專利名稱：生物波時(shí)間檢測技術(shù)及其在實(shí)驗(yàn)室臨床中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為抗癌診斷新技術(shù)、新用途，涉及到癌癥發(fā)生的早期診斷、治療效果監(jiān)控、恢復(fù)期的監(jiān)測、癌體質(zhì)發(fā)現(xiàn)，包括其它疾病的內(nèi)環(huán)境改變引起生物波時(shí)間變化，以及用于人體各種細(xì)胞學(xué)的群體多數(shù)同步化節(jié)律活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)檢測。
背景技術(shù)：
目前隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，臨床實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)要求應(yīng)用普遍，診斷目的明確，結(jié)果確定，成為現(xiàn)代醫(yī)院發(fā)展趨勢。但從臨床實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)來看，合理化診斷包括影像系統(tǒng)的診斷設(shè)備，相比之下，差距甚大。從臨床實(shí)際要求來分析，對疾病的化學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷及現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室分析檢驗(yàn)以醫(yī)學(xué)發(fā)展規(guī)律來看，化學(xué)檢驗(yàn)十分重要，而且目前發(fā)展空間很大。生化檢驗(yàn)就是一個(gè)突出例子，大量生化指標(biāo)的出現(xiàn)，使得臨床實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)成為現(xiàn)代分析、檢驗(yàn)科主流原因。對癌癥診斷檢測，近幾年來發(fā)展影像系統(tǒng)漸漸增大，人體組成成分化驗(yàn)診斷檢驗(yàn)沒有明顯進(jìn)展，目前仍然集中在腫瘤的病理細(xì)胞學(xué)觀察，病理學(xué)檢驗(yàn)有確診性一面，但技術(shù)局限性大，臨床應(yīng)用范圍很少。建立在細(xì)胞標(biāo)志物檢測，主要建立在細(xì)胞發(fā)育階段受影響，腫瘤標(biāo)志物的特異性不高而應(yīng)用受限。腫瘤相關(guān)性抗原的檢測，盡管這種實(shí)驗(yàn)持續(xù)不斷，種類變更，但由于瘤細(xì)胞MHC和機(jī)體相同性重復(fù)，反過來發(fā)揮更大作用。分子生物學(xué)基因診斷由于細(xì)胞基因的不確定性，直到今天在臨床沒有完成一個(gè)可靠的技術(shù)。十分明顯，針對人體成份包括體液，組織細(xì)胞的化學(xué)檢驗(yàn)多采亟待豐富。在生物波理論指導(dǎo)下建立了生物波時(shí)間檢測技術(shù)，以腫瘤的病情顯示生物波時(shí)間特殊表現(xiàn)以及生物波時(shí)間特殊規(guī)律，建立了新的檢驗(yàn)技術(shù)，為腫瘤臨床診斷、治療的監(jiān)控、癌體質(zhì)的早期預(yù)防，以及其它疾病內(nèi)環(huán)境改變的實(shí)驗(yàn)室診斷提供了新的診斷技術(shù)，開拓實(shí)驗(yàn)室診斷新途徑。
此外，在生物醫(yī)學(xué)的整體框架內(nèi)，自人類基因組計(jì)劃初步告一段落以來，總體上呈現(xiàn)出向整體研究回歸的趨勢，由基因組學(xué)轉(zhuǎn)向干細(xì)胞研究，進(jìn)而出現(xiàn)了不少的整體的高維度(DNA以中心法則控制蛋白質(zhì)的合成總體上是一維)的研究，這種研究古時(shí)以中醫(yī)為代表，但缺乏具體的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，僅以望聞問切加以代替，表現(xiàn)出隨機(jī)性大的特點(diǎn)；現(xiàn)今則以復(fù)雜性探索研究與生物醫(yī)學(xué)結(jié)合，多從機(jī)理方面加以探討，眾多研究仍難以與實(shí)際相結(jié)合，生物波的研究屬于后一種探索，也曾面臨從基礎(chǔ)研究過渡到人體時(shí)的困難，直到以“條件論”為指導(dǎo)，創(chuàng)立了以生物體或其組成成份對特定環(huán)境特定反應(yīng)為基礎(chǔ)的群體游離細(xì)胞波動(dòng)頻率的測定技術(shù)，及生物波時(shí)間測定技術(shù)。即這一方法下檢測獲得的群體細(xì)胞多數(shù)同步活動(dòng)節(jié)律改變以頻率來表示，以對不利環(huán)境應(yīng)答極限點(diǎn)(經(jīng)受作用時(shí)間長短)來表示。