B(-511)的等位基因2和IL-1RN(VNTR)的等位基因2彼此連鎖不平衡并且與多個(gè)其它的定義IL-1(44112332)單倍型的IL-1多態(tài)性連鎖不平衡(Cox,etal.(1998)Am.J.Hum,Genet.62:1180-88)。具體地，該44112332單倍型包括以下的基因型IL-1A的222/223標(biāo)志物的等位基因4IL-1A的gz5/gz6標(biāo)志物的等位基因4IL-lA的-889標(biāo)志物的等位基因1IL-1B的+3954標(biāo)志物的等位基因1IL-1B的-511標(biāo)志物的等位基因2gaat.p33330標(biāo)志物的等位基因3Y31標(biāo)志物的等位基因3IL-1RN的VNTR標(biāo)志物的等位基因2因此，在本發(fā)明的備選實(shí)施方案中，確定了在IL-1A的222/223標(biāo)志物、IL-1A的gz5/gz6標(biāo)志物、IL-1A的-889標(biāo)志物、IL-1B的+3954標(biāo)志物、IL-1B/IL-1RN基因間區(qū)域的gaat.p33330標(biāo)志物或IL-1B/IL-1RN基因間區(qū)域的Y31標(biāo)志物處的基因分型分析，IL-1A的222/223標(biāo)志物的等位基因4、IL-1A的gz5/gz6標(biāo)志物的等位基因4、IL-1A的-889標(biāo)志物的等位基因1、IL-1B的+3954標(biāo)志物的等位基因1、gaat.p33330標(biāo)志物的等位基因3、或Y31標(biāo)志物的等位基因3的存在表明了增加的出現(xiàn)心血管病癥的增加的可能性，尤其是通過動(dòng)脈的閉塞引起的特定病癥。在某些實(shí)施方案中，對(duì)閉塞疾病的傾向的診斷可導(dǎo)致對(duì)與閉塞臨床事件增加的發(fā)生率有關(guān)的生活方式因子的改變，或者可導(dǎo)致引入治療方式來減少閉塞癥狀或體征的風(fēng)險(xiǎn)。在其它實(shí)施方案中，診斷對(duì)閉塞疾病的傾向可提醒臨床醫(yī)師說明其它難以診斷的疾病，例如腸絞痛、腎血管性高血壓和其它的動(dòng)脈狹窄可以造成這些癥狀和體征的狀況。此外，IL-1RN(+2018)多態(tài)性的等位基因2(Clayeta1.(1996)HumGenet97:723-26)，也稱為外顯子2(8006)(GenBank:X64532，位于8006)，已知與IL-1RN(VNTR)多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因2連鎖不平衡，其又是44112332人單倍型的一部分。因此，IL-1RN(+2018)位點(diǎn)的等位基因2(即，+2018處為C)為與44112332單倍型有關(guān)的等位基因變體，并因此提供了另一靶標(biāo)，用于預(yù)測(cè)性基因分型分析來確定個(gè)體發(fā)生血管病癥的可能性。類似地，IL-1RN可選擇的外顯子中三個(gè)其它的多態(tài)性(外顯子lic,其產(chǎn)生基因產(chǎn)物的細(xì)胞內(nèi)形式)也與IL-1RN(VNTR)的等位基因2連鎖不平衡(Clayetal.(1996)HumGenet97:723-26)。這些包括IL-1RN外顯子lie(1812)多態(tài)性(GenBank:X77090,位于1812);IL-1RN外顯子lie(1868)多態(tài)性(GenBank:X77090，位于1868);以及IL-1RN外顯子lie(1887)多態(tài)性(GenBank:X77090,位于1887)。此外，啟動(dòng)子中用于基因的可選擇的剪接的細(xì)胞內(nèi)形式的另一多態(tài)性Pic(1731)多態(tài)性(GenBank:X77090,位于1731)也與IL-1RN(VNTR)多態(tài)位點(diǎn)的等位基因2連鎖不平衡(Clayetal.(1996)HumGenet97:723-26)。針對(duì)每個(gè)這些IL-IRN多態(tài)性位點(diǎn)的相應(yīng)序列變化顯示如下。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>對(duì)于這些多態(tài)性位點(diǎn)的每一個(gè)，等位基因2序列變體被確定為與IL-IRN(VNTR)位點(diǎn)的等位基因2連鎖不平衡(Clayetal.(1996)HumGenet97:723-26)。類似地，與增加的出現(xiàn)易碎斑塊疾病的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的33221461包括以下基因型IL-1A的222/223標(biāo)志物的等位基因3IL-1A的gz5/gz6標(biāo)志物的等位基因3IL-lA的-889標(biāo)志物的等位基因2IL-1B的+3954標(biāo)志物的等位基因2IL-1B的-511標(biāo)志物的等位基因1gaat.p33330標(biāo)志物的等位基因4Y31標(biāo)志物的等位基因6_IL-1RN的+2018的等位基因1IL-1A的+4845的等位基因2IL-1RN的VNTR標(biāo)志物的等位基因1在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，在IL-1A的-889標(biāo)志物、IL-1B/IL-1RN基因間區(qū)域的gaat.p33330標(biāo)志物、IL-1B/IL-1RN基因間區(qū)域的Y31標(biāo)志物處的基因分型分析凈皮確定，并且IL-lA的-899標(biāo)志物的等位基因1、gaat.p3330標(biāo)志物的等位基因4、或Y31標(biāo)志物的等位基因6的存在預(yù)示了心血管病癥，尤其是增加的易碎斑塊病癥風(fēng)險(xiǎn)。已知這些病癥通過血栓形成和栓塞形成導(dǎo)致臨床事件。通常該臨床事件沒有被在先的局部缺血體征預(yù)示。用在本文時(shí)，慢性局部缺血與閉塞心血管疾病而不是與易碎斑塊疾病相關(guān)。早期;f全測(cè)到不幸臨床事件傾向會(huì)是對(duì)目前的診斷手段的重要補(bǔ)充。腦血管循環(huán)中的易碎斑塊臨床事件可通過堵塞腦血管并且引起急性局部缺血而導(dǎo)致中風(fēng)或CVA,其可導(dǎo)致不可逆的腦梗塞。心肌循環(huán)中的易碎斑塊臨床事件可通過堵塞冠狀血管和引起急性局部缺血而導(dǎo)致心肌梗塞，其可導(dǎo)致不可逆的心肌損傷。非腦外周血管中的易碎斑塊臨床事件可導(dǎo)致引起壞疽和組織缺損的局部缺血突然發(fā)作。由于這些易碎斑塊臨床事件可以發(fā)生而沒有之前的預(yù)告，所以鑒定與增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基因型可導(dǎo)致對(duì)這些風(fēng)險(xiǎn)中個(gè)體的增加的臨床檢測(cè)，具有更早和更廣泛的診斷或治療性介入。在另一實(shí)施方案中，還預(yù)示增加的出現(xiàn)嚴(yán)重成人牙周炎的風(fēng)險(xiǎn)。在另一實(shí)施方案中，嚴(yán)重成人牙周炎的存在預(yù)示著增加的易碎斑塊疾病風(fēng)險(xiǎn)。除了上述等位基因模式之外，如本文所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地鑒別其它等位基因(包括多態(tài)性和突變)，該等位基因與心血管病癥相關(guān)等位基因連鎖不平衡。例如，可收集來自第一組無心血管病癥的個(gè)體的核酸樣品，以及來自第二組的患有心血管病癥的個(gè)體的DNA。然后，比爭(zhēng)支核酸樣品以鑒別第二組中與第一組相比過表達(dá)的那些等位基因，其中這些等位基因可能與心血管病癥相關(guān)?；蛘?，例如可通過對(duì)大群體基因分型并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析來確定哪些等位基因比預(yù)期的更加經(jīng)常地一起出現(xiàn)，可鑒別與心血管病癥相關(guān)等位基因連鎖不平衡的等位基因。優(yōu)選地，所選的組由遺傳上相關(guān)的個(gè)體組成。遺傳上相關(guān)的個(gè)體包括相同種族、相同民族或甚至相同家族的個(gè)體。當(dāng)對(duì)照組和測(cè)試組之間的遺傳關(guān)聯(lián)性的程度增加時(shí)，與致病等位基因更遠(yuǎn)連鎖的多態(tài)性等位基因的預(yù)測(cè)值也增加。這是由于經(jīng)過更少的進(jìn)化時(shí)間使得沿染色體在建立者群體中連鎖的多態(tài)性通過交換事件再分布。因此，可開發(fā)種族特異的、民族特異的、以及甚至家族特異的診斷性基因分型測(cè)定以允許檢測(cè)在人類進(jìn)化中更近期出現(xiàn)的疾病等位基因，例如在主要的人種族趨異后、在人群分為不同的民族后、以及甚至在特定家系的近代史內(nèi)。兩多態(tài)標(biāo)志物之間或一個(gè)多態(tài)標(biāo)志物和致病突變之間的連鎖不平衡為相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)。缺乏選擇壓力或零星的連鎖重現(xiàn)潛在突變事件，則多態(tài)性將最終通過染色體重組事件而變得不關(guān)聯(lián)，并由此會(huì)通過人類進(jìn)化過程而最終達(dá)到連鎖平衡。因此，發(fā)現(xiàn)與疾病或狀況連鎖不平衡的多態(tài)性等位基因的可能性可以隨至少兩因子而增加該多態(tài)性標(biāo)志物與致病突變之間減小的物理距離、以及可用于該連鎖對(duì)分離的減數(shù)分裂代減少的數(shù)量?？紤]后一因素表明，兩個(gè)個(gè)體的相關(guān)性越近，它們?cè)接锌赡芄蚕硪粋€(gè)母本染色體或者含有連鎖的多態(tài)性的染色體區(qū)域，而且還不大可能是通過發(fā)生在每一代的減數(shù)分裂的交換事件，使這一連鎖對(duì)成為非連鎖。作為結(jié)果，兩個(gè)個(gè)體的相互關(guān)系越近，越有可能很遠(yuǎn)間隔的多態(tài)性可以共遺傳。這樣，對(duì)于通過共同種族、民族或者家族相關(guān)的個(gè)體來說，距離更遠(yuǎn)的多態(tài)性位點(diǎn)可信賴為連鎖的致病突變遺傳的指示。存在于本發(fā)明試劑盒的一個(gè)實(shí)施方案中的寡核苷酸可以被用于擴(kuò)增所關(guān)注的區(qū)域或者指導(dǎo)等位基因特異寡核苷酸(ASO)雜交至所研究的標(biāo)志物。因此，該寡核苷酸可以鄰接所關(guān)注的標(biāo)志物(如PCR擴(kuò)增所需)或者直接重疊標(biāo)志物(如在ASO雜交中的)。用于上述檢測(cè)方法的合適引物的實(shí)例包括5'國(guó)CTCAGCAACACTCCTAT-3'(SEQIDNO.1);5'-TCCTGGTCTGCAGGTAA-3'(SEQIDNO.2);其可被用于擴(kuò)增人IL-1RN(VNTR)多態(tài)性位點(diǎn)并對(duì)其分型；5'-CTATCTGAGGAACAACCAACTAGTAGC-3'(SEQIDNO.3);5'-TAGGACATTGCACCTAGGGTTTGT-3'(SEQIDNO.4);其可被用于擴(kuò)增人IL-1RN(+2018)多態(tài)性位點(diǎn)并對(duì)其分型；5'TGGCATTGATCTGGTTCATC3'(SEQIDNo:5);5'GTTTAGGAATCTTCCCACTT3'(SEQIDNo:6);其可被用于擴(kuò)增人IL-1B(-511)多態(tài)性位點(diǎn)并對(duì)其分型；5'CTCAGGTGTCCTCGAAGAAATCAAA3'(SEQIDNO:7);5'GCTTTTTTGCTGTGAGTCCCG3'(SEQIDNO:8)其可被用于擴(kuò)增人IL-1B(+3954)多態(tài)性位點(diǎn)并對(duì)其分型；以及5'ATGGTTTTAGAAATCATCAAGCCTAGGGCA3'(SEQIDNO:9)3'AATGAAAGGAGGGGAGGATGACAGAAATGT3'(SEQIDNO:10)其可被用于擴(kuò)增人IL-1A(+4845)多態(tài)性位點(diǎn)并對(duì)其分型。可以i殳計(jì)合適的揮3十與i者如IL-1A、IL-1B或IL-1RN的IL-1位點(diǎn)的特異基因或相關(guān)基因雜交?；蛘撸@些探針可以并入相關(guān)基因組的位點(diǎn)的其它區(qū)域，包括基因間序列。實(shí)際上，人染色體2的IL-1區(qū)橫跨大約400,000堿基對(duì)，并且估計(jì)每1，000堿基對(duì)平均1個(gè)單核苷酸多態(tài)性，則包括約400SNP單獨(dú)位點(diǎn)?？捎糜诒景l(fā)明的其它多態(tài)性可從各種公開資源獲得。例如，人基因組數(shù)據(jù)庫收集了基因內(nèi)SNP，可通過序列沖企索，目前含有約2,700條目(http:〃hgbase.interactiva.de)。還可獲得人多態(tài)性凄t據(jù)庫，其由MassachusettsInstituteofTechnology(麻省理工學(xué)院)維護(hù)(MITSNP數(shù)據(jù)庫(http:〃www.genome.wi.mit.edu/SNP/human/index.htm1))。從這些資源可以發(fā)現(xiàn)SNP以及其它的人多態(tài)性。例如，對(duì)于這些數(shù)據(jù)庫任何一個(gè)中的人基因組的IL-1區(qū)的研究揭示，IL-1位點(diǎn)基因被127.4cM(厘摩)處的稱為小隨體標(biāo)志物AFM220ze3的著絲粒近端多態(tài)性標(biāo)志物(參見GenBankAce.No.Z17008)和127.9cM處的稱為小隨體錨標(biāo)志物AFM087xal的遠(yuǎn)端多態(tài)性標(biāo)志物(參見GenBankAce.No.Z16545)從兩側(cè)鄰接。這些人多態(tài)性位點(diǎn)都為CA二核苷酸重復(fù)小隨體多態(tài)性，因此，在人群中顯示出高度的雜和現(xiàn)象。例如，采用5'引物序列TGTACCTAAGCCCACCCTTTAGAGC(SEQIDNO.14)和3'引物序列TGGCCTCCAGAAACCTCCAA(SEQIDNO.15),AFM220ze3的一個(gè)等位基因產(chǎn)生211bpPCR擴(kuò)增產(chǎn)物。此外，采用5'引物序列GCTGATATTCTGGTGGGAAA(SEQIDNo.l6)和3'引物序歹'JGGCAAGAGCAAAACTCTGTC(SEQIDNO.17)，AFM087xal的一個(gè)等位基因產(chǎn)生177bpPCR擴(kuò)增產(chǎn)物。對(duì)應(yīng)于出現(xiàn)在這些人染色體2CA二核苷酸重復(fù)多態(tài)性的5'和3'的獨(dú)特序列的等價(jià)引物對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。適合的等價(jià)引物包括與指定引物的約1kb內(nèi)雜交并且進(jìn)一步地在任何地方的約17bp至約27bp長(zhǎng)度的引物。用于設(shè)計(jì)擴(kuò)增獨(dú)特的人染色體基因組序列的引物的一般原則是它們具有至少約50DC的融解溫度，其中可采用公式T瞎=[2x(A或T的#)+4x(G或C的#)]估計(jì)大概的融解溫度。多個(gè)其它的人多態(tài)性位點(diǎn)存在在這些兩CA二核苷酸重復(fù)多態(tài)性之間，并提供了另外的靶標(biāo)來確定家族或遺傳上相關(guān)個(gè)體的其它組中的心血管病癥預(yù)測(cè)性等位基因。例如，theNationalCenterforBiotechnologyInformationwebsite(國(guó)家生物4支術(shù)信息中心網(wǎng)站)(www.ncbi.nlm.nih.gov/genemap/)列出了IL-1位點(diǎn)區(qū)i或內(nèi)的多個(gè)多態(tài)性標(biāo)志物，并為設(shè)計(jì)擴(kuò)增和分析這些標(biāo)志物的合適引物提供了指導(dǎo)。因此，本發(fā)明的核苦酸片段由于其如下能力可以被使用選擇性地與人染色體2q12-13的互補(bǔ)性節(jié)段或源于該區(qū)域的cDNA形成雙鏈分子、或者能夠提供引物來擴(kuò)增該區(qū)域的DNA或cDNA。設(shè)計(jì)合適的用于此目的的探針需要考慮多種因素。例如，會(huì)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)度在10、15、或18核苦酸至約20或至約30核苦酸的片段尤其實(shí)用。對(duì)于某些實(shí)施方案來說，甚至更優(yōu)選較長(zhǎng)的序列，例如40、50、80、90、100、甚至全長(zhǎng)。至少約18至20核苷酸的寡核苷酸長(zhǎng)度被本領(lǐng)域技術(shù)人員廣泛接受，由于足以允許充分特異的雜交，由此可用作分子探針。此外，取決于預(yù)期的應(yīng)用，會(huì)希望采用不同的雜交條件來實(shí)現(xiàn)探針對(duì)靶序列的不同程度的選擇性。對(duì)于需要高選擇性的應(yīng)用，通常希望采用相對(duì)嚴(yán)緊的條件形成雜交物。例如，較低的鹽和/或高溫條件，例如在約50aC至約70口C的溫度由0.02M-0.15MNaCl所提供的。這種選擇性條件可以忍耐極少(如果有的話)的探針與模板或靶鏈之間的錯(cuò)配。與上述等位基因的檢測(cè)聯(lián)合，血管病癥的其它等位基因或其它標(biāo)志物可在個(gè)體中被檢測(cè)或監(jiān)測(cè)，例如鑒定血管壁厚度(例如，通過超聲測(cè)量的)、或者該個(gè)體是否吸煙、是否飲酒、是否過重、是否有壓力、是否具有高膽固醇或低膽固醇、是否具有升高的Lp(a)，或者是否鍛煉。4.3.2等位基因的檢測(cè)很多方法可用于檢測(cè)人多態(tài)性位點(diǎn)處的特異等位基因。檢測(cè)特異多態(tài)性等位基因的優(yōu)選方法部分地取決于多態(tài)性的分子性質(zhì)。例如，多態(tài)性位點(diǎn)的各種等位基因形式可以通過DNA的單堿基對(duì)區(qū)分。這種單核苷酸多態(tài)性(或SNP)為遺傳變異的主要貢獻(xiàn)者，占所有已知多態(tài)性的大約80%，并且它們?cè)谌祟惢蚪M中的密度據(jù)估計(jì)為平均1,000堿基對(duì)1個(gè)。SNP是最頻繁的二等位基因一僅以兩種不同形式存在(盡管高達(dá)四種不同形式的SNP,對(duì)應(yīng)于在DNA中出現(xiàn)的四種不同核苷酸堿基，在理論上是可能的)。然而，SNP在突變上比其它多態(tài)性更穩(wěn)定，使它們適合于相關(guān)性研究，其中將標(biāo)志物和未知變體之間的連鎖不平衡用于對(duì)致病突變作圖。另外，因?yàn)镾NP典型地僅具有兩種等位基因，它們可以通過簡(jiǎn)單的正/負(fù)測(cè)定而不是長(zhǎng)度測(cè)量來基因分型，使它們更易于自動(dòng)化。多種方法可供檢測(cè)個(gè)體中特定單核苷酸多態(tài)性等位基因的存在。該領(lǐng)域的進(jìn)展已經(jīng)提供準(zhǔn)確、容易和便宜的大規(guī)模SNP基因分型。最近，例如已經(jīng)描述了幾種新技術(shù)，包括動(dòng)態(tài)等位基因特異性雜交(DASH)、微量板陣列對(duì)角凝膠電泳(MADGE)、焦磷酸測(cè)序、寡核苷酸特異性連接、TaqMan系統(tǒng)以及諸如AffymetrixSNP芯片的各種DNA"芯片"技術(shù)。