專利名稱：一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種專用肥牛飼養(yǎng)中的微生物和短肽的飼料添加劑，通過在肉牛飼料中添加，利用特殊微生物和產(chǎn)生的大豆短肽和大豆纖維蛋白等多種代謝產(chǎn)物，促進(jìn)肥牛消化吸收功能提高，特別是提高肥牛的肌腱蛋白含量，提高肉質(zhì)適口性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，屬于農(nóng)業(yè)生物制品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
“肥?！钡挠⑽氖莃eef in hotpot，直譯為“放在熱鍋里食用的牛肉”。它既不是一種牛的品種，也不是單純育肥后屠宰的牛，更不是肥的牛。通常選擇優(yōu)質(zhì)的腰背部的“背最長(zhǎng)肌”和腹部去骨肌肉修割成形，經(jīng)過后成熟、排酸處理，切成薄片在火鍋內(nèi)涮食的部位，被稱為“肥牛”。在我國(guó)火鍋龐大的餐飲行業(yè)中，肥牛的消耗占了30％的比重。肥牛的肌肉和一般骨骼肌一樣，是由肌腹和肌腱組成，肌腹位于骨骼肌中央，由一束束肌纖維組成，其主要成分為肌肉蛋白，起收縮作用，而肌腹位于骨骼肌兩端，呈白色，其主要成分為結(jié)締組織，起固著和延展肌腹的作用，優(yōu)質(zhì)的肥牛要靠?jī)?yōu)良的飼養(yǎng)技術(shù)和條件來保證，我國(guó)是肉牛養(yǎng)殖大國(guó)，具有悠久的養(yǎng)殖歷史，傳統(tǒng)養(yǎng)殖條件下肉牛的肌肉部分中肌腹和肌腱兩者的比例為10∶1，高溫水燙后主要是肌纖維肉味，口感一般，且肉牛的飼養(yǎng)期較長(zhǎng)。
類似的一項(xiàng)牛飼料微生物制劑專利，其申請(qǐng)?zhí)枮镃N01129474.4，題為“含有微交變生物電場(chǎng)調(diào)制的酵母菌的牛飼料”，該專利是利用微交變技術(shù)處理酵母菌，加到牛飼料中提高牛的免疫能力，預(yù)防牛瘟等疾病，該專利僅從免疫學(xué)入手，使用單一的菌種提高免疫力，對(duì)肥牛的生長(zhǎng)發(fā)育難以取得綜合的效果，且方法步驟較為簡(jiǎn)單，無任何多肽作用及機(jī)理。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種肉牛的飼養(yǎng)期縮短、肌肉蛋白含量增加，肌腹等結(jié)締組織比例增加的多肽及微生物制劑及制備方法。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑，其特征在于，由納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌制成其重量百分配比為納豆桿菌30-35％、植物乳桿菌15-20％、干酪乳桿菌15-20％、啤酒酵母菌18-20％、地衣芽孢桿菌12-15％。
一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑的制作備方法，其特征在于，采用的菌種通過具有分解大豆蛋白能力的納豆桿菌和促進(jìn)動(dòng)物腸道消化吸收功能的乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌進(jìn)行選育，利用培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化選育，生產(chǎn)工藝采用多菌種的復(fù)合、分級(jí)發(fā)酵工藝，每級(jí)發(fā)酵均有主要的代謝產(chǎn)物，在后處理工藝過程中添加適于菌體生長(zhǎng)保存的載體，其制備方法為第一步生產(chǎn)菌株選育a.菌株篩選在肉牛的瘤胃中取食糜為菌源，采用MRS乳酸菌培養(yǎng)基進(jìn)行乳酸菌分離，篩選出植物乳桿菌和干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌；在啤酒發(fā)酵液中用酵母選擇培養(yǎng)基分離啤酒酵母菌；在大豆發(fā)酵中利用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分離納豆桿菌，將分離的菌種分別在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中4℃下保存菌種；b.分離的菌種分別接種于肉湯培養(yǎng)基中，在35-40℃溫度下培養(yǎng)22-28小時(shí)后，將啤酒酵母菌接種于麥?zhǔn)?Meclary)瓊脂培養(yǎng)基，將納豆桿菌接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，將植物乳桿菌和干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌接種于乳酸菌培養(yǎng)基中，進(jìn)行劃線培養(yǎng)，選出生長(zhǎng)快、菌體特征明顯的納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌分別在實(shí)驗(yàn)室中保存；c.