此外環(huán)境的變化所涉及內(nèi)容，包括人體所面臨的各類內(nèi)外環(huán)境的變化，諸如天體變化、天氣變化、處所變動(dòng)等和疾病有無、疾病進(jìn)展轉(zhuǎn)歸、治療藥物影響、物理療法的影響等，而生物波時(shí)間是上述環(huán)境中的一種或數(shù)種的綜合構(gòu)成的環(huán)境因素與機(jī)體內(nèi)在的反應(yīng)性相互作用的結(jié)果，此處內(nèi)在反應(yīng)性可由個(gè)體決定，較多地反應(yīng)內(nèi)在節(jié)律導(dǎo)致的反應(yīng)性所處的相態(tài)的區(qū)別，因此可以反映出機(jī)體整體所處的狀態(tài)，并進(jìn)而推知影響這種狀態(tài)的因素的演變情況。這是一項(xiàng)全新的發(fā)現(xiàn)，將東方整體觀的定性模糊特點(diǎn)和西方定量科學(xué)喪失整體特征的兩方面缺陷加以克服，而融合了機(jī)體的整體性及其功能狀態(tài)的定量測定，彌補(bǔ)了這一領(lǐng)域的一個(gè)空白。本發(fā)明系圍繞這一項(xiàng)新的發(fā)現(xiàn)而完成的。即針對性建立了檢測方法，并以此檢測方法使生物波時(shí)間有可能在多領(lǐng)域中加以應(yīng)用，成為本發(fā)明的主要內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明保護(hù)的是生物波時(shí)間全套檢測方法及其應(yīng)用。生物波時(shí)間是人體整體功能狀態(tài)的指標(biāo)。當(dāng)人體內(nèi)外環(huán)境包括天體、天氣、治療藥物應(yīng)用、疾病等發(fā)生變化時(shí)，均可反映在生物波時(shí)間的改變特征上。生物波時(shí)間本質(zhì)上是群體細(xì)胞節(jié)律性同步活動(dòng)的交替過程，這種變化是對各種環(huán)境因素應(yīng)答的結(jié)果。因此，生物波時(shí)間系用于指示人體功能狀態(tài)的一項(xiàng)新的發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明在這一項(xiàng)發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)上展開，涉及其檢測方法和用途。
一、技術(shù)建立方面方法設(shè)計(jì)思想及總體過程(一)、設(shè)計(jì)思想的基礎(chǔ)為生物波理論中指出的條件論，即“物質(zhì)性狀存在于條件之中”，如群體細(xì)胞的呼吸酶只有在其存在環(huán)境或生成過程所經(jīng)歷的環(huán)境條件再次出現(xiàn)時(shí)才表現(xiàn)最強(qiáng)活性，體外以對這種條件的不同內(nèi)容的模擬建立了不同的具體檢測技術(shù)，如波動(dòng)頻率測定，極限點(diǎn)測定等等，也通過對提供的不同條件的群體細(xì)胞節(jié)律性活動(dòng)的改變的分析，來對體內(nèi)正經(jīng)歷的或曾經(jīng)經(jīng)受的影響加以判斷，從而推測疾病進(jìn)展，判斷體質(zhì)改變情況。
(二)、方法的總體過程生物波時(shí)間檢測方法的總體過程相同，不同者僅是提供的條件不同，以反映不同的機(jī)體內(nèi)部活動(dòng)過程和狀態(tài)。均包括以下環(huán)節(jié)1.檢測標(biāo)本選擇生物波時(shí)間技術(shù)對標(biāo)本的選擇分為代表全身和代表局部者，代表全身的選外周血粒性白細(xì)胞，局部組織細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞，如腫瘤周邊細(xì)胞、腫瘤包膜細(xì)胞、腫瘤體內(nèi)部細(xì)胞等；各種粘膜細(xì)胞、腦細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞，及全身其它部位需要進(jìn)行群體多數(shù)同步測定的細(xì)胞。其中經(jīng)常用到的為血液中的白細(xì)胞(WBC)。
2.環(huán)境條件處理生物波時(shí)間測定中，為了反映體內(nèi)群體細(xì)胞所處的環(huán)境的特征，按照前述條件論“性狀存在于條件之中”以及“生物體對外加條件具有泛化反應(yīng)能力”的基本觀點(diǎn)，人工提供不同種類、不同強(qiáng)度的條件進(jìn)行影響，如本專利中提到的(但不僅限于此的)51℃加熱不同時(shí)間、酸堿處理、腫瘤代謝廢物影響、模擬天體天氣變化的離心力不同頻度改變等，具體內(nèi)容分述各方法之中。
3.結(jié)果判定根據(jù)所施加的外部條件，在各種檢測的具體技術(shù)中群體細(xì)胞的同步活動(dòng)節(jié)律改變表現(xiàn)為不同形式，如活動(dòng)與暫停交替頻率的改變，群體同步活動(dòng)濕度極限點(diǎn)等可見是由相應(yīng)不同條件而加以顯示的。本發(fā)明所觀察的群體的活動(dòng)是以呼吸酶加以顯示。而測定呼吸酶依常規(guī)的酶顯色反應(yīng)法進(jìn)行，但并不限于此，也可以直接測定酶分子的親水性等法進(jìn)行。其中用到的顯色劑可以是現(xiàn)有的或以后新出現(xiàn)的等等，并且同樣要提供相應(yīng)酶測定所需底物及反應(yīng)基本條件等。具體在每一項(xiàng)下結(jié)果的測定，表達(dá)辦法分述于以下各方法之中。
