專利名稱：：用于治療cns疾病的分離細(xì)胞和包含這種細(xì)胞的細(xì)胞群的制作方法用于治療CNS疾病的分離細(xì)胞和包含這種細(xì)胞的細(xì)胞群發(fā)明領(lǐng)域和背景本發(fā)明涉及可用于治療CNS疾病的細(xì)胞及其細(xì)胞群。Parkinson病是一種年齡相關(guān)性疾病，特征在于中腦黑質(zhì)中產(chǎn)多巴胺的神經(jīng)元的進(jìn)行性損失，其又導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)功能的進(jìn)行性損失，這通過(guò)諸如震顫、僵化和運(yùn)動(dòng)失調(diào)的癥狀表現(xiàn)出來(lái)D當(dāng)前用于PD的治療策略集中于恢復(fù)多巴胺的損耗，一般通過(guò)施用多巴胺前體L-DOPA(L-3-4-二幾基苯丙氨酸)。L-DOPA(多巴胺的血腦屏障(BBB)穿透前體)成功地增加了多巴胺的合成和釋放。但是，隨著疾病演進(jìn)，可用于由前體合成多巴胺的多巴胺能神經(jīng)元減少，并且隨著L-DOPA誘發(fā)的運(yùn)動(dòng)障礙的出現(xiàn)，治療的有效性下降。采用多巴胺激動(dòng)劑、單胺氧化劑抑制劑或COMT抑制劑的其它治療也表現(xiàn)出部分改善，但它們不能阻止疾病演進(jìn)。業(yè)已表明細(xì)胞移植是修復(fù)和替換失去多巴胺能的神經(jīng)元的替代治療選項(xiàng)。為使此細(xì)胞置換療法起作用，植入的細(xì)胞必須在受損傷的組織中在功能上和結(jié)構(gòu)上存活和整合。'最近已提議將干細(xì)胞用作Parkinson病細(xì)胞置換療法中的細(xì)胞源。干細(xì)胞具有以未分化態(tài)在體內(nèi)存在和自我更新的能力。它們不限于對(duì)起源組織特異性的細(xì)胞類型，所以它們能夠響應(yīng)于來(lái)自其它組織的局部環(huán)境信號(hào)分化。這種自我更新和分化的能力在治愈疾病方面具有巨大的治療潛力。在Parkinson病中，干細(xì)胞置換策略基于以下想法多巴胺(DA)神經(jīng)傳遞的恢復(fù)受到隨時(shí)間變化整合入剩余組織并產(chǎn)生長(zhǎng)期功能性組織的細(xì)胞移植物的影響。有兩種處理用于在PD中移植的干細(xì)胞的方法。在第一種方法中，在移^i前，細(xì)胞在體外分化為多巴胺能神經(jīng)元。這使相關(guān)細(xì)胞得以標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制。第二種方法包括移植未分化干細(xì)胞，這些未分化干細(xì)胞被認(rèn)為在移植入紋狀體或黑質(zhì)之后在體內(nèi)分化為多巴胺能神經(jīng)元。理論上，用于PD中的細(xì)胞療法的DA神經(jīng)元可由4種不同來(lái)源的干細(xì)胞制備胎兒多巴胺能神經(jīng)元、神經(jīng)干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞。骨髓包含兩種主要的干細(xì)力包群造血干細(xì)胞(HSC)和有時(shí)稱為骨髓基質(zhì)細(xì)胞的間充質(zhì)千細(xì)胞(MSC)。已表明分化后的大鼠BMSC表達(dá)酪氨酸-羥化酶(TH)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶和P-III微管蛋白[Woodbury,D.等，JNeurosciRes.69(6):908-17,2002]。通過(guò)將小鼠BMSC紋狀體內(nèi)注射l-甲基-4-苯基-l,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)小鼠PD模型中證實(shí)了小鼠BMSC在PD中的臨床治療潛力。移植的細(xì)胞存活并表達(dá)TH。而且已表明在移植后35天轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)改善[Li,Y.等，NeurosciLett.316(2):67-70,2001]。本發(fā)明人的美國(guó)專利申請(qǐng)20050265983講述了合成人多巴胺的和轉(zhuǎn)錄因子。作為對(duì)其中移植細(xì)胞必須存活并具有形態(tài)學(xué)、電生理學(xué)和功能性多巴胺能特性的細(xì)胞置換策略的替代，細(xì)胞療法可以恢復(fù)或重建紋狀體的正常解剖學(xué)(連通性)和生理學(xué)(適宜的突觸性接觸和功能)為目標(biāo)。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NTF)是調(diào)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞的存活、功能保持和表型發(fā)育的分泌性蛋白。NTF水平的改變涉及觸發(fā)神經(jīng)元中的程序性細(xì)胞死亡，并因此促成Parkinson病和其它神經(jīng)退化病的發(fā)病。其中一種用于多巴胺能神經(jīng)元的最有效NTF叫做神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)。已知其促進(jìn)黑質(zhì)中的多巴胺能神經(jīng)元存活、促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)、增加細(xì)胞體大小以及還提高TH水平。GDNF屬于一個(gè)與TGF-p超家族相關(guān)的蛋白家族，目前由4種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子纟且成GDNF、Neurturin(NTN)、Persephin禾口Artemin/Neublastin。這些因子已知用作細(xì)胞增殖和分化的調(diào)節(jié)物。神經(jīng)祖細(xì)胞(ST14A)的分析揭示，GDNF過(guò)度生產(chǎn)可能與涉及軸突發(fā)芽、神經(jīng)突生長(zhǎng)、棘形成、嚢泡運(yùn)輸和突觸可塑性的基因上調(diào)有關(guān)[PahnkeJ等，ExpCellRes.297(2):484-94,2004]。還已經(jīng)表明，GDNF的神經(jīng)保護(hù)活性借助于其對(duì)抗氧化酶系統(tǒng)(例如谷胱甘肽過(guò)氧化酶、超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活性)的活化[ChaoCC,LeeEH.Neuropharmacology,38(6):913-6,1999]。多種細(xì)胞類型生產(chǎn)GDNF，包括神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系。近來(lái)已表明在補(bǔ)加20。/。胎牛血清的DMEM中培養(yǎng)的、傳至第6代的大鼠BMSC表達(dá)GDNF和NGF[GarciaR等，BiochemBiophysResCommun.316(3):753-4,2004]。GDNF合成可由生長(zhǎng)因子、激素、細(xì)胞因子和神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)。例如，腫瘤壞死因子-ot或白介素-l誘導(dǎo)成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞釋放GDNF。毛喉素或cAMP引起成神經(jīng)細(xì)月包瘤和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤這兩種細(xì)胞系釋放的GDNF增加。這些細(xì)胞包含神經(jīng)遞質(zhì)受體，這些受體使得神經(jīng)遞質(zhì)能夠在應(yīng)力條件下調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子的生產(chǎn)。業(yè)已表明，將GDNF直接施用至腦中在多種PD動(dòng)物模型有效。另外，細(xì)胞在移植前接觸GDNF已證明是有益的。例如，在移植前嫁接400,000個(gè)胎兒多巴胺能神經(jīng)元顯著改善受損大鼠的轉(zhuǎn)動(dòng)行為[MehtaV等，JNeurosurg.1999年4月;90(4):804-6]。已使用多種方法幫助將GDNF施用入腦中，包括滲透泵、膠囊和微球。用于GDNF傳遞的另一種方法是體內(nèi)基因治療。經(jīng)由遺傳工程表達(dá)GDNF并移植入MPTP受損小鼠中的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞能夠保護(hù)黑質(zhì)神經(jīng)元以及紋狀體纖維[Park,K.,Neurosci.Res.40:315-323,2001〗。幾個(gè)研究已表明，MSC在體外接觸不同因子后改變其表型，表現(xiàn)出神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)標(biāo)記[Kopen,G.C.等，ProcNatlAcadUSA.96(19):10711-6,1999;Sanchez-Ramos等，ExpNeurol.164(2):247-56.2000;Woodbury,D.,JNeurosciRes.6(4):364-70,2000;Woodbury,D.等，JNeurosciRes.69(6):908-17,2002;Black,LB.，Woodbury,D.BloodCellsMolDis.27(3):632-6，2001;Kohyama,J.等，Differentiation.68(4-5):235-44,2001;Levy,Y.S.JMolNeurosci.21(2):121-32,2003]。但是，這些研究中沒(méi)有一個(gè)表明人MSC能夠分泌顯著水平的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。因此，對(duì)能夠合成用于治療神經(jīng)變性病的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(例如GDNF)的可移植細(xì)胞存在著公認(rèn)的需要，獲得這些細(xì)胞應(yīng)當(dāng)是非常有益的。發(fā)明概述按照本發(fā)明，提供一種分離的人細(xì)胞，其包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。按照本發(fā)明的另一方面，提供一種分離的人細(xì)胞，其包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型和至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型，其中所述間充質(zhì)千細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種分離的人細(xì)胞，其包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型和至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種分離的人細(xì)胞，其包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，并表達(dá)至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，其中所述表達(dá)是間充質(zhì)干細(xì)胞中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基礎(chǔ)表達(dá)的至少2倍高。按照本發(fā)明的另一方面，提供一種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型；(ii)至少M(fèi)。/o的人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型；和(iii)至少一種人細(xì)胞同時(shí)包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/o的人細(xì)胞表達(dá)至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，其中所述表達(dá)是間充質(zhì)干細(xì)胞中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基礎(chǔ)表達(dá)的至少2倍高；(ii)至少M(fèi)。/。的人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；和(iii)至少一種人細(xì)胞表達(dá)至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；.其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型；(ii)至少M(fèi)。/。的人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型；和(iii)至少一種人細(xì)胞同時(shí)包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型；(ii)至少M(fèi)。/。的人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型；和(iii)至少一種人細(xì)胞同時(shí)包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的方法，該方法包括在含血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)和人神經(jīng)調(diào)節(jié)素1-|31的分化培養(yǎng)基中孵育間充質(zhì)干細(xì)胞，由此產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的方法，該方法包括在含至少一種分化劑的培養(yǎng)基中孵育間充質(zhì)干細(xì)胞，所述至少一種分化劑選自血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、人神經(jīng)調(diào)節(jié)素l-卩l(xiāng)、FGF2、EGF、N2、IBMX和cAMP,由此產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。按照本發(fā)明的又一方面，提供一種治療CNS疾病或障礙的方法，該方法包括給有需要的個(gè)體施用治療有效量的星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞，由此治療CNS疾病或障礙。按照本發(fā)明的又一方面，纟是供星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞CNS疾病或障礙的用途。按照本發(fā)明的又一方面，^是供一種藥用組合物，其含作為活性物質(zhì)的權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7或8中任一項(xiàng)的任一種細(xì)胞或細(xì)胞群和藥學(xué)可接受栽體。按照以下描述的本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述細(xì)胞未被遺傳操作。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型是結(jié)構(gòu)表型。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型是功能表型。按照所迷優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所迷細(xì)胞還包含星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型。按照所迷優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型不是所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型。按照所迷優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述細(xì)胞還包含星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述細(xì)胞還包含星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型。按照所迷優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型不是所述間充質(zhì)千細(xì)胞表型。按照所迷優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型是細(xì)胞大小、細(xì)胞形狀、細(xì)胞器大小和細(xì)胞器數(shù)量。