這些方法要求靶基因區(qū)域的擴(kuò)增，典型地通過PCR進(jìn)行。還有其它新開發(fā)的方法，其基于通過侵入裂解產(chǎn)生小信號(hào)分子，接著質(zhì)鐠分析或固定化鎖定探針和滾環(huán)擴(kuò)增，最終可能消除對(duì)PCR的需要。下文總結(jié)了本領(lǐng)域已知的用于檢測(cè)特定單核苷酸多態(tài)性的幾種方法。本發(fā)明的方法應(yīng)當(dāng)理解為包括所有可利用的方法。幾種方法已經(jīng)被開發(fā)用于促進(jìn)單核苷酸多態(tài)性的分析。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過使用專門的抗外切核酸酶的核苷酸可以檢測(cè)單堿基多態(tài)性，如例如在MundyC.R,(美國(guó)專利4，656，127)中所公開的。根據(jù)該方法，與緊接多態(tài)位點(diǎn)3'的等位基因序列互補(bǔ)的引物允許與從特定動(dòng)物或人獲得的靶分子雜交。如果在靶分子上的多態(tài)位點(diǎn)包含與存在的特定抗外切核酸酶的核苦酸衍生物互補(bǔ)的核苷酸，那么該衍生物將被摻入到雜交引物的末端。該摻入導(dǎo)致引物抗外切核酸酶，由此使得其檢測(cè)成為可能。因?yàn)闃悠返目雇馇泻怂崦傅难苌锏纳矸菔且阎?，所以發(fā)現(xiàn)引物已經(jīng)變得抗外切核酸酶則揭示存在于靶分子的多態(tài)位點(diǎn)中的核苷酸與用于反應(yīng)中的核苷酸衍生物互補(bǔ)。該方法具有優(yōu)勢(shì)，即它不要求確定大量的外來序列數(shù)據(jù)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，基于溶液的方法被用于測(cè)定多態(tài)位點(diǎn)核苷酸的同一性。Cohen，D.等人(法國(guó)專利2,650,840;PCT申請(qǐng)WO91/02087)。如在美國(guó)專利4,656,127的Mundy方法中，使用與緊接多態(tài)位點(diǎn)3'的等位基因序列互補(bǔ)的引物。采用標(biāo)記的雙脫氧核苷酸衍生物，該方法確定該位點(diǎn)的核苷酸同一性，其中所述雙脫氧核苷酸衍生物如果與多態(tài)位點(diǎn)的核苷酸互補(bǔ)將被摻入到引物的末端。Goelet,P.等人(PCT申請(qǐng)92/15712)描述一種備選方法，稱為遺傳位分析法(GeneticBitAnalysis)或GBATM。Goelet,P.等的方法使用標(biāo)記的終止子和引物的混合物，其中所述引物與多態(tài)位點(diǎn)3'的序列互補(bǔ)。核苦酸而測(cè)定并與其互補(bǔ)。與Cohen等人的方法(法國(guó)專利2,650,840;PCT申請(qǐng)WO91/02087)形成對(duì)比，Goelet,P.等的方法優(yōu)選非均相測(cè)定，其中引物或靶分子被固定于固相。近來，已經(jīng)描述幾種用于測(cè)定DNA中多態(tài)性位點(diǎn)的引物引導(dǎo)的核苷酸摻入方法(Komher,J.S.etal.,Nucl.Acids.Res.17:7779-7784(1989);Sokolov，B.R,Nucl.AcidsRes.18:3671(1990);Syvanen,A.誦C，etal.Genomics8:684-692(1990);Kuppuswamy,M.N.etal"Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)88:1143-1147(1991);Prezant,T.R.etal.,Hum.Mutat.1:159-164(1992);Ugozzoli，L.etal.,GATA9:107-112(1992);Nyren,P.etal.,Anal.Biochem.208:171-175(1993))。這些方法與GBA的區(qū)別在于它們都依賴于標(biāo)記的脫氧核苷酸的摻入以區(qū)別多態(tài)位點(diǎn)處的堿基。在這種形式中，因?yàn)樾盘?hào)與摻入的脫氧核苷酸的數(shù)量成比例，在相同核苷酸的運(yùn)行中出現(xiàn)的多態(tài)性可以產(chǎn)生與運(yùn)行長(zhǎng)度成比例的4言號(hào)(Syvanen,A,C.,etal.,Amer.J.Hum.Genet.52:46-59(1993))。對(duì)于導(dǎo)致蛋白質(zhì)翻譯的過早終止的突變，蛋白質(zhì)截短試驗(yàn)(PTT)提供有效的診斷方法(Roest，etal.，(1993)Tfi/m.Mo/2:1719-21;vanderLuijt，etal.,(1994)Ge"om/cs20:1-4)。對(duì)于PTT，RNA最初從可利用的組織中分離并被逆轉(zhuǎn)錄，并通過PCR擴(kuò)增所關(guān)注的片段。然后將逆轉(zhuǎn)錄PCR的產(chǎn)物用作嵌套PCR擴(kuò)增的模板，引物包含RNA聚合酶啟動(dòng)子和用于起始真核生物翻譯的序列。在擴(kuò)增所關(guān)注的區(qū)域以翻譯產(chǎn)物的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酸胺凝膠電泳以后，截短多肽的出現(xiàn)指示導(dǎo)致翻譯過早終止的突變的存在。在該技術(shù)的變體中，當(dāng)所關(guān)注的靶區(qū)域來源于單個(gè)外顯子時(shí)，將DNA(與RNA相反)用作PCR模板。可以利用任何細(xì)胞類型或組織以獲得用于本文所述診斷的核酸樣品。在優(yōu)選實(shí)施方案中，DNA樣品獲自體液，例如通過已知技術(shù)(例如靜脈穿刺)獲得的血液或唾液?；蛘?，可在干燥樣品(例如頭發(fā)或皮膚)上進(jìn)行核酸片全-險(xiǎn)。當(dāng)使用RNA或蛋白質(zhì)時(shí)，可以使用的細(xì)胞或組織必須表達(dá)IL-l基因。還可以直接在獲自組織活檢或切除術(shù)的患者組織的組織切片(固定和/或冷凍)上原位進(jìn)行診斷操作，因此不需要核酸純化?？梢詫⒑怂嵩噭┯米髟撛徊僮鞯奶结樅?或引物(參見，例如，Nuovo，G.J.,1992,PCRs"whybridization:protocolsandapplications(PCR原位雜交方法和應(yīng)用)，RavenPress,NY)。除了主要集中在檢測(cè)一種核酸序列的方法以外，在這類檢測(cè)方案中還可以評(píng)估圖譜。例如通過4吏用差異顯示方法、Northern分析和/或RT-PCR可以產(chǎn)生指紋圖鐠。優(yōu)選的檢測(cè)方法是使用探針的等位基因特異性雜交，所述探針重疊IL-l促炎單倍型的至少一個(gè)等位基因區(qū)域并具有突變或多態(tài)區(qū)域周圍約5、10、20、25、或30個(gè)核苷酸。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，將能夠與其它涉及心血管病癥的等位基因變體特異雜交的幾個(gè)探針附著在固相載體，例如"芯片"(其可以容納高達(dá)約250,000個(gè)寡核苷酸)。寡核苷酸可以通過包括平版印刷術(shù)在內(nèi)的多種方法與固相載體結(jié)合。例如在Croninetal.(1996)HumanMutation7:244中描述使用這些包含寡核苷酸的芯片(也稱為"DNA探針陳列")的突變檢測(cè)分析。在一個(gè)實(shí)施方案中，芯片包含基因的至少一個(gè)多態(tài)區(qū)域的所有等位基因變體。在簡(jiǎn)單的雜交實(shí)驗(yàn)中可鑒定一個(gè)或多個(gè)基因的許多等位基因變體的身份。這些技術(shù)可以還包括在分析前擴(kuò)增核酸的步驟。擴(kuò)增技術(shù)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，包括但不限于克隆、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、特異性等位基因的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ASA)、連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)、嵌套聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、自主序列復(fù)制(Guatelli，J.C.etal.，1990,Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:1874-1878)、轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增系統(tǒng)(Kwoh，D.Y.etal.，1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:1173-1177)、以及Q-Beta復(fù)制酶(Lizardi，P.M.etal.,1988，Bio/Technology6:1197)?？梢砸远喾N方式測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物，包括大小分析、限制消化接以大小分析、在反應(yīng)產(chǎn)物中檢測(cè)特異標(biāo)記的寡核苷酸引物、等位基因特異寡核香酸(ASO)雜交、等位基因特異性5'外切核酸酶檢測(cè)、測(cè)序、雜交等?；赑CR的檢測(cè)方法可以包括同時(shí)多重?cái)U(kuò)增多個(gè)標(biāo)志物。例如，本領(lǐng)域中公知選擇PCR引物以產(chǎn)生大小不重疊并且可以同時(shí)分析的PCR產(chǎn)物。備選地，可能使用帶有不同標(biāo)簽的引物來擴(kuò)增不同標(biāo)志物，因此每個(gè)可被差異檢測(cè)。當(dāng)然，基于雜交的檢測(cè)手段允許樣品中多個(gè)PCR產(chǎn)物的差異檢測(cè)。本領(lǐng)域已知其它技術(shù)允許多個(gè)標(biāo)志物的多重分析。在僅說明性的實(shí)施方案中，該方法包括以下步驟(i)從患者收集細(xì)胞樣品，(ii)從樣品細(xì)胞中分離核酸(例如，基因組，mRNA或兩者)，(iii)在多種條件下使核酸樣品與一種或多種引物接觸以便發(fā)生等位基因的雜交和擴(kuò)增，其中所述引物與IL-1促炎單倍型的至少一個(gè)等位基因的5'和3'特異性雜交，以及(iv)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。如果這些分子以極低數(shù)量存在，則這些檢測(cè)方案對(duì)于檢測(cè)核酸分子特別有用。在個(gè)體測(cè)定的優(yōu)選實(shí)施方案中，通過限制酶切割模式的改變鑒定IL-1促炎單倍型的等位基因。例如，分離樣品和對(duì)照DNA、擴(kuò)增(任選地)、用一種或多種限制內(nèi)切核酸酶消化、并通過凝膠電泳確定片段長(zhǎng)度大小。在另一實(shí)施方案中，本領(lǐng)域已知的多種測(cè)序反應(yīng)中的任何一種可被用于直接對(duì)等位基因測(cè)序。示例性的測(cè)序反應(yīng)包括那些基于由Maxim和Gilbert((1977)Proc.NatlAcadSciUSA74:560)或Sanger(Sangeretal.(1977)Proc.Nat.Acad.SciUSA74:5463)開發(fā)的技術(shù)。還考慮當(dāng)進(jìn)行個(gè)體測(cè)定時(shí)可以使用多種自動(dòng)測(cè)序方法中的任何一種(參見例如Biotechniques(1995)19:448),包括通過質(zhì)譜測(cè)序(參見，例如PCT公開WO94/16101;Cohenetal.(1996)AdvChromatogr36:127-162;以及Griffinetal.(1993)ApplBiochemBiotechnol38:147-159)。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，對(duì)于某些實(shí)施方案，僅僅需要在測(cè)序反應(yīng)中確定一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)核酸堿基的出現(xiàn)。例如，可以進(jìn)行A-跟蹤(A-track)等，如其中僅4企測(cè)一個(gè)核酸。在另一實(shí)施方案中，可^f吏用切割劑(如核酸酶、羥胺或四氧化《敞和的錯(cuò)配堿基(Myersetal.(1985)Science230:1242)。通常，"錯(cuò)配切割，，的現(xiàn)有技術(shù)通過提供含有野生型等位基因的(標(biāo)記的)RNA或DNA與樣品雜交形成的異源雙鏈起始。用切割雙鏈體的單鏈區(qū)域的試劑處理雙鏈體，這種單鏈區(qū)域例如由于對(duì)照和樣品鏈之間的堿基對(duì)錯(cuò)配而導(dǎo)致其存在。例如，可以用RNA酶處理RNA/DNA雙鏈體和用Sl核酸酶處理DNA/DNA雜交物以酶促消化錯(cuò)配區(qū)域。在其它實(shí)施方案中，可以用羥胺或四氧化鋨和p底咬處理DNA/DNA或RNA/DNA雙鏈體以便消化錯(cuò)配區(qū)域。在消化錯(cuò)配區(qū)域以后，通過在變性聚丙烯酰胺凝膠上通過大小分離得到的物質(zhì)以確定突變位點(diǎn)。參見，例如Cottonetal.(1988)Proc.NatlAcadSciUSA85:4397;和Saleebaetal.(1992)MethodsEnzymol.217:286-295。在優(yōu)選實(shí)施方案中，對(duì)照DNA或RNA可尋皮標(biāo)記以用于檢測(cè)。在另一實(shí)施方案中，錯(cuò)配切割反應(yīng)使用一種或多種識(shí)別雙鏈DNA中的錯(cuò)配堿基對(duì)的蛋白質(zhì)(所謂"DNA錯(cuò)配修復(fù)"酶)。例如大腸桿菌mutY酶在G/A錯(cuò)配處切割A(yù)，來自HeLa細(xì)胞的胸苷DNA糖基化酶在G/T錯(cuò)配處切割T(Hsuetal.(1994)Carcinogenesis15:1657-1662)。按照示例性實(shí)施方案，基于IL-1位點(diǎn)單倍型的等位基因的探針與來自斗企—驗(yàn)細(xì)胞的cDNA或其它DNA產(chǎn)物雜交。用DNA4晉配4務(wù)復(fù)酶處理雙鏈體，從電泳方案等可以檢測(cè)到切割產(chǎn)物，如果有的話。參見，例如美國(guó)專利5,459,039。在其它實(shí)施方案中，電泳遷移率的改變可以用來鑒定IL-1位點(diǎn)等位基因。例如，單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)可以被用于檢測(cè)突變型和野生型核酸之間的電泳遷移率的差異(Oritaetal.(1989)ProcNatl.AcadSciUSA86:2766,還參見Cotton(1993)MutatRes285:125-144和Hayashi(1992)GenetAnalTechAppl9:73-79)。使樣品和對(duì)照IL-1位點(diǎn)等位基因的單鏈DNA片段變性并讓其復(fù)性。單鏈核酸的二級(jí)結(jié)構(gòu)隨序列而變化，導(dǎo)致的電泳遷移率的改變使得能夠檢測(cè)甚至單堿基變化。DNA片段可以被標(biāo)記或用經(jīng)標(biāo)記的探針檢測(cè)。通過使用RNA(而不是DNA)可以增強(qiáng)測(cè)定的靈敏性，在RNA中二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)序列變化更為敏感。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，基于電泳遷移率的變化，所述方法使用異源雙鏈體分析來分離雙鏈異源雙鏈體分子(Keenetal.(1991)TrendsGenet7:5)。在另一實(shí)施方案中，使用變性梯度凝膠電泳(DGGE)測(cè)定在含有梯度變性劑的聚丙烯酰胺凝膠中等位基因的運(yùn)動(dòng)(Myersetal.(1985)Nature313:495)。當(dāng)將DGGE用作分析方法時(shí)，例如通過PCR加入約40bp高熔解的富含GC的DNA的GC夾修飾DNA，以確保它不完全變性。在另一實(shí)施方案中，使用溫度梯度替代變性劑梯度來鑒定對(duì)照和樣品DNA的遷移率差異(RosenbaumandReissner(1987BiophysChem265:12753)。其它用于檢測(cè)等位基因的技術(shù)的實(shí)例包括但不限于選擇性寡核苷酸雜交、選擇性擴(kuò)增、或選擇性引物延伸。例如，可以制備其中已知突變或核苷酸差異(例如在等位基因變體中)被放置在中央的寡核苷酸引物，然后在只有存在完全匹配時(shí)才雜交的條件下與靶DNA雜交(Saikietal.(1986)Nature324:163);Saikietal.(1989)Proc.NatlAcad.SciUSA86:6230)。當(dāng)寡核苷酸與PCR擴(kuò)增的靶DNA雜交時(shí)該等位基因特異的寡核苷酸雜交技術(shù)可以被用于檢測(cè)每個(gè)反應(yīng)一個(gè)突變或多態(tài)區(qū)域，當(dāng)寡核苷酸附著在雜交膜和與經(jīng)標(biāo)記的靶DNA雜交時(shí)該技術(shù)可以用于檢測(cè)多個(gè)不同突變或多態(tài)區(qū)域?；蛘撸蕾囉谶x擇性PCR擴(kuò)增的等位基因特異擴(kuò)增技術(shù)可以與本發(fā)明結(jié)合使用。用作特異擴(kuò)增引物的寡核苷酸可以在分子中央攜帶所關(guān)心的突變或多態(tài)區(qū)域(這樣擴(kuò)增取決于差異雜交)(Gibbsetal(1989)NucleicAcidsRes.17:2437-2448)，或者在一條引物的3'最末端，其中在適當(dāng)條件下可以防止錯(cuò)配，或減少聚合酶延伸(Prossner(1993)Tibtech11:238)。另夕卜，可能希望在突變區(qū)域引入新的限制位點(diǎn)以產(chǎn)生基于切割的檢測(cè)(Gasparinietal.(1992)Mol.CellProbes6:1)。預(yù)期在某些實(shí)施方案中還可以使用用于擴(kuò)增的Taq連接酶來進(jìn)行擴(kuò)增(Barany(1991)Proc.Natl.Acad.SciUSA88:189)。在這些情形中，只有當(dāng)5'序列的3'末端存在完全匹配時(shí)才發(fā)生連接，使其可能通過檢查是否存在擴(kuò)增來檢測(cè)在特定位點(diǎn)處已知突變的存在。在另一實(shí)施方案中，如例如在美國(guó)專利4,998,617和在Landegren,U.等人((1988)Science241:1077-1080)中所描述的，-使用寡核苷酸連接測(cè)定法(OLA)進(jìn)行等位基因變體的鑒定。OLA方案使用兩寡核苷酸，它們被設(shè)計(jì)為能夠與靶的單鏈的鄰接序列雜交。寡核苷酸之一與分離標(biāo)志物連接，例如生物素化，另一條#皮可4企測(cè)地標(biāo)記。如果在靶分子中存在精確的互補(bǔ)序列，則寡核苷酸將雜交，以致于它們的末端鄰接，并產(chǎn)生連接底物。然后連接允許使用抗生物素蛋白或另外的生物素配體回收^皮標(biāo)記的寡核苷酸。Nickerson,D.A.