4.狀態(tài)對應(yīng)依據(jù)測定的結(jié)果，根據(jù)“系統(tǒng)中部分具備整體特性”的系統(tǒng)論定理，對所測定標(biāo)本，如WBC測定的結(jié)果用于分析機(jī)體的整體狀態(tài)，如體質(zhì)情況是否有癌體質(zhì)傾向及恢復(fù)期病人狀態(tài)，以及是否到達(dá)放療或化療的最佳時(shí)機(jī)，或疾病的轉(zhuǎn)歸情況預(yù)測。用以分析目前體內(nèi)環(huán)境及該環(huán)境的主要決定者，也可以反映群體細(xì)胞的膜成份及其呼吸酶形成過程中環(huán)境的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的權(quán)利要求所涉及的諸項(xiàng)發(fā)明內(nèi)容的應(yīng)用。
(三)操作技術(shù)及各項(xiàng)結(jié)果判斷1.標(biāo)本預(yù)處理(1)血液白細(xì)胞制備取新鮮抗凝血20μl于試管中，再加入80μlW液，混勻。用毛細(xì)管取分離液加入生化管與刻度平齊處，備用。將稀釋后的抗凝血用毛細(xì)管緩慢加入生化管中分離液上層，不能使血液混入分離液中。1000rpm×5′，離心。取出生化管，用毛細(xì)管吸取上層液體至刻度處去掉。吸取分離液，將側(cè)壁上細(xì)胞輕微沖洗(不要將紅細(xì)胞沉淀層沖起)，收集分離液于小方玻片上。取少量R1清洗管壁后，加入小方玻片上。反復(fù)吹吸，分散細(xì)胞，均分于2張小方玻片上。
(2)腸粘膜上皮細(xì)胞的制備用剪刀將小鼠結(jié)腸段剪取一小段，放置在盛有生理鹽水的平板里。然后用剪刀橫著剪開，用鑷子夾住輕輕在生理鹽水里擺動(dòng)洗滌，除去廢物(或用滴管沖洗也可)。將已洗好的結(jié)腸內(nèi)表面朝上，放置在玻片上用鑷子夾住，然后用鈍器輕輕刮表層，滴加適量的生理鹽水收集細(xì)胞，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞情況(即為收集的腸粘膜上皮細(xì)胞)，制片。
(3)肝臟的標(biāo)本制備將小鼠肝臟取少許，放在盛有生理鹽水的平板里，用滴管沖洗表層的血細(xì)胞。取出已選好的肝臟組織，用鑷柄輕輕擠壓或者用剪刀剪成小塊，放置在已洗凈的試管內(nèi)，加入適量的胰酶于37℃孵箱里孵5～10分鐘取出。去除液體，加入適量的生理鹽水用力吹打肝臟組織，取少量液體在顯微鏡下觀察是否合適收集肝細(xì)胞，制片。
(4)肺細(xì)胞標(biāo)本制備將肺組織取一葉，放在盛有生理鹽水的平板里。先用生理鹽水洗去表面的血細(xì)胞。然后用鑷子柄輕輕的壓擠肺組織，沖洗3～5遍。將處理好的肺組織放在玻片上，用鑷子夾住再用刀片輕輕刮取肺組織，加入少量生理鹽水，制成細(xì)胞懸液，制片備用。
(5)血管內(nèi)皮細(xì)胞收集用裝有PBS的注射器沖洗血管標(biāo)本，去除血液及凝塊。結(jié)扎一端，灌滿膠原酶溶液，結(jié)扎另一端室溫放置10min。從上端結(jié)扎處剪掉上端，收集血管內(nèi)膠原酶，移入試管內(nèi)。用PBS沖洗內(nèi)腔并收集到試管內(nèi)的膠原酶溶液中。將收集到的消化液用離心法在培養(yǎng)液中洗2次。收集細(xì)胞，重新懸浮于培養(yǎng)液中。
2.各項(xiàng)檢測技術(shù)
(1)生物波波動(dòng)頻率測定(簡稱為R二數(shù)法)將標(biāo)本分成兩份，其一放在室溫，其二置于51℃孵育5min然后一齊進(jìn)行酶活性測定。計(jì)數(shù)分別計(jì)數(shù)兩片中總數(shù)為200個(gè)WBC中的各以10為單位小群體中酶顯色陽性細(xì)胞數(shù)并記錄，判別血液中細(xì)胞處于高頻率期或低頻率期。方法如下①血液中WBC R二數(shù)測定法A.標(biāo)本新鮮抗凝血標(biāo)本。
B.操作步驟a.打開試劑盒，取出支架盒體放入51±1℃水浴中，調(diào)節(jié)水位至盒內(nèi)橫隔上1～2mm處。
b.取出載玻片2張，平放于盒蓋，用記號筆標(biāo)明1#、2#，每張載玻片中間放一張小方玻片。
c.打開A液、B液各一瓶，混勻，制成分離液，備用。
d.取新鮮抗凝血20μl于試管中，再加入80μlW液，混勻。
e.用毛細(xì)管取分離液加入生化管與刻度平齊處，備用。
f.將稀釋后的抗凝血用毛細(xì)管緩慢加入生化管中分離液上層，不能使血液混入分離液中。
g.1000rpm×5′，離心。
h.取出生化管，用毛細(xì)管吸取上層液體至刻度處去掉。吸取分離液，將側(cè)壁上細(xì)胞輕微沖洗(不要將紅細(xì)胞沉淀層沖起)，收集分離液于小方玻片上。取少量R1清洗管壁后，加入小方玻片上。反復(fù)吹吸，分散細(xì)胞，均分于2張小方玻片上。
i.將2#玻片放在支架橫隔上(玻片與液面平齊)，計(jì)時(shí)5分鐘后取出支架。加熱過程中為防止標(biāo)本干燥，可加入適量R2。
j.將1#玻片放在支架橫隔上，用滴管吸取R5、R6各一滴于1#、2#小方玻片上，混勻。
k.底蓋中加入37℃水至5mm高，然后放支架盒體和上蓋，37℃孵育20分鐘。
l.加蓋玻片，顯微鏡檢測。