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型是至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記是結(jié)構(gòu)標(biāo)記。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記是內(nèi)部標(biāo)記。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型是至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，其表達(dá)水平是間充質(zhì)干細(xì)胞中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基礎(chǔ)表達(dá)的至少2倍高。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子選自神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4/5、Neurturin(NTN)、Persephin、腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、artemin(ART)、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)、胰島素生長(zhǎng)因子-I(IGF-1)和Neublastin。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是GDNF。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記選自S100P、膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)、谷氨酰胺合成酶、GLT-1和GLAST。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，GDNF的分泌受IL-l(3和/或卡麥角林調(diào)節(jié)。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，孵育的持續(xù)時(shí)間為約48小時(shí)。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，PDGF的濃度為約5ng/ml。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，人神經(jīng)調(diào)節(jié)素的濃度為約50ng/ml。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，分化培養(yǎng)基還包含L-谷氨酰胺、二丁酰環(huán)腺苷酸和異丁基甲基黃嘌呤IBMX。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述方法還包括在所述孵育之前在一種另外的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，由此使所述細(xì)胞傾向于分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述另外的培養(yǎng)基包含人表按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，hEGF的濃度為約20ng/ml。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，hbFGF的濃度為約20ng/ml。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述另外的培養(yǎng)基還包含L-谷氨酰胺、胰島素、孕酮、腐胺、硒和轉(zhuǎn)鐵蛋白。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，培養(yǎng)的持續(xù)時(shí)間為約48小時(shí)。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，間充質(zhì)干細(xì)胞如下獲得(a)在能夠維持和/或擴(kuò)增間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)含間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞群；和(b)由步驟(a)產(chǎn)生的細(xì)胞選擇間充質(zhì)干細(xì)胞。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，通過(guò)收獲表面粘附細(xì)胞實(shí)施步驟(b)。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述方法還包括給個(gè)體施用能夠內(nèi)源合成至少一種神經(jīng)遞質(zhì)的干細(xì)胞。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所迷CNS疾病或障礙是神經(jīng)變性疾病或障礙。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述CNS疾病或障礙選自運(yùn)動(dòng)障礙、分離性障礙、心境障礙、情感障礙、成癮障礙和痙攣性障礙。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述神經(jīng)變性疾病選自Parkinson病、多發(fā)性硬化、癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化、中風(fēng)、自身免疫性腦脊髓炎、糖尿病性神經(jīng)病、青光眼神經(jīng)病、Alzheimer病和Huntingdon病。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述細(xì)胞是自體細(xì)胞。按照所述優(yōu)選實(shí)施方案的其它特征，所述細(xì)胞是非自體細(xì)胞。本發(fā)明通過(guò)提供能夠分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的細(xì)胞及其細(xì)胞群成功克服了目前已知做法的缺點(diǎn)。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域一般技術(shù)人員的通常理解相同的含義。盡管與本文所述的那些方法和材料類似或等同的方法和材料可用于實(shí)施或檢驗(yàn)本發(fā)明，但以下描述的方法和材料尤為適宜。本文提及的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利和其它參考文獻(xiàn)都整體在此引入作為參考。要是有抵觸，以包括定義在內(nèi)的專利說(shuō)明書為準(zhǔn)。另外，所述材料、方法和實(shí)施例僅是闡述性的，無(wú)限制意圖。附圖簡(jiǎn)述本文僅通過(guò)實(shí)施例并參照附圖描述本發(fā)明。現(xiàn)在要具體地詳細(xì)談到附圖，要強(qiáng)調(diào)的是，顯示的細(xì)節(jié)僅作為實(shí)例和用于說(shuō)明性論述本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的目的，提供這些細(xì)節(jié)是為了提供一般認(rèn)為最有用和最容易理解的本發(fā)明原則和概念方面的描述。就此而言，沒(méi)有嘗試展現(xiàn)出比基本理解本發(fā)明所需更詳細(xì)的本發(fā)明結(jié)構(gòu)性細(xì)節(jié)，說(shuō)明書連帶附圖使本領(lǐng)域技術(shù)人員更易于理解怎樣能實(shí)施本發(fā)明的幾種形式。在附圖中圖1A-B是5天分化的和未分化的人MSC的光學(xué)顯微鏡圖象。分化的人MSC顯示出星形膠質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)，例如典型的星形樣結(jié)構(gòu)。(光學(xué)顯微鏡)。圖2A-D是5天分化(圖2B-D)的和未分化(圖2A)的人MSC的掃描電子顯微鏡圖象。分化的人MSC表現(xiàn)出星形膠質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)。圖3A-B是圖示分化的人MSC中的星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)的顯微照片。用抗S100(3(圖3A)和抗谷氨酰胺合成酶(圖3B)對(duì)分化的人hBMSc進(jìn)行免疫染色。細(xì)胞核4吏用DAPI染色(藍(lán)色)。圖4A-B是圖示分化的人MSC中的星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)的條圖。用抗GFAP對(duì)分化的人hBMSc進(jìn)行免疫染色，細(xì)胞核4吏用DAPI染色(藍(lán)色)(圖4A)。圖4B是圖示分化的人MSC的細(xì)胞^是取物中的GFAP水平的條圖，所述GFAP水平通過(guò)使用引物SEQIDNO:ll和12的實(shí)時(shí)PCR分析。養(yǎng)因子轉(zhuǎn)錄物的量的條圖。對(duì)細(xì)胞提取物進(jìn)行GDNF(SEQIDN0:3和4)、NGF(SEQIDNO:9和IO)和BDNF(SEQIDNO:5和6)轉(zhuǎn)錄物的實(shí)時(shí)PCR測(cè)定。圖6A-B是圖示分化的人MSC上的GDNF表達(dá)的顯微照片和條圖。用抗GDNF對(duì)分化的人hBMSc進(jìn)行免疫染色。細(xì)胞核使用DAPI染色(藍(lán)色)(圖6A)。圖6B表明，用抗GDNF陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)約為30%(*P<0.05,n=3，每n的平均細(xì)胞計(jì)數(shù)=415.5±37.5)。通過(guò)檢驗(yàn)3個(gè)獨(dú)立培養(yǎng)物的15個(gè)^f見野估計(jì)GDNF細(xì)胞數(shù)。這些樣品中的總細(xì)胞數(shù)通過(guò)計(jì)數(shù)DAPI染色的細(xì)胞核確定，結(jié)果表示為陽(yáng)性細(xì)胞百分率的平均值士SEM。圖7是圖示分化的人MSC中的細(xì)胞中GDNF存在量的條圖。通過(guò)ELISA測(cè)定分化的hBMSc的細(xì)胞提取物中的GDNF產(chǎn)量。結(jié)果為3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值士S.D.。在p〈0.05(*)的情況下與對(duì)照相比差異是顯著的。在開始分化48小時(shí)后將分化的細(xì)胞與卡麥角林(130pg/ml)和IL-lf3(100pg/ml)溫育24小時(shí)。圖8A-D是圖示分化的人MSC分泌的GDNF、BDNF和NGF的量的條圖。圖8A圖示了卡麥角林(130pg/ml)和IL-l(3(100pg/ml)的48小時(shí)溫育對(duì)GDNF分泌的影響。在分化72小時(shí)后收集培養(yǎng)基，并使用ELISA分析。結(jié)果為3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值士S.D.。在p〈0.05("的情況下與對(duì)照相比差異是顯著的。還測(cè)定了分化細(xì)胞培養(yǎng)基的GDNF(圖8B)和NGF(圖8C)。(捐贈(zèng)者#14-2、#8-10或弁Hl-2-7)。藍(lán)色條棒指示分化后的分泌，紅色條棒指示分化前的分泌。圖8D圖示了48小時(shí)分化對(duì)3個(gè)不同捐贈(zèng)者的MSC中的BDNF分泌的影響。圖9是圖示MSC分化后的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST和GLT-1的表達(dá)的條圖。通過(guò)對(duì)由在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的hBMSc和星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc提取的總RNA進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR評(píng)價(jià)這些谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)。用于GLAST的引物是SEQIDNO:7和8，用于GLT-1的引物是SEQIDNO:13和14。樣品還用于GAPDH的PCR擴(kuò)增，使得可以定量分析以任意單位表示的PCR產(chǎn)物(對(duì)獨(dú)立的培養(yǎng)物進(jìn)行的三份平行檢測(cè)的平均值士SEM)。通過(guò)用于多重比較的單因素anova繼之以Newman-Keul檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。*(p<0.05)表示與保持在無(wú)血清培養(yǎng)基中的細(xì)胞有顯著差異。圖10是圖示hBMSC的星形膠質(zhì)細(xì)胞分化之前和之后的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體功能活性的條圖。檢測(cè)并對(duì)比在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)胞與在分化培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的hBMSC中的卩H]d-天冬氨酸攝取(20nm)。顯示的數(shù)據(jù)是對(duì)3個(gè)獨(dú)立培養(yǎng)物進(jìn)^"的三份平行檢測(cè)的平均值±SEM。通過(guò)用于多重比較的單因素anova繼之以Newman-Keul檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(p〈0.05)。圖11是圖示移植星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc的6-OHDA受損大鼠的行為改善的線圖。大鼠在受損后6周移;f直注射入同側(cè)紋狀體中的5xl()S個(gè)細(xì)胞。以每60分鐘的平均轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)記錄阿樸嗎啡(0,15mg/kg,皮下)誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)動(dòng)行為。移植大鼠在移植后75天的轉(zhuǎn)動(dòng)表現(xiàn)出明顯(p〈0.05)下降。圖12是圖示移植星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc的6-0HDA受損大鼠的轉(zhuǎn)動(dòng)測(cè)定改善的條圖。在相同大鼠中于移植后95天觀察轉(zhuǎn)棒性能(在轉(zhuǎn)棒上的秒數(shù))。移植大鼠表現(xiàn)出顯著(p〈0.05)改善(在Friedmananova之后的多重比較檢驗(yàn)，P<0.05)。圖13是圖示移植星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc的6-OHDA受損大鼠的靈敏運(yùn)動(dòng)功能改善的條圖。在移植后IOO天進(jìn)行吃葵花籽測(cè)試。在5分鐘時(shí)間段內(nèi)移植星形膠質(zhì)細(xì)胞的大鼠打開和吃葵花籽要比鹽水治療小鼠快得多。結(jié)果是在之后兩天進(jìn)行的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的平均值土SEM。圖14A-E是移植星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc的6-OHDA受損大鼠的細(xì)胞的共焦顯微圖象。在移植后110天，處死動(dòng)物，進(jìn)行組織學(xué)研究。圖14A圖示了DAPI染色。圖14B圖示了人核抗原染色。圖14C圖示了GFAP染色。圖14D是全部3種染色的合并(merge)。免疫染色和共焦顯微研究揭示，對(duì)人抗原為陽(yáng)性的細(xì)胞達(dá)25%也是GFAP陽(yáng)性的。圖15是一幅線圖，表明移植入ALS小鼠腓腸肌中的星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的BMSC延遲疾病發(fā)作，并改善這些小鼠在轉(zhuǎn)棒上的運(yùn)動(dòng)性能(n=8，p<0.05)。圖16是一幅線圖，表明移植入ALS小鼠腓腸肌中的星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的BMSC延遲體重下降。