生產(chǎn)制種最后將選出生長(zhǎng)快納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉(zhuǎn)接入裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂作培養(yǎng)基的茄子瓶中，在35-40℃溫度下培養(yǎng)45-50小時(shí)，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時(shí)即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中進(jìn)行保存；第二步有益菌株的單獨(dú)及復(fù)合培養(yǎng)a.按重量配比稱取步驟1生產(chǎn)制種的納豆桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌和地衣芽孢桿菌；b.將稱取的納豆桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌和啤酒酵母菌混合在一起進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)將茄子瓶中混合菌苔按1∶25-30的比例接種于120-130℃、30-45min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中攪拌30min，其轉(zhuǎn)速為200-240r/min，攪拌均勻后放入200L的消毒后塑料桶中靜置10-15天，靜置過程中每天測(cè)定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體，防止飼料桶爆裂，待Ph到達(dá)3.0-4.0時(shí)發(fā)酵結(jié)束；c.將稱取的地衣芽孢桿菌單獨(dú)培養(yǎng)將茄子瓶種的地衣芽孢桿菌按1∶25-35的比例接種于120-130℃、30-45min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min，培養(yǎng)溫度為35-40℃，通氣量1∶1，發(fā)酵時(shí)間為22-26小時(shí)，顯微鏡下觀察90-95％生孢時(shí)結(jié)束；第三步菌群的馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)將步驟2單獨(dú)和復(fù)合培養(yǎng)的菌液混合按1∶25-30的比例接入120-130℃、30-45min高溫滅菌的固體擴(kuò)大培養(yǎng)基中，攪拌30-45min至均勻，倒入50-70kg消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度30-35℃，時(shí)間12-15天，發(fā)酵過程中取樣三次，測(cè)定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測(cè)定水分為35-40％、Ph值為3.5-4.0；第四步粉碎添加特殊載體；a.干燥將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時(shí)間先后放入培養(yǎng)箱干燥，每盤重量2.0公斤±0.5，溫度控制在40-45℃，時(shí)間14-16小時(shí)，干燥完成的物料水份控制在≤11.8％；b.添加載體；將干燥后的產(chǎn)品按1∶0.02-0.03的比例添加載體，倒入攪拌機(jī)中攪拌均勻；轉(zhuǎn)入粉碎間進(jìn)行粉碎，物料溫度控制在45℃以下，粉碎后的物料過50目篩網(wǎng)，篩后粗料重新粉碎；c.過篩后裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標(biāo)識(shí)牌，轉(zhuǎn)入成品庫(kù)有序堆放；取樣檢測(cè)，參數(shù)為水份≤11.8％、活菌數(shù)40-60億/g；物理性狀淡黃色粉末狀固體。
所述的步驟2復(fù)合或單獨(dú)培養(yǎng)基為無菌水再加豆粕粉、尿素、清糠、硫酸銨、酵母粉、玉米粉、糖蜜、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸鎂、硫酸鎂的至少三種混合物，其重量百分配比為豆粕2-6％、清糠10-60％、尿素0-3％、硫酸銨0-1％、酵母粉0-3％、玉米粉3-10％、糖蜜0-20％、磷酸二氫鉀0-1％、磷酸二氫鈉0-2％、磷酸鎂0-1％、硫酸鎂0-1％、無菌水12-85％。
所述的步驟3的固體擴(kuò)大培養(yǎng)基為清糠和無菌水再加豆粕粉、糖蜜、玉米粉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、無菌水10-30％、尿素中的至少四種混合物組成，其重量百分配比為粕粉2-6％、糖蜜8-12％、玉米粉4-8％、清糠10-70％、磷酸二氫鉀0.03-0.06％、磷酸二氫鈉1-2％、硫酸鎂0.4-0.8％、無菌水10-30％、尿素1-2％中的至少四種混合物組成所述的步驟4的特殊載體由沸石粉、碳酸鈣組成，其重量百分配比為沸石粉40-50％、碳酸鈣50-60％。