m.填寫檢測報(bào)告單。結(jié)果表述為生物波頻率(1)高頻(2)低頻(3)波動(dòng)周期。生物波頻率——對血粒性白細(xì)胞生物波時(shí)間檢測，基于多數(shù)細(xì)胞呼吸酶活性同步工作，表現(xiàn)染色陰性反應(yīng)為Rs，表現(xiàn)Rs細(xì)胞為多數(shù)時(shí)反映細(xì)胞群之間交替的頻率較高，稱為生物波時(shí)間高頻率期，這一過程中也有Re交替，只是持續(xù)時(shí)間較短以染色法不易察覺，表明體內(nèi)細(xì)胞的多樣性程度高。另一方面，染色陽性反應(yīng)為Re，表現(xiàn)Re細(xì)胞為多數(shù)時(shí)反映細(xì)胞群暫停期之間交替的頻率較低，細(xì)胞群的更換速度較慢，這一過程中以染色查出Re與Rs交替，分別稱為生物波低頻率期Re相和生物波高頻率期Rs相，Re期持續(xù)的時(shí)間越長，反應(yīng)發(fā)揮交替過程中的細(xì)胞群較大，表明目前機(jī)體內(nèi)環(huán)境不利因素加大促成細(xì)胞群的協(xié)同結(jié)構(gòu)的結(jié)果，這種多數(shù)細(xì)胞同步化的細(xì)胞群大小與有機(jī)體內(nèi)環(huán)境變化的相關(guān)性使細(xì)胞群大小顯相對性，稱細(xì)胞群大小相對性原理。Re相與Rs期的出現(xiàn)過程是完全相同。Rs-Re單獨(dú)分類說明A.Rs期中也有Re相，只是染色技術(shù)不能查出，實(shí)際上只是以Rs為主。B.Re期有Rs，主要以Re為主。C.有些自然環(huán)境機(jī)體反應(yīng)以Rs為主，常稱為Rs天氣，以Re為主，常稱為Re天氣。
圖1所示為白細(xì)胞陽性標(biāo)準(zhǔn)圖(以++、+++入選為陽性結(jié)果)(2)群體細(xì)胞節(jié)律同步低頻率的溫度極限點(diǎn)測定技術(shù)(簡稱T極限點(diǎn)測定技術(shù))①標(biāo)本新鮮抗凝血標(biāo)本。
②操作步驟A.打開試劑盒，取出支架盒體放入51±1℃水浴中，調(diào)節(jié)水位至盒內(nèi)橫隔上1～2mm處。
B.取出載玻片8張，平放于盒蓋，用記號筆標(biāo)明1#～8#，每張載玻片中間放一張小方玻片。
C.打開A液、B液各一瓶，混勻，制成分離液，備用。
D.取新鮮抗凝血60μl于試管中，再加入240μlW液，混勻。
E.用毛細(xì)管取分離液加入生化管與刻度平齊處，備用。
F.將稀釋后的抗凝血用毛細(xì)管緩慢加入生化管中分離液上層，不能使血液混入分離液中。
G.1000rpm×5′，離心。
H.取出生化管，用毛細(xì)管吸取上層液體至刻度處去掉。吸取分離液，將側(cè)壁上細(xì)胞輕微沖洗(不要將紅細(xì)胞沉淀層沖起)，收集分離液于小方玻片上。取少量R2清洗管壁后，加入小方玻片上。反復(fù)吹吸，分散細(xì)胞，均分于8張小方玻片上。
I.將8#片放在支架橫隔上加熱(玻片與液面平齊)，加熱5分鐘后，將7#片放入，加熱4分鐘后再放6#片，加熱2分鐘后，再放5#片，加熱2分鐘后，放4#片，加熱2分鐘后，再放3#片，然后再加熱5分鐘后，最后將2#片放入，再加熱5分鐘后。連支架一起取出，放入底蓋。(注加熱過程中為防止標(biāo)本干燥，可加入適量51℃±1R2液)。
J.將1#玻片放在支架橫隔上，用滴管吸取R5、R6各一滴于1～8#小方玻片上，混勻。
K.蓋上盒蓋，37℃孵箱孵20分鐘。
L.加蓋玻片，顯微鏡檢測。
M.填寫檢測報(bào)告單。結(jié)果報(bào)告的是溫度極限點(diǎn)(T極限點(diǎn))指標(biāo)本在51℃環(huán)境中，試驗(yàn)群體細(xì)胞多數(shù)同步交替，以同步數(shù)量的多少與反應(yīng)持續(xù)時(shí)間的長短的非線性過程中，出現(xiàn)最大峰的時(shí)間。主要指在51℃環(huán)境中，導(dǎo)致最多數(shù)同步染色陽性所需持續(xù)的時(shí)間。在這一時(shí)間內(nèi)細(xì)胞分兩個(gè)階段變化過程細(xì)胞膜封閉階段，膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)受限，但呼吸酶染色仍陽性，隨著時(shí)間延長，呼吸酶反映受限，染色變陰性，這是酶反應(yīng)受限階段。極限點(diǎn)R在酶反應(yīng)受限點(diǎn)前，極限點(diǎn)R主要是多數(shù)細(xì)胞為Re反應(yīng)。
③試劑盒組成，包括W及R0至R6一套試劑，作用分別為細(xì)胞分離液、緩沖液，孵育液及顯色劑、底物液等，也包括輔助的支架及滴管等。
(3)L極限點(diǎn)檢測試驗(yàn)(包括R-L試驗(yàn))①標(biāo)本新鮮抗凝血標(biāo)本。
②操作步驟A.將試劑盒中12張載玻片取出，平放于盒蓋并編號。每張載玻片上放一張小方玻片。
B.打開A、B液各一瓶，混勻，制成分離液，備用。
C.取新鮮抗凝血60μl于試管中，再加入240μlW液，混勻。
D.用毛細(xì)管取分離液加入生化管與刻度平齊處，備用。
E.將稀釋后的抗凝血用毛細(xì)管緩慢加入生化管中分離液上層，不能使血液混入分離液中。
F.1000rpm×5′，離心。