等人已經(jīng)描述了結(jié)合PCR和OLA的特點(diǎn)的核酸檢測(cè)法(Nickerson，D.A.etal.(1990)Proc.Natl.AcadSci.USA87:8923-27)。在該方法中，PCR被用于實(shí)現(xiàn)靶DNA的指數(shù)擴(kuò)增，然后使用OLA檢測(cè)。幾種基于該OLA方法的技術(shù)已被開發(fā)，可被用于檢測(cè)IL-1位點(diǎn)單倍型的等位基因。例如，美國(guó)專利5,593,826公開了這樣的OLA，其使用具有3'-氨基的寡核苷酸和5'-磷酸化寡核苷酸形成具有氨基磷酸酯連接的偶聯(lián)物。在Tobe等人((1996)NucleicAcidsRes24:3728)描述的另一種OLA變體中，與PCR結(jié)合的OLA允許在單個(gè)微量孔中將兩個(gè)等位基因分型。通過用獨(dú)特半抗原，即毛地黃毒苷和熒光素，標(biāo)記每種等位基因特異性引物，通過使用半抗原特異性抗體可檢測(cè)每種OLA反應(yīng)，所述半抗原特異性抗體用不同的酶報(bào)告者(堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶)標(biāo)記。該系統(tǒng)允許使用導(dǎo)致兩種不同顏色產(chǎn)生的高通量形式檢測(cè)兩個(gè)等位基因。本發(fā)明另一實(shí)施方案涉及用于檢測(cè)出現(xiàn)心血管病癥的素因的試劑盒，該心血管病癥或者是由于動(dòng)脈閉塞引起，或者是由于形成易碎斑塊引起，或者是由于形成再狹窄引起。該試劑盒可包含一種或多種寡核苷酸，包括與IL-1位點(diǎn)單倍型的至少一個(gè)等位基因的5'和3'雜交的5'和3'寡核苦酸。PCR擴(kuò)增寡核苷酸應(yīng)當(dāng)在相隔25至2500個(gè)石威基對(duì)、優(yōu)選相隔約100至約500個(gè)堿基之間雜交，以便產(chǎn)生用于隨后分析的適合大小的PCR產(chǎn)物。尤其優(yōu)選的用在本發(fā)明診斷方法中的引物包括SEQIDNos.1-10?？色@得的來自包含人IL-1位點(diǎn)的人染色體2ql3的最新序列信息和最新的關(guān)于該位點(diǎn)的可獲得的人多態(tài)性信息促進(jìn)了用于通過本發(fā)明方法擴(kuò)增和檢測(cè)IL-1多態(tài)等位基因的另外的寡核苷酸的設(shè)計(jì)。使用該序列信息和本領(lǐng)域已知用于設(shè)計(jì)和優(yōu)化引物序列的標(biāo)準(zhǔn)4支術(shù)，可以容易地設(shè)計(jì)用于檢測(cè)這些基因中人類多態(tài)性的適當(dāng)引物。例如通過使用商業(yè)上可購得的引物選擇程序如Primer2.1、Primer3或GeneFisher可以實(shí)現(xiàn)這些引物序列的最優(yōu)設(shè)計(jì)(還參見NicklinM.H.J,WeithA.DuffG.W.，"APhysicalMapoftheRegionEncompassingtheHumanInterleukin國(guó)lo;Interleukin-ljS，andInterleukin-1ReceptorAntagonistGenes(包含人白介素-la、白介素-10和白介素-l受體拮抗劑基因的區(qū)域的物理圖i普)"Genomics19:382(1995);NothwangH.Getal."MolecularCloningoftheInterleukin-1geneCluster:ConstructionofanIntegratedYAC/PACContigandapartialtranscriptionalMapintheRegionofChromosome2ql3(白介素-l基因簇的分子克隆構(gòu)建整合的YAC/PAC重疊群和染色體2ql3區(qū)域中的部分轉(zhuǎn)錄圖i普)"Genomics41:370(1997);Clarketal.(1986)Nucl.Acids.Res.,14:7897-7914[出版錯(cuò)誤出現(xiàn)在NucleicAcidsRes,15:868(1987)和URLhttp:〃www.gdb.org的基因組數(shù)據(jù)庫(GDB)計(jì)劃中]。關(guān)于在試劑盒中的使用，寡核苷酸可以是多種天然和/或合成組合物中的任何一種，如合成寡核苷酸、限制性片段、cDNA、合成肽核酸(PNA)等。測(cè)定試劑盒和方法還可以使用經(jīng)標(biāo)記的寡核苷酸以允許在測(cè)定中易于鑒定?？梢証^用的標(biāo)記的實(shí)例包括;改射標(biāo)記、酶、熒光化合物、抗生蛋白鏈霉素、抗生物素蛋白、生物素、磁性部分、金屬結(jié)合部分、抗原或抗體部分等。試劑盒可任選地還包括DNA取樣裝置。DNA取樣裝置對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的并且可以包括但不限于基質(zhì)，如濾紙，AmpliCard(UniversityofSheffield,Sheffield,EnglandS102JF;Tarlow,JWWa/.，丄"wmato/.103:387隱389(1994))等；DNA純化試劑如NucleonTM試劑盒、裂解緩沖液、蛋白酶溶液等；PCR試劑，如10X反應(yīng)緩沖液、熱穩(wěn)定性聚合酶、dNTP等；以及等位基因檢測(cè)手段如限制酶、等位基因特異寡核苷酸、用于來自干血的嵌套PCR的簡(jiǎn)并寡核苷酸引物。4.3.3.藥物基因組學(xué)對(duì)出現(xiàn)心血管病癥的易感性相關(guān)的特定等位基因的單獨(dú)了解、或其與關(guān)于其它促進(jìn)心血管病癥的遺傳缺陷信息的結(jié)合使得根據(jù)個(gè)體的遺傳狀況的預(yù)防或治療的個(gè)性化成為可能，這是"藥物基因組學(xué)"的目標(biāo)。一種預(yù)防和治療心血管疾病的方法涉及對(duì)特定疾病風(fēng)險(xiǎn)因子的鑒定。例如，具有任意以下標(biāo)志物的等位基因2:IL-1A+4845或IL-1B(+3954)、或以下標(biāo)志物的等位基因1:IL-1B(-511)或IL-1RN(+2018)、或者與這些等位基因任一個(gè)連鎖不平衡的任何核酸序列的個(gè)體可能具有或者傾向于出現(xiàn)以形成易碎斑塊為特征的心血管疾病、可能傾向于增加的心肌梗塞、中風(fēng)、急性外周血管堵塞、以及大動(dòng)脈中中等大小動(dòng)脈瘤形成的風(fēng)險(xiǎn)。這些患者還傾向于出現(xiàn)嚴(yán)重成人牙周炎。另一種治療心血管疾病的方法涉及干擾潛在病癥的進(jìn)展、改善疾病癥狀和體征、或者保護(hù)耙組織，這樣影響組織循環(huán)的心血管病癥的存在不導(dǎo)致與該靶組織相關(guān)的臨床癥狀和體征的出現(xiàn)。舉例而言，某些藥物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊有穩(wěn)定作用或者對(duì)易碎斑塊疾病后遺癥有其它有益作用。作為實(shí)例，/3-腎上腺素受體阻斷劑減少心肌梗塞的復(fù)發(fā)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑減少心肌梗塞的發(fā)病率、某些抗生素和抗氧化劑也被證明在穩(wěn)定斑塊方面有效。有降低脂質(zhì)能力的藥物如3-羥基-3甲戊二酰-輔酶A還原酶抑制劑(他汀類)也是重要的?；诒疚墓_的模式1IL-1基因型，這些患者可能對(duì)致力于斑塊穩(wěn)定的治療反應(yīng)更好，而不是血管重建或其它侵入性技術(shù)。在細(xì)胞水平上，降低血清膽固醇水平導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)炎性細(xì)胞的減少。在分子水平上，脂質(zhì)降低已被證實(shí)降低了這些斑塊中金屬蛋白酶活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，例如，諸如基因治療的技術(shù)可以被用于穩(wěn)定易碎斑塊，這可包括基質(zhì)金屬蛋白酶的組織抑制劑的過表達(dá)和阻斷促炎分子的反義方法。IL-IB(+3954)、或以下標(biāo)志物的等位基因2:IL-1B(-511)或IL-1RN(+2018)的個(gè)體可能對(duì)諸如血管重建的特定方法或者改變內(nèi)膜中層動(dòng)脈增厚的進(jìn)展的那些方法反應(yīng)更好。另一治療心血管病癥和疾病的方法包括控制增加心血管病癥風(fēng)險(xiǎn)的條件。與動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展相關(guān)的因子包括糖尿病、高血壓、高膽固醇血癥、高脂蛋白-a、肥胖和吸煙。其中可受藥理學(xué)介入影響的因子包括i)糖尿病、ii)高血壓、和iii)血脂異常。降低脂質(zhì)藥物的實(shí)例包括陰離子交換樹脂如消膽胺、考來替泊；HMGCoA還原酶抑制劑或(他汀類)如辛伐他汀、pracastatin、西立伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、洛伐他??；貝特類如非諾貝特、苯扎貝特、吉非貝齊、氯貝丁酯、環(huán)丙貝特；煙酸和類似物阿昔莫司、尼可呋糖；增強(qiáng)非受體介導(dǎo)的LDL清除和降〗氐LDL氧化的普羅布考；魚油如脈適寶、復(fù)方w-3不飽和脂肪酸；以及膽固醇吸附抑制劑如帕馬苷、替奎安。相應(yīng)地，可基于這種基因型分析開發(fā)針對(duì)個(gè)體中疾病特定分子基礎(chǔ)的治療劑。因此，就心血管病癥將個(gè)體的IL-1i普與群體i普進(jìn)行比較，使得選擇或設(shè)計(jì)預(yù)期對(duì)特定患者或患者群(即，具有相同遺傳改變的患者組)安全有效的藥物或其它治療方案成為可能。另外，基于遺傳譜耙向期望顯示最高臨床益處的群體的能力便能夠1)重新定位已經(jīng)上市的防止或治療心血管病癥的藥物；2)拯救由于安全性或功效限制導(dǎo)致中斷臨床開發(fā)的候選藥物，其是患者亞群特異的；以及3)加速和更便宜地開發(fā)候選療法和更佳的藥物標(biāo)簽(例如，因?yàn)闇y(cè)量各種劑量的藥劑對(duì)血管病癥致病突變的效果對(duì)于優(yōu)化有效劑量是有用的)。通過測(cè)定蛋白質(zhì)(例如IL-la、IL-lj3、或IL-lRa)、mRNA和/或轉(zhuǎn)錄水平可監(jiān)測(cè)特定療法的個(gè)體治療。根據(jù);險(xiǎn)測(cè)水平，然后可以維持或調(diào)整(增加或減少劑量)治療方案。在優(yōu)選實(shí)施方案中，以藥劑對(duì)個(gè)體的有效治療包括以下步驟(i)在給藥藥劑之前從個(gè)體中獲得給藥前樣品；(ii)檢測(cè)給藥前樣品中的蛋白質(zhì)、mRNA或基因組DNA的水平或量；(iii)從個(gè)體中獲得一個(gè)或多個(gè)給藥后的樣品；(iv)在給藥后的樣品中4企測(cè)蛋白質(zhì)、mRNA或基因組DNA的表達(dá)水平或活性；(v)將給藥前的樣品中蛋白質(zhì)、mRNA或基因組DNA的表達(dá)水平或活性分別與給藥后的樣品中對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)、mRNA或基因組DNA比較；以及(vi)相應(yīng)地改變對(duì)個(gè)體的藥劑給藥。還可以在治療劑給藥之前和之后獲得個(gè)體的細(xì)胞以檢測(cè)除了IL-l基因以外的基因的表達(dá)水平，以證實(shí)治療劑未增加或減少可能有害的基因的表達(dá)。這可以例如通過使用轉(zhuǎn)錄語的方法完成。因此，可以將來自體內(nèi)暴露于治療劑的細(xì)胞的mRNA和來自未暴露于治療劑的相同類型細(xì)胞的mRNA逆轉(zhuǎn)錄并與含有來自多個(gè)基因的DNA的芯片雜交，由此比較在用治療劑處理和未處理的細(xì)胞中基因的表達(dá)。4,4心血管病癥和疾病的治療劑IL-1(例如IL-lce、IL-l/3或IL-l受體拮抗劑)的調(diào)節(jié)物或由與IL-l基因連鎖不平衡的基因編碼的蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)物可以包含任何類型的化合物，包括蛋白質(zhì)、肽、肽模擬物、小分子、或核酸。優(yōu)選的拮抗物包括核酸(例如編碼IL-l蛋白或被IL-l蛋白上調(diào)或下調(diào)的基因)、蛋白質(zhì)(例如IL-l蛋白或由此上調(diào)或下調(diào)的蛋白質(zhì))或小分子(例如調(diào)節(jié)IL-l蛋白的表達(dá)或結(jié)合)。例如使用本文所述的測(cè)定法可以鑒定的優(yōu)選拮抗劑包括核酸(例如單鏈(反義)或雙鏈(三聯(lián)體)DNA或PNA和核酶)、蛋白質(zhì)(例如抗體)和用于阻止或抑制IL-l轉(zhuǎn)錄和/或蛋白質(zhì)活性的小分子。4.4.1.有效劑量通過在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)崱?yàn)動(dòng)物中例如用于測(cè)定LD50(50%群體致死的劑量)和Ed50(50%群體治療有效的劑量)的標(biāo)準(zhǔn)藥物方法，可以測(cè)定這些化合物的毒性和治療功效。毒性作用和治療作用之間的劑量比率是治療指數(shù)，它可以表達(dá)為比率LD50/ED50。優(yōu)選顯示大的治療指數(shù)的化合物。盡管可以使用顯示毒性副作用的化合物，應(yīng)當(dāng)小心設(shè)計(jì)遞送系統(tǒng)，其使這些化合物靶向受影響組織的部位，以便最小化對(duì)未感染細(xì)胞的潛在損傷并由此減小副作用。，^'賴劑量范圍。這些化合物的劑量?jī)?yōu)選位于ED50具有很小或無毒性的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。根據(jù)所用劑型和所用給藥途徑，劑量可以在該范圍內(nèi)變化。對(duì)于本發(fā)明方法中所用的任何化合物，最初從細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定中可以評(píng)估治療有效劑量。在動(dòng)物模型中可以確定劑量以獲得包括如細(xì)胞培養(yǎng)中測(cè)定的IC50(即獲得癥狀最大抑制一半的檢測(cè)化合物的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。該信息可以用于更準(zhǔn)確地確定人類中的有效劑量。例如通過高效液相色譜可以測(cè)量血漿中的水平。4.4.2制劑和用途可以使用一種或多種生理上可接受的載體或賦形劑以常規(guī)方法配制用于本發(fā)明的組合物。因此，可以配制化合物和它們生理上可接受的鹽和溶劑化物，用于通過例如注射、吸入或吹入(通過嘴或鼻)給藥或口服、含服、腸胃外或直腸給藥。對(duì)于該治療，可以將本發(fā)明化合物配制用于各種負(fù)荷的給藥，包括全身的和局部的或定位給藥。技術(shù)和制劑通?？梢栽赗emmington，sPharmaceuticalSciences(雷明頓藥物科學(xué))，MeadePublishingCo,,Eastern,PA.中找到。對(duì)于全身給藥，優(yōu)選注射，包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射。對(duì)于注射，可以將本發(fā)明化合物配制在液體溶液中，優(yōu)選在生理相容的H沖液如Hank溶液或Ringer溶液中。另外，化合物可以以固體形式配制并在即將使用前再溶解或懸浮。還包括凍干形式。對(duì)于口服給藥，組合物可以采取通過常規(guī)方法用藥物可接受的賦形劑制備的例如片劑或膠嚢劑的形式，這些賦形劑例如為粘合劑(例如預(yù)先糊化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基曱基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或硅石)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或羥基乙酸淀4分鈉)；或濕潤(rùn)劑(例如十二烷基硫酸鈉)。可以用本領(lǐng)域公知的方法包衣片劑。用于口服給藥的液體制劑可以采取例如溶液、糖漿或混懸劑的形式，或者它們可以作為在使用前與水或其它適當(dāng)載體組構(gòu)的干產(chǎn)品存在。通過常規(guī)方法用藥用添加劑可以制備這些液體制劑，所述藥用添加劑如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性載體(例如成ationd油、油性酯、乙醇或分級(jí)的植物油)；以及防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸曱酯或?qū)αu基苯曱酸丙酯或山梨酸)。視情況制劑還可以包含緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑和甜味劑?？梢詫⒂糜诳诜o藥的制劑適當(dāng)?shù)嘏渲埔援a(chǎn)生活性化合物的控釋。對(duì)于含服給藥而言，組合物可以采取以常規(guī)方法配制的片劑或錠劑的形式。對(duì)于通過吸入給藥，用于本發(fā)明的化合物便利地以來自加壓包裝或噴霧器的氣溶膠噴霧呈遞的形式使用適當(dāng)?shù)耐七M(jìn)劑輸送，所述推進(jìn)劑例如為二氯二氟曱烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當(dāng)?shù)臍怏w。在加壓氣溶膠的情形中，可以通過提供閥門以輸送計(jì)量量來確定劑量單位?？梢耘渲朴糜谖肫骰虼等肫鞯睦缑髂z的膠嚢和藥筒，其包含化合物和諸如乳精或淀粉的適當(dāng)粉末基質(zhì)的粉末混合物。可以被配制化合物通過注射用于腸胃外給藥，例如通過單次快速靜脈注射或連續(xù)輸注。用于注射的制劑可以單位劑量形式存在，例如在安瓿瓶中或在多劑量容器中，并含有加入的防腐劑。組合物可以釆取諸如在油性或水性載體中的混懸液、溶液或乳劑的形式，并且可以包含配制劑如混懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘撸钚猿煞挚梢允窃谑褂们芭c適當(dāng)載體例如無菌不含熱原的水組構(gòu)的粉末形式?；衔镞€可以;故配制成諸如栓劑或保留灌腸劑的直腸組合物，例如包含諸如可可油或其它甘油酯的常規(guī)栓劑基質(zhì)。除了前述制劑，化合物還可以被配制成長(zhǎng)效制劑。這些長(zhǎng)效制劑可以通過移植(例如皮下或肌內(nèi))或通過肌內(nèi)注射給藥。因此，例如化合物可以用適當(dāng)?shù)木酆匣蚴杷晕镔|(zhì)(例如作為可接受油中的乳劑)或離子交換樹脂配制、或配制成微溶衍生物，例如微溶鹽。其它適當(dāng)?shù)倪f送系統(tǒng)包括微球體，其提供在延長(zhǎng)時(shí)期的時(shí)間內(nèi)局部非侵入性遞送藥物的可能性。該技術(shù)利用前毛細(xì)管大小的微球體，其可以經(jīng)由冠狀動(dòng)脈導(dǎo)管注射到例如心臟或其它器官的任何選擇部分而不導(dǎo)致炎癥或局部缺血。給予的治療劑從這些微球體緩慢地釋放并纟皮周圍組織細(xì)胞(例如內(nèi)皮細(xì)胞)吸收還可以通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮方法全身給藥。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮給藥，在制劑中使用適于被滲透的屏障的滲透劑。