圖17A-C是移植星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc的ALS小鼠細(xì)胞的共焦顯微圖象，表明移植入ALS小鼠腓腸肌中的星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的BMSC在移植后存活110天。優(yōu)選實(shí)施方案的描述本發(fā)明涉及可移植入患者中以便治療眾多神經(jīng)變性病的細(xì)胞及其細(xì)胞群。參考附圖和后附描述可更好地理解本發(fā)明的原則和實(shí)施。在詳細(xì)解釋本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施方案之前，要理解的是，本發(fā)明未將其應(yīng)用限于在以下描述中陳述的或?qū)嵤├e的細(xì)節(jié)。本發(fā)明可以有其它實(shí)施方案，或者能夠以多種方式實(shí)施或進(jìn)行。另外，要理解的是，本文使用的用語(yǔ)和術(shù)語(yǔ)用于描述目的，不應(yīng)被看作限制性的。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NTF)是調(diào)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞的存活、功能維持和表型發(fā)育的分泌性蛋白。NTF水平的改變涉及觸發(fā)神經(jīng)元中的程序性細(xì)胞死亡，并因此促使Parkinson病和其它神經(jīng)變性病發(fā)病。其中一種用于多巴胺能神經(jīng)元的最有效NTF叫做神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)。已知其促進(jìn)黑質(zhì)中的多巴胺能神經(jīng)元存活、促進(jìn)神經(jīng)突生長(zhǎng)、增加細(xì)胞體大小以及還提高TH水平。但是，一般來(lái)說(shuō)禁止直接使用神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，尤其是禁止直接使用GDNF，因?yàn)樗鼈儾荒芡ㄟ^(guò)血腦屏障，在系統(tǒng)注射后不能正確分布。因此，必須開發(fā)其它策略，以便利用它們的治療特性。在簡(jiǎn)化本發(fā)明以便實(shí)施時(shí)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在特定培養(yǎng)條件下，間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)可分化為具有能夠分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的細(xì)胞。此結(jié)果被表明是捐贈(zèng)者和傳代非依賴性的。因此，本發(fā)明人已表明，這些分化的MSC可用于在移植后治療神經(jīng)變性病患者。本發(fā)明人已表明，按照新的兩步法分化的MSC表現(xiàn)出星形膠質(zhì)細(xì)胞樣形狀(圖1A-B和2A-D),并伴隨出現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記(圖3A-B和4A-B)。這些星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞被證實(shí)表達(dá)(圖5)和分泌(圖8A-D)顯著水平的GDNF、BDNF和NGF。而且，D2-受體激動(dòng)劑卡麥角林和IL-1還上調(diào)NTF產(chǎn)量(圖7和圖8A)。另外，星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞具有谷氨酸清除機(jī)制(圖10)。在移植入6-OHDA受損大鼠(一種Parkinson大鼠模型)的紋狀體和ALS轉(zhuǎn)基因小鼠的足部肌肉之后，細(xì)胞存活，并改善了通過(guò)轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)的行為缺陷以及阿樸嗎啡誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)動(dòng)行為(圖11-17A-C)。因此，按照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供一種產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的方法，該方法包括在含血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)和人神經(jīng)調(diào)節(jié)素l-pi的分化培養(yǎng)基中孵育間充質(zhì)干細(xì)胞，由此產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。本文使用的用語(yǔ)"星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞"指含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的細(xì)胞，所述表型使該細(xì)胞在體內(nèi)介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞活性，即支持神經(jīng)元。這些表型在下文進(jìn)一步描逸。術(shù)語(yǔ)"間充質(zhì)干細(xì)胞"或"MSC"可交互用于未終末分化的成體細(xì)胞，這些細(xì)胞可分裂，產(chǎn)生為兩個(gè)干細(xì)胞的細(xì)胞，或者不可逆地分化，產(chǎn)生間充質(zhì)細(xì)胞譜系細(xì)胞。本發(fā)明的間充質(zhì)千細(xì)胞可為同源的或異源的，但優(yōu)選同源的。按照本發(fā)明該方面的優(yōu)選實(shí)施方案，間充質(zhì)干細(xì)胞未被遺傳操作(即未用表達(dá)構(gòu)建物轉(zhuǎn)化)，以產(chǎn)生本文描述的細(xì)胞和細(xì)胞群。要認(rèn)識(shí)到的是，本發(fā)明的細(xì)胞可來(lái)源于任何干細(xì)胞，但優(yōu)選不來(lái)源于ES細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞可分離自各種組織，包括但不限于骨髓、外周血、血液、胎盤和脂肪組織。由外周血分離間充質(zhì)干細(xì)胞的方法描述于Kassis等[BoneMarrowTransplant.2006年5月；37(10):967-76〗。由胎盤組織分離間充質(zhì)千細(xì)胞的方法描述于Zhang等[ChmeseMedicalJournal,2004,117(6):882-887]。分離和培養(yǎng)脂肪組織、胎盤和臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的方法描述于Kern等[StemCells,2006;24:1294-1301]。按照本發(fā)明該方面的優(yōu)選實(shí)施方案，間充質(zhì)干細(xì)胞為人源的。骨髓可通過(guò)抽吸分離自個(gè)體的髂峰。低密度BM單核細(xì)胞(BMMNC)可通過(guò)FICOL-PAGUE密度梯度分離。為了獲得間充質(zhì)干細(xì)胞，含間充質(zhì)干細(xì)胞(例如BMMNC)的細(xì)胞群可在能夠保持和/或擴(kuò)增細(xì)胞的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。按照一個(gè)實(shí)施方案，所述群接種在聚苯乙烯塑料表面上(例如在燒瓶中)，通過(guò)去除非粘附細(xì)胞分離間充質(zhì)干細(xì)胞。備選地，可使用間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記通過(guò)FACS分離間充質(zhì)干細(xì)胞(參見下文表1)。優(yōu)選地，MSC是至少50%純化的，更優(yōu)選地是至少75%純化的，再更優(yōu)選地是至少90%純化的。在分離后，通常如下擴(kuò)增細(xì)胞如下文實(shí)施例1所述在能夠先體外后體內(nèi)保持和/或擴(kuò)增分離細(xì)胞的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基可為DMEM、a-MEM或DMEM/F12。優(yōu)選地，增殖培養(yǎng)基是DMEM。優(yōu)選地，增殖培養(yǎng)基還包含SPN、L-谷氨酰胺和血清(例如胎牛血清或馬血清)，例如描述于以下實(shí)施例部分的實(shí)施例1?？赏ㄟ^(guò)在分化培養(yǎng)基中孵育MSC實(shí)現(xiàn)向星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的分化，所述分化培養(yǎng)基例如為描述于美國(guó)專利第6,528,245號(hào)和Sanchez-Ramos等，(2000);Woodburry等，(2000);Woodburry等，(丄Neurisci.Res.96:908-917,2001);Black和Woodbury(BloodCellsMol.Dis.27:632-635,2001);Deng等，(2001)，Kohyama等，(2001),ReyesandVerfatile(Ann.N,Y.Acad.Sci.938:231-235，2001)和Jiang等，(Nature418:47-49,2002)的那些培養(yǎng)基。BMSc在其于"分化培養(yǎng)基"中孵育前優(yōu)選在一種"另外的培養(yǎng)基"中孵育至少24小時(shí)，優(yōu)選48小時(shí)。在"分化培養(yǎng)基"中的孵育延續(xù)至少24小時(shí)，優(yōu)選至少48小時(shí)。優(yōu)選為DMEM。適宜的"另外的培養(yǎng)基"可為能夠使細(xì)胞傾向于星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的任何生長(zhǎng)培養(yǎng)基，例如補(bǔ)加表皮生長(zhǎng)因子hEGF(例如20ng/ml)和/或堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(例如20ng/ml)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。優(yōu)選地，另外的培養(yǎng)基還包含N2補(bǔ)加物(胰島素、孕酮、腐胺、硒和轉(zhuǎn)鐵蛋白)。本發(fā)明的分化培養(yǎng)基優(yōu)選包含血小板衍生生長(zhǎng)因子(例如5ng/ml)和人神經(jīng)調(diào)節(jié)素(例如50ng/ml)。"分化培養(yǎng)基"優(yōu)選包含分化劑，例如IL-1(3和/或dbcAMP。優(yōu)選地，分化培養(yǎng)基還包舍SPN、L-谷氨酰胺、補(bǔ)加物(例如N2或B27)、抗生素(例如IBMX)和血清(例如胎牛血清、胎牛血清或馬血清)。按照本發(fā)明的另一方面，間充質(zhì)干細(xì)胞在含至少一種分化劑的培養(yǎng)基中孵育，以便產(chǎn)生本發(fā)明的星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。分化劑的實(shí)例包括但不限于血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGF)、人神經(jīng)調(diào)節(jié)素l-f31、FGF2、EGF、N2補(bǔ)加物、IBMX和cAMP。分化培養(yǎng)基(包括另外的分化培養(yǎng)基)還可包含其它物質(zhì)，例如神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(例如BDNF、CNTF、GDNF、NTN、NT3或LIF)、激素、生長(zhǎng)因子(例如GGF2、TGF-P3、TGF-ot、FGF-8和bFGF)、維生素、激素如胰島素、孕酮以及其它因子，諸如somehedgehog、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、毛喉素、視黃酸、抗壞血酸、腐胺、硒和轉(zhuǎn)鐵蛋白。示例性分化培養(yǎng)基描述于下文的實(shí)施例1。按照本文所述方法獲得的細(xì)胞群通常是非同源的。因此，按照本發(fā)明的另一方面，提供一種分離的人細(xì)胞群，其中(i)至少NQ/。的細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型；(ii)至少]\4%的細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型；和(iii)至少一種人細(xì)胞同時(shí)包含所述至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和所述至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自卜99。本文使用的術(shù)語(yǔ)"分離的"指已由其體內(nèi)位置(例如骨髓、神經(jīng)組織)取出的細(xì)胞群。優(yōu)選地，分離細(xì)胞群基本沒(méi)有在其體內(nèi)位置存在的其它物質(zhì)(例如其它細(xì)胞)。本文使用的用語(yǔ)"星形膠質(zhì)細(xì)胞表型"指星形膠質(zhì)細(xì)胞特有的(例如獨(dú)有的)結(jié)構(gòu)和/或功能參數(shù)，這些參數(shù)可用于區(qū)分本發(fā)明的分化MSC和未分化MSC。星形膠質(zhì)細(xì)胞表型可包含單個(gè)或眾多可用于區(qū)分本發(fā)明的分化MSC和未分化MSC的特征。要認(rèn)識(shí)到的是，功能參數(shù)可與結(jié)構(gòu)參數(shù)重疊，例如存在分泌性嚢泡。優(yōu)選地，功能性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型包括以未分化人間充質(zhì)干細(xì)胞中的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基礎(chǔ)表達(dá)至少2倍高的水平表達(dá)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的能力。本文使用的術(shù)語(yǔ)"表達(dá)，，指合成和/或分泌以上提及的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。因?yàn)樯窠?jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在細(xì)胞外部發(fā)揮其作用，所以優(yōu)選地，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的分泌在本發(fā)明所述群的細(xì)胞中增加。按照一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，相比于在未分化人間充質(zhì)干細(xì)胞中分泌的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子量，所述分泌增加到至少2倍，甚至更優(yōu)選增加到5倍。本文使用的用語(yǔ)"神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子"指對(duì)腦神經(jīng)系統(tǒng)起作用的細(xì)胞因子，包括對(duì)神經(jīng)元的生長(zhǎng)、分化、功能維持和/或存活作用。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的實(shí)例包括但不限于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)，GenBank登錄號(hào)L19063、L15306;神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF),GenBank登錄號(hào)CAA37703;腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF),GenBank登錄號(hào)CAA62632;神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)，GenBank登錄號(hào)M37763;神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4/5;Neurturin(NTN)，GenBank登錄號(hào)NP一004549;神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4，GenBank登錄號(hào)M86528;Persephin,GenBank登錄號(hào)AAC39640;腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)，GenBank登錄號(hào)CAA42761;artemm(ART),GenBank登錄號(hào)AAD13110;睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)，GenBank登錄號(hào)NPJ)00605;胰島素生長(zhǎng)因子-I(IGF-1)，GenBank登錄號(hào)NP—000609;和Neublastin,GenBank登錄號(hào)AAD21075。