G.取出生化管，用毛細(xì)管吸取上層液體至刻度處去掉。吸取分離液，將側(cè)壁上細(xì)胞輕微沖洗(不要將紅細(xì)胞沉淀層沖起)，收集分離液于小方玻片上。取少量L0清洗管壁后，加入小方玻片上。反復(fù)吹吸，分散細(xì)胞，均分于12張小方玻片上。
H.以滴管按刻度指示取L1試劑加在1號片上，并與片上標(biāo)本輕輕混勻。然后將滴管在潤洗液中反復(fù)吸吹洗滌干凈，同法，分別將L2、L3......L12加在第2、3......12號片上。靜置5分鐘。
I.吸去表面液體，用滴管吸取L15、L16各一滴于12張小方玻片上，混勻。
J.樣本片放進(jìn)濕盒，置于37℃孵箱20分鐘。
K.小方玻片上加蓋玻片。按照檢測標(biāo)準(zhǔn)，在顯微鏡下檢測陽性率。
L.填寫檢測報(bào)告單。結(jié)果報(bào)告的是極限點(diǎn)L是指不耐pH環(huán)境的多數(shù)群pH點(diǎn)。典型結(jié)果如下左側(cè)表示pH高于6.4范圍的變化。以及R-L，主要觀察系列計(jì)數(shù)結(jié)果右側(cè)的數(shù)值大小及位置。
③試劑盒組成試劑方面包括了L0及L1～L12和L15、L16等一套試劑，其用途分別是細(xì)胞分離液，系列pH作用液、孵育液、底物反應(yīng)液、酶顯色劑等，并且輔助有玻片，小玻片，蓋玻片等。
(4)體內(nèi)外波動(dòng)一致性測定在R二數(shù)法的基礎(chǔ)上進(jìn)行，基本過程相同，區(qū)別之處在于標(biāo)本的處理，即體外波動(dòng)測定中，是一次取血液標(biāo)本2ml，置于4℃冰箱，每隔2hr取1次標(biāo)本，以R二數(shù)測定方法測定其波動(dòng)頻率，用以反應(yīng)體內(nèi)波動(dòng)情況。該法已多次用動(dòng)態(tài)取血，間隔時(shí)間可為1hr或2hr，或根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行調(diào)整，多用2hr一次，然后又對取得樣本測定R二數(shù)，以對照加以比較，證明可較好地反映動(dòng)物或病人體內(nèi)的群體細(xì)胞的同步節(jié)律改變的波動(dòng)頻率。
(5)腦圖模式測定基本的測定方法同血液中WBC R二數(shù)測定技術(shù)，區(qū)別之處僅是標(biāo)本的獲取較為特殊①取一正常小白鼠，將其頸椎脫臼法或空氣椎塞法處死(空氣栓塞法較好)。
②剪下頭部，置于解剖板上，剝離，露出整個(gè)腦部，觀察皮下組織有無充血情況。
③剪除咽后壁，將肌肉剝離，小心取下頸椎，用鑷子夾住上頜骨，緩慢地有順序的取掉顳骨等各個(gè)腦顱骨，將剝落出來的腦，置于平板上，觀察腦特征及現(xiàn)象。
④用鑷子輕輕夾住延髓、用生理鹽水沖洗。再置于平板上，將腦的腹部朝上，小腦在上部方向。
⑤用刀片沿正中矢狀線垂直切開，分成左、右腦；如果要再分。則將左、右腦垂直分切一次即成4塊腦組織(從左往右為左2、左1、右1、右2)。
⑥左腦、右腦分別以矢縱切面為選點(diǎn)面、平鋪平板上。
⑦位點(diǎn)的選取(以圖示)右腦矢縱切面為例a.1位點(diǎn)仔細(xì)觀察腦部結(jié)構(gòu)，可看到間腦與端腦顏色的差異，用挑針分開，按圖示挑取1點(diǎn)，大小1mm3左右。
b.2位點(diǎn)，在1位點(diǎn)的下部，而在3位點(diǎn)的上部，選取中間部挑取。
c.3位點(diǎn)，4位點(diǎn)3位點(diǎn)與下端相連處，4位點(diǎn)位于左側(cè)下端(左下角)。
d.5.6.7位點(diǎn)的內(nèi)側(cè)有一白質(zhì)層，可輕易將端腦與間腦分開，如圖位置挑取。
e.11位點(diǎn)，將端腦全部拔開，可見一團(tuán)白色疏松的，按圖示位置取點(diǎn)。
f.10.9.8順序挑取。
挑取順序1→2→3→4→5→6→7→11→10→9→8較方便；(1-7為皮質(zhì)、8-11為中樞)。
⑧分別制片R二數(shù)鏡檢。
生物波腦圖模式，常見結(jié)果舉例，圖2是正常鼠生物波腦圖模式，圖3所示是小腫瘤鼠生物波腦圖模式。
二、應(yīng)用領(lǐng)域生物波時(shí)間各檢測方法在實(shí)際應(yīng)用中表現(xiàn)出的各自特點(diǎn)，用以反映不同的內(nèi)環(huán)境改變內(nèi)容。本發(fā)明所涉及各方法在發(fā)明人所在地進(jìn)行了大量的測定性應(yīng)用，分述于后(一)R二數(shù)測定反映人和動(dòng)物對天體、天氣變化反應(yīng)能力1.2004年5月5日月食影響測定結(jié)果2004年5月5日晚2:00，重慶地區(qū)觀測到月食出現(xiàn)，5月4日到5月5日天氣情況基本一致，測定了三種狀態(tài)小鼠生物波時(shí)間的結(jié)果如下

不同狀態(tài)小鼠對月食反應(yīng)的生波時(shí)間頻率表現(xiàn)特征初步觀察顯示，正常鼠與老齡鼠對月食出現(xiàn)反應(yīng)早，而腫瘤鼠提前沒有反應(yīng)，月食(2:00)之后；正常鼠Rs少，老齡鼠Rs出現(xiàn)持續(xù)2小時(shí)，而腫瘤鼠則持續(xù)6個(gè)小時(shí)。
2.重慶地區(qū)2004年3月西南醫(yī)院500例門診病人生物波時(shí)間檢測結(jié)果