這些滲透劑在本領(lǐng)域是公知的，包括例如用于經(jīng)粘膜給藥膽汁鹽和梭鏈孢酸衍生物。另外，可以使用洗滌劑以促進(jìn)滲透。經(jīng)粘膜給藥可以通過鼻噴霧或使用栓劑。對(duì)于局部給藥，本發(fā)明的寡聚體可以被配制成本領(lǐng)域公知的軟膏、藥膏、凝膠、或乳膏?？梢跃植渴褂孟匆阂蕴幚頁p傷或炎癥以加速愈合。如果需要，組合物可以存在于包裝或分配器裝置之中，其可以含有一種或多種含有活性成分的單位劑量形式中。包裝例如可以包括金屬或塑料箔，如泡罩包裝。包裝或分配器裝置可以附有給藥說明。4.5鑒定心血管病癥和疾病的治療劑的測(cè)定法基于對(duì)導(dǎo)致或促進(jìn)血管病癥出現(xiàn)的突變的鑒定，本發(fā)明的另外特征在于例如用于鑒定血管病癥治療劑的基于細(xì)胞的或無細(xì)胞的測(cè)定法。在一個(gè)實(shí)施方案中，在測(cè)試化合物單獨(dú)存在下或在測(cè)試化合物和另外的蛋白質(zhì)存在下孵育在其細(xì)胞膜外表面上表達(dá)IL-1受體的細(xì)胞或由與IL-1基因連鎖不平衡的基因編碼的蛋白質(zhì)的受體的細(xì)胞，并例如通過使用微生理儀檢測(cè)測(cè)試化合物和受體之間或蛋白質(zhì)(優(yōu)選經(jīng)標(biāo)記的蛋白質(zhì))和受體之間的相互作用(McConnelletal.(1992)Science257:1906)。通過孩i生理儀;險(xiǎn)測(cè)作為培養(yǎng)基酸化變化的受體和測(cè)試化合物或蛋白質(zhì)之間的相互作用。該測(cè)定系統(tǒng)因此提供鑒定例如通過干擾蛋白質(zhì)-受體相互作用起作用的分子拮抗劑以及例如通過激活受體起作用的分子激動(dòng)劑的方法。細(xì)胞或無細(xì)胞測(cè)定法還可以用于鑒定調(diào)節(jié)IL-1基因或與其連鎖不平4軒的基因的表達(dá)、調(diào)節(jié)mRNA翻譯的化合物、或調(diào)節(jié)mRNA或蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的化合物。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，將能夠產(chǎn)生IL-1或其它蛋白質(zhì)的細(xì)胞與測(cè)試化合物一起孵育，測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)基中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的量，并將其與從未與測(cè)試化合物接觸的細(xì)胞中產(chǎn)生的量比較。通過各種對(duì)照分析，例如測(cè)量一個(gè)或多個(gè)對(duì)照基因的表達(dá)，可以證實(shí)化合物相對(duì)于蛋白質(zhì)的特異性。特別是，該分析可以用于測(cè)定反義核酸、核酶和三聚體化合物的功效無細(xì)胞測(cè)定還可以用于鑒定能夠與蛋白質(zhì)相互作用、由此改變蛋白質(zhì)活性的化合物。該化合物可以例如修飾蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)由此影響它與受體結(jié)合的能力。在優(yōu)選實(shí)施方案中，用于鑒定這些化合物的無細(xì)胞測(cè)定基本上由反應(yīng)混合物組成，所述反應(yīng)混合物包含在結(jié)合配體的存在或不存在條件下的蛋白質(zhì)和測(cè)試化合物或測(cè)試化合物庫。測(cè)試化合物可以是例如結(jié)合配體的衍生物，例如無生物活性的靶肽或小分子。相應(yīng)地，本發(fā)明的一個(gè)示例性篩選測(cè)定包括將蛋白質(zhì)或其功能片段與測(cè)試化合物或測(cè)試化合物庫接觸并檢測(cè)復(fù)合體的形成的步驟。出于4企測(cè)目的，分子可以用特異的標(biāo)志物來標(biāo)記，測(cè)試化合物或測(cè)試化合物庫用不同的標(biāo)志物標(biāo)記。于是在孵育步驟和洗滌步驟以后通過測(cè)定兩種標(biāo)記的水平可以檢測(cè)測(cè)試化合物與蛋白質(zhì)或其片段的相互作用。在洗滌步驟以后兩種標(biāo)記的存在表明了相互作用。通過使用檢測(cè)表面等離子共振(SPR)(—種光學(xué)現(xiàn)象)的實(shí)時(shí)BIA(生物分子相互作用分析，PharmaciaBiosensorAB)也可以鑒定分子間的相互作用。檢測(cè)依賴于在生物特異性界面大分子質(zhì)量濃度的變化，不需要反應(yīng)物的任何標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)試化合物庫可被固定在傳感器表面，例如，其形成微流量池的一個(gè)壁。然后含有蛋白質(zhì)或其功能片段的溶液連續(xù)流過傳感器表面。如信號(hào)記錄所示的共振角變化表明相互作用已經(jīng)發(fā)生。該技術(shù)例如在Pharmacia的BIA技術(shù)手冊(cè)中進(jìn)一步描述本發(fā)明另一示例性的篩選測(cè)定包括以下步驟(a)形成反應(yīng)混合物，其包括(i)IL-1或其它蛋白質(zhì)，(ii)適當(dāng)?shù)氖荏w，以及(iii)測(cè)試化合物；和(b)檢測(cè)蛋白質(zhì)和受體的相互作用。與缺乏測(cè)試化合物的相互作用相比，在測(cè)試化合物存在條件下蛋白質(zhì)和受體的相互作用的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著變化(力口強(qiáng)或抑制)顯示可能的拮抗劑(抑制劑)。該測(cè)試的化合物可以同時(shí)接觸?；蛘?，蛋白質(zhì)可以首先與測(cè)試化合物接觸適當(dāng)量的時(shí)間，接著將受體加入反應(yīng)混合物。通過使用各種濃度的測(cè)試化合物獲得的數(shù)據(jù)產(chǎn)生劑量反應(yīng)曲線可以評(píng)估化合物的功效。此外，還可以進(jìn)行對(duì)照測(cè)定以提供比較的基線?？梢酝ㄟ^多種技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)和受體之間的復(fù)合體形成。通過免疫測(cè)定，或通過色i普檢測(cè)，使用例如可檢測(cè)的標(biāo)記蛋白質(zhì)，如放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、或酶促標(biāo)記的蛋白質(zhì)或受體，可以定量對(duì)復(fù)合體形成的調(diào)節(jié)典型地，希望固定化蛋白質(zhì)或受體以促進(jìn)從非復(fù)合形式的一種或兩種蛋白質(zhì)中分離復(fù)合體以及適應(yīng)測(cè)定的自動(dòng)化。在任何適于包含反應(yīng)物的容器中可以完成蛋白質(zhì)和受體的結(jié)合。實(shí)例包括微量滴定板、試管和微型離心管。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以提供融合蛋白質(zhì)，其增加允許蛋白質(zhì)與基質(zhì)結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。例如，谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白質(zhì)可被吸附到谷胱甘肽瓊脂糖小珠(SigmaChemical,St.Louis，MO)或谷胱甘肽衍生化的微量滴定板上，其然后與受體例如"S-標(biāo)記的受體和測(cè)試化合物結(jié)合，在有助于復(fù)合體形成的條件下，例如在鹽和pH的生理?xiàng)l件下，孵育混合物，盡管稍微更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臈l件可能更理想。孵育后，洗滌小珠以去除任何未結(jié)合的標(biāo)記，將基質(zhì)固定并直接測(cè)定放射性標(biāo)記(例如將小珠放于閃爍體中)，或在隨后將復(fù)合體解離后在上清液中測(cè)定》文射性標(biāo)記。備選地，復(fù)合體可以從基質(zhì)上解離，通過SDS-PAGE分離，4吏用如在所附的實(shí)施例中所述的標(biāo)準(zhǔn)電泳4支術(shù)從凝膠中定量在小珠級(jí)分中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)或受體的水平。其它用于固定蛋白質(zhì)于基質(zhì)上的技術(shù)也可以供所述測(cè)定使用。例如，利用生物素和抗生蛋白鏈菌素的偶聯(lián)可以固定化蛋白質(zhì)或受體。也可以制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物以鑒定激動(dòng)劑和拮抗劑或證實(shí)候選治療劑的安全性和功效。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可包括非人動(dòng)物，其包含在適當(dāng)內(nèi)源啟動(dòng)子的控制下或在異源啟動(dòng)子的控制下的心血管病癥致病突變。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物還可以是含有在適當(dāng)啟動(dòng)子的控制下的轉(zhuǎn)基因如報(bào)告基因或其片段的動(dòng)物。這些動(dòng)物可用于例如鑒定如通過調(diào)節(jié)基因表達(dá)調(diào)節(jié)IL-1蛋白質(zhì)的產(chǎn)生的藥物。獲得轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物的方法在本領(lǐng)域是公知的。在優(yōu)選實(shí)施方案中，使用例如以期望模式控制表達(dá)的順式作用序列，將心血管病癥致病突變的表達(dá)限制在特定的細(xì)胞亞群、組織或發(fā)育階段。在本發(fā)明中，這種蛋白質(zhì)的嵌合表達(dá)可能對(duì)于許多形式的譜系分析是關(guān)鍵性的，并且可以另外提供評(píng)估例如表達(dá)水平效果的方法，所述表達(dá)水平可能完全改變另外正常胚胎內(nèi)小塊組織的發(fā)育。為此，可以使用組織特異性調(diào)節(jié)序列和條件調(diào)節(jié)序列來控制在特定空間分布模式中突變的表達(dá)。此外，通過例如條件重組系統(tǒng)或原核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列可以提供表達(dá)的時(shí)間分布模式。遺傳技術(shù)，其允許通過體內(nèi)位點(diǎn)特異性遺傳操作可以調(diào)節(jié)突變表達(dá)，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是己知的。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在多個(gè)它們的細(xì)胞內(nèi)都包括本發(fā)明的心血管病癥致病突變轉(zhuǎn)基因，該轉(zhuǎn)基因改變"宿主細(xì)胞"的表型。在說明性的實(shí)施方案中，可以4吏用噬菌體Pl的cm7ojc尸重組酶系統(tǒng)(Laksoeta1.(1992)尸A^S89:6232-6236;Orban(1992)/Wv4S89:6861-6865)或釀酒'酵母(Sflcc/iaramycescerev/s/ae)的FLP重組酶系統(tǒng)(O，Gormanetal.(1991)Sc/e"ce251:1351-1355;PCT公開W092/15694)來產(chǎn)生體內(nèi)位點(diǎn)特異性遺傳重組系統(tǒng)。Cre重組酶催化位于/似尸序列之間的插入靶序列的位點(diǎn)特異性重組。/o;c尸序列是Cre重組酶結(jié)合的34個(gè)堿基對(duì)的核苦酸重復(fù)序列并且為Cre重組酶介導(dǎo)的遺傳重組所需。當(dāng)Cre重組酶存在時(shí)，/oxP序列的定向決定插入靶序列被切除或倒置(Abremskietal.(1984)丄歷o/.C力em.259:1509-1514);當(dāng)/oxP序列定向?yàn)檎蛑貜?fù)時(shí)催化靶序列的切除，當(dāng)/ox尸序列定向?yàn)榉聪蛑貜?fù)時(shí)催化靶序列的倒置。因此，耙序列的遺傳重組取決于Cre重組酶的表達(dá)。重組酶的表達(dá)可以通過啟動(dòng)子元件調(diào)節(jié)，所述啟動(dòng)于受調(diào)節(jié)控制，例如組織特異性、發(fā)育階段特異性、通過外加試劑可誘導(dǎo)的或可抑制的。這種調(diào)節(jié)的控制僅在重組酶表達(dá)受啟動(dòng)子元件介導(dǎo)的細(xì)胞中導(dǎo)致靶序列的遺傳重組。因此，通過控制重組酶表達(dá)可以調(diào)節(jié)致病突變轉(zhuǎn)基因的表達(dá)的激活。將cm/Zox尸重組酶系統(tǒng)用于調(diào)節(jié)致病突變轉(zhuǎn)基因的表達(dá)要求構(gòu)建含有編碼Cre重組酶和所述蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。通過構(gòu)建"二重，，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以提供含有Cre重組酶和心血管病癥致病突變轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物。提供這些動(dòng)物的便利方法是使兩種各自含有一種轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物交配。使用原核啟動(dòng)子序列可以提供類似的條件轉(zhuǎn)基因，為了促進(jìn)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)所述原核啟動(dòng)子序列要求原核蛋白質(zhì)同時(shí)表達(dá)。示例啟動(dòng)子和相應(yīng)的反式激活原核蛋白質(zhì)在美國(guó)專利4,833,080中給出。此外，通過類似基因治療的方法可以誘導(dǎo)條件轉(zhuǎn)基因的表達(dá)，其中將編碼反式激活蛋白，例如重組酶或原核蛋白質(zhì)，的基因遞送到組織并使其例如以細(xì)胞類型特異性的方式表達(dá)。通過該方法，轉(zhuǎn)基因可以保持沉默至成年期直至通過引入反式激活物"開啟"。在示例性實(shí)施方案中，通過將轉(zhuǎn)基因?qū)敕侨藙?dòng)物的種系中來產(chǎn)生本發(fā)明的"轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物"。在不同發(fā)育階段的胚胎靶細(xì)胞可以用來導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因。根據(jù)胚胎靶細(xì)胞的發(fā)育階段使用不同方法?；谄毡榱己玫慕】怠⒑玫呐咛ギa(chǎn)率、在胚胎中良好的原核能見度、和良好的生殖適度來選擇用于實(shí)施本發(fā)明的任何動(dòng)物的特定品系。另外，單倍型是重要因素。例如，當(dāng)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，經(jīng)常使用諸如C57BL/6或FVB系的品系(JacksonLaboratory,BarHarbor,ME)。優(yōu)選的品系是具有H-2b、H-2d、或H-2q單倍型的那些，如C57BL/6或DBA/1。用于實(shí)施本發(fā)明的品系本身可以是轉(zhuǎn)基因的，和/或可以是敲除的(即從具有部分或完全被抑制的一個(gè)或多個(gè)基因的動(dòng)物中獲得)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體引入單一階段的胚胎。合子是顯微注射的最好目標(biāo)。在小鼠中，雄性原核達(dá)到直徑約20微米的大小，其允許l-2plDNA溶液的可重復(fù)注射。將合子用作基因轉(zhuǎn)移的目標(biāo)具有一個(gè)主要優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樵诖蠖鄶?shù)情形中注射的DNA將在第一次卵裂之前整合到宿主基因中(Brinsteretal.(1985)/WJS82:4438-4442)。結(jié)果，所有轉(zhuǎn)基因動(dòng)物細(xì)胞將攜帶整合的轉(zhuǎn)基因。這通常也在轉(zhuǎn)基因有效地輸送給建立者的后代中得到反映，因?yàn)?0%的生殖細(xì)胞將含有轉(zhuǎn)基因。通常，將受精的胚胎在適當(dāng)培養(yǎng)基中孵育直至原核出現(xiàn)。約在此時(shí)，如下所述將包含轉(zhuǎn)基因的核苷酸序列導(dǎo)人雌性或雄性原核。在一些物種如小鼠中，優(yōu)選雄性原核。最優(yōu)選在它被卵核或合子的雌性原核加工以前將外源遺傳物質(zhì)加至合子的雄性DNA互補(bǔ)體。認(rèn)為卵核或雌性原核釋放影響雄性DNA互補(bǔ)體的分子，其可能通過用組蛋白替換雄性DNA的魚精蛋白，由此促進(jìn)雌性和雄性DNA互補(bǔ)體的結(jié)合以形成二倍體合子。因此，優(yōu)選在它受雌性原核的影響之前將外源遺傳物質(zhì)加入雄性DNA互補(bǔ)體或任何其它DNA互補(bǔ)體。例如，在形成雄性原核之后盡可能快地將外源遺傳物質(zhì)加入早期雄性原核，這時(shí)雄性原核和雌性原核很好地分離并且都位于近細(xì)胞膜。備選地，在它已經(jīng)被誘導(dǎo)進(jìn)行解凝聚以后可以將外源遺傳物質(zhì)加入精核。含有外源遺傳物質(zhì)的精子然后可以加入卵子或者可以將解凝聚的精子加入卵子，其后盡可能快地加入轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何方法例如顯微注射、電穿孔、或脂轉(zhuǎn)染，實(shí)現(xiàn)將轉(zhuǎn)基因核苷酸序列導(dǎo)入胚胎。在將轉(zhuǎn)基因核苷酸序列引入胚胎以后，胚胎可以體外孵育不同時(shí)間，或重移植到替代宿主中，或兩者都進(jìn)行。體外孵育至成熟在本發(fā)明的范圍內(nèi)。一種常規(guī)方法是將胚胎體外孵育約l-7天(取決于物種)，然后將它們重移植到替代宿主中。出于本發(fā)明的目的，合子基本上是二倍體細(xì)胞的形成，其能夠發(fā)育成完整的生物。通常合子由含有通過融合來自一個(gè)配子或多個(gè)配子的兩個(gè)單倍體核天然或人工形成的核的卵子組成。因此，配子核必須是天然相容的配子核，即產(chǎn)生能夠進(jìn)行分化和發(fā)育成功能生物體的能生存的合子的配子核。通常，優(yōu)選整倍體合子。如果獲得非整倍體合子，那么相對(duì)于任何一個(gè)配子起源的生物的整倍體數(shù)量，染色體的數(shù)量改變應(yīng)當(dāng)不超過一個(gè)。除了類似的生物學(xué)考慮，物理考慮也決定外源遺傳物質(zhì)的數(shù)量(例如體積)，所述外源遺傳物質(zhì)可被加至合子的核或者形成合子核的一部分的遺傳物質(zhì)。如果未去除遺傳物質(zhì)，那么可以加入的外源遺傳物質(zhì)的量將受被吸收但無物理性破壞的量的限制。通常，插入的外源遺傳物質(zhì)的體積將不超過約10皮升。加入的物理影響不應(yīng)該如此大以致物理上破壞合子的生存力。