本發(fā)明是一種針對(duì)火鍋餐飲市場(chǎng)中需求巨大的原料——肥牛，開發(fā)的一種微生物及多肽制劑，其由多種促進(jìn)肉牛消化道菌群改善、提高肌腱結(jié)締組織的合成功能的有益菌群和大豆多肽、短肽、寡肽產(chǎn)物組成。通過分級(jí)微生物發(fā)酵技術(shù)制成，培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)載體作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在部分被菌體利用后，通過菌體代謝產(chǎn)生的酶對(duì)培養(yǎng)基中的有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行分解，并在特定的條件下組合，可形成目的產(chǎn)物，在培養(yǎng)物中含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素，還含有制成含有納豆激酶的保健型大豆肽、低聚肽、短肽混合物等一些代謝產(chǎn)物。此菌群由農(nóng)業(yè)部318公告允許添加的微生物菌種馴化及分級(jí)培養(yǎng)而成，具有高效無殘留、針對(duì)性和實(shí)用性強(qiáng)的特點(diǎn)，此發(fā)明的產(chǎn)品已在上海飼料辦公室申請(qǐng)批準(zhǔn)文號(hào)，批準(zhǔn)文號(hào)飼添字(2002)127370。在上海及江浙一代養(yǎng)殖戶中銷售并使用，增產(chǎn)增質(zhì)效果十分明顯。
肌肉的主要成分是肌纖維，90％是肌肉蛋白，而大豆蛋白是飼料蛋白的主要來源，但在正常的動(dòng)物腸道中被硝化液分解利用較慢，同時(shí)大豆及其副產(chǎn)品中含有的多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，卻嚴(yán)重阻礙了蛋白質(zhì)和其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的有效利用。眾多學(xué)者對(duì)大豆采用獨(dú)特的菌種和發(fā)酵工藝，微生物發(fā)酵過程中分泌的蛋白酶使大豆蛋白被分解成小分子蛋白和小肽分子。同時(shí)，動(dòng)物日增重增加和飼養(yǎng)期限的縮短是靠提高飼養(yǎng)動(dòng)物的消化和吸收功能來實(shí)現(xiàn)的，而動(dòng)物的消化功能主要靠腸道內(nèi)的有益菌群來完成，本專利發(fā)明的特點(diǎn)就是將增加動(dòng)物產(chǎn)腸道中有益菌數(shù)量和提高動(dòng)物的消化吸收功能兩巧妙的結(jié)合起來，應(yīng)用于肥牛的飼養(yǎng)和肉質(zhì)的提高，通過在山東、山西、安徽等養(yǎng)牛大省的實(shí)際應(yīng)用，肉牛的品質(zhì)得到明顯的提高，其突出的表現(xiàn)是肉牛的飼養(yǎng)期縮短、肌肉蛋白含量增加，肌腹等結(jié)締組織比例增加，在餐飲中其口感和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值大大提高。經(jīng)過添加劑飼養(yǎng)的肥牛肉的肌腹比例能提高到10∶3，其脆性大大增加，而其中的主要成分結(jié)締組織被人體吸收后能增加關(guān)節(jié)的柔韌性和肌肉的延展性。
動(dòng)物腸道中分解利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要菌種為乳酸菌，但正常腸道中乳酸菌含量并不高，同時(shí)飼料中蛋白種類繁多，結(jié)構(gòu)各異，這給腸道的消化吸收帶來了困難，因此，本專利的技術(shù)特點(diǎn)是除腸道中一般的乳酸菌類，如植物乳酸菌、乳鏈球菌等外，還添加了啤酒酵母菌和芽孢桿菌。啤酒酵母由啤酒工業(yè)麥汁培養(yǎng)物中的酵母菌體及該培養(yǎng)基的殘?jiān)M成，經(jīng)干燥而得，其粗蛋白一般在40-50％，內(nèi)含大量B族維生素和未知生長(zhǎng)因子，啤酒酵母還可促進(jìn)肉牛食欲，引誘效果較好。其內(nèi)含的各種營(yíng)養(yǎng)素保存完善，具有較濃的芳香味。芽孢桿菌在其生長(zhǎng)繁殖過程中能夠產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸，這些酸類能夠降低肉牛腸道的pH值，可有效抑制病原菌的生長(zhǎng)，為乳酸菌的生長(zhǎng)創(chuàng)造了條件，其中丙酸還能夠參與三羧酸循環(huán)，為動(dòng)物新陳代謝提供能量，促進(jìn)肝臟發(fā)育和膽汁合成。芽孢桿菌在生長(zhǎng)繁殖過程中還能夠產(chǎn)生很高的維生素B1、B2、B6等B族維生素和維生素C，為肥牛提供維生素營(yíng)養(yǎng)，從而促進(jìn)動(dòng)物生產(chǎn)性能的提高。本專利產(chǎn)品的菌種全部從自然環(huán)境中選育而成，為飼料行業(yè)813公告允許添加菌種，具有安全、無毒、高效的特點(diǎn)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.