由表可見，天氣變化越頻繁，生物波時(shí)間高頻率期(Rs)出現(xiàn)越多。而持續(xù)不變的天氣情況下則多為Re。顯示生物波時(shí)間可反映機(jī)體對天氣變化影響的應(yīng)答。
(二)R二數(shù)測定對正常鼠、老齡鼠、腫瘤鼠天體反應(yīng)結(jié)果的區(qū)別實(shí)驗(yàn)。
1.2005年驚蜇對小鼠影響測定2005年 3月5日 農(nóng)歷正月二十五 驚蟄(19:00) 天氣晴

由表可見，正常鼠和老齡鼠對節(jié)氣轉(zhuǎn)換有反應(yīng)，但腫瘤鼠沒有，表現(xiàn)在Rs出現(xiàn)上面。
(三)T極限點(diǎn)測定判斷癌體質(zhì)及術(shù)后恢復(fù)情況的結(jié)果東北前郭臨床試驗(yàn)中，獲得了這方面資料，結(jié)果如下


由測得結(jié)果可見，正常人T極限點(diǎn)均小于20分，多分布于10-16分位置，而腫瘤病人多分布于14分以后，以20-25分居多，且病勢越重，癌體質(zhì)越明顯，越靠后，術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)機(jī)率越高。
(四)L極限點(diǎn)測定對不同大小腫瘤小鼠試驗(yàn)結(jié)果2004年3月針對長有不同大小瘤體的小鼠進(jìn)行L極限點(diǎn)測定，將當(dāng)時(shí)的數(shù)字寫成最低點(diǎn)出現(xiàn)位置的密度分布表。
說明其中每一個(gè)條形圖代表該組測定中陽性標(biāo)本占到70％以上。圖示可見，正常鼠L極限點(diǎn)多出現(xiàn)在6.8～7.0左右，小瘤體鼠7.4，大瘤體鼠7.6，表明瘤體越大，越向右偏移的趨勢。


圖1是白細(xì)胞陽性標(biāo)準(zhǔn)圖(以++、+++入選為陽性結(jié)果)圖。
圖2是正常鼠生物波腦圖模式圖。
圖3是小腫瘤鼠生物波腦圖模式圖。
圖4是L極限點(diǎn)測定對不同大小腫瘤小鼠試驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)施方式
實(shí)施例一腫瘤動(dòng)物模擬實(shí)驗(yàn)接種腫瘤細(xì)胞，到可見的腫瘤體形成約6天時(shí)間內(nèi)生物波時(shí)間變化。從第4天開始生物波時(shí)間開始發(fā)生變化，首先表現(xiàn)出陰陽序(以一天為周期，Rs與Re出現(xiàn)的序列)改變上午開始出現(xiàn)低頻率期，晚上高頻率期，但大多數(shù)個(gè)體仍表現(xiàn)不確定性，第4天T極限點(diǎn)在14′-16′，R-L實(shí)驗(yàn)偏在左邊集中，L極限點(diǎn)實(shí)驗(yàn)在7.2前后仍然表現(xiàn)出隨機(jī)性，10天后腫瘤1.5cm左右，生物波時(shí)間發(fā)生明顯變化，T極限點(diǎn)16′-20′，L極限點(diǎn)實(shí)驗(yàn)確定性固定在7.2-7.8之間，每天陰陽序呈固定化低頻率特征。
實(shí)施例二腫瘤動(dòng)物模擬實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤切除后進(jìn)行生物波時(shí)間檢測，第5天生物波時(shí)間發(fā)生變化，第10天基本正常，20天全部恢復(fù)到正常。
實(shí)施例三動(dòng)物消瘤實(shí)驗(yàn)在治療過程中，生物波時(shí)間發(fā)生改變，極限點(diǎn)偏短，陰陽序正常，L隨機(jī)性增加，生物波時(shí)間特征與消退呈平行性過程。瘤體逐漸變小，呈黑線而逐漸消失，生物波時(shí)間恢復(fù)至正常特征。
實(shí)施例四食道癌病人的生物波時(shí)間特征明顯不同于正常人，T極限點(diǎn)在16′-20′之間徘徊。體外波動(dòng)實(shí)驗(yàn)，6小時(shí)實(shí)驗(yàn)觀察限度內(nèi)沒有出現(xiàn)周期性，全天測定陰陽序混亂，大部分是低頻率期，同時(shí)伴隨著吞咽困難，人體消瘦，吞鋇劑透視檢測，食道中狹窄位鋇劑下降受阻，經(jīng)治療二十天后，生物波時(shí)間時(shí)顯恢復(fù)，極限點(diǎn)在14′-16′之間，L實(shí)驗(yàn)偏在左側(cè)6.8-7.0之間，但顯隨機(jī)性。體外6小時(shí)實(shí)驗(yàn)觀察限度內(nèi)有一次波動(dòng)。一個(gè)月后體外波動(dòng)2小時(shí)周期，6小時(shí)限度內(nèi)波動(dòng)3次，T極限點(diǎn)10′，陰陽序基本恢復(fù)到上午Rs多見，下午Re多見，且不可重復(fù)性，鋇餐透視食道平滑，吞鋇劑下降較順利。
實(shí)施例五腎癌病例，晚期整個(gè)盆腔轉(zhuǎn)移，生物波時(shí)間檢測，T極限點(diǎn)20以上，L極限點(diǎn)實(shí)驗(yàn)固定在7.6左右，體外波動(dòng)實(shí)驗(yàn)陰性，無明顯陰陽序特征。治療10天內(nèi)4次檢查均無明顯變化，最后死于尿毒癥。