因?yàn)榘ㄍ庠催z傳物質(zhì)在內(nèi)的得到的合子的遺傳物質(zhì)必須在生物學(xué)上能夠起始和保持合子的分化并發(fā)育成功能生物體，所以DNA序列的數(shù)量和種類的生物學(xué)限制將根據(jù)具體合子和外源遺傳物質(zhì)的功能而變化，并且對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。加入合子的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體的拷貝數(shù)目取決于加入的外源遺傳物質(zhì)的總量，并且將是能夠使遺傳轉(zhuǎn)化發(fā)生的量。理論上僅需要一個(gè)拷貝；然而通常使用許多拷貝，例如1,000-20,000個(gè)拷貝的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體，以便確保一個(gè)拷貝有功能。關(guān)于本發(fā)明，通常有利的是具有多于一個(gè)功能拷貝的每個(gè)插入外源DNA序列以增強(qiáng)外源DNA序列的表型表達(dá)。只要它不對(duì)細(xì)胞、核膜或其它存在的細(xì)胞或遺傳結(jié)構(gòu)是破壞性的，就可以使用允許加入外源遺傳物質(zhì)至核遺傳物質(zhì)中的任何技術(shù)。外源遺傳物質(zhì)優(yōu)選通過微量注射插入核遺傳物質(zhì)中。細(xì)胞和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的微量注射是已知的并在本領(lǐng)域中被使用。使用標(biāo)準(zhǔn)方法完成重移植。通常，將替代宿主麻醉，將胚胎插入輸卵管。移植到具體宿主中的胚胎的數(shù)量將隨物種變化，但是將通常類似于物種天然生產(chǎn)的后代數(shù)量?？梢酝ㄟ^任何適當(dāng)方法篩選替代宿主的轉(zhuǎn)基因后代的轉(zhuǎn)基因的存在和/或表達(dá)。經(jīng)常使用與轉(zhuǎn)基因的至少一部分互補(bǔ)的探針，通過DNA印跡或RNA印跡分析完成篩選?？梢允褂美冕槍?duì)由轉(zhuǎn)基因編碼的蛋白質(zhì)的抗體的蛋白質(zhì)印跡分析作為篩選轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物存在的備選或補(bǔ)充方法。典型地，從尾組織中制備DNA并通過DNA印跡分析或PCR分析轉(zhuǎn)基因?；蛘撸M管任何組織或細(xì)胞類型可以用于該分析，但使用DNA印跡分析或PCR檢驗(yàn)認(rèn)為以最高水平表達(dá)轉(zhuǎn)基因的組織或細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因的存在和表達(dá)。用于評(píng)估轉(zhuǎn)基因存在的備選或補(bǔ)充方法包括但不限于諸如酶和/或免疫學(xué)測(cè)定的適當(dāng)?shù)纳锘瘜W(xué)測(cè)定、針對(duì)特定標(biāo)志物或酶活性的組織學(xué)染色、流式細(xì)胞儀分析等。血液的分析也可以用于檢測(cè)血液中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的存在，以及評(píng)估轉(zhuǎn)基因?qū)Ω鞣N類型的血細(xì)胞和其它血液成分的水平的影響。通過將轉(zhuǎn)基因動(dòng)物與適當(dāng)?shù)呐渑冀慌洹⒒蛲ㄟ^獲自轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的卵和/或精子的體外受精可以獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的后代。當(dāng)進(jìn)行與配偶交配時(shí)，配偶可以是或不是轉(zhuǎn)基因的和/或敲除的；當(dāng)它是轉(zhuǎn)基因的時(shí)，它可以包含相同或不同的轉(zhuǎn)基因，或都含有?；蛘?，配偶可以是母本品系。當(dāng)使用體外受精時(shí)，可以將受精胚胎移植到替代宿主中或體外孵育，或兩者都進(jìn)行。使用任一方法，使用上述方法或其它適當(dāng)?shù)姆椒梢栽u(píng)估后代轉(zhuǎn)基因的存在。按照本發(fā)明產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物將包含外源遺傳物質(zhì)。另外，在該實(shí)施方案中，序列將附著在轉(zhuǎn)錄控制元件例如啟動(dòng)子上，所述轉(zhuǎn)錄控制元件優(yōu)選使得轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物能在特定類型的細(xì)胞中表達(dá)。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染也可以用來將轉(zhuǎn)基因?qū)敕侨藙?dòng)物。發(fā)育的非人胚胎可以體外培養(yǎng)至胚泡期。在該期間，可以以卵裂球?yàn)槟孓D(zhuǎn)錄感染的靶標(biāo)(Jaenich，R.(1976)7WJS73:1260-1264)。通過酶處理去除透明帶可以獲得卵裂球的有效感染(Mam》w/a"wgAeMow"五m6^yo(小鼠胚月臺(tái)才喿4乍),Hoganeds.(ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,1986)。用于導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因的病毒載體系統(tǒng)典型地是攜帶轉(zhuǎn)基因的復(fù)制缺陷的逆轉(zhuǎn)錄病毒(Jahneretal.(1985)iWJS82:6927-6931;VanderPuttenetal.(1985)尸7V^S82:6148-6152)。通過在生產(chǎn)病毒的細(xì)胞單層上培養(yǎng)卵裂球容易或有效地獲得轉(zhuǎn)染(VanderPutten,上文；Stewartetal.(1987)五M5(9J.6:383-388)?；蛘?，可在后期進(jìn)行感染?？蓪⒉《净虍a(chǎn)生病毒的細(xì)胞注射到嚢胚腔中(Jahneretal.(1982)A/a^/w298:623-628)。因?yàn)檎蟽H在形成轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物的細(xì)胞亞群中發(fā)生，大多數(shù)建立者將是轉(zhuǎn)基因的嵌合體。另外，建立者可以在基因組的不同位置包含轉(zhuǎn)基因的各種逆轉(zhuǎn)錄病毒插入，其通常將在后代中分離。另外，還可以通過子宮內(nèi)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染孕中期胚胎將轉(zhuǎn)基因?qū)敕N系(Jahneretal.(1982)上文)。第三類用于轉(zhuǎn)基因?qū)氲陌屑?xì)胞是胚胎干細(xì)胞(ES)。ES細(xì)胞獲自體外培養(yǎng)并與胚胎融合的移才直前的胚胎(Evansetal.(1981)7Va^w292:154-156;Bradleyetal.(1984)Atoww309:255-258;Gossleretal.(1986)/WJS83:9065-9069;以及Robertsonetal.(1986)A^we322:445-448)。通過DNA轉(zhuǎn)染或通過逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)可以將轉(zhuǎn)基因有效地導(dǎo)入ES細(xì)胞。該轉(zhuǎn)化的ES細(xì)胞此后可以與來自非人類動(dòng)物的胚泡結(jié)合。ES細(xì)胞此后移植居胚胎，并有助于得到的嵌合動(dòng)物的種系。關(guān)于綜述參見Jaenisch,R,(1988)Sc/ewce240:1468-1474。進(jìn)一步通過下列實(shí)施例來舉例說明本發(fā)明，所述實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是以任何方式限制性的。所有引用的參考文獻(xiàn)的內(nèi)容(包括貫穿本申請(qǐng)引用的文獻(xiàn)參考、授權(quán)的專利、公開的專利申請(qǐng))以此明確并入本文作為參考。除非另外說明，本發(fā)明的實(shí)施將使用本
技術(shù)領(lǐng)域：
內(nèi)的常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)在文獻(xiàn)中被充分解釋。參見，例如MolecularCloningALaboratoryManual(分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))，(第二版，Sambrook、Fritsch和Maniatis編輯,ColdSpringHarborLaboratoryPress:1989);DNACloning(DNA克隆)巻I和II(D.N,Glover編輯，1985);OligonucleotideSynthesis(寡核苦酸合成)(M.J.Gait編輯，1984);美國(guó)專利4,683,195;美國(guó)專利4,683,202;以及NucleicAcidHybridization(核酸雜交)(B.D.Hames&S丄Higgins編輯，1984)。5.實(shí)施例實(shí)施例1:單支冠狀動(dòng)脈疾病的標(biāo)志物本項(xiàng)研究的目的是確定患有早期形式的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化(即單支冠狀動(dòng)脈疾病)的患者是否更可能在以下基因中具有特異等位基因IL-lA(-889標(biāo)志物)、IL-1B(-511和+3954標(biāo)志物)、IL-IRN(VNTR標(biāo)志物)或TNFa(-308標(biāo)志物)。多支疾病通常代表了該疾病的晚期階,史，其可能涉及很多因素，會(huì)使數(shù)據(jù)解釋復(fù)雜化。因此，由心臟病專家評(píng)估表現(xiàn)出胸痛不適的患者，從分析中排除在一個(gè)以上冠狀動(dòng)脈中具有顯著動(dòng)脈粥樣硬化的血管造影證據(jù)的那些患者?；颊呷航M:采用常規(guī)技術(shù)從股動(dòng)脈或肱動(dòng)脈進(jìn)行血管造影。在研究的患者中，八十五(85)名通過血管造影沒有明顯的管腔不規(guī)則，被分類為具有血管造影術(shù)上正常的冠狀動(dòng)脈的對(duì)照。如果通過肉眼評(píng)估，三個(gè)心外膜冠狀血管之一含有導(dǎo)致管腔直徑50%減少的心外膜狹窄，則患者被分類為具有單支疾病。五十八(58)名患者被發(fā)現(xiàn)具有單支冠狀動(dòng)脈疾病。排除具有多支血管疾病的患者。對(duì)照和單支疾病組具有類似的平均年齡，分別是57.6士10.4歲和56.4±9.4歲。對(duì)照組中男性與女性的比例為1:1.7，患病組中為2.6:1。一般方法:除非另有說明，涉及核酸技術(shù)的反應(yīng)和操作按ambrookefa/"A/o/ecw/arC7omVzg..j丄a6on^o^yA/iawwa/，ColdSpringHarborLaboratoryPress(1989)中通常描述的方法進(jìn)行。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)—般按尸C7iVofoco/s:爿GWcfeMeAo^s^4/7/7//ca"ows(PCR規(guī)程方法和應(yīng)用指南)，AcademicPress,SanDiego,CA(1990)中所述進(jìn)行?；蚍中头椒ㄒ话闳缑绹?guó)專利4,666,828、4,683,202、4,801,531、5，192，659、和5,272,057以及McDowelletal.,顛A函在38(2):221-8(1995)中所描述。DNA制備:采用改良的鹽析方法(NucleonIITM，Scotlab，UK)從全血提取DNA?；蚍中虸L-1RN:之前已由Tarlow"a/.，i/w附aw91:403-4(1993)描述了與IL-1RN基因相關(guān)的等位基因。用于PCR的酶來自Promega(UK),熱循環(huán)儀來自MJResearchDNAEngine或Biometra。在ABIDNA合成4義中產(chǎn)生以下的引物5'CTCAGCAACACTCCTAT3'(SEQIDNo.1)5'TCCTGGTCTGCAGGTAA3'(SEQIDNo.2)在鎂終濃度1.75mM的情況下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，循環(huán)方案為1個(gè)循環(huán)的96。C1分鐘；30個(gè)循環(huán)的[94。C1分鐘、60。C1分鐘、以及70。Cl分鐘];以及1個(gè)循環(huán)的70。C2分鐘。PCR后，不同的等位基因在溴化乙啶染色的2%瓊脂糖凝膠上電泳，并在MV光下觀察和鑒定。每個(gè)試—驗(yàn)中都進(jìn)行沒有DNA的陰性對(duì)照。IL-1RN基因的內(nèi)含子2含有可變數(shù)量的串聯(lián)重復(fù)(VNTR)區(qū)，其產(chǎn)生如下的五(5)個(gè)等位基因,顯示412bp的PCR產(chǎn)物；，顯示240bp的PCR產(chǎn)物，顯示326bp的PCR產(chǎn)物.,顯示498bp的PCR產(chǎn)物；以及.,顯示584bp的PCR產(chǎn)物。等位基因l含有四個(gè)重復(fù):等位基因2含有兩個(gè)重復(fù)，等位基因3含有三個(gè)重復(fù):等位基因4含有五個(gè)重復(fù):等位基因5含有六個(gè)重復(fù):基因分型IL-1B(-511)diGiovine，//匿Mo/ec.G匿Z，1(6):450(1992)描述了IL陽1B的-511標(biāo)志物?；诘任换騦(C)上的^va/位點(diǎn)和等位基因2(T)上的5^36/位點(diǎn)鑒定IL-lB堿基-511處的單堿基變異(C/T)。以1個(gè)循環(huán)的95。C2分鐘、35個(gè)循環(huán)的[95。C1分鐘，53°C1分鐘和74°C1分鐘]和1個(gè)循環(huán)的74°C4分鐘進(jìn)行PCR。通過^vfl/和5s"36/在37°C下限制酶消化8小時(shí)以及隨后的8%PAGE大小分析對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析。在ABIDNA合成儀中產(chǎn)生以下的引物(Clarketal.,M/c/.及as.，14:7897-7914(1986)[出版錯(cuò)誤出現(xiàn)在M/c/e/cJcz'Aies.，15(2):868(1987)中];GENBANKX04500):5'TGGCATTGATCTGGTTCATC3'(國(guó)702/畫682)(SEQIDNo:5)5'GTTTAGGAATCTTCCCACTT3'(-417/-397)(SEQIDNo:6)結(jié)果:對(duì)于IL-1A(-889標(biāo)志物)、IL-1B(+3954標(biāo)志物)或TNFa(-308標(biāo)志物)，在對(duì)照和患病患者之間基因中不同等位基因的頻率無顯著差異。但是，與對(duì)照中22%相比，IL-1RN基因中VNTR標(biāo)志物的等位基因2在單支疾病患者中過度表現(xiàn)為41%。據(jù)估計(jì)，帶有至少一個(gè)拷貝的等位基因2的個(gè)體與對(duì)等位基因2陰性的個(gè)體相比，患有單支冠狀動(dòng)脈疾病的可能性大2.44倍(優(yōu)勢(shì)比=2.44、p=0.003、95%置信區(qū)間=1.35-4.43)。此外，具有兩拷貝，即IL-1RN中等位基因2純合，的個(gè)體與對(duì)等位基因2陰性的個(gè)體相比，具有單支冠狀動(dòng)脈疾病的可能性高5.36倍(優(yōu)勢(shì)比=5.36、p=0.005、95%置信區(qū)間=1.6-17.97)。與對(duì)照中38%相比，攜帶一個(gè)拷貝的IL-lB基因的-511標(biāo)志物的等位基因2在單支冠狀動(dòng)脈疾病中增加至52%。據(jù)估計(jì)具有至少一個(gè)拷貝的等位基因2的個(gè)體與對(duì)等位基因2陰性的個(gè)體相比，患有單支疾病的可能性是其1.74倍(優(yōu)勢(shì)比=1.74、p=0.1、95%置信區(qū)間=0.86-3.52)。這些發(fā)現(xiàn)表明IL-1RN基因的等位基因2為易于出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈閉塞疾病(表現(xiàn)為單支狹窄)的標(biāo)志。該等位基因與增加2.4至5.4倍的冠狀動(dòng)脈疾病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，這取決于存在一個(gè)拷貝的(雜合的)還是兩個(gè)拷貝的(純合的)疾病相關(guān)等位基因。該等位基因相對(duì)于其它普通風(fēng)險(xiǎn)因子對(duì)冠狀動(dòng)脈疾病風(fēng)險(xiǎn)的影響顯示在表1中。此外，發(fā)現(xiàn)IL-1B基因的等位基因與單支冠狀動(dòng)脈疾病相關(guān)。該等位基因與1.74倍冠狀動(dòng)脈疾病增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>實(shí)施例2:多支冠狀動(dòng)脈疾病的標(biāo)志物本項(xiàng)研究的目的是確定患有晚期或更彌散形式的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，即多支冠狀動(dòng)脈疾病，的患者是否更可能在IL-1基因簇或TNFa的基因內(nèi)具有特異等位基因?；颊呷航M:患者群組的確定如實(shí)施例1,只是通過肉眼觀察，一個(gè)以上的心外膜冠狀血管含有導(dǎo)致管腔直徑>50%減少的心外膜狹窄的患者被分類為具有多支疾病。在所研究的患者中，86名被分類為具有血管造影上正常的冠狀動(dòng)脈的對(duì)照，315名患者被發(fā)現(xiàn)具有多支冠狀動(dòng)脈疾病。對(duì)照和單支疾病組具有類似的年齡，分別為57.6±10.4歲和60.8±1.13歲。對(duì)照組中的男性與女性比例為1:1:7,患病組為3.7:1。一般方法:反應(yīng)和方法如實(shí)施例1。結(jié)果:對(duì)于IL-1A(-889標(biāo)志物)、IL-1B(+3954標(biāo)志物)、和IL-1RN(VNTR標(biāo)志物)，基因中不同等位基因的頻率在對(duì)照和患病患者中無顯著差異。但是，與對(duì)照中的38%相比，攜帶IL-lB基因的-511標(biāo)志物的5wM/等位基因(等位基因2)的一個(gè)拷貝在多支疾病患者中增加至54%。據(jù)估計(jì)具有至少一個(gè)拷貝的-511標(biāo)志物的等位基因2的個(gè)體與對(duì)等位基因2陰性的個(gè)體相比，患多支冠狀動(dòng)脈疾病的可能性是其1.92倍(優(yōu)勢(shì)比+1.92、p=0.009、95%置信區(qū)間=1.17-3.16)。在該群體中，至少對(duì)于-511標(biāo)志物而言看起來沒有劑量效應(yīng)。總之，IL-1B基因的等位基因被發(fā)現(xiàn)與多支冠狀動(dòng)脈疾病相關(guān)。