采用單獨(dú)培養(yǎng)和復(fù)合培養(yǎng)及馴化相結(jié)合的發(fā)酵技術(shù)，既保證了有益菌種的高速生長(zhǎng)，又保證了其代謝產(chǎn)物完全保留，最大限度保證了產(chǎn)品對(duì)養(yǎng)殖體的特殊功效；2.肥?？抵械娜樗峋⒔湍妇?、芽孢桿菌及納豆桿菌與其產(chǎn)生的保健型大豆肽、低聚肽、短肽混合物、抗生素、微量元素及其它代謝產(chǎn)物共同生長(zhǎng)作用，對(duì)肉牛肌肉蛋白提高最佳營(yíng)養(yǎng)條件；3.含有納豆激酶的保健型大豆肽、低聚肽、短肽混合物等一些代謝產(chǎn)物促進(jìn)肉牛肌腹結(jié)締組織合成，提高肉牛口感和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；4.采用糧食作物和常用飼料載體作為主要培養(yǎng)基原料，降低了生產(chǎn)成本，同時(shí)使用常用的發(fā)酵及生產(chǎn)設(shè)備，易于在肉牛養(yǎng)殖中推廣；5.本發(fā)明的產(chǎn)品添加到肉牛飼料中，在保證肉牛營(yíng)養(yǎng)需要的情況下改善肉牛自身免疫系統(tǒng)和生長(zhǎng)發(fā)育，在動(dòng)物體內(nèi)無任何抗生素和重金屬殘留，符合生態(tài)農(nóng)業(yè)的要求，保證了食用者的身體健康。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的微生物制劑及制備方法，采用的菌種均從自然界中分離而來并篩選優(yōu)化，同時(shí)采用單獨(dú)培養(yǎng)和復(fù)合培養(yǎng)相結(jié)合的工藝，它包括以下步驟第一步生產(chǎn)菌株選育a.菌株篩選在肉牛的瘤胃中取食糜為菌源，采用MRS乳酸菌培養(yǎng)基進(jìn)行乳酸菌分離，篩選出Lactobacillus plantarum(ATCC8014)植物乳桿菌、Lactobacillus casei(ATCC7469)干酪乳桿菌和licheniformis(13123)地衣芽孢桿菌；在啤酒發(fā)酵液中用酵母選擇培養(yǎng)基分離Saccharomycescerevisiae(IFO0203)啤酒酵母菌；在大豆發(fā)酵中利用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分離納豆桿菌，將分離的菌種分別在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中4℃下保存菌種；b.菌株接種于肉湯培養(yǎng)基中，在35℃溫度下培養(yǎng)24小時(shí)，將啤酒酵母菌接種于麥?zhǔn)?Meclary)瓊脂、將納豆桿菌接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂(LB培養(yǎng)基)，將納豆桿菌接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，將植物乳桿菌和干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌接種于Lactic-bacteria Medium I乳酸菌培養(yǎng)基中，進(jìn)行劃線培養(yǎng)，選出生長(zhǎng)快、菌體特征明顯的納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌分別在實(shí)驗(yàn)室中保存；c.生產(chǎn)制種最后將選出生長(zhǎng)快納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉(zhuǎn)接入裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂作培養(yǎng)基的茄子瓶中，在37℃溫度下培養(yǎng)45小時(shí)，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時(shí)即可取出。然后放入4℃的冰箱中進(jìn)行保存；各篩選培養(yǎng)基組分乳酸菌培養(yǎng)基酵母膏7.5g、蛋白胨7.5g、葡萄糖)10g、KH2PO42g、西紅柿汁100ml、Tween(吐溫)800.5ml、Disti蒸餾水)900ml pH7.0。
酵母選擇培養(yǎng)基葡萄糖1g、KCl1.8g、酵母浸膏2.5g、醋酸鈉8.2g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000ml。
營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、瓊脂15-20g、水1000ml、pH7.0-7.2。
麥?zhǔn)檄傊瑸槠咸烟?g、KCI 1.8g、酵母浸膏2.5g、醋酸鈉8.2g、瓊脂15-20g、蒸餾水1000ml。這些菌種在實(shí)驗(yàn)室中都有。