實(shí)施例六肝癌放射治療治療前生物波時(shí)間檢測，T極限點(diǎn)20′，L極限點(diǎn)實(shí)驗(yàn)7.6左右，體外波動(dòng)實(shí)驗(yàn)陰性，不見明顯陰陽序。放射兩周，各種生物波時(shí)間檢測趨向恢復(fù)，第三周T極限點(diǎn)在14′，體外波動(dòng)實(shí)驗(yàn)陽性，L極限點(diǎn)固定在7.6。停止放療一星期同時(shí)伴隨病情惡化，同時(shí)給予支持療法，檢測完后第3天出現(xiàn)癥狀。
實(shí)施例七胃癌手術(shù)生物波時(shí)間檢測，從第十五天開始恢復(fù)，到一個(gè)月檢測結(jié)果恢復(fù)到正常水平，術(shù)后第二個(gè)月，生物波時(shí)間檢測發(fā)現(xiàn)隨機(jī)性程度減低，L極限點(diǎn)固定在7.4，體外波動(dòng)多見陽性，T極限點(diǎn)維持14′，采用生物波調(diào)節(jié)治療1個(gè)月后，生物波時(shí)間恢復(fù)正常。
方法評價(jià)由上述動(dòng)物試驗(yàn)和臨床應(yīng)用病例中可見生物波時(shí)間檢測方法在敏感性和病程進(jìn)展機(jī)體狀態(tài)的特異性以及操作的簡易性、可重復(fù)性方面均較好。其中“特異性”與常規(guī)意義不同，不是針對某種病的判斷，如用以分辯某患者是否患有腫瘤或心血管疾病，而是對機(jī)體狀態(tài)變化的測定，因此在已知某位病人患有某種疾病的常規(guī)診斷、治療基礎(chǔ)上，對其疾病進(jìn)程中對機(jī)體的影響或醫(yī)療手段對疾病干預(yù)過程中對機(jī)體的影響及其程度的判斷上表現(xiàn)出“特異性”。此外，方法所涉及的各項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用的檢測試劑和輔助器材以試劑盒的形式出現(xiàn)，對這些檢測試劑進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立，穩(wěn)定性考察，不同批次一致性檢查，結(jié)果顯示試劑盒具有質(zhì)量可控穩(wěn)定性好，常溫下可保存一年等特點(diǎn)，這些保證了方法的穩(wěn)定。
權(quán)利要求
1.生物波時(shí)間檢測試劑盒，用于人體生物波治療以及常規(guī)抗癌檢測的臨床實(shí)驗(yàn)診斷新指標(biāo)，其特征在于采用對細(xì)胞呼吸狀態(tài)測定，以群體細(xì)胞多數(shù)同步化交替為分析依據(jù)，交替頻率為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。
2.生物波檢測方法，其中檢測方法包括方法設(shè)計(jì)思想及總體共性的技術(shù)環(huán)節(jié)，相應(yīng)技術(shù)包括但不限于(1)群體細(xì)胞多數(shù)同步節(jié)律的交替頻率，即生物波頻率測定技術(shù)，以節(jié)律高頻或低頻顯示，簡稱R二數(shù)測定；(2)51℃環(huán)境中，導(dǎo)致最多數(shù)同步染色陽性所需持續(xù)的時(shí)間，稱為溫度極限點(diǎn)測定，簡稱T極限點(diǎn)測定；(3)不耐特定PH環(huán)境的多數(shù)群的pH點(diǎn)。其中不耐環(huán)境表現(xiàn)為系列pH中某一位點(diǎn)最少數(shù)的同步染色陽性。這一pH點(diǎn)常出現(xiàn)在pH從6.4至8.8系列位點(diǎn)的左側(cè)，簡稱L極限點(diǎn)；(4)體外波動(dòng)測定群體中亞群及其包含的游離細(xì)胞波動(dòng)的多樣性及在此波動(dòng)過程中動(dòng)態(tài)更替的功能群體大小。以體外波動(dòng)不同時(shí)間間隔動(dòng)態(tài)的R二數(shù)測定反映體內(nèi)群體細(xì)胞同步節(jié)律的變化動(dòng)態(tài)的測定技術(shù)；(5)生物波腦圖模式測定技術(shù)；確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法為(1)建立細(xì)胞呼吸程度標(biāo)準(zhǔn)分別為陰性、陽性+、++、+++及取++、+++為計(jì)算范圍(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定①T極限點(diǎn)——指標(biāo)本在51℃環(huán)境中，試驗(yàn)群體細(xì)胞多數(shù)同步交替，以同步數(shù)量的多少與反應(yīng)持續(xù)時(shí)間的長短的非線性過程中，出現(xiàn)最大峰的時(shí)間；②生物波頻率——對血粒性白細(xì)胞生物波時(shí)間檢測，其于多數(shù)細(xì)胞呼吸酶活性同步工作，表現(xiàn)染色陰性反應(yīng)為Rs，表現(xiàn)Rs細(xì)胞為多數(shù)時(shí)反映細(xì)胞群之間交替的頻率較高，稱為生物波時(shí)間高頻率期，這一過程中也有Re交替，只是持續(xù)時(shí)間較短以染色法不易察覺，表明體內(nèi)細(xì)胞的多樣性程度高；另一方面，染色陽性反應(yīng)為Re，表現(xiàn)Re細(xì)胞為多數(shù)時(shí)反映細(xì)胞群暫停期之間交替的頻率較低，細(xì)胞群的更換速度較慢，這一過程中以染色查出Re與Rs交替，分別稱為生物波低頻率期Re相和生物波高頻率期Rs相，Re期持續(xù)的時(shí)間越長，反應(yīng)發(fā)揮交替過程中的細(xì)胞群較大，表明目前機(jī)體內(nèi)環(huán)境不利因素加大促成細(xì)胞群的協(xié)同結(jié)構(gòu)的結(jié)果，這種多數(shù)細(xì)胞同步化的細(xì)胞群大小與有機(jī)體內(nèi)環(huán)境變化的相關(guān)性使細(xì)胞群大小顯相對性，稱細(xì)胞群大小相對性原理；Re相與Rs期的出現(xiàn)過程是完全相同；Rs-Re單獨(dú)分類說明A.Rs期中也有Re相，只是染色技術(shù)不能查出，實(shí)際上只是以Rs為主。