功能性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的其它實(shí)例是加入IL-1(3和卡麥角林之后增強(qiáng)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)和/或分泌。星形膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)利用高親和性谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體清除谷氨酸而在維持低胞外谷氨酸濃度方面起重要作用。因此，本發(fā)明所述群的細(xì)胞的另一種功能性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型可為增加的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體活性。這些谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性可通過(guò)4企測(cè)標(biāo)記的天冬氨酸(例如來(lái)自細(xì)胞培養(yǎng)基的卩H]-d-天冬氨酸攝取)來(lái)分析。如上文所述，本發(fā)明所述細(xì)胞群的一定百分率的細(xì)胞可另外地或替代地包含結(jié)構(gòu)性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。結(jié)構(gòu)性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的實(shí)例包括細(xì)胞大小、細(xì)胞形狀、細(xì)胞器大小和細(xì)胞器數(shù)量。西此，星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型包括圓形核、"星形"體和許多末端作為血管足板位于CNS小血管上的長(zhǎng)突起(參見圖1A-B和2A-D)。結(jié)構(gòu)性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的其它實(shí)例可見于以下材料Reynolds和Weiss,Science(1992)255:1707-1710;Reynolds,Tetzlaff和Weiss,丄Neurosci(1992)12:4565-4574;和Kandel等，PrinciplesofNeuroscience,第3版，(1991),Appleton&Lange,Norwalk,Conn。這些結(jié)構(gòu)表型可使用顯微技術(shù)(例如掃描電子顯微鏡)分析。抗體或染料可用于突顯分辨性特征，以便幫助分析。結(jié)構(gòu)性星形膠質(zhì)細(xì)胞表型還可包含星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)。本文使用的用語(yǔ)"星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記，，指在星形膠質(zhì)細(xì)胞中選擇性或非選擇性表達(dá)的多肽。星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記可在細(xì)胞表面或內(nèi)部表達(dá)。星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的實(shí)例包括sioop、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)、谷氨酰胺合成酶、GLAST和GLTl。如上文所述，所述細(xì)胞群的一定百分率的細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，此表型在典型的星形膠質(zhì)細(xì)胞中不存在。這些千細(xì)胞表型通常是結(jié)構(gòu)性的。例如，本發(fā)明的細(xì)胞可顯示出與間充質(zhì)千細(xì)胞相似的形態(tài)(梭樣形態(tài))。替代地或另外地，本發(fā)明細(xì)胞可表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞特有的但對(duì)天然星形膠質(zhì)細(xì)胞非典型的標(biāo)記(例如表面標(biāo)記)。間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于CD105+、CD29+、CD44+、CD90+、CD34-、CD45-、CD19-、CD5-、CD20-、CD11B-和FMC7-。其它間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記包括但不限于酪氨酸羥化酶、巢蛋白和H-NF。本發(fā)明的細(xì)胞群還包含同時(shí)表現(xiàn)出星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和間充質(zhì)干細(xì)胞表型的細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞表型優(yōu)選不和星形膠質(zhì)細(xì)胞表型相同。因此，如表3所示，已證實(shí)本發(fā)明細(xì)胞群的細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)千細(xì)胞標(biāo)記酪氨酸羥化酶、CD90和H-NF,這3種標(biāo)記已知在星形膠質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)。優(yōu)選地，當(dāng)細(xì)胞同時(shí)包含上文所述星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和間充質(zhì)干細(xì)胞表型時(shí)，其星形膠質(zhì)細(xì)胞表型是星形膠質(zhì)細(xì)胞獨(dú)有的。所述細(xì)胞可包含星形膠質(zhì)細(xì)胞獨(dú)有的單個(gè)星形膠質(zhì)細(xì)胞表型(例如星形形態(tài))或組合表現(xiàn)出星形膠質(zhì)細(xì)胞獨(dú)有表型的非獨(dú)有星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的組合。按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明所述群的任一種細(xì)胞的星形膠質(zhì)細(xì)胞表型都盡可能地接近天然星形膠質(zhì)細(xì)胞。因此，如在以下實(shí)施例部分中的闡述，按照本發(fā)明方法分化的細(xì)胞表現(xiàn)出星形膠質(zhì)細(xì)胞樣形狀(圖1A-B和2A-D),并伴有星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的存在(圖3A-B和4A-B);表達(dá)(圖5)和分泌(圖8A-D)顯著水平的GDNF、BDNF和NGF;包含受D2-受體激動(dòng)劑卡麥角林和IL-1進(jìn)一步上調(diào)的NTF生產(chǎn)(圖7和圖8A);以及具有谷氨酸清除機(jī)制(圖10)?？筛鶕?jù)預(yù)期需要提高或降低含星形膠質(zhì)細(xì)胞表型的細(xì)胞百分率。因此，例如，細(xì)胞群可富集具有特定星形膠質(zhì)細(xì)胞表型(例如表達(dá)GDNF)的細(xì)胞。這可通過(guò)使用對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記特異性的抗體的FACS實(shí)現(xiàn)。這些星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的實(shí)例如上文所述。如果細(xì)胞標(biāo)記是內(nèi)部細(xì)胞標(biāo)記，則優(yōu)選FACS分析包含可容易地穿透細(xì)胞并可容易地在檢測(cè)后被洗出細(xì)胞的抗體或其片段。根據(jù)富集程度和終產(chǎn)物需要的細(xì)胞表型，F(xiàn)ACS處理可使用相同或不同的標(biāo)記重復(fù)很多次。按照本發(fā)明該方面的另一個(gè)實(shí)施方案，細(xì)胞群可富集同時(shí)含星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和間充質(zhì)千細(xì)胞表型的細(xì)胞，使得產(chǎn)生均一細(xì)胞群。因此，按照本發(fā)明的又一方面，提供一種分離的人細(xì)胞，其包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，其中所迷間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。一旦分化和任選地分離，可檢驗(yàn)所述細(xì)胞的(在培養(yǎng)物中)的星形膠質(zhì)細(xì)胞表型(例如分泌功能性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的能力)?？墒褂蒙锘瘜W(xué)分析方法，例如免疫測(cè)定、蛋白質(zhì)印跡和以下實(shí)施例部分的實(shí)施例1中所述的實(shí)時(shí)PCR，或通過(guò)酶活性生物測(cè)定，比較分析培養(yǎng)物的星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。根據(jù)星形膠質(zhì)細(xì)胞表型，本發(fā)明的細(xì)胞和細(xì)胞群可用于治療特定疾病或障礙。細(xì)胞群可在分化后直接使用，或者可以如上文所述針對(duì)特定星形膠質(zhì)細(xì)胞表型富集。如在下文表l中所概述的，某些神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子組已顯示出對(duì)治療特定疾病特別有益。例如，分泌NGF、BDNF、FGF和GDNF的本發(fā)明細(xì)胞應(yīng)特別適于治療Parkinson病。4J疾病<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>業(yè)已提出，星形膠質(zhì)細(xì)胞可通過(guò)代謝多巴胺降低神經(jīng)元中的氧化應(yīng)力，因?yàn)樗鼈儽磉_(dá)單胺氧化酶-B和兒茶酚-O-甲基-轉(zhuǎn)移酶。另外，還已提出，星形膠質(zhì)細(xì)胞能夠通過(guò)谷胱甘肽依賴性機(jī)制防止NO產(chǎn)生的神經(jīng)毒性(Chen等，2004,CurrDrugTargets.2005年11月；6(7):821-33)。因此，含清除功能和/或表達(dá)多巴胺代謝酶的本發(fā)明細(xì)胞還可能適于治療Parkinson病。由于谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的清除或減少不充分，所以已提出谷氨酸興奮毒性為ALS的病因[Bendotti2001等，JNeurochem,79(4):737-746,2001]。因此，顯示出提升的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體活性的本發(fā)明細(xì)胞還可能適于治療ALS。因此，按照本發(fā)明的另一方面，提供一種治療CNS疾病或障礙的方法。本文使用的用語(yǔ)"CNS疾病"指可用本發(fā)明細(xì)胞治療的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的^f壬何障礙、疾病或病癥。因此，這些細(xì)胞可用于制備藥物(又稱為藥用組合物)，由此將此藥物配制成制劑用于治療CNS疾病或障礙?？捎帽疚乃约?xì)胞有益地治療的CNS疾病或障礙的代表性實(shí)例包括但不限于疼痛障礙、運(yùn)動(dòng)障礙、分離性障礙、心境障礙、情感障礙、神經(jīng)變性疾病或障礙和痙攣性障礙。這些病癥的更具體實(shí)例包4舌但不限于Parkinson病、ALS、多發(fā)性硬化、Huntingdon病、自身免疫性腦脊髓炎、糖尿病性神經(jīng)病、青光眼神經(jīng)病、黃斑變性、動(dòng)作性震顫和遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙、恐慌、焦慮、抑郁、醇中毒、失眠、躁狂行為、Alzheimer病和癲癇。在本文描述的任一種方法中，細(xì)胞可得自任何自體或非自體(即同種異體或異種)人捐贈(zèng)者。例如，細(xì)胞可分離自人尸體或捐贈(zèng)受試者?？墒褂酶鞣N移植方法將本發(fā)明的細(xì)胞施用給待治療個(gè)體，移植方法的性質(zhì)取決于移植部位。術(shù)語(yǔ)或用語(yǔ)"移植"、"細(xì)胞置換"或"嫁接"在本文可交互使用，指將本發(fā)明的細(xì)胞導(dǎo)入靶組織。所述細(xì)胞可來(lái)自接受者，或者來(lái)自同種異體或異種捐贈(zèng)者。細(xì)胞可嫁接入中樞神經(jīng)系統(tǒng)或心室腔中，或硬膜下嫁接到宿主腦表面上。成功移植的條件包括(i)植入體的存活力；(ii)移植物在移植部位的保留；和(iii)在移植部位的最小量的病理反應(yīng)。將各種神經(jīng)組織(例如胚胎腦組織)移植入宿主腦中的方法描述于"NeuralgraftinginthemammalianCNS(哺乳動(dòng)物CNS中的神經(jīng)移植)",Bjorklund和Stenevi編輯，(1985);Freed等，2001;Olanow等，2003)。這些方法包括腦實(shí)質(zhì)內(nèi)移,即通過(guò)在宿主腦中注射或沉積組織實(shí)現(xiàn)的宿主腦內(nèi)移植(與腦外部或腦實(shí)質(zhì)外移植相比)，以便在移植時(shí)和腦實(shí)質(zhì)相對(duì)置。腦實(shí)質(zhì)內(nèi)移植可使用兩種方法實(shí)現(xiàn)(i)將細(xì)胞注射入宿主腦實(shí)質(zhì)中或(ii)通過(guò)手術(shù)方法制作一個(gè)腔，以暴露宿主腦實(shí)質(zhì)，然后將移植物沉積入腔中。兩種方法都在移植時(shí)在移植物和宿主腦組織之間提供實(shí)質(zhì)沉積，兩種方法都有利于移植物和宿主腦組織之間的解剖學(xué)整合。如果需要移植物變成宿主腦的一個(gè)組成部分并存活宿主一生，那么這一點(diǎn)就特別重要。備選地，移植物可置于室(例如心室)中，或置于硬膜下，即在宿主腦表面上，在該處其通過(guò)插入軟腦膜或蛛網(wǎng)膜和軟腦膜之間與宿主腦實(shí)質(zhì)分開。移植至室可如下實(shí)現(xiàn)注射捐贈(zèng)者細(xì)胞，或在基質(zhì)如3%膠原蛋白中培養(yǎng)細(xì)胞，以形成一塊固體組織，然后可將固體組織植入室中，以防止移植物移位。對(duì)于硬膜下移植，可在硬腦膜中做一個(gè)裂縫后將細(xì)胞注射到腦表面周圍?？赏ㄟ^(guò)鉆一個(gè)孔并刺穿硬腦膜，以允許微量注射器的針插入，對(duì)宿主腦的選定區(qū)域進(jìn)行注射。微量注射器優(yōu)選在立體定位架中固定，并選擇三維立體定位圖譜，用于將針?lè)胖糜谀X或脊髓中的預(yù)期位置。還可將細(xì)胞導(dǎo)入腦的殼核、下橄欖核、海馬皮質(zhì)、紋狀體、黑質(zhì)或尾核區(qū)以及骨髓。還可將細(xì)胞移植入組織的健康區(qū)域。在某些情況下，損傷組織的確切位置可能是未知的，細(xì)胞可隨意地移植入健康區(qū)域。在其它情況下，優(yōu)選可將細(xì)胞施用給健康區(qū)域，由此避免對(duì)該區(qū)域的任何進(jìn)一步損傷。無(wú)論何種情況，在移植后細(xì)胞都優(yōu)選遷移到受損區(qū)域。對(duì)于移植，將細(xì)胞懸浮液抽到注射器中，并施用給麻醉的移植接受者?？墒褂迷摲椒ㄟM(jìn)行多次注射。因此，細(xì)胞懸浮方法允許將細(xì)胞移植入腦或脊髓中的任何預(yù)定部位，相對(duì)無(wú)創(chuàng)傷，允許在幾個(gè)不同部位或相同部位使用相同細(xì)胞懸浮液同時(shí)進(jìn)行多重移植，并容許來(lái)自不同解剖學(xué)區(qū)域的細(xì)胞混合物。多種移植物可由多種細(xì)胞類型的混合物和/或插入到細(xì)胞中的轉(zhuǎn)基因混合物組成。優(yōu)選地，每次移植導(dǎo)入約104至約108個(gè)細(xì)胞。