該等位基因與1.92倍的冠狀動(dòng)脈疾病增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。單支和多支冠狀動(dòng)脈疾病每種看起來都與IL-1基因簇的不同基因相聯(lián)系。這可能作為真實(shí)的生物差異出現(xiàn)，其中IL-1RA如此調(diào)節(jié)IL-ljS作用使得產(chǎn)生單支表型?；蛘?，可能是這兩基因?qū)嶋H上作為整體與冠狀動(dòng)脈疾病相關(guān)，并且這里所觀察到的相關(guān)性是由這種特定群體表現(xiàn)冠狀動(dòng)脈疾病的方式所引起。無論哪種解釋，IL-1生物學(xué)和冠狀動(dòng)脈疾病的強(qiáng)相關(guān)性都已^皮確i^。實(shí)施例3:白介素-l基因變體與頸動(dòng)脈壁增厚的相關(guān)性在社區(qū)動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)(ARIC)研究的參與者中研究了頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層壁厚(IMT)與染色體2上白介素-1(IL-1)基因簇四個(gè)基本的雙等位基因標(biāo)志物(IL-lA(+4845)、IL-1B(+3954)、IL-1RN(+2018))的相關(guān)性，這些參與者為選自四個(gè)美國(guó)社區(qū)的年齡45-64歲的15,792名男性和女性群組。遠(yuǎn)側(cè)壁厚度通過B模式超聲測(cè)量，采用先驗(yàn)選擇的用于升高的平均IMT(Slmm)的切點(diǎn)分析以鑒定最高心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。在排除了具有心血管疾病史的那些后，對(duì)252名非洲裔美國(guó)人和924名高加索人分層的隨機(jī)樣本進(jìn)行基因分型。在非洲裔美國(guó)人中，IL-1RN(+2018)的少見等位基因(等位基因2)攜帶者比非攜帶者在調(diào)整了年齡、性別和研究中心的基本^^莫型中更可能具有平均IMTSImm(16%對(duì)5%p=0.04)。高加索人中，經(jīng)調(diào)整的具有升高IMT的個(gè)體比例也高于攜帶IL-1RN(+2018)等位基因2的那些(9%對(duì)6%)。但是這種差異不是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的(P二0.10)。IL-1A(+4845)、IL-1B(+3954)或IL-1B(-511)變體與任一民族的頸動(dòng)脈IMT之間沒有相關(guān)性。74實(shí)施例4:IL-1基因分型與斑塊形成和增加的斑塊易碎性相關(guān)IL-1受體拮抗劑基因和連鎖的IL-1B(-511)基因中的多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈中大(>50%血管閉塞)斑塊的存在以及頸動(dòng)脈壁中早期動(dòng)脈粥樣硬化變化緊密相關(guān)(ARIC數(shù)據(jù))。這些數(shù)據(jù)提示包括IL-1RN(+2018)等位基因2和/或IL-1B(-511)等位基因2的遺傳多態(tài)性模式預(yù)示大的閉塞性斑塊。某些IL-1基因型與諸如血栓形成和栓塞的臨床事件增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。我們主張，位點(diǎn)IL-lA(+4845)和IL-lB(+3954)之一或二者中的等位基因2預(yù)期會(huì)增加炎性反應(yīng)，因此增加斑塊易碎性和諸如血栓形成和栓塞的臨床事件的風(fēng)險(xiǎn)。這種風(fēng)險(xiǎn)在低水平膽固醇個(gè)體中最大，由于較高的水平預(yù)期會(huì)活化甚至IL-1野生型(例如，IL-1A(+4845)=1.1，IL-1B(+3954)=l.l)中的最大炎性反應(yīng)。我們主張與4交大閉塞斑塊相關(guān)的基因型即IL-1RN(+2018)等位基因2或IL-1B(-511)等位基因2會(huì)預(yù)示斑塊易碎性的較低風(fēng)險(xiǎn)。在縱向隨訪臨床事件(ARIC)的約15,000健康個(gè)體中，記錄了370血栓形成或栓塞事件。一組約900隨機(jī)分層的對(duì)照被選擇用于比較。IL-1A(+4845)和IL-1B(+3954)處的等位基因2影響易碎斑塊相關(guān)的臨床事件對(duì)于LDL<130的病例(n=535)IL-lA(+4845)基因型2.2:臨床事件優(yōu)勢(shì)比(OR+95%CI)=3.03(0.96-9.1);p=0.059對(duì)于總膽固醇<200的病例(n=425)IL國(guó)lA(+4845)基因型2.2:OR=6.25(1.69-20.00);p=0.006IL-lB(+3954)基因型1.2或2.2:OR=2.58(1.25-5.31);p=0.010IL-1RN(+2018)處的等位基因2與易碎斑塊相關(guān)臨床事件反相關(guān)，因此提示對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定作用對(duì)于所有病例(n4214)IL-1RN(+2018)基因型1.2或2.2:OR=0.65(0.43-0.96);p=0.031對(duì)于LDL〉160(n=343)IL-1RN(+2018)基因型1.2或2.2:OR=0.33(0,14-0.73);p=0.058對(duì)于總膽固醇>240(11=307)IL-1RN(+2018)基因型1.2或2.2:0R=0.28(0.11-0.68);p=0.054實(shí)施例5:與單倍型模式1一致的IL-1復(fù)合基因型與牙周炎相關(guān)，與單倍型模式2—致的IL-1基因型與閉塞性心血管疾病相關(guān)研究了牙周炎、心血管疾病和染色體2上白介素-l(IL-1)基因簇中的四個(gè)基本雙等位基因標(biāo)志物(IL-1A(+4845)、IL-1B(+3954)、IL-1B(-511)、和IL曙1RN(+2018))的相關(guān)性。由IL-1基因簇中四個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)可以定義兩種單倍型模式，如表2中所示(IL-1A(+4845)、IL-1B(+3954)、IL-lB(-511)、IL畫lRN(+2018))。一種模式包括IL-lA(+4845)處和IL-1B(+3954)位點(diǎn)處的等位基因2。另一種模式包括IL-1B(-511)處和IL-1RN(+2018)位點(diǎn)處的等位基因2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>該單倍型表明，當(dāng)在一個(gè)位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)等位基因2時(shí)，很可能在其它4立點(diǎn)也發(fā)現(xiàn)它。以前的凄t據(jù)(Coxetal.(1998)Am.J.Hum,Genet.62:1180-1188)表明，當(dāng)在IL-1A(+4845)位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)等位基因2時(shí)，在大約80%情況下等位基因2也可存在于IL-lB(+3954)位點(diǎn)。單倍型模式僅與染色體的單個(gè)拷貝相關(guān)。由于有兩拷貝的染色體2并且標(biāo)準(zhǔn)的基因分型方法不能鑒定在哪條染色體上發(fā)現(xiàn)了特定等位基因的拷貝，因此專門的統(tǒng)計(jì)學(xué)程序被用于從確定的基因型模式推斷單倍型模式。作為動(dòng)脈粥樣硬化研究(Pankowetal.(1999)TheARICstudy(ARIC研究).EuropeanAtherosclerosisSocietyAnnualMeeting(歐洲動(dòng)脈粥樣硬化協(xié)會(huì)年會(huì))，摘要，弁646)的一部分，在新群體中研究了這些遺傳才莫式的分布。在該群體(N-1,368)中，在10.2%的個(gè)體中發(fā)現(xiàn)了IL-lA(+4845)基因型2.2。但是，在基因型IL-1B(+3954)=2.2(N=95)的個(gè)體中，在71.6%的個(gè)體中發(fā)現(xiàn)IL-1A(+4845)基因型2.2。這表明IL-lA(+4845)處等位基因2與IL-1B(3954)處等位基因2以比考慮到這些標(biāo)志物的每一個(gè)在群體中的分布時(shí)所預(yù)期的高得多的比例一起遺傳。對(duì)于模式2特征性的2位點(diǎn)處的等位基因2而言，存在類似的數(shù)據(jù)。另外，當(dāng)基因型模式l被確認(rèn)時(shí)，極不可能的是，等位基因2存在于其它模式特征性的任何位點(diǎn)處。這兩種基因型模式還與白介素-1的功能生物學(xué)中的特定差異相關(guān)。例如，當(dāng)經(jīng)LPS刺激時(shí)來自在IL-lB(+3954)處具有一個(gè)或兩個(gè)拷貝的等位基因2的個(gè)體的外周單核細(xì)胞產(chǎn)生的IL-1口的量為來自具有基因型模式IL-1B(+3954)=1.1的個(gè)體的單核細(xì)胞的2至4倍。(DiGiovini,FSetal.(1995)Cytokine,7:606)。對(duì)于從患有嚴(yán)重牙周炎的個(gè)體中分離的外周血多形核白細(xì)胞，最近也報(bào)道了類似的數(shù)據(jù)(Gore,EAetal.(1998)J.Clin.Periodontal.,25:781)。此外，在IL-l口水平方面，來自具有表明模式1的復(fù)合基因型的個(gè)體的齦溝液(GCF)比來自對(duì)那些基因型陰性的個(gè)體的GCF高2至3倍(Engelbretson，SPetal.(1999)J.Periodontal.,出版中)。還有數(shù)據(jù)表明，對(duì)于模式2，IL-1RN+2018處的等位基因2與IL-1受體拮抗劑蛋白的減低的水平相關(guān)。因此，模式1基因型似乎與增加的IL-1激動(dòng)劑相關(guān)，而模式2似乎與降低水平的IL-1受體拮抗劑相關(guān)。與模式1一致的復(fù)合IL-l基因型與增加的嚴(yán)重成人牙周炎易感性相關(guān)(Kornman,KSetal,(1997)，上文；Gore,EAetal.(1998)，上文；McGuire,MKetal.(1999)J.Periodontal.，出版中；McDevitt，MJetal,(1999)J.Periodontal.,出版中)。IL-1基因型對(duì)牙周炎的一方面的影響看起來是增強(qiáng)特異細(xì)菌復(fù)合體(包括公認(rèn)的牙周病原體)的齦下水平(Socransky，SSetal.(1999)IADR年會(huì)，摘要#3600)。但是，模式1基因型不與增加的閉塞性心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。在來自Pankow和同事al.,上文)，將具有指示閉塞性心血管病癥的頸動(dòng)脈壁內(nèi)膜中層厚度(IMT)超聲測(cè)量的個(gè)體與IL-1基因多態(tài)性分層的隨機(jī)對(duì)照群進(jìn)行比較。IL-lA(+4845)和IL-1B(+3954)都沒有顯示出與高IMT風(fēng)險(xiǎn)的任何相關(guān)性。模式2特征性的基因型最近與增加的閉塞性冠狀動(dòng)脈疾病易感性相關(guān)，但是不與增加的牙周炎風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。在關(guān)于冠狀動(dòng)脈疾病的報(bào)告中，具有冠狀狹窄血管造影證據(jù)的患者顯著地更可能是IL-1RN(+2018)位點(diǎn)處或IL-1B(-511)位點(diǎn)處等位基因2攜帶者(參見Francisetal.，上文)。這兩個(gè)位點(diǎn)都是單倍型模式2特征性的。如上所述，在ARIC研究中，具有高IMT測(cè)量值的非洲裔美國(guó)人中對(duì)IL-1RN(+2018)等位基因2的攜帶顯著高于種族上相似的對(duì)照。在具有高IMT測(cè)量值的高加索人中在IL-1RN(+2018)處攜帶一個(gè)拷貝等位基因顯著高于對(duì)照，但是在該位點(diǎn)純合的個(gè)體與對(duì)照無差異。應(yīng)注意，這項(xiàng)研究中高加索人中對(duì)IL-1RN(+2018)處等位基因2純合的個(gè)體的患病率顯著低于在其它群體中所觀察到的。當(dāng)評(píng)估患有牙周炎以及齒齦健康的個(gè)體與模式1和模式2—致的基因型模式時(shí)，患有嚴(yán)重成人牙周炎的個(gè)體被發(fā)現(xiàn)具有顯著優(yōu)勢(shì)的與模式1一致的基因型，而具有健康牙周狀況的個(gè)體具有既無模式1又無模式2主導(dǎo)的基因型模式。因此看起來與單倍型模式1一致的IL-1基因型與嚴(yán)重牙周炎和斑塊易碎性病癥相關(guān)，不與閉塞性心血管疾病相關(guān)，而與單倍型模式2—致的IL-1基因型與閉塞性心血管疾病相關(guān)，但不與牙周炎或斑塊易碎性相關(guān)。一種可能的機(jī)制是，IL-1基因型模式1直接影響斑塊易碎性；另一可能的機(jī)制是模式1直接影響牙周炎，而其可能通過作為口腔慢性炎癥過程一部分而發(fā)現(xiàn)的牙周微生物間接影響到心血管疾病。另一種機(jī)制可能是IL-1基因型模式2直接影響心血管閉塞病癥，但是對(duì)牙周炎無影響。因此可能的是，IL-1遺傳多態(tài)性可影響心血管疾病和嚴(yán)重牙周炎，通過以相同方式直接改變兩種疾病中免疫炎性反應(yīng)的共同潛在機(jī)制和通過提高口腔細(xì)菌負(fù)載并隨后影響心血管疾病的間接機(jī)制進(jìn)行。與單倍型模式1一致的IL-1基因型可能在一部分群體中通過增大免疫炎性反應(yīng)和齦下細(xì)胞負(fù)載而影響牙周炎和心血管疾病的相關(guān)性。實(shí)施例5:Mayo診所研究研究設(shè)計(jì):18至75歲的在MayoClinic,Rochester,Minnesota進(jìn)行臨床上需要的冠狀動(dòng)脈血管造影的患者被考慮用于這項(xiàng)研究。如果患者具有需要治療的糖尿病、吸煙史〉50盒齡、在先或計(jì)劃的人器官移植、懷孕、在先經(jīng)皮或手術(shù)冠狀動(dòng)脈血管重建、活動(dòng)性出血或血紅蛋白低于8g/dL、在30天內(nèi)接受了輸血、血液動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定、人免疫缺陷病毒感染、需要透析的腎衰竭、以及胸部放射治療史，則它們不適于包括進(jìn)來。504名患者代表了〉90%的適合于這項(xiàng)研究的患者，它們?cè)谠撈陂g經(jīng)歷了冠狀動(dòng)脈血管造影。血管造影分析:采用手持測(cè)徑器或視覺分析來分析冠狀動(dòng)脈血管造影照片，將它們分類為揭示正常冠狀動(dòng)脈(平滑動(dòng)脈沒有狹窄或狹窄40%)、輕纟效疾病(冠狀動(dòng)脈管腔直徑減小10%至50%)、單支疾病(單個(gè)冠狀動(dòng)脈或其主要分支中20%)、雙支冠狀動(dòng)脈疾病(兩個(gè)冠狀動(dòng)脈中管腔直徑狹窄30%)、以及三支疾病(三個(gè)冠狀動(dòng)脈中管腔直徑狹窄30%)。分析血管造影照片時(shí)對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)因子和遺傳分析是不知情的。實(shí)驗(yàn)室分析:載脂蛋白A。栽脂蛋白B、Lp(a)和纖維蛋白原測(cè)定在COBASMIRA系統(tǒng)上進(jìn)行。這些測(cè)定的正常范圍為載脂蛋白Al，115-190mg/dL;載脂蛋白B,70-160mg/dL;Lp(a),2.5-7.0mg/dL;纖維蛋白原的正常范圍還未被報(bào)道。測(cè)定了總血漿高半胱氨酸。定義:如果不吸煙或不具有糖尿病的患者一級(jí)親屬在年齡S5歲出現(xiàn)了冠狀動(dòng)月永疾病則i人為存在冠狀動(dòng)樂:K疾病家力臭史。高血脂癥定義為總膽固醇250mg/dL或LDL250mg/dL,或者在治療前脂值未知的患者中正接受降脂劑治療。分別根據(jù)加拿大心臟協(xié)會(huì)和紐約州分類方案對(duì)絞痛和心力衰竭分類。統(tǒng)計(jì)方法:值表達(dá)為百分比和均值+1標(biāo)準(zhǔn)差。對(duì)于優(yōu)勢(shì)比，將95%置信區(qū)間表示在括號(hào)中。在確定冠狀動(dòng)樂:K疾病關(guān)聯(lián)性的初步分析中，首先進(jìn)行卡方枱、驗(yàn)和單因子方差分析以4企-驗(yàn)在無疾病、輕樣(疾病、單支疾病、雙支疾病和三支疾病患者中各種常規(guī)和顯現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)因子、以及IL-1簇基因中等位基因變體的相關(guān)性。接著對(duì)冠狀動(dòng)脈疾病重新分類以將無疾病或輕微疾病患者與單支、雙支或三支狹窄患者進(jìn)行比較。具有一定程度的堵塞但是冠狀狹窄<50%的.患者被認(rèn)為具有輕微冠狀疾病并與沒有堵塞(無疾病)患者一起分組，而在單個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)冠狀動(dòng)脈中狹窄30%的患者被一起分類用于進(jìn)一步的研究，因?yàn)檫@些患者被認(rèn)為具有顯著程度的冠狀動(dòng)脈疾狹窄。趨勢(shì)精確檢驗(yàn)被用于在具有多態(tài)性的患者群中檢驗(yàn)趨勢(shì)。根據(jù)四分位數(shù)和三分位數(shù)以logistic回歸才莫型擬合各種風(fēng)險(xiǎn)因子，給出報(bào)道的關(guān)于增加四分位數(shù)和三分位數(shù)水平的優(yōu)勢(shì)比。為了進(jìn)一步分析IL-1簇基因的等位基因變體與冠狀動(dòng)脈疾病的相關(guān)性，以多重logistic回歸模型擬合，將統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的混雜因子包括到每個(gè)模型中。所有的常規(guī)和顯現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)因子都被考慮包括進(jìn)該模型中，并且該模型以分步方式擬合以獲得最佳的擬合模型，其中所有的包括在該模型中的因子都是統(tǒng)計(jì)上顯著的。此外，可能的效應(yīng)修飾因素也被考慮包括進(jìn)該才莫型中。對(duì)該多重logistic回歸才莫型的反應(yīng)是存在或不存在以上定義的顯著冠狀動(dòng)脈狹窄。除了分析包括在該項(xiàng)研究中的所有個(gè)體，還分別在S60歲的個(gè)體和>60歲的個(gè)體上進(jìn)行了進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)分析。該基于年齡的分析被認(rèn)為是合理的，因?yàn)槟挲g已被證實(shí)是冠狀動(dòng)脈疾病的強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)因子，并且據(jù)信因?yàn)槎嘁蜃硬≈械倪z傳影響在早期發(fā)作病例中是最明顯的。