第二步有益菌株的單獨(dú)及復(fù)合培養(yǎng)a.按重量配比稱取步驟1生產(chǎn)制種的納豆桿菌30％、植物乳桿菌18％、干酪乳桿菌19％、啤酒酵母菌啤酒酵母菌20％和地衣芽孢桿菌13％；b.將稱取的納豆桿菌、乳酸菌、酵母菌的復(fù)合培養(yǎng)將茄子瓶中菌苔按1∶25的比例接種于120℃、30min高溫滅菌的豆粕粉3％、糖蜜10％、玉米粉6％、磷酸二氫鉀0.05％、磷酸二氫鈉1.6％、硫酸鎂0.1％、無菌水79.25％組成的培養(yǎng)基中，放入發(fā)酵罐中攪拌30min，其轉(zhuǎn)速為200r/min，攪拌均勻后放入200L的消毒后塑料桶中靜置12天，靜置過程中每天測(cè)定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體，防止飼料桶爆裂，待Ph到達(dá)3.5時(shí)發(fā)酵結(jié)束；c.將稱取的地衣芽孢桿菌單獨(dú)培養(yǎng)將茄子瓶菌苔按1∶25的比例接種于121℃、40min高溫滅菌的豆粕粉3％、玉米粉8％、磷酸二氫鉀0.4％、磷酸二氫鈉1.6％、硫酸鎂0.8％、尿素1.5％、無菌水84.7％組成的培養(yǎng)基中，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，培養(yǎng)溫度為37℃，通氣量1∶1，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，顯微鏡下觀察90％生孢時(shí)結(jié)束；第三步菌群的馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)將步驟2單獨(dú)和復(fù)合培養(yǎng)的菌液混合按1∶25的比例接入120℃、45min高溫滅菌的由豆粕粉3％、玉米粉6％、清糠60％、磷酸二氫鉀0.4％、磷酸二氫鈉1.6％、硫酸鎂0.6％、尿素1.5％、無菌水26.9％組成的固體擴(kuò)大培養(yǎng)基中，攪拌30min至均勻，倒入50kg消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵溫度30℃，時(shí)間10天，發(fā)酵過程中取樣三次，測(cè)定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測(cè)定水分為35％、Ph值為3.5；第四步粉碎添加特殊載體；a.干燥將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時(shí)間先后放入培養(yǎng)箱干燥，每盤重量2.0公斤，溫度控制在45℃，時(shí)間15小時(shí)，干燥完成的物料水份控制在≤11.8％；b.添加載體；將干燥后的產(chǎn)品按1∶0.02添加沸石粉60％和碳酸鈣40％組成的載體，倒入攪拌機(jī)中攪拌均勻；轉(zhuǎn)入粉碎間進(jìn)行粉碎，物料溫度控制在45℃以下，粉碎后的物料過50目篩網(wǎng)，篩后粗料重新粉碎；c.過篩后裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標(biāo)識(shí)牌，轉(zhuǎn)入成品庫(kù)有序堆放；取樣檢測(cè)，其參數(shù)為水份≤11.8％、活菌數(shù)50億/g；物理性狀淡黃色粉末狀固體。
實(shí)施例2第一步生產(chǎn)菌株選育同實(shí)施例1相同；第二步有益菌株的單獨(dú)及復(fù)合培養(yǎng)a.按重量配比稱取步驟1生產(chǎn)制種的納豆桿菌33％、植物乳桿菌16％、干酪乳桿菌16％、啤酒酵母菌啤酒酵母菌20％和地衣芽孢桿菌15％；b.將稱取的納豆桿菌、乳酸菌、酵母菌的復(fù)合培養(yǎng)將茄子瓶中菌苔按1∶30的比例接種于120℃、30min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基比例為豆粕粉6％、玉米粉10％、糖蜜15％、磷酸二氫鉀0.05％、磷酸二氫鈉1.8％、硫酸鎂0.1％、無菌水67.05％組成的培養(yǎng)基中，放入發(fā)酵罐中攪拌30min，其轉(zhuǎn)速為220r/min，攪拌均勻后放入200L的消毒后塑料桶中靜置15天，靜置過程中每天測(cè)定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體，防止飼料桶爆裂，待Ph到達(dá)3.5時(shí)發(fā)酵結(jié)束；c.將稱取的地衣芽孢桿菌單獨(dú)培養(yǎng)將茄子瓶菌苔按1∶30的比例接種于130℃、40min高溫滅菌的接種于121℃、30min高溫滅菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基比例為豆粕粉3％、玉米粉10％、磷酸二氫鉀0.2％、磷酸二氫鈉0.5％、硫酸鎂0.3％、尿素1.0％、無菌水85％，攪拌轉(zhuǎn)速為220r/min，培養(yǎng)溫度為37℃，通氣量1∶1，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，顯微鏡下觀察90％生孢時(shí)結(jié)束；第三步菌群的馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