對(duì)可優(yōu)選用于脊髓移植的腔中移植，通過(guò)取出覆在腦上的骨，并用諸如明膠海綿的材料止血，由接近中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)外表面的區(qū)域取出組織，以形成移植腔，如Stenevi等(BrainRes.114:1-20.,1976)所述。可使用抽吸建立腔。然后把移植物置于腔中?？墒褂眉?xì)胞或固體組織移植物注射將1個(gè)以上的移植物置于相同腔中。優(yōu)選地，本發(fā)明細(xì)胞的移植部位由待治療的CNS疾病和細(xì)胞中包含的星形膠質(zhì)細(xì)胞表型(例如分泌的特定神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)指示。例如，優(yōu)選將分泌GDNF的細(xì)胞植入Parkinson病患者的黑質(zhì)中。因?yàn)榉亲泽w細(xì)胞在給予機(jī)體時(shí)可能誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，所以已開發(fā)出幾種方法降低再注射非自體細(xì)胞的可能性。這些方法包括抑制受體免疫系統(tǒng)或在移植前將非自體細(xì)胞嚢化在免疫屏障半透膜中。嚢化技術(shù)一般分類為包含小球載體的微囊化和包含較大平板和中空纖維膜的大尺度嚢化(macroencapsulation)(Uludag,H.等，Technologyofmammaliancellencapsulation.AdvDrugDelivRev.2000;42:29-64)。制備微膠嚢的方法是本領(lǐng)域已知的，包括例如公開于以下的那些方法LuMZ等，Cellencapsulationwithalginateandalpha-phenoxycinnamylidene-acetylatedpoly(allylamine)(用藻酸鹽和a-苯氧基亞肉桂基-乙?；木?丙烯胺)包囊細(xì)胞).BiotechnolBioeng.2000,70:479-83,ChangTM和PrakashS.Proceduresformicroencapsulationofenzymes,cellsandgeneticallyengineeredmicroorganisms(酶、細(xì)胞和基因工程改造的微生物的微包嚢方法).MoJBiotechnol.2001,17:249-60,以及LuMZ等，Anovelcellencapsulationmethodusingphotosensitivepoly(allylaminealpha-cyanocinnamylideneacetate)(用光每文聚(丙烯胺a-氰基亞肉才圭基乙酸鹽(或酯)包囊細(xì)胞的新方法).JMicroencapsul.2000,17:245-51。例如，通過(guò)復(fù)合修飾的膠原蛋白和2-曱基丙烯酸羥乙酯(HEMA)、甲基丙烯酸(MAA)和甲基丙烯酸甲酯(MMA)的三聚合物殼，產(chǎn)生2-5pm厚度的嚢體，制備微嚢體。此微嚢體可用另外的2-5jam三聚合物殼進(jìn)一步嚢化，以便賦予帶負(fù)電荷的光滑表面，并最小化血漿蛋白吸附(Chia,S.M.等，Multi-layeredmicrocapsulesforcellencapsulationBiomaterials.200223:849-56)。其它微嚢體基于一種海洋生物多糖藻酸鹽(Sambams,A.Encapsulatedisletsindiabetestreatment.DiabetesTechnol.Ther.2003,5:665-8)或其衍生物。例如，可通過(guò)在氯化鈣存在下在聚陰離子藻酸鈉和具有聚陽(yáng)離子鹽酸聚(亞甲基-共-胍)的硫酸纖維素鈉之間聚合電解質(zhì)復(fù)合制備微嚢體。要理解的是，在使用較小嚢體時(shí)，細(xì)胞囊化被改善。因此，當(dāng)將嚢體尺寸由1mm減小至400pin時(shí)，嚢化細(xì)胞的質(zhì)量控制、機(jī)械穩(wěn)定性、擴(kuò)散特性和體外活性改善(CanapleL.等，Improvingcellencapsulationthroughsizecontrol.JBiomaterSciPolymEd.2002;13:783-96)。而且，發(fā)現(xiàn)具有小至7nm的良好控制的孔徑、特制的表面化學(xué)和精細(xì)的微觀結(jié)構(gòu)的納米孔徑生物嚢體成功地將微觀環(huán)境與纟田月包免疫隔離(WilliamsD.Smallisbeautiful:microparticleandnanoparticletechnologyinmedicaldevices.MedDeviceTechnol.1999,10:6-9;Desai,T.A.Microfabricationtechnologyforpancreaticcellencapsulation.ExpertOpinBiolTher.2002,2:633-46)。免疫抑制劑的實(shí)例包括但不限于氨甲蝶呤、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢霉素、環(huán)孢菌素A、氯喹、羥基氯會(huì)、柳氮磺胺吡啶(sulphasalazopyrine)、金鹽、D-青霉胺、來(lái)氟米特、咪唑硫嘌呤、阿那白滯素、英利昔單抗(REMICADE)、依那西普、TNFa阻斷劑、靶向炎性細(xì)胞因子的生物劑和非甾族抗炎藥物(NSAID)。NSAID的實(shí)例包括但不限于乙酰水楊酸、水楊酸膽堿鎂、雙氟尼酸、水楊酸鎂、雙水楊酯、水楊酸鈉、雙氯芬酸、依托度酸、非諾洛芬、氟比洛芬、消炎痛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯胺苯酸鈉、萘普生、nabumetone、保泰松、吡羅昔康、舒林酸、托美汀、醋氨酚、布洛芬、Cox-2抑制劑和曲馬多。在本文所述的任一種方法中，細(xì)胞可自身單獨(dú)施用，或優(yōu)選作為還含藥學(xué)可接受載體的藥用組合物的一部分施用。本文使用的"藥用組合物"指本文描述的一種或多種化學(xué)綴合物和其它化學(xué)組分(例如藥學(xué)適宜的載體和賦形劑)的制劑。藥用組合物的用途是利于將化合物施用給受試者。下文的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受的載體"指不對(duì)受試者產(chǎn)生顯著刺激且不廢除所施用化合物的生物活性和特性的載體或稀釋劑。載體的非限制性實(shí)例是丙二醇、鹽水、乳濁液以及有機(jī)溶劑與水的混合物。本文的術(shù)語(yǔ)"賦形劑"指加入到藥用組合物中以進(jìn)一步利于化合物施用的惰性物質(zhì)。賦形劑的非限制性實(shí)例包括碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和淀粉類型、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。按照本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，藥用載體是一種水性鹽水溶液。酉己制和施用藥物的4支術(shù)可見于"Remington'sPharmaceuticalSciences,"MackPublishingCo.,Eastern,PA,最新版，其在此引入作為參考。適宜的施用途徑包括直接施用到目標(biāo)組織或器官中。因此，例如，細(xì)胞可如上文所述直接施用到腦中，或如下下文實(shí)施例3中所述直接施用到肌肉中。對(duì)于本發(fā)明方法使用的任何制劑，開始可由體外和細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定估計(jì)治療有效量或劑量。優(yōu)選地，在動(dòng)物模型中配制劑量，以獲得期望的濃度或滴度。此信息可用于更精確地確定在人中的有用劑量。本文描述的活性成分的毒性和治療效力可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)體外藥學(xué)方法在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中確定。例如，6-OHDA-受損小鼠可用作Parkinson病的動(dòng)物模型。另外，葵花籽實(shí)驗(yàn)可通過(guò)挑戰(zhàn)動(dòng)物在特定時(shí)間段內(nèi)打開葵花籽用于測(cè)試靈敏運(yùn)動(dòng)功能的改善。轉(zhuǎn)基因小鼠可用作Huntingdon疾病模型，所述轉(zhuǎn)基因小鼠包含增加數(shù)目的CAG重復(fù)序列，在紋狀體和大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元中具有huntingtin蛋白和泛素的核內(nèi)包舍體，但在腦干、丘腦或脊髓中沒(méi)有，這與在所述疾病中的神經(jīng)元細(xì)胞損失部位緊密匹配。含SOD-l突變的轉(zhuǎn)基因小鼠可用作ALS疾病的模型。通過(guò)切斷海馬傘單側(cè)橫切的隔海馬途徑?jīng)_莫擬Alzheimers病中失去的隔海馬途徑的膽堿能缺乏。因此，含此受損的動(dòng)物模型可用于測(cè)試用于治療Alzheimers病的本發(fā)明細(xì)胞?？稍谑┯帽景l(fā)明細(xì)胞后分析(如在實(shí)施例2和3中一樣)動(dòng)物的存活和轉(zhuǎn)動(dòng)行為(例如在轉(zhuǎn)棒上)。由這些體外和細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定以及動(dòng)物研究獲得的數(shù)據(jù)可用于配制一系列在人中使用的劑量。劑量可根據(jù)使用的劑型和使用的施用途徑改變?？筛鶕?jù)患者病癥由個(gè)體醫(yī)師選擇正確的制劑、施用途徑和劑量，(參見例如Fingl等，1975,載于"ThePharmacologicalBasisofTherapeutics",第1章，第1頁(yè))。例如，Parkinson病患者可依椐癥狀監(jiān)測(cè)指示對(duì)治療積極反應(yīng)的改善的運(yùn)動(dòng)機(jī)能。對(duì)于注射，藥用組合物的活性成分可配制在水性溶液中，優(yōu)選配制在生理相容性緩沖液中，例如Hank溶液、Ringer溶液或生理鹽水緩沖液。劑量和間隔可單獨(dú)地調(diào)整至足以有效調(diào)節(jié)植入細(xì)胞的神經(jīng)遞質(zhì)合成的活性成分水平。獲得期望作用必須的劑量取決于施用的個(gè)體特征和途徑。檢測(cè)測(cè)定可用于確定血漿濃度。根據(jù)要治療的病癥的嚴(yán)重性和反應(yīng)性，給藥可為單次或多次施用，治療過(guò)程持續(xù)幾天至幾周，或?qū)崿F(xiàn)病況的減輕。當(dāng)然，要給予的組合物的量取決于要治療的個(gè)體、侵染的嚴(yán)重性、施用方式、主治醫(yī)師的判斷等。施用的劑量和時(shí)間要對(duì)小心和持續(xù)監(jiān)測(cè)的個(gè)體改變狀況作出反應(yīng)。例如，基于監(jiān)測(cè)指示給受治療的Parkinson病患者施用足以減輕疾病癥狀的細(xì)胞量。本發(fā)明的細(xì)胞可與用于治療神經(jīng)退化病的治療劑如神經(jīng)節(jié)苷脂、抗生素、神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)激素、毒素、促突起分子以及抗代謝物和神經(jīng)遞質(zhì)分子前體如L-DOPA共給予。另外，本發(fā)明的細(xì)胞可與能夠合成神經(jīng)遞質(zhì)的其它細(xì)胞共給予。這些細(xì)胞描述于本發(fā)明人的美國(guó)專利申請(qǐng)第20050265983號(hào)。在移植后，本發(fā)明的細(xì)胞優(yōu)選在患病部位存活一段時(shí)間(例如至少6個(gè)月)，以便觀察到治療作用。如在實(shí)施例2中所述，本發(fā)明的細(xì)胞在移植后16周時(shí)在6-OHDA受損小鼠腦半球中顯示存活，并在移植后110天時(shí)在轉(zhuǎn)基因ALS小鼠模型中顯示存活。本文使用的術(shù)語(yǔ)"約"指±10%。在檢驗(yàn)以下無(wú)限制意圖的實(shí)施例時(shí)，本發(fā)明的其它目標(biāo)、優(yōu)勢(shì)和新特征對(duì)本領(lǐng)域一般技術(shù)人員將變得顯而易見。另外，如上文描述和以下權(quán)利要求部分中要求保護(hù)的本發(fā)明的各種實(shí)施方案和方面的每一個(gè)都可在以下實(shí)施例中找到實(shí)驗(yàn)支持。實(shí)施例現(xiàn)在援引以下實(shí)施例，這些實(shí)施例連同以上描述一起以非限制性方式闡述本發(fā)明。一般來(lái)說(shuō)，本文使用的命名法和在本發(fā)明中使用的實(shí)驗(yàn)室方法包括分子學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)和重組DNA技術(shù)。這些技術(shù)在文獻(xiàn)中被充分闡述。參見例如"MolecularCloning:AlaboratoryManual(分子克隆實(shí)驗(yàn)指南)，，Sambrook等，(1989);"CurrentProtocolsinMolecularBiology(現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南)"I-III巻，Ausubel，R.M.等，(1994);Ausubel等，"CurrentProtocolsinMolecularBiology(現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南)"，JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland(1989);Perbal,"APracticalGuidetoMolecularClomng(實(shí)用分子克隆指南)，，，JohnWiley&Sons,NewYork(1988);Watson等,"RecombinantDNA(重組DNA)",ScientificAmericanBooks,NewYork;Birren等(編輯)"GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries(基因組分析實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)系列)"，1-4巻，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork(1998);陳述于美國(guó)專利第4,666,828、4,683,202、4,801,531、5，192,659和5,272,057號(hào)的方法；"CellBiology:ALaboratoryHandbook(細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))"，I-III巻Cellis,J.E.編輯，(1994);Freshney的"CultureofAnimalCells-AManualofBasicTechnique(動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)手冊(cè))",Wiley國(guó)Liss,N.Y.(1994),第3版；"CurrentProtocolsinImmunology(現(xiàn)代免疫學(xué)指南)"I-III巻ColiganJ.E.編輯，(1994);Stites等(編輯)，"BasicandClinicalImmunology(基礎(chǔ)和臨床免疫學(xué))"(第8版)，Appleton&Lange，Norwalk,CT(1994);Mishell和Shiigi(編輯)，"SelectedMethodsinCellularImmunology(細(xì)胞免疫學(xué)精選方法)，，,W.H.FreemanandCo.，NewYork(1980);可用的免疫測(cè)定詳盡描述于專利和科學(xué)文獻(xiàn)，參見例如美國(guó)專利第3,791,932、3,839,153、3,850,752、3,850,578、3,853,987、3,867,517、3,879,262、3,901,654、3,935,074、3,984,533、3,996,345、4,034,074、4,098,876、4,879,219、5，011,771和5,281,521;"OligonucleotideSynthesis(寡核苷酸合成)"Gait,M.J.編輯,(1984);"NucleicAcidHybridization(核S交雜交)，，Hames,B.D.,和HigginsS.丄編輯，(1985);"TranscriptionandTranslation(轉(zhuǎn)錄和翻譯)"Hames,B.D.,和HigginsS.J.