另外,由于上位性可能決定遺傳影響在男性和女性有不同的結(jié)果，所以基于性別的亞分析也被認(rèn)為是重要的，在一些分析中男性和女性分別處理。實(shí)施例6:Munich研究方法患者本研究包括1850連續(xù)高加索患者，這些患者具有有癥狀的冠狀動(dòng)脈疾病并在DeutschesHerzzentrumMtinchen和1.MedizinischeKlinikrechtsderIsarderTechnischenUniversitatMtinchen接受了冠狀支架移植。所有的患者都預(yù)訂在第6月血管造影隨訪。所有參與這項(xiàng)研究的患者都給出關(guān)于介入、血管造影隨訪和基因型確定的書面知情同意書。本研究方案符合赫爾辛基宣言，并經(jīng)倫理委員會(huì)同意。表1.基線臨床特征IL-1RN1/2或2/2IL-1RN1/1P(n=896)(n=954)年齡-歲63.4±10.062.6±10.00.11女性-%22.419.90.19動(dòng)樂jt高血壓-%67.268.90.44糖尿病-%22.719.40.08現(xiàn)在或以前吸煙-%38.741.20.28升高的總膽固醇-%42.543.10.81急性心塞-%20.320.20,97不穩(wěn)定絞痛-%27.927.80.95之前的分流術(shù)-%10.611.50.53減少的左心室功能-%31.327.70.09患病冠狀血管的數(shù)量0.39-1支-%29.227.3-2支-%32.931.9-3支-%37.840.9手術(shù)附近阿昔單抗治療-%19.819.60.93數(shù)據(jù)為比例或均值SD支架放置和支架后治療的方案對(duì)本領(lǐng)域從業(yè)者來說是熟悉的。大多數(shù)的支架手動(dòng)移植到常規(guī)的血管成形術(shù)氣球上。術(shù)后治療由阿司匹林(IOOmg，每天兩次，不限期地)和p塞氯匹定(250mg,每天兩次，持續(xù)四周)構(gòu)成。支架移植后由于殘留血栓或流量損害性切割導(dǎo)致結(jié)果不是最滿意的患者接受另外的治療，在支架插入操作中以單次快速靜脈注射給予阿昔單抗并在這之后進(jìn)行12小時(shí)的連續(xù)輸注。給予阿昔單抗的決定由手術(shù)員判斷作出。確定IL-1RN基因型用QIAampBloodKit(QIAamp血液試劑盒)(Qiagen，Hilden，Germany)和HighPurePCRTemplatePreparationKit(高純PCR才莫4反制備i式劑盒)(BoehringerMannheim,Mannheim,Germany),人200ml的夕卜周血白細(xì)胞提取基因組DNA。IL國(guó)1RN基因分型采用ABIPrismSequenceDetectionSystem(ABI棱鏡序列才企測(cè)系統(tǒng))(PEAppliedBiosystems,Weiterstadt,Germany)進(jìn)行。在5'核酸酶反應(yīng)中使用等位基因特異的熒光探針將DNA擴(kuò)增和基因型測(cè)定合并為單一測(cè)定33。外顯子2中單堿基對(duì)多態(tài)性IL-1RN(+2018)為這項(xiàng)研究26中分型的多態(tài)性。引物和探針的核苷酸序列如下正向引物5'GGGATGTTAACCAGAAGACCTTCTATCT3',反向引物5'CAACCACTCACCTTCTAAATTGACATT3'，等位基因1探針5'AACAACCAACTAGTTGCTGGATACTTGCAA3',等位基因2探針5'ACAACCAACTAGTTGCCGGATACTTGC3'。等位基因1的探針被熒光染料6-羧基-熒光素(FAM)標(biāo)記，等位基因2的探針被熒光染料四氯-6-羧基-熒光素(TET)在5'端標(biāo)記。兩探針都在它們的3'端被淬滅劑6-羧基-四曱基-若丹明(TAMRA)標(biāo)記。熱循環(huán)方案由40循環(huán)的95°C15秒變性和64°C1分鐘的退火/延伸組成。通過采用具有新個(gè)體碼的雙份DNA樣品重復(fù)20%患者中測(cè)定，來進(jìn)行基因型確認(rèn)，其中該新個(gè)體碼與原始個(gè)體碼無關(guān)。兩種結(jié)果間為100%—致。血管造影評(píng)估根據(jù)改良的美國(guó)心臟病學(xué)學(xué)院/美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)分級(jí)系統(tǒng)將冠狀病變分類。采用7段劃分基于雙相血管造影定性評(píng)估左心室功能；在反差血管造影存在至少兩運(yùn)動(dòng)功能減弱段時(shí)確立對(duì)左心室功能減弱的診斷。定量的計(jì)算機(jī)輔助血管造影分析在放置支架前不久、放置支架后立即、以及在隨訪時(shí)獲得的血管造影照片上離線進(jìn)行，采用自動(dòng)的邊纟彖4企測(cè)系統(tǒng)CMS(MedisMedicalImagingSystems,Nuenen，TheNetherlands)。操作者未知患者的IL-1RN基因型。靶病變的相同投影被用于所有的評(píng)估的血管造影照片。最小內(nèi)腔直徑、內(nèi)插參考直徑、直徑狹窄、病變長(zhǎng)度和最大膨脹氣球直徑為通過這種分析系統(tǒng)獲得的血管造影參數(shù)。即刻管腔獲得(acutelumengain)^皮計(jì)算為介入終止時(shí)最小管腔直徑與介入前最小管腔直徑的差值。晚期管腔丟失(latelumenloss)被計(jì)算為介入終止時(shí)最小管腔直徑與血管造影隨訪時(shí)最小管腔直徑的差值。丟失指數(shù)計(jì)算為晚期管腔丟失與即刻管腔獲得的比例。定義和研究終點(diǎn)這項(xiàng)研究的主要終點(diǎn)是再狹窄。對(duì)再狹窄的兩測(cè)量值進(jìn)行評(píng)估定義為6個(gè)月隨訪血管造影時(shí)50%的直徑狹窄的血管造影再狹窄的發(fā)病率，和在插入一年后支架位點(diǎn)處存在血管造影再狹窄的情況下由于局部缺血癥狀或體征而需要耙血管重建(PTCA或主動(dòng)脈冠狀動(dòng)脈分流術(shù)[CABG])。所評(píng)估的其它主要不利事件為任何原因的死亡和心肌梗塞。所有的死亡都被認(rèn)為是由于心臟原因，除非尸檢證明為非心臟原因。對(duì)急性心肌梗塞的診斷是基于應(yīng)用在EPISTENT試驗(yàn)(新病理學(xué)Q波或肌酸激酶[CK]值或其MB異構(gòu)酶為上限的至少3倍)35中的標(biāo)準(zhǔn)。在支架植入才喿作48小時(shí)以后對(duì)CK進(jìn)行系統(tǒng)測(cè)定。在1年隨訪期內(nèi)一直檢測(cè)臨床事件。該評(píng)估基于醫(yī)院再入院記錄、咨詢醫(yī)生或電話詢問患者提供的信息。對(duì)于在詢問期間顯示了心臟癥狀的那些患者，在門診部或由咨詢醫(yī)生進(jìn)行至少1種臨床和心電圖沖企查。統(tǒng)計(jì)分析離散變量表達(dá)為數(shù)量或百分比，并在需要時(shí)與卡方或Fisher精確檢驗(yàn)比較。連續(xù)變量表達(dá)為均值SD,并通過未配對(duì)、雙側(cè)t檢驗(yàn)方法或針對(duì)2組以上的方差分析進(jìn)行比較。通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)比和95%置信區(qū)間進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。主要分析在于比較組合的雜合和純合IL-11RN*2等位基因攜帶者與純合IL-11RN"等位基因攜帶者。此外，在包括那些臨床和病變相關(guān)特征的多變量logistic回歸模型中評(píng)估IL-1RN基因型和再狹窄之間的相關(guān)性，對(duì)此IL-1RN*2等位基因攜帶者和非攜帶者之間的比較顯示了0.30的P值。在此多變量模型中，我們檢驗(yàn)了IL-1RN基因型與年齡之間可能的相互作用。由于遺傳因素對(duì)多因子過程如再狹窄的有關(guān)貢獻(xiàn)可能隨年齡降低，因此我們對(duì)<60歲的預(yù)先指定的患者亞組進(jìn)行了另外的分析。接著，我們使用趨勢(shì)檢驗(yàn)評(píng)估了基因劑量效應(yīng)，即隨著O、1、或2個(gè)推定等位基因的存在逐步增加的表型反應(yīng)。對(duì)P值0.05接受為統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的。結(jié)果患者特征在研究群體中所觀察的IL-1RN基因型在954中為1/1(51.6%),在742中為1/2(40.1%),在154中為2/2(8.3%)。因此，等位基因2的頻率為0.28。所觀察到的分布與Hardy-Weinberg平衡相符。患者的主要基線特征列在表1中，并比較了IL-1RN*2等位基因的攜帶者和非攜帶者。在IL-1RN*2等位基因攜帶者中存在更高頻率糖尿病和減弱的左心室功能的趨勢(shì)。其它的特征在2組間均勻分布。介入時(shí)血管造影和程序特征列在表2中，顯示IL-1RN*2等位基因攜帶者和非攜帶者之間無顯著差異。表2.介入時(shí)血管造影和程序特征IL-1RN1/2或2/2IL陽1RN1/1P(n=896)(n=954)輩巴冠狀血管0.89左主動(dòng)1^-%1.31.6LAD-%40.139.3LCx-%19.920.0RCA-%32.631.9靜脈分流移植-%6.17.2復(fù)雜病變-%75.274.10.58再狹窄病變-%25.323.30.30植入支架前參照直徑，mm3.02±0.533.05±0.540.29直徑狹窄-%79.1±14.978.7±15.70.57病變長(zhǎng)度-mm12.1±6.912.1±6.60.98程序數(shù)據(jù)測(cè)量的氣J求直徑-mm3.2±0.53.2±50.45最大氣球壓力-atm13.9±3.313.8±3.20.20支架植入段長(zhǎng)度-mm20.0±14.320.3±13.60.70支架植入后不久直徑狹窄-%5.2±9.15.4±7.60.47數(shù)據(jù)為比例或均值SDLAD表示冠狀動(dòng)I^左前降支；LCx,冠狀動(dòng)樂K左;5走支；RCA，右冠狀動(dòng)脈；根據(jù)美國(guó)心臟病學(xué)院/美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)分級(jí)系統(tǒng)，將復(fù)雜病變定義為ACC/AHA病變類型B2和C。IL-lra多態(tài)性，才直入支架后的死亡率和心肌梗塞表3顯示了IL-1RN*2等位基因的攜帶者和非攜帶者在冠狀支架植入后的第一個(gè)30天內(nèi)觀察到的不利臨床事件。IL-1RN*2等位基因的存在和死亡、心肌梗塞或靶血管重建之間沒有相關(guān)性，顯示在所述風(fēng)險(xiǎn)中IL-lra基因中該多態(tài)性對(duì)冠狀支架植入后早期血栓形成事件無顯著影響。表3.在最早30天期間記錄的不利事件的發(fā)生率IL-1RN1/2或2/2IL-1RN1/1P(n=8%)(n=954)死亡-%0.90.90.91非致命心肌梗塞-%3.32.60.52-Q波-%1.10.70.39-無Q波-%2.21.90。60輩巴血管重建-%3.02.30.341年的隨訪也表明IL-1RN*2等位基因的存在和介入后死亡率或心肌梗塞發(fā)病率之間沒有相關(guān)性。1年的隨訪期間，IL-1RN1/2和IL-1RN2/2患者的合并組中死亡率為2.8%,IL-11/1患者中為2.2%(P=0.42)，產(chǎn)生1.28的優(yōu)勢(shì)比(95%置信區(qū)間，0.71-2.29)。IL-1RN*2等位基因攜帶者中非致命心肌梗塞的發(fā)病率為3.5%,在IL-1RN*1等位基因純合攜帶者中為3.9%(P=0.54)，對(duì)應(yīng)的優(yōu)勢(shì)比為0.86(0.53-1.4)。IL-lra多態(tài)性和支架植入后再狹窄在中值188天后在84%患者中進(jìn)行對(duì)照血管造影(四分位數(shù)間距，171-205天)。具有對(duì)照血管造影的患者比例在通過是否存在IL-1RN*2等位基因而定義的兩組中類似。表4列出了對(duì)6月血管造影照片定量評(píng)估的結(jié)果。表4.血管造影隨訪結(jié)果IL-1RN1/2或2/2(n=758)IL-1RN1/1(n=798)P晚期管腔丟失-mm1.160.821.240.860.07丟失指數(shù)0.530.380.590.450.009直徑狹窄-%41.826.245.228.70.015再狹窄率-%30.235.60.024數(shù)據(jù)為比例或均值SD值得注意的是，反映支架植入后增生反應(yīng)的丟失指數(shù)在攜帶IL-1RN*2等位基因的患者中顯著較低。與IL-1RN1/l基因型患者中35.6%相比，IL-1RN*2等位基因攜帶者中血管造影再狹窄的發(fā)病率也顯著較低，為30.2%。因此，IL-1RN*2等位基因的存在與再狹窄率22%降低(優(yōu)勢(shì)比，0.78)相關(guān)。與IL-1RN*1等位基因純合患者中22.7。/。(P-0.026)相比，表現(xiàn)為需要靶血管重建的臨床再狹窄也在IL-1R^^2等位基因攜帶者中顯著較低，為17.7%,產(chǎn)生0.73的優(yōu)勢(shì)比(0.58-0.92)。與IL-1RN*2等位基因的存在與否一起，年齡、性別、是否存在糖尿病、吸煙習(xí)慣、減弱的左心室功能和再狹窄病變、血管大小(所有變量在單變量分析中相差P值0.30)進(jìn)入關(guān)于血管造影再狹窄的多變量模型。較高年齡(P-0.005)、存在糖尿病(PO.OOl)、再狹窄病變(P<0.001)和小血管大小(PO.001)獨(dú)立地與再狹窄增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。與此相反，IL-1RN*2等位基因的存在獨(dú)立地(P〈0.001)與降低的再狹窄風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，調(diào)整的優(yōu)勢(shì)比為0.81(0.71-0.92)。另外，IL-1RN承2等位基因的存在和年齡之間存在顯著相互作用(P-0.009)，正如該等位基因在年輕患者中逐漸增加的強(qiáng)保護(hù)作用所反映的。在<60歲的預(yù)先指定的患者亞組(11=696)中分析的結(jié)果顯示在表5中。在l年的隨訪期間，17.1%的IL-lR!SP2等位基因攜帶者和24.9n/()的純合IL-1RN*1等位基因攜帶者需要靶血管重建(P二0.013)。因此IL-1RN*2等位基因的存在與對(duì)局部缺血驅(qū)動(dòng)的再介入的需要降低37%相關(guān)(優(yōu)勢(shì)比:0.63)。在6個(gè)月時(shí)對(duì)照研究獲得的定量相關(guān)造影數(shù)據(jù)(在590或85%的<60歲患者中進(jìn)行的)顯示在表5中。表5.<60歲患者中血管造影隨訪結(jié)果IL-1RN1/2或2/2(n=273)IL-1RNl/l(n=317)P晚期管腔丟失-mm1.080.771.270.930.008丟失指數(shù)0.490.350.590.480.003直徑狹窄陽％39.324.146.730.50.001再狹窄率-%25.638.5<0.001數(shù)據(jù)為比例或均值SD在IL-1RN1/2和IL-1RN2/2的合并組中血管造影再狹窄的發(fā)病率為25.6%，而在IL-1RN1/1患者中為38.5%(P<0.001),其對(duì)應(yīng)于45%減少(優(yōu)勢(shì)比0.55)。再狹窄發(fā)病率隨IL-1RN*2等位基因的雜合和純合逐步減小。血管造影再狹窄的比例在IL-1RN1/1患者中為38.5%,在IL-1RN1/2患者中為26.3%，在IL-1RN2/2患者中為22.4%(P=0.001，趨勢(shì)檢驗(yàn))。耙血管重建比例在IL-IRN1/1患者中為24.9%,在IL-IRN1/2患者中為17.9%,在IL-IRN2/2患者中為13.2%(P=0.01，趨勢(shì)檢驗(yàn))。實(shí)施例7.復(fù)合IL-l基因型與心血管疾病素因的相關(guān)性進(jìn)行了關(guān)聯(lián)IL-l復(fù)合基因型與炎性介質(zhì)表達(dá)以及不利心臟事件風(fēng)險(xiǎn)的研究。所鑒定的是復(fù)合基因型和它們與增加的、或者相反減小的、心血管疾病素因風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。還鑒定的是種族群體中該基因型的流行率。IL-1基因簇復(fù)合基因型可用于區(qū)別在環(huán)境挑戰(zhàn)如LDL("壞")膽固醇存在下個(gè)體炎性因子的表達(dá)，這樣通過鑒定心臟疾病遺傳風(fēng)險(xiǎn)幫助個(gè)體保持心臟健康并使得能作出個(gè)性化的健康決定(如營(yíng)養(yǎng)和生活方式)來保持心臟健康。從臨床研究獲得數(shù)據(jù)，其評(píng)估了IL-1基因簇遺傳變異與生化或臨床結(jié)果之間的相關(guān)性，并且數(shù)據(jù)支持了IL-1遺傳變異對(duì)生物學(xué)/分子機(jī)制、疾病/臨床結(jié)果相關(guān)性、以及對(duì)抗炎補(bǔ)加物的反應(yīng)的影響，如通過生物標(biāo)志物變化或疾病風(fēng)險(xiǎn)所衡量的。表7-1提供了高加索和亞洲(這里，韓國(guó)人)群體中主要IL-1單倍型。提供在表7-2中的數(shù)據(jù)表明具有三個(gè)不同復(fù)合基因型模式之一的個(gè)體會(huì)被分類為對(duì)炎癥過度表達(dá)和CVD增加的風(fēng)險(xiǎn)的IL-1基因型"陽性"，而具有兩個(gè)不同復(fù)合基因型模式之一的個(gè)體會(huì)被分類為對(duì)炎癥過度表達(dá)和CVD降低的風(fēng)險(xiǎn)的IL-1基因型"陰性"。表7-3提供了顯示在表7-2中的風(fēng)險(xiǎn)模式分種族流行率。表7-l:主要IL-1單倍型<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>表7-2:與增加的或降低的CVD風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的IL-1復(fù)合基因型<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>表7-3風(fēng)險(xiǎn)模式分種族流行率<table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table>增加的炎性介質(zhì)與復(fù)合基因型模式的相關(guān)性與心血管疾病增加的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。進(jìn)行了DARIC(社區(qū)牙齒動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn))研究以證實(shí)在較小年齡CVD和首次心臟病發(fā)作的增加的風(fēng)險(xiǎn)與IL-ljS和CRP生物標(biāo)志物增加的表達(dá)之間的相關(guān)性。復(fù)合基因型la模式與GCFIL-ljS32%的增加^=0.01)和血清中CRP24%的增加&=0.087)相關(guān)。復(fù)合基因型lb模式與GCF28%的增加相關(guān)&=0.02)，但是與血清中CRP增加的水平不顯著相關(guān)。