B.Re期有Rs，主要以Re為主；C.有些自然環(huán)境機(jī)體反應(yīng)以Rs為主，常稱為Rs天氣，以Re為主，常稱為Re天氣。
3.權(quán)利要求2的生物波檢測方法，用于癌體質(zhì)發(fā)現(xiàn)在常規(guī)體檢或有所指向的檢測基礎(chǔ)上，根據(jù)人體生物波陰陽序和對Rs天氣的變化特點(diǎn)，以及實(shí)驗(yàn)的確定性特征，確定癌體質(zhì)。
4.權(quán)利要求2的生物波檢測方法，用于癌癥早期診斷通過生物波時(shí)間變化或根據(jù)生物波時(shí)間變化規(guī)律在Rs天氣檢測出現(xiàn)特殊生物波時(shí)間特征，確定癌癥早期體質(zhì)特征變化，顯示已患癌癥，提示需結(jié)合影像學(xué)方法確定腫瘤部位。
5.權(quán)利要求2的生物波檢測方法，用于治療監(jiān)控根據(jù)生物波時(shí)間變化規(guī)律在生物波抗癌治療中及常規(guī)抗癌藥物治療應(yīng)用于檢測治療效果及時(shí)調(diào)整用藥劑量或治療方法。作為選擇聯(lián)合用藥的根據(jù)，指導(dǎo)用藥方案的更改和確定持續(xù)時(shí)間長短。
6.權(quán)利要求2的生物波檢測方法，用于監(jiān)控放療承受能力及時(shí)調(diào)整劑量，在放療過程中根據(jù)生物波時(shí)間特征確定放療的時(shí)間、劑量以及方案的調(diào)整。
7.權(quán)利要求2的生物波檢測方法，用于腫瘤學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。
8.權(quán)利要求2的生物波檢測方法，用于術(shù)后的跟蹤檢測，及早發(fā)現(xiàn)體質(zhì)的變化，包括(1)各種癌癥手術(shù)后的生物波時(shí)間檢測；①手術(shù)后生物波時(shí)間恢復(fù)到正常時(shí)間的查明；②定期檢驗(yàn)，監(jiān)測復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；(2)化學(xué)治療后，不管保守治療根除與否要及時(shí)用生物波時(shí)間檢驗(yàn)，判定病情穩(wěn)定或發(fā)展。
9.權(quán)利要求1所述的試劑盒用于對臨床常見疾病(如糖尿病、各種病毒急慢性感染、重度細(xì)菌感染、循環(huán)系統(tǒng)障礙、各種臟器衰竭以及顱內(nèi)疾病等)引起人體內(nèi)環(huán)境改變檢驗(yàn)出現(xiàn)的特殊表現(xiàn)模式與診斷或輔助診斷臨床應(yīng)用。
10.權(quán)利要求2的方法用于癌體質(zhì)的臨床糾正臨床應(yīng)用，方法還包括與常規(guī)放化療的結(jié)合及對常規(guī)放化療毒副作用的糾正，用于測定的標(biāo)本包括人和動(dòng)物各種組織細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明在生物波時(shí)間這一項(xiàng)發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)上展開，涉及其全套檢測方法及其應(yīng)用。生物波時(shí)間所反映的是人體整體功能狀態(tài)，本質(zhì)上是群體細(xì)胞節(jié)律性同步活動(dòng)的交替過程，這種變化是對各種環(huán)境因素應(yīng)答的結(jié)果。本發(fā)明為抗癌診斷新技術(shù)、新用途，涉及到癌癥發(fā)生的早期診斷、治療效果監(jiān)控、恢復(fù)期的監(jiān)測、癌體質(zhì)發(fā)現(xiàn)，包括其它疾病的內(nèi)環(huán)境改變引起生物波時(shí)間變化，以及用于人體各種細(xì)胞學(xué)的群體多數(shù)同步化節(jié)律活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)檢測。
文檔編號C12Q1/02GK101059500SQ20061015137
公開日2007年10月24日 申請日期2006年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月8日
發(fā)明者徐啟旺, 劉俊康 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué), 蘇州市巴微醫(yī)藥開發(fā)研究所有限公司, 北京中港大富生物波科技有限公司