編輯,(1984);"AnimalCellCulture(動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng))，，F(xiàn)reshney,R.L編輯，(1986);"ImmobilizedCellsandEnzymes(免疫的細(xì)胞和酶)"IRLPress,(1986);"APracticalGuidetoMolecularClomng(實(shí)用分子克隆指南)，，Perbal,B.,(簡(jiǎn))以及"MethodsinEnzymology(酶學(xué)方法)"1-317巻，AcademicPress;"PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications(PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)指南)，,，AcademicPress,SanDiego,CA(1990);Marshak等，"StrategiesforProteinPurificationandCharacterization-ALaboratoryCourseManual(蛋白質(zhì)純化與鑒定實(shí)驗(yàn)指南)"CSHLPress(1996);所有這些文獻(xiàn)都如同其在本文完整陳述一樣引入作為參考。其它一般性文獻(xiàn)貫穿本文件提供。其中的方法一般被認(rèn)為是本領(lǐng)域眾所周知的，提供它們是為了方便讀者D其中包含的所有信息都在此引入作為參考。實(shí)施例l差承辰I勿應(yīng)為V么的5MSC^#在材料和方法乂BMSC"》、岸*潛#:由知情同意的健康成人捐贈(zèng)者的后髂峰收集骨髓抽吸液(10-30ml)。通過(guò)FICOL-PAGUE密度梯度(1.077g/ml)分離低密度BM單核細(xì)胞(BMMNC),并用HBSS清洗。接著，將細(xì)胞接種在聚苯乙烯塑料燒瓶的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。生長(zhǎng)培養(yǎng)基由補(bǔ)加15%胎牛血清(FCS)、2mML-谷氨酰胺、100嗎/ml鏈霉素、100U/ml青霉素、2.5單位/ml制霉菌素(SPN)的dulbecco改良型eagle培養(yǎng)基組成。以培養(yǎng)基置換去除非粘附細(xì)胞。在匯合后，胰蛋白酶化粘附層，再接種，生長(zhǎng)至匯合，并在實(shí)驗(yàn)前傳代2-6次。生長(zhǎng)培養(yǎng)基一周更換兩次，細(xì)胞保持于37。C的濕潤(rùn)'5%C02溫育箱中。^承農(nóng)#勿^#必為誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞分化，將1x106個(gè)細(xì)胞在10mm皿中生長(zhǎng)。用預(yù)分化培養(yǎng)基置換細(xì)胞達(dá)48小時(shí)(DMEM,補(bǔ)加SPN、2mML-谷氨酰胺、20ng/ml人表皮生長(zhǎng)因子hEGF(R&D,Systems,Minneapolis,MN)、20ng/ml人石成性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hbFGF)和N2補(bǔ)加物(胰島素5jug/ml、孕酮20nM、腐胺100岸、硒30nM、轉(zhuǎn)鐵蛋白100嗎/ml)。在48小時(shí)后，將預(yù)分化培養(yǎng)基更換為分化培養(yǎng)基，(DMEM，補(bǔ)力。SPN、2mML-谷氨酰胺、lmM二丁酰環(huán)腺普酸dbcAMP、0.5mM異丁基甲基黃嘌呤IBMX(Sigma-Adrich,St.Louis,Missouri,USA)、5ng/ml人血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF(peprotech)和50ng/ml人神經(jīng)調(diào)節(jié)素1-(31NRG-J3卜GGF-2)。在某些實(shí)驗(yàn)中，在分化開始后24小時(shí)將IL-ip(100pg/ml)或卡麥角林(130pg/ml)加入培養(yǎng)基中。名瘦勿應(yīng)化,對(duì)于免疫化學(xué)分析，細(xì)胞在12mm圓形聚-L-賴氨酸包被的玻璃蓋玻片上生長(zhǎng)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，去除培養(yǎng)基，細(xì)胞用多聚甲醛4%(體積/體積)于室溫固定20分鐘，此后用0.25%TritonX-100(體積/體積)的0.1MPBS溶液透化20分鐘。通過(guò)將細(xì)胞在含5%正常山羊血清(NGS)和1。/。牛血清白蛋白(BSA)(Sigma)的0.1MPBS溶液中于37。C溫育1小時(shí)封閉非特異性結(jié)合。隨后，將細(xì)胞在含0.25%TritonX-100(體積/體積)、5%NGS和1%BSA的0.1MPBS溶液中與一抗溫育，所述一抗即兔抗神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)1:100(DAKO)、兔抗-GDNF1:100(SantaCruzBiotechnologyInc.,SantaCruz,California,USA)、小鼠抗人核h-Nuc1:30、兔抗谷氨酰胺合成酶1:200(Sigma-Aldrich,St.Louis,Missouri,USA)、小鼠抗S100(31:200(Sigma-Aldrich,St.Louis,Missouri,USA)。對(duì)于GDNF染色，加入山羊抗兔生物素化(1:200)二抗達(dá)1小時(shí)，隨后加入鏈霉抗生物素蛋白-Alexa-488綴合的山羊抗兔IgG抗體1:200(MolecularProbes,Eugene,OR,USA)。對(duì)于其它染色，將Alexa-488綴合的山羊抗兔IgG抗體1:200和羅丹明-Rx-綴合的1:200(JacksonImmunoResearchLaboratories,WestGrove,PA,USA)在含0.25°/。TritonX-100(體積/體積)、5%NGS和1。/。BSA的0.1MPBS溶液中稀釋，并于室溫應(yīng)用1小時(shí)。用核染料DAPI1:200(Sigma,Aldrich)染色核5分鐘。在用PBS淋洗3次后，制劑在Antifaiding(Sigma,Israel)中封裝，并使用配備CCD照相機(jī)的焚光顯微鏡檢查(T.I丄丄.photonics,Martinsried,Germany)。激發(fā)波長(zhǎng)(對(duì)于Alexa488、DAPI和Alexa568分別為488、405和568nm)使用配備單色器的氣燈(T.I丄丄.photonics,Martinsried,Germany)產(chǎn)生。數(shù)字圖象使用適宜的濾光片獲得，并使用TILLvisION軟件合并。*BZ)7VF》、^f:在上述分化方法結(jié)束時(shí)，由平板收集上清液，收獲細(xì)胞并計(jì)數(shù)。使用GDNF或BDNF免疫測(cè)定系統(tǒng)(Promega)按照生產(chǎn)商的方法定量細(xì)胞裂解物和培養(yǎng)上清液中的GDNF或BDNF的量。450nm的吸光度記錄在微板讀數(shù)器(BioRadModel550)上，讀數(shù)值用于產(chǎn)生GDNF或BDNF標(biāo)準(zhǔn)曲線。GDNF標(biāo)準(zhǔn)曲線在15.6和1,000pg/ml之間是線性的。ELISA結(jié)果按照106個(gè)細(xì)胞/板計(jì)算。勿啟V"炎伊介為了確定表達(dá)特定抗原的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，仔細(xì)檢查每個(gè)樣品的3個(gè)獨(dú)立培養(yǎng)物的15個(gè)視野收集數(shù)據(jù)。這些樣品中的MSC總數(shù)通過(guò)計(jì)數(shù)DAPI-染色的細(xì)胞核測(cè)定，結(jié)果表示為針對(duì)GDNF、谷氨酰胺合成酶或S00(3的陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。/M/fiVr4^浙務(wù)^!口Chomczynski-口Sacchi(AnalBiochem162:156-159,1987)所述分離總RNA。細(xì)胞用200pl溶液D(4M硫氰酸胍、25mM檸檬酸鈉、0.5%十二烷基肌氨酸鈉、0.1M2-巰基乙醇)裂解。隨后，加入0.1體積的2M乙酸鈉(pH4)、1體積苯酚(飽和的)和0.2體積的氯仿:異戊醇(49:1)。使樣品于4'C沉降30分鐘，然后于4。C以10,000xg離心20分鐘。將上部的水相與2體積乙醇混合，于-20。C使RNA過(guò)夜沉淀。最終的RNA沉淀用75%乙醇清洗，風(fēng)干。將沉淀溶解在DEPC-處理的水中。使用ND-1000分光光度計(jì)(Nano-drop)化學(xué)計(jì)量測(cè)定RNA量。通過(guò)檢測(cè)OD260/OD280比率證實(shí)RNA量。RNA儲(chǔ)存于-80。C,直至使用。實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)目標(biāo)基因的實(shí)時(shí)定量PCR在ABIPrism7700測(cè)序系統(tǒng)(Appliedbiosystems)中進(jìn)行，使用SybrgreenPCRmastermix(Appliedbiosystems)和以下引物GAPDH有義引物5'-CGACAGTCAGCCGCATCTT-3'(SEQIDNO:l)、GAPDH反義引物5'-CCAATACGACCAAATCCGTTG-3'(SEQIDNO:2)、GDNF有義引物5'-TCAAATATGCCAGAGGATTATCCTG-3'(SEQIDNO:3)、GDNF反義引物5'-GCCATTTGTTTATCTGGTGACCTT-3'(SEQIDNO:4):BDNF有義引物5'-AGCTCCGGGTTGGTATACTGG-3'(SEQIDNO:5)、BDNF反義引物5'誦CCTGGTGGAACTTCTTTGCG-3'(SEQIDNO:6)、GLAST有義引物5'-AGAATGAGCTACCGGGAAGTCA-3'(SEQIDNO:7)、GLAST反義引物5'-CTAGCGCCGCCATTCCT-3'(SEQIDNO:8)、NGF有義引物5'國(guó)CATGCTGGACCCAAGCTCA-3'(SEQIDNO:9)、NGF反義引物5'-GACATTACGCTATGCACCTCAGTG-3'(SEQIDNO:10)、GFAP有義引物TAGAGGGCGAGGAGAACCG-3'(SEQIDNO:11)、GFAP反義引物5'GTGGCCTTC丁GACACAGACTTG-3'(SEQIDNO:12)、GLT-1有義引物5'-TTGGCTCAGAGGAACCCAAG-3'(SEQIDNO:13)、GLT-1反義引物5'-CAGGATGACACCAAACACCGT-3'(SEQIDNO:14)、S100(3有義引物5'-GGGTGAGACAAGGAAGAGGATG-3'(SEQIDNO:15)、S100卩反義引物5'曙GCTTGTGCTTGTCTCCCTCC-3'(SEQIDNO:16)、谷氨酰胺合成酶有義引物5'-CGAAGGCCTGCAGAGACC-3'(SEQIDNO:17)、谷氨酰胺合成酶反義引物5'-AGGGTATACTCCTGCTCCA丁GC-S'(SEQIDNO:18)。GAPDH基因用作進(jìn)行轉(zhuǎn)錄譜分析的有效參比'持家，基因。對(duì)于定量，以一式兩份進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)。對(duì)于每個(gè)樣品，在相同PCR反應(yīng)板的單獨(dú)孔中進(jìn)行qPCR擴(kuò)增，該反應(yīng)板還包舍擴(kuò)增的各個(gè)基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線和無(wú)模板對(duì)照(NTC)。確定各個(gè)51物對(duì)的最佳實(shí)驗(yàn)參數(shù)(雜交溫度、延伸溫度和引物濃度)。對(duì)于每個(gè)基因，檢驗(yàn)在解鏈曲線分析中的單峰評(píng)《介PCR產(chǎn)物的特異性。在含jliI上述cDNA、1^每種3'和5'引物(終濃度均為500nmol/L)、10piAbsoluteTMQPCRSYBRGreenROXMix和8DEPC水的20/il總體積中進(jìn)行PCR。擴(kuò)增程序是40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)為90。C、15秒后接6(TC、l分鐘。如在ABIprism7700測(cè)序系統(tǒng)的用戶公告#2(10/2001更新)中的說(shuō)明，使用ddCT法進(jìn)行目標(biāo)基因?qū)APDH的定量計(jì)算。逆脊求果合凝鏈足應(yīng)^r-尸0):在含1.3寡-dT]2-18(Sigma,USA)、生產(chǎn)商提供的]x緩沖液、10mMDTT、20dNTP和RNA酶抑制劑(RNAguard,amershampharmaciabiotech,UK)的混合物中使用10U酶RT-superscriptII(Gibco-BRL,MD,USA)對(duì)0.5RNA樣品進(jìn)行RT-PCR。于42。C進(jìn)行2小時(shí)逆轉(zhuǎn)錄。在含2iulRT、1x緩沖液(Takara,Japan)、200dNTP、1)iM每種引物和5U單位Taq聚合酶(Takara,Japan)的混合物中用特異性引物進(jìn)行目標(biāo)基因的PCR，接著在熱循環(huán)儀中進(jìn)行25-30個(gè)循環(huán)94°C、30秒；55。C退火30秒，于72'C進(jìn)行45秒的DNA延伸。在這些實(shí)驗(yàn)條件下觀察擴(kuò)增的線性。按照本發(fā)明的方法對(duì)未分化的hBMSC和分化的BMSC進(jìn)行RT-PCR。對(duì)比兩種細(xì)胞類型之間的基因表達(dá)和星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)(由文獻(xiàn)獲得的信息)。優(yōu)選序列詳述于下文的表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>々潛逸^M凝裙細(xì)胞用2.50/o戊二醛的磷酸鹽緩沖液(pH7.2)固定，以相同緩沖液清洗，并用2。/()Os04后固定。固定的第三步使用鞣酸和鹽酸胍溶液進(jìn)行。三重固定的細(xì)胞在分級(jí)乙醇溶液中脫水。然后使用分級(jí)Freon溶液將乙醇更換為Freon-U2。風(fēng)干細(xì)胞，用金包被，并使用Jeol840掃描電子顯微鏡檢查。^^虔^^承對(duì)胰蛋白酶化的分化細(xì)胞進(jìn)行谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能表征。通過(guò)檢測(cè)在含Na+的緩沖液中于37。C溫育6分鐘后的卩H]-d-天冬氨酸(20nM)攝取估測(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)速度。谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的比活表示為每mg蛋白量的攝取速度。結(jié)果按照本發(fā)明方法分化的hBMSc得到了類似星形膠質(zhì)細(xì)胞的衛(wèi)星樣形態(tài)，而單獨(dú)地在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的對(duì)照細(xì)胞表現(xiàn)出hBMSc的扁平成纖維細(xì)胞樣形態(tài)特征(圖1A-B)。還使用掃描電子顯微鏡分析了分化細(xì)胞，證實(shí)了其特有的星形膠質(zhì)細(xì)胞衛(wèi)星形態(tài)(圖2A-D)。還使用采用典型星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的免疫熒光分析進(jìn)一步證實(shí)了細(xì)胞的星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。如在圖3A-B中所示，形態(tài)學(xué)變化伴有對(duì)S100p(星形膠質(zhì)細(xì)胞Ca+通道的亞基)和谷氨酰胺合酶(GS)(代謝谷氨酸的獨(dú)特星形膠質(zhì)細(xì)胞酶)的陽(yáng)性免疫染色。另外，細(xì)胞對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性染色(圖4A)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色數(shù)據(jù)的定量揭示，針對(duì)S00p、GFAP和GS的陽(yáng)性細(xì)胞百分率在20-30%的范圍內(nèi)。為進(jìn)一步證實(shí)星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)，進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR分析。如在圖4B中所示，GFAP轉(zhuǎn)錄物被上調(diào)10-20倍。S100p和GS轉(zhuǎn)錄物顯示出相似值。因?yàn)橐阎切文z質(zhì)細(xì)胞分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NTF),所以分析GDNF、NGF和BDNF等NTF的mRNA水平。