復(fù)合基因型lc模式與GCFIL-l/3增加的水平不顯著相關(guān)，但是與血清中CRP54。/o的增加相關(guān)(p二0.01)。另一研究產(chǎn)生了類似的結(jié)果，顯示模式la與血清中CRP81%的增加相關(guān)&=0.0001),才莫式lb與血清中增加的CRP不顯著相關(guān)，才莫式lc與血清中CRP32。/。的增加相關(guān)(p^.04)。涉及IL-1基因變異和炎性介質(zhì)的另外的研究描述在表7-4中。表7-4:IL-1基因變異和炎性介質(zhì)概述<table>tableseeoriginaldocumentpage91</column></row><table>注1.這項(xiàng)研究中的個(gè)體具有所列出的狀況注2PMBC為外周血單核細(xì)胞表7_4參考文獻(xiàn)1.Iacoviello&a/.^Wen-osc/erT7^om6J^wc5z'o/2005;25:222-227.2.Hall&a/.爿W/nto臉謂2004;50(6):1976-1983,3.Berger&a/.Cy威we.2002;17:171-174.4.Eklund"a/.浙C,hwe淑w2003Jul-Sep;14(3):168-171.5.Latkovskisefa/.五wrJ7mmwwogeweZ2004;31(5):207-213.尤其關(guān)注的是Iacoviello研究，其證實(shí)IL-1B(-511)l.l基因型與在較小年齡增加的MI風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)(對(duì)于男性<45歲，對(duì)于女性<50歲(OR隱2.2))。此外，IL-1B(-511)1.2基因型與在較小年齡增加的MI風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)(對(duì)于男性<45歲，對(duì)于女性<50歲(011=1.8))。還關(guān)注的是在Mayo診所進(jìn)行的研究，其發(fā)現(xiàn)患有冠狀動(dòng)脈疾病的個(gè)體比那些無疾病個(gè)體有更大的MI風(fēng)險(xiǎn)，患有多支疾病(MVD)的那些患者比患有單支疾病(SVD)的那些患者有更大MI風(fēng)險(xiǎn)，以及，與冠狀動(dòng)脈疾病的程度無關(guān)，那些在IL-1A+4845和IL-1B+3954處對(duì)CVD基因型陽性(與模式la和lc一致)的個(gè)體與那些檢驗(yàn)為陰性的個(gè)體相比有增加的MI風(fēng)險(xiǎn)。該Mayo研究還發(fā)現(xiàn)，IL-1A+4845和IL-1B+3954處CVD基因型陽性(與模式la和lc一致)還與心導(dǎo)管插入術(shù)時(shí)較小年齡(小2歲)和出現(xiàn)典型和非典型胸痛時(shí)較小年齡(小2歲)相關(guān)。最后，這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)CVD測(cè)試陽性(即風(fēng)險(xiǎn)模式la，lb或lc)的患有冠狀動(dòng)脈疾病的個(gè)體而言，與有記錄的較早心臟病發(fā)作增加的風(fēng)險(xiǎn)存在顯著相關(guān)性。也確定了CVD模式與心肌梗塞的相關(guān)性，提供在以下表7-5中。表7-5:CVD模式1與心臟病發(fā)作的相關(guān)性<table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table>實(shí)施例8.復(fù)合IL-1基因型與韓國(guó)人心血管疾病素因的相關(guān)性進(jìn)行了關(guān)聯(lián)存在于韓國(guó)人中的IL-1復(fù)合基因型與炎性介質(zhì)表達(dá)和不利心臟事件風(fēng)險(xiǎn)的研究。所鑒定的是新遺傳標(biāo)志物IL-1B(+3877)等位基因，以及包括2拷貝的IL-lB(+3877)等位基因1、1拷貝的IL-1B(-511)等位基因1和l拷貝的IL-1B(-511)等位基因2的復(fù)合基因型。表8-1顯示了與CVD相關(guān)的IL-1基因型模式以及這些等位基因與其它IL-1基因簇等位基因之間的相關(guān)性<table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table>(1)高加索人中的標(biāo)志物包括IL-lA(+4845)等位基因2加上IL-lB(+3954)等位基因2;亞洲人(例如韓國(guó)人)中的標(biāo)志物包括IL-1B(十3877)1.1。("IL-1B啟動(dòng)子中功能性單倍型標(biāo)志物，包括IL-1B(-511)。對(duì)高加索人和韓國(guó)人男性個(gè)體比較進(jìn)行了研究。樣本群體如下n=133個(gè)體，CAD+,患有MI(大部分《55歲)；n=169CAD+,無MI(大部分<55歲)；以及11=302對(duì)照。平均年齡為54歲。C反應(yīng)性蛋白(CRP)測(cè)量如下。三等分分布如下<0.37;0.37-1.08;>1.08mg/l。在12%群組中發(fā)現(xiàn)CRP>3mg/l。CRP水平與CVD相關(guān)基因型相關(guān)，如表8-2中所顯示的。如同表8-1中所示，高加索人中的標(biāo)志物包括IL-1A(+4845)等位基因2加上IL-1B(+3954)等位基因2;亞洲人(例如韓國(guó)人)中的標(biāo)志物包括IL-1B(+3877)1.1。IL-1B啟動(dòng)子中功能性單倍型的標(biāo)志物包括IL-1B(-511)。表8-2模式<table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table>CVD相關(guān)基因型的相對(duì)分布提供在表8-3中。如同表8-1,高加索人中的標(biāo)志物包括IL-lA(+4845)等位基因2加上IL-1B(+3954)等位基因2;亞洲人(例如韓國(guó)人)中的標(biāo)志物包括IL-1B(+38T7)1.1。<table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table>(l)表示在諸如oxPL的挑戰(zhàn)存在下增加的冠狀動(dòng)脈疾病風(fēng)險(xiǎn)；(2)表示不存在諸如oxPL的4兆戰(zhàn)下增加的冠狀動(dòng)脈疾病風(fēng)險(xiǎn)。這項(xiàng)研究中，將患有心肌梗塞(MI)的個(gè)體與對(duì)照個(gè)體比較。存在133CAD+MI+和302對(duì)照；數(shù)據(jù)針對(duì)年齡、BMI和吸煙而進(jìn)行調(diào)整。確定指示MI風(fēng)險(xiǎn)的基因型模式包含兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式ld;p-O.Ol)。另一指示MI風(fēng)險(xiǎn)的基因型模式包含IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式lc;p=0.09)。在進(jìn)一步的分析中，將年齡較小(55歲或更小)的患有MI的個(gè)體與年齡較大(56歲或更高)的對(duì)照進(jìn)行比較。有97個(gè)S5歲發(fā)作的CAD十MI+個(gè)體，132對(duì)照，年齡56歲或更高。針對(duì)BMI和吸煙調(diào)整數(shù)據(jù)。確定指示MI風(fēng)險(xiǎn)的基因型模式包含兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式Id;p=0.01)。另一指示MI風(fēng)險(xiǎn)的基因型模式包含IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-IB(+3877)等位基因1(模式lc;p=0.05)。另外，將患有MI的個(gè)體與非MI對(duì)照進(jìn)行了比較。有133MI陽性個(gè)體和169MI陰性個(gè)體。通常，MI陰性個(gè)體年齡較大、較輕并具有更高的酒精攝入。針對(duì)年齡、BMI、吸煙和治療血清脂質(zhì)水平的藥物調(diào)整了數(shù)據(jù)。確定指示MI風(fēng)險(xiǎn)的基因型模式包含兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1和IL-lB(+3877)等位基因2(模式lb;p=0.15)。指示MI風(fēng)險(xiǎn)的另一基因型模式包含IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式lc;p=0.02)。指示MI風(fēng)險(xiǎn)的另一基因型模式包含兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式Id;p=0.02)。在進(jìn)一步的分析中，將年齡55歲或更小的患有CAD和MI的個(gè)體與患有CAD但沒有MI的對(duì)照進(jìn)行了比較。有77MI+個(gè)體和79MI-個(gè)體。MI陰性個(gè)體趨于年齡更大、更輕和具有更高的酒精攝入。針對(duì)BMI、吸煙和HDL含量調(diào)整了數(shù)據(jù)。確定指示MI風(fēng)險(xiǎn)的基因型模式含有兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1和IL-1B(+3877)等位基因2(模式lb;p=0.04)。指示MI風(fēng)險(xiǎn)的另一基因型才莫式包含IL-IB(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式lc;p^.01)。指示MI風(fēng)險(xiǎn)的另一基因型模式包括兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1(模式ld;p=0.02)。該研究的另一方面比較了HDL水平和MI風(fēng)險(xiǎn)。有156名年齡55歲或更小的患有CAD的個(gè)體。確定HDL^40mg/dl的個(gè)體中，無相關(guān)IL-1MI風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于HDL〉40mg/dl的個(gè)體(11=95)，觀察到以下的MI風(fēng)險(xiǎn)模式。模式lb(p=0.05)、模式lc(p=0.04)和模式Id(p=0.02)。另外，在健康對(duì)照個(gè)體中測(cè)定了CRP水平。分析了平均年齡54歲的302名個(gè)體。CRP三等分如下<0.37;0.37-1.08;>1.08mg/l。發(fā)現(xiàn)12%的群組具有CRP水平S3mg/1。包含兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1的基因型與CRP40%的增加相關(guān)^=0.03)。該結(jié)果證實(shí)了IL-1B(-511)的所有基因型組合。權(quán)利要求1.確定個(gè)體的心血管疾病素因的方法，包括檢測(cè)選自以下的模式a)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1、兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1、IL-1B(+3954)等位基因2、以及IL-1A(+4845)等位基因2；以及b)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1、兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及兩拷貝的IL-1A(+4845)等位基因1，其中所述模式的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述個(gè)體具有增加的IL-l/3和C反應(yīng)性蛋白表達(dá)。3.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述個(gè)體有增加的患心肌梗塞的風(fēng)險(xiǎn)。4.確定個(gè)體的心血管疾病素因的方法，包括4企測(cè)選自以下的模式a)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1、IL-lB(+3877)等位基因2、IL-lB(+3954)等位基因2、以及兩拷貝的IL-1A(+4845)等位基因1;b)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1、IL-lB(+3877)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及IL-1A(+4845)等位基因2;以及c)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1、IL-lB(+3877)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及兩拷貝的IL-lA(+4845)等位基因1,其中所述模式的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述個(gè)體具有增強(qiáng)的IL-ljS表達(dá)。6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述個(gè)體有增加的患心肌梗塞的風(fēng)險(xiǎn)。7.確定個(gè)體的心血管疾病素因的方法，包括4企測(cè)選自以下的模式a)IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-lB(+3877)等位基因1、IL-lB(+3954)等位基因2、以及IL-1A(+4845)等位基因2;b)IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及IL-lA(+4845)等位基因2;c)IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1、IL-1B(+3954)等位基因2、兩拷貝的IL-1A(+4845)等位基因1;以及d)IL-1B(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及兩拷貝的IL-lA(+4845)等位基因1,其中所述模式的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述個(gè)體具有增強(qiáng)的C反應(yīng)性蛋白表達(dá)。9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述個(gè)體有增加的患心肌梗塞的風(fēng)險(xiǎn)。10.確定個(gè)體的心血管疾病素因的方法，包括檢測(cè)選自以下的模式a)IL-lB(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2、IL-1B(+3877)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及IL-1A(+4845)等位基因2;b)IL國(guó)lB(畫511)等位基因1、IL-1B(國(guó)511)等位基因2、IL-1B(+3877)等位基因2、IL-1B(+3954)等位基因2、以及兩拷貝的IL-1A(+4845)等位基因1;c)IL-lB(-511)等位基因1、IL-1B(-511)等位基因2、IL-1B(+3877)等位基因2、兩拷貝的IL-lB(+3954)等位基因1、以及兩拷貝的IL-1A(+4845)等位基因1;d)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1、IL-1B(+3954)等位基因2、以及IL-1A(+4845)等位基因2;e)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2、IL-lB(+3954)等位基因2、以及兩拷貝的IL-lA(+4845)等位基因1;f)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及IL-lA(+4845)等位基因2;以及g)兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2、兩拷貝的IL-1B(+3954)等位基因1、以及兩拷貝的IL-lA(+4845)等位基因1,其中所述模式的存在表明所述個(gè)體無心血管疾病傾向。11.確定高加索個(gè)體的心血管疾病素因的方法，包括;險(xiǎn)測(cè)IL-1A(+4845)等位基因2和IL-lB(+3954)等位基因2，其中所述等位基因的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。12.如權(quán)利要求11所述的方法，還包括鑒定IL-1B(+3877)等位基因1或IL-1B(-511)等位基因1。13.確定亞洲個(gè)體心血管疾病素因的方法，包括才企測(cè)兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1,其中所述等位基因的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述個(gè)體為韓國(guó)人、中國(guó)人或日本人。15.如權(quán)利要求13所述的方法，還包括鑒定IL-1B(-511)等位基因2。16.確定亞洲男性個(gè)體的心血管疾病素因的方法，其中所述個(gè)體年齡為55歲或以上，包括4企測(cè)IL-1B(+3877)等位基因2和兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因1，其中所述等位基因的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述個(gè)體為韓國(guó)人、中國(guó)人或曰本人。18.確定韓國(guó)男性個(gè)體心血管疾病素因的方法，包括;險(xiǎn)測(cè)兩拷貝的IL-1B(+3877)等位基因1和兩拷貝的IL-1B(-511)等位基因2，其中所述等位基因的存在表明所述個(gè)體有心血管疾病傾向。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述個(gè)體具有增強(qiáng)的C反應(yīng)性蛋白表達(dá)。全文摘要本發(fā)明的試劑盒和方法涉及心血管病癥的診斷。一方面，本發(fā)明公開了確定個(gè)體是否具有易碎斑塊病癥的方法和試劑盒。一方面，本發(fā)明公開了確定個(gè)體是否具有閉塞病癥的方法和試劑盒。一方面，本發(fā)明公開了確定個(gè)體是否具有再狹窄病癥的方法和試劑盒。本發(fā)明的其它方法涉及用于患有心血管疾病患者的治療劑的選擇。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101356286SQ200680050652公開日2009年1月28日申請(qǐng)日期2006年11月17日優(yōu)先權(quán)日2005年11月17日發(fā)明者凱瑟琳·馬丁奈茲,大衛(wèi)·C·克羅斯曼,希拉·E·弗朗西斯,戈登·W·達(dá)夫,肯尼思·S·科恩曼申請(qǐng)人:英特利金遺傳學(xué)有限公司