)將步驟2單獨(dú)和復(fù)合培養(yǎng)的菌液混合按1∶30的比例接入130℃、45min高溫滅菌的由121℃、30min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基比例為豆粕粉6％、玉米粉10％、清糠45％、磷酸二氫鉀0.4％、磷酸二氫鈉1.0％、硫酸鎂0.6％、尿素1.0％、無菌水36％，組成的培養(yǎng)基中，攪拌40min至均勻，到入50kg消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度40℃時(shí)間15天，發(fā)酵過程中取樣三次，測(cè)定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測(cè)定水分為40％、Ph值為4.0；第四步粉碎添加特殊載體；a.干燥將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時(shí)間先后放入培養(yǎng)箱干燥，每盤重量2.0公斤，溫度控制在40度，時(shí)間16小時(shí)，干燥完成的物料水份控制在≤11.8％；b.添加載體；將干燥后的產(chǎn)品按1∶0.025添加沸石粉50％和碳酸鈣50％組成的載體，倒入攪拌機(jī)中攪拌均勻；轉(zhuǎn)入粉碎間進(jìn)行粉碎，物料溫度控制在45℃以下，粉碎后的物料過50目篩網(wǎng)，篩后粗料重新粉碎；c.過篩后裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標(biāo)識(shí)牌，轉(zhuǎn)入成品庫(kù)有序堆放；取樣檢測(cè)，主要參數(shù)水份≤11.8％、活菌數(shù)50億/g；物理性狀淡黃色粉末狀固體。
使用時(shí)按1.5-2.0‰比例添加到肉牛飼料中并攪拌均勻，本產(chǎn)品需在干燥通風(fēng)處密閉封存，開封后應(yīng)盡快使用。本產(chǎn)品使用后肉牛每日攝食量將明顯增加，肌肉的肌腱比例將明顯提高，肥牛片脆口性將明顯改善。在上海金山養(yǎng)殖場(chǎng)的推廣實(shí)驗(yàn)中，肉牛的生長(zhǎng)周期實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組縮短15天，日增重從0.7上升到1.0kg/天，節(jié)約飼料成本23％，肌腱比例由1∶10上升到3∶10。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑，其特征在于，由納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌制成其重量百分配比為納豆桿菌30-35％、植物乳桿菌15-20％、干酪乳桿菌15-20％、啤酒酵母菌18-20％、地衣芽孢桿菌12-15％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑的制備方法，其特征在于，采用的菌種通過具有分解大豆蛋白能力的納豆桿菌和促進(jìn)動(dòng)物腸道消化吸收功能的乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌進(jìn)行選育，利用培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化選育，生產(chǎn)工藝采用多菌種的復(fù)合、分級(jí)發(fā)酵工藝，每級(jí)發(fā)酵均有主要的代謝產(chǎn)物，在后處理工藝過程中添加適于菌體生長(zhǎng)保存的載體，其制備方法為第一步生產(chǎn)菌株選育a.菌株篩選在肉牛的瘤胃中取食糜為菌源，采用MRS乳酸菌培養(yǎng)基進(jìn)行乳酸菌分離，篩選出植物乳桿菌和干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌；在啤酒發(fā)酵液中用酵母選擇培養(yǎng)基分離啤酒酵母菌；在大豆發(fā)酵中利用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基分離納豆桿菌，將分離的菌種分別在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中4℃下保存菌種；b.分離的菌種分別接種于肉湯培養(yǎng)基中，在35-40℃溫度下培養(yǎng)22-28小時(shí)后，將啤酒酵母菌接種于麥?zhǔn)?Meclary)瓊脂培養(yǎng)基，將納豆桿菌接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，將植物乳桿菌和干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌接種于乳酸菌培養(yǎng)基中，進(jìn)行劃線培養(yǎng)，選出生長(zhǎng)快、菌體特征明顯的納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌分別在實(shí)驗(yàn)室中保存；c.