實(shí)時(shí)PCR分析揭示，星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc表達(dá)大量NTF轉(zhuǎn)錄物，相比之下在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的MSC中存在少量或沒(méi)有這些轉(zhuǎn)錄物(圖5)。用抗GDNF進(jìn)行免疫染色揭示，30%的培養(yǎng)細(xì)胞被所述抗體陽(yáng)性染色(圖6A-B)。采用特異性抗體的ELISA測(cè)定用于定量NTF的生產(chǎn)和分泌。在細(xì)胞提取物(圖7)和生長(zhǎng)培養(yǎng)基(圖8A)中測(cè)試GDNF生產(chǎn)的檢測(cè)結(jié)果。盡管在培養(yǎng)的MSC和成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系(用雷沙吉蘭處理的SH-SY5Y)中檢測(cè)到基礎(chǔ)水平的GDNF生產(chǎn)，但在培養(yǎng)基中僅在分化的MSC中檢測(cè)到GDNF。而且，在加入已知上調(diào)GDNF的因子IL-1(3和卡麥角林后檢測(cè)到顯著增強(qiáng)的GDNF生產(chǎn)和分泌。此現(xiàn)象支持分化細(xì)胞作為星形膠質(zhì)細(xì)胞響應(yīng)的觀點(diǎn)。比較幾個(gè)捐贈(zèng)者中的分泌的GDNF和NGF的水平，可以看出分泌水平在69-140pgGDNF/]06個(gè)細(xì)胞之間(圖8B)和356-875pgNGF/l()6個(gè)細(xì)胞之間(圖8C)變化。星形膠質(zhì)細(xì)胞通過(guò)經(jīng)高親和性谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體清除谷氨酸和通過(guò)谷氨酰胺合成酶分解代謝谷氨酸而在保持低胞外谷氨酸濃度方面起重要作用。因此，使用用于谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體和谷氨酰胺合成酶表達(dá)的RT-PCR分析來(lái)分析分化細(xì)胞。在星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的hBMSc中發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的GLT-l/EAAT-2轉(zhuǎn)錄物(圖9)。以來(lái)自分化細(xì)胞而不是來(lái)自MSC的培養(yǎng)基的3H-谷氨酸攝取顯示谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性(pO.005)(圖10)。進(jìn)行更詳細(xì)的RT-PCR分析，以便確定本發(fā)明的細(xì)胞表達(dá)哪種間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記和哪種星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記。還將兩種細(xì)胞類型中的基因表達(dá)與星形膠質(zhì)細(xì)胞中的基因表達(dá)對(duì)比(由文獻(xiàn)獲得的信息)。結(jié)果概述于下文的表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>因此，可以看出，本發(fā)明的分化細(xì)胞顯示出與間充質(zhì)干細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞均不同的特定表型。例如，本發(fā)明的細(xì)胞表達(dá)CD90、酪氨酸輕化酶和H-NF，這可將它們與星形膠質(zhì)細(xì)胞區(qū)分開。另外，本發(fā)明的細(xì)胞表達(dá)高水平的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記，這將它們與間充質(zhì)干細(xì)胞區(qū)分開。實(shí)施例2效炎'伴^;^控f承/^者勿^^^》、化^y^M^攻吝^(guò)嫂義處付適動(dòng)在游為了研究本發(fā)明細(xì)胞的可能治療潛力，將按照本發(fā)明方法分化的HBMSC移植入既建Parkinson病大鼠模型中。材料和方法動(dòng)浙雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan,Israel)重220-280g,用于6-OHDA-受損實(shí)驗(yàn)。所有動(dòng)物都圈養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)條件下恒溫(22±1"C)、濕度(相對(duì)濕度，30%)、12小時(shí)晝:12小時(shí)夜循環(huán)以及自由獲取食物和ISRAEL的動(dòng)物管理委員會(huì)監(jiān)督下進(jìn)行。6-^7ZX4f源大鼠用350mg/kg水合氯醛腹膜內(nèi)麻醉，并關(guān)在立體定位架(Stoelting,USA)中。使用帶有26號(hào)針的Hamilton10pl注射器將氫溴酸6-OHDA(12)ng/6pl溶解在抗壞血酸-鹽水中)單側(cè)注射入動(dòng)物的左紋狀體的兩個(gè)部位(每個(gè)部位6)Lll，處于兩個(gè)深度)中?；诹Ⅲw定位圖諳(？3乂11108&Watson,1986)的注射坐標(biāo)如下(l)AP:距前囟+0.5mm，L:-2.5111111側(cè)面至中間，V:-6.5mm腹側(cè)至硬腦膜表面，和(2)AP:-0.5mm,L:-3.7mm，V:-6.0mm。在注射完成時(shí)，套管原地再停留3分鐘，然后以1mm/分鐘拔出，以防止真空。W趁浙在大腦內(nèi)注射6-OHDA后14天檢驗(yàn)受損大鼠的轉(zhuǎn)動(dòng)行為。在皮下注射DA激動(dòng)劑阿樸嗎啡(Sigma,0.15mg/kg,溶解在生理鹽水中)后1小時(shí)在自動(dòng)化轉(zhuǎn)動(dòng)檢測(cè)裝置中監(jiān)測(cè)運(yùn)動(dòng)不對(duì)稱。阿樸嗎啡誘導(dǎo)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)動(dòng)行為至原先的受損側(cè)，因?yàn)榧y狀體DA受體由于6-OHDA受損而變成高度敏感的。具有每分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)5次的旋轉(zhuǎn)速度的大鼠被看作是既建PD模型，用于移植實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)廣泛用作紋狀體中多巴胺損耗的可靠指示。移控在6-OHDA受損后6周，將PD模型大鼠分為2組〗個(gè)對(duì)照組和1個(gè)實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組中的大鼠(n=7)注射0.9%鹽水。實(shí)驗(yàn)組中的大鼠(n-6)移植產(chǎn)生GDNF的細(xì)胞。在移植前收集hBMSC星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞，并以5xl()S個(gè)有活力細(xì)胞/5iLil重懸在鹽水中。將細(xì)胞通過(guò)10jalHamilton注射器的26號(hào)針以兩個(gè)深度立體定向注射入左紋狀體中的一個(gè)部位(每個(gè)深度2.5|al)。用于注射的坐標(biāo)如下(l)AP:十].Omm,L:+3.0mm，V:-5.0mm;和(2)AP:+1.0mm,L:+3.0mm,V:-4.1mm，牙齒勾桿組件處于耳間線水平。在操作后，如上所述每?jī)芍軐?duì)動(dòng)物進(jìn)行一次轉(zhuǎn)動(dòng)測(cè)試。對(duì)于人MSC移;f直，通過(guò)每天皮下注射Sandimune(10mg/kg/天；Novartis)免疫抑制動(dòng)物。脊舉在移;f直后3個(gè)月測(cè)試轉(zhuǎn)棒任務(wù)的性能。所述任務(wù)的組成為3次連續(xù)實(shí)驗(yàn)，其中大鼠被放置于轉(zhuǎn)棒上并努力(直至16RPM)防止它們自己跌下加速的轉(zhuǎn)棒。每次實(shí)驗(yàn)持續(xù)達(dá)最多2分鐘。實(shí)驗(yàn)之間的間隔是30秒。結(jié)果由每周兩次的測(cè)試獲得。/^7《莽浙試該測(cè)試的目的是要求動(dòng)物達(dá)到在5分鐘的最大時(shí)間段內(nèi)打開葵花籽。為了進(jìn)行測(cè)試，不給予動(dòng)物過(guò)量食物，在開始監(jiān)測(cè)前3天僅以45mg/gk/天供應(yīng)動(dòng)物。訓(xùn)練動(dòng)物3天，在第4和第5天進(jìn)行檢測(cè)。將動(dòng)物放置于空籠中，提供葵花籽達(dá)5分鐘。檢測(cè)打開并吃下的葵花籽凄文。[GonzalezC,KolbB.Acomparisonofdifferentmodelsofstrokeonbehaviorandbrainmorphology(不同打擊沖莫型只于4亍為牙口腦形態(tài)影響的對(duì)比).E.丄Neuroscience18(1950-1962),2003〗。^瘦逸織^,:在移植后16周，對(duì)對(duì)照和治療組進(jìn)行免疫染色。用水合氯醛(350mg/kg腹膜內(nèi))深度麻醉大鼠，并用65ml冷鹽水經(jīng)心臟灌注，之后以250ml冷4%多聚甲醛的0.1mol/1PBS溶液(pH7.4)灌注。取出腦，置于4%PFA/PBS中達(dá)48小時(shí)，接著在20。/。蔗糖/PBS中冷保護(hù)48小時(shí)，然后冷凍在干冰上的異戊烷中。在冷凍切片機(jī)上將腦的連續(xù)冠狀切片切成20ium厚度。切片用PBS清洗3次，隨后在5。/o正常馬血清(BiologicalIndustries)的PBS溶液中封閉1小時(shí)。隨后，在含抗人細(xì)胞核(1:30;小鼠單克??；ChemiconInternational,Temecula,CA,USA)、抗GDNF(1:200;兔多克隆，SantaCmz)和抗GFAP(1:100，兔DAKO)的一抗的相同溶液中溫育切片24小時(shí)。然后用PBS清洗切片3次，并于室溫與二抗接觸1小時(shí)，所述二抗為偶聯(lián)羅丹明的山羊抗小鼠IgG(1:500;JacksonImmunoResearchLaboratoriesInc.,WestGrove,PA，USA)和偶聯(lián)Alexa-488的山羊抗兔IgG(1:500MolecularProbes,Eugene,OR,USA)。用核染料DAPI1:200(Sigma)染色細(xì)胞核5分鐘。最后，切片用0.1MPBS淋洗，并用95%甘油覆蓋。通過(guò)去掉(i)一抗，(ii)二抗，以及(iii)一抗和二抗，進(jìn)行對(duì)照免疫染色實(shí)驗(yàn)。結(jié)果將6-羥基多巴胺紋狀體內(nèi)注射到大鼠腦中，以在紋狀體中誘導(dǎo)溫和的多巴胺能神經(jīng)元損傷。在注射導(dǎo)致同側(cè)旋轉(zhuǎn)的阿樸嗎啡后3周檢測(cè)受損程度。將星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞(5"05個(gè))移植入基于其轉(zhuǎn)動(dòng)性能而預(yù)先選擇的大鼠的同側(cè)紋狀體中。在移植后60、75和105天檢測(cè)移植大鼠和鹽水注射大鼠中的藥理學(xué)誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)動(dòng)行為。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，兩組都每日注射環(huán)孢霉素，以防止移植排斥。如在圖11中所示，移植大鼠(n=8)中阿樸嗎啡誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)動(dòng)在移植后75天時(shí)由平均160次轉(zhuǎn)動(dòng)/小時(shí)下降至60次轉(zhuǎn)動(dòng)/小時(shí)的基線，移植后105天時(shí)下降至50次轉(zhuǎn)動(dòng)/小時(shí)(68°/。和75°/。的下降，p<0.05)。對(duì)照組(n-8)在基線每小時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)155次，在105天后轉(zhuǎn)動(dòng)140次(無(wú)顯著下降)。移植后95天，進(jìn)行非藥理學(xué)轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)，以便提供運(yùn)動(dòng)缺損的直接檢測(cè)結(jié)果。移植星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的動(dòng)物能夠在加速轉(zhuǎn)棒上比對(duì)照走更長(zhǎng)的時(shí)間段(圖12)。還對(duì)動(dòng)物進(jìn)行吃葵花籽測(cè)試。在移植后100天時(shí)，評(píng)價(jià)動(dòng)物在限定時(shí)間內(nèi)(參閱方法)打開葵花籽的能力。移植動(dòng)物在5分鐘內(nèi)打開44個(gè)葵花籽，相比之下對(duì)照在相同時(shí)間內(nèi)打開44個(gè)(p〈0.05)(圖13)。在移植后110天，處死動(dòng)物，并進(jìn)行組織學(xué)研究，以便鑒別和表(圖14A-E)。免疫染色和共焦顯微鏡研究揭示，對(duì)人抗原陽(yáng)性的細(xì)胞達(dá)25。/。對(duì)GFAP也是陽(yáng)性的。這些結(jié)果表明，星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞能夠恢復(fù)紋狀體中的多巴胺缺損，并可能有益于其它神經(jīng)變性病。實(shí)施例3厲力移控f多魔j勿^脊^》VA"/^M9c炎吝^(guò)^差厲/4Z^小葳模費(fèi)付運(yùn)於機(jī)游材料和方法^浙<#資TgN(SOD1-G93A)lGur轉(zhuǎn)基因小鼠(Gurney1994)的種群得自JacksonLaboratory(USA)。小鼠在CSJLFl繁育，在月齡時(shí)通過(guò)PCR分析對(duì)子代進(jìn)行基因表型分析，使用以下PCR引物hSODl上游引物(SEQIDNO:19)5'CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT3';hSODl下游引物(SEQIDNO:20)5'GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC3';IL2上游引物(SEQIDNO:21)5'CATCAGCCCTAATCCATCTGA3';IL2下游引物(SEQIDNO:22)5'CGCGACTAACAATCAAAGTGA3'。退火溫度是53°C，PCR產(chǎn)物為236bp(hSODl)、324bp(IL2)。用于本研究的小鼠直至3月齡時(shí)都是健康的，在4-5月齡之間變成完全癱瘓的。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)由特拉維夫大學(xué)批準(zhǔn)和監(jiān)督。勿應(yīng)移楦#存力在第40天時(shí)，將0.5《106個(gè)人星形膠質(zhì)細(xì)胞分化細(xì)胞(如在實(shí)施例1中所述制備)移植入兩條腿的腓腸肌內(nèi)。通過(guò)轉(zhuǎn)棒裝置以加速轉(zhuǎn)動(dòng)每?jī)芍芤淮卧u(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)性能。逸歡4理夢(mèng)淨(jìng)^:在110天時(shí)處死小鼠，將腿置于4"C的4%多聚甲醛的0.1M磷酸緩沖液pH7.4中。制作石蠟塊，用抗人抗原抗體免疫染色。當(dāng)涉及兩個(gè)以上組別時(shí)，通過(guò)ANOVA和事后Dunnett檢驗(yàn)進(jìn)行比較。如果數(shù)據(jù)不正常分布，則使用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann-WhitneyU-檢驗(yàn))比較結(jié)果。數(shù)據(jù)以平均值±s.e.m.表示。結(jié)果星形膠質(zhì)細(xì)胞分化細(xì)胞(0.5xl0"在第40天移植入hmSOD小鼠(n=8)的肌肉(腳)中。用鹽水注射平行組。另外，野生型小鼠(11=8)和mhSODTg小鼠(n==8)用作陽(yáng)性和陰性對(duì)照D由第40天直至死亡(120-140天)每?jī)芍芤淮卧谵D(zhuǎn)棒上(參見M&M)進(jìn)行行為評(píng)價(jià)。由圖15可見，運(yùn)動(dòng)性能的下降(即ALS癥狀)在移植細(xì)胞的小鼠中被顯著延遲。檢測(cè)動(dòng)物體重，并在移才直組和對(duì)照組之間對(duì)比，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)照組顯示出明顯高于移植組的體重下降(p<0.05)(圖16)。在第IIO天用抗人核抗原抗體進(jìn)行的組織學(xué)研究，結(jié)果表明移植細(xì)胞存活(圖17A-C)。要認(rèn)識(shí)到的是，為明晰起見而在單獨(dú)的實(shí)施方案背景下描述的本發(fā)明的某些特征，還可以在單個(gè)實(shí)施方案中組合提供。相反地，簡(jiǎn)言之，在單個(gè)實(shí)施方案背景下描述的本發(fā)明的多種特征，也可單獨(dú)地或以任何適宜的子組合提供。盡管已描述了本發(fā)明及其具體實(shí)施方案，但顯然，許多改變、修改和變更對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。因此，意味著包含所有這些改變、修改和變更，只要它們屬于所附權(quán)利要求的精神和廣泛范圍。本說(shuō)明書中提及的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)都通過(guò)引用整體結(jié)合到本說(shuō)明書中，其程度如同每個(gè)單獨(dú)的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)具體地和單獨(dú)地引入本文作為參考。另外，本申請(qǐng)中引用或標(biāo)出的任何參權(quán)利要求1.一種分離的人細(xì)胞，所述人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。2.—種分離的人細(xì)胞，所述人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型和至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型。3.—種分離的人細(xì)胞，所迷人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型和至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型，其中所述間充質(zhì)千細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型。4.一種分離的人細(xì)胞，所述人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，并表達(dá)至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，其中所述表達(dá)是間充質(zhì)干細(xì)胞中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基礎(chǔ)表達(dá)的至少2倍高。5.—種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的所述人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型；(ii)至少M(fèi)。/。的所述人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型；和(iii)至少一種所述人細(xì)胞同時(shí)包含所述至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和所迷至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。6.—種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的所述人細(xì)胞表達(dá)至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，其中所述表達(dá)是間充質(zhì)干細(xì)胞中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基礎(chǔ)表達(dá)的至少2倍高；(ii)至少M(fèi)。/。的所述人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；和(iii)至少一種所述人細(xì)胞同時(shí)表達(dá)所述至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和所述至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。7.—種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的所述人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型；(ii)至少M(fèi)。/o的所述人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型；和(iii)至少一種所述人細(xì)胞同時(shí)包含所述至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型和所述至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。8.—種含人細(xì)胞的分離細(xì)胞群，其中(i)至少N。/。的所述人細(xì)胞包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型；(ii)至少M(fèi)。/。的所述人細(xì)胞包含至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型；和(iii)至少一種所述人細(xì)胞同時(shí)包含所述至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型和所述至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型；其中M和N各自獨(dú)立地選自1-99。9.權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7或8中任一項(xiàng)的分離的人細(xì)胞和分離的細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞未被遺傳操作。10.權(quán)利要求1或5的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型是結(jié)構(gòu)表型。11.權(quán)利要求1或5的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型是功能表型。12.權(quán)利要求2或7的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞還包含星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型。13.權(quán)利要求12的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型不是所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型。14.權(quán)利要求3或8的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞還包含星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型。15.權(quán)利要求4或6的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞還包含星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型。16.權(quán)利要求14或15的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型不是所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型。17.權(quán)利要求2、7、10、14或15中任一項(xiàng)的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型是細(xì)胞大小、細(xì)胞形狀、細(xì)胞器大小和細(xì)胞器數(shù)量。18.權(quán)利要求2、7、10、14或15中任一項(xiàng)的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)表型是至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)。19.權(quán)利要求18的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)月包才示i己是表面沖示i己。20.權(quán)利要求18的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記是內(nèi)部標(biāo)記。21.權(quán)利要求3、8、11或12中任一項(xiàng)的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞功能表型是至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，所述表達(dá)的水平是間充質(zhì)干細(xì)胞中所述神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的基礎(chǔ)表達(dá)的至少2倍高。22.權(quán)利要求4、6或21.中任一項(xiàng)的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子選自神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4/5、Neurturin(NTN)、Persephin、腦衍生的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、artemin(ART)、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)、胰島素生長(zhǎng)因子-I(IGF-1)和Neublastin。23.權(quán)利要求22的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述至少一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是GDNF。24.權(quán)利要求18的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記選自S100f3、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(GFAP)、谷氨酰胺合成酶、GLT-1和GLAST。25.權(quán)利要求23的分離的人細(xì)胞或細(xì)胞群，其中所述GDNF的分泌受IL-l(3和/或卡麥角林調(diào)節(jié)。26.—種產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的方法，所述方法包括在含血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)和人神經(jīng)調(diào)節(jié)素-pi的分化培養(yǎng)基中孵育間充質(zhì)干細(xì)胞，由此產(chǎn)生星形力吏質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述孵育的持續(xù)時(shí)間為約48小時(shí)。28.權(quán)利要求26的方法，其中所述PDGF的濃度為約5ng/ml。29.權(quán)利要求26的方法，其中所述人神經(jīng)調(diào)節(jié)素的濃度為約50ng/ml。30.權(quán)利要求26的方法，其中所述分化培養(yǎng)基還包含L-谷氨酰胺、二丁酰環(huán)腺普酸和異丁基甲基黃噤呤IBMX。31.權(quán)利要求26的方法，所述方法還包括在所述孵育之前在一種另外的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，由此使所述細(xì)胞傾向于分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述另外的培養(yǎng)基包含人表皮生長(zhǎng)因子(hEGF)和人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hbFGF)。33.權(quán)利要求32的方法，其中hEGF的濃度為約20ng/m。34.權(quán)利要求32的方法，其中hbFGF的濃度為約20ng/ml。35.權(quán)利要求31的方法，其中所述另外的培養(yǎng)基還包含L-谷氨酰胺、胰島素、孕酮、腐胺、石西和轉(zhuǎn)鐵蛋白。36.權(quán)利要求31的方法，其中所述培養(yǎng)的持續(xù)時(shí)間為約48小時(shí)。37.權(quán)利要求26的方法，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞如下獲得(a)在能夠維持和/或擴(kuò)增所述間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)含所述間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞群；和(b)從步驟(a)產(chǎn)生的細(xì)胞中選擇所述間充質(zhì)干細(xì)胞。38.權(quán)利要求37的方法，其中步驟(b)通過(guò)收獲表面粘附細(xì)胞實(shí)施。39.—種產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)^L樣細(xì)胞的方法，所述方法包括在含至少一種分化劑的培養(yǎng)基中孵育間充質(zhì)干細(xì)胞，所述至少一種分化劑選自血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、人神經(jīng)調(diào)節(jié)素1-(31、FGF2、EGF、N2、IBMX和cAMP，由此產(chǎn)生星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。40.—種治療CNS疾病或障礙的方法，所述方法包括給有需要的個(gè)體施用治療有效量的星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞，由此治療CNS疾病或障礙。41.星形膠質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的用途，所述用途用于治療CNS疾病或障礙。42.權(quán)利要求40的方法，所述方法還包括給所述個(gè)體施用能夠內(nèi)源合成至少一種神經(jīng)遞質(zhì)的干細(xì)胞。43.權(quán)利要求40或41的方法或用途，其中所述CNS疾病或障礙是神經(jīng)變性疾病或障礙。44.權(quán)利要求40或41的方法或用途，其中所述CNS疾病或障礙選自運(yùn)動(dòng)障礙、分離性障礙、心境障礙、情感障礙、成癮障礙和痙攣性障礙。45.權(quán)利要求43的方法或用途，其中所述神經(jīng)變性疾病選自Parkinson病、多發(fā)性硬化、癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化、中風(fēng)、自身免疫性腦脊髓炎、糖尿病性神經(jīng)病、青光眼神經(jīng)病、Alzheimer病和Huntingdon病。46.權(quán)利要求40或41的方法或用途，其中所述細(xì)胞是自體細(xì)胞。47.權(quán)利要求40或41的方法或用途，其中所述細(xì)胞是非自體細(xì)胞。48.—種藥用組合物，所述藥用組合物含作為活性物質(zhì)的權(quán)利要求l、2、3、4、5、6、7或8中任一項(xiàng)的任一種細(xì)胞或細(xì)胞群和藥學(xué)可接受載體。全文摘要提供一種分離的人細(xì)胞及其細(xì)胞群，其包含至少一種星形膠質(zhì)細(xì)胞表型和至少一種間充質(zhì)干細(xì)胞表型，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞表型不是星形膠質(zhì)細(xì)胞表型。文檔編號(hào)C12N5/079GK101243178SQ200680029587公開日2008年8月13日申請(qǐng)日期2006年6月18日優(yōu)先權(quán)日2005年6月16日發(fā)明者D·奧芬,E·梅拉梅德,M·哈特-斯特龍?jiān)暾?qǐng)人:特拉維夫大學(xué)拉莫特有限公司