生產(chǎn)制種最后將選出生長(zhǎng)快納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉(zhuǎn)接入裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂作培養(yǎng)基的茄子瓶中，在35-40℃溫度下培養(yǎng)45-50小時(shí)，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時(shí)即可取出。然后放入2-6℃的冰箱中進(jìn)行保存；第二步有益菌株的單獨(dú)及復(fù)合培養(yǎng)a.按重量配比稱取步驟1生產(chǎn)制種的納豆桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌和地衣芽孢桿菌；b.將稱取的納豆桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌和啤酒酵母菌混合在一起進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)將茄子瓶中混合菌苔按1∶25-30的比例接種于120-130℃、30-45min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中攪拌30min，其轉(zhuǎn)速為200-240r/min，攪拌均勻后放入200L的消毒后塑料桶中靜置10-15天，靜置過程中每天測(cè)定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體，防止飼料桶爆裂，待Ph到達(dá)3.0-4.0時(shí)發(fā)酵結(jié)束；c.將稱取的地衣芽孢桿菌單獨(dú)培養(yǎng)將茄子瓶種的地衣芽孢桿菌按1∶25-35的比例接種于120-130℃、30-45min高溫滅菌的培養(yǎng)基中，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min-240r/min，培養(yǎng)溫度為35-40℃，通氣量1∶1，發(fā)酵時(shí)間為22-26小時(shí)，顯微鏡下觀察90-95％生孢時(shí)結(jié)束；第三步菌群的馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)將步驟2單獨(dú)和復(fù)合培養(yǎng)的菌液混合按1∶25-30的比例接入120-130℃、30-45min高溫滅菌的固體擴(kuò)大培養(yǎng)基中，攪拌30-45min至均勻，倒入50-70kg消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度30-35℃，時(shí)間12-15天，發(fā)酵過程中取樣三次，測(cè)定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測(cè)定水分為35-40％、Ph值為3.5-4.0；第四步粉碎添加特殊載體；a.干燥將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時(shí)間先后放入培養(yǎng)箱干燥，每盤重量2.0公斤±0.5，溫度控制在40-45℃，時(shí)間14-16小時(shí)，干燥完成的物料水份控制在≤11.8％；b.添加載體；將干燥后的產(chǎn)品按1∶0.02-0.03的比例添加載體，倒入攪拌機(jī)中攪拌均勻；轉(zhuǎn)入粉碎間進(jìn)行粉碎，物料溫度控制在45℃以下，粉碎后的物料過50目篩網(wǎng)，篩后粗料重新粉碎；c.過篩后裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標(biāo)識(shí)牌，轉(zhuǎn)入成品庫(kù)有序堆放；取樣檢測(cè)，主要參數(shù)水份≤11.8％、活菌數(shù)40-60億/g；物理性狀淡黃色粉末狀固體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟2復(fù)合或單獨(dú)培養(yǎng)基為無菌水再加豆粕粉、尿素、清糠、硫酸銨、酵母粉、玉米粉、糖蜜、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸鎂、硫酸鎂的至少三種混合物，其重量百分配比為豆粕2-6％、清糠10-60％、尿素0-3％、硫酸銨0-1％、酵母粉0-3％、玉米粉3-10％、糖蜜0-20％、磷酸二氫鉀0-1％、磷酸二氫鈉0-2％、磷酸鎂0-1％、硫酸鎂0-1％、無菌水12-85％。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟3的固體擴(kuò)大培養(yǎng)基為清糠和無菌水再加豆粕粉、糖蜜、玉米粉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、無菌水10-30％、尿素中的至少四種混合物組成，其重量百分配比為豆粕粉2-6％、糖蜜8-12％、玉米粉4-8％、清糠10-70％、磷酸二氫鉀0.03-0.06％、磷酸二氫鈉1-2％、硫酸鎂0.4-0.8％、無菌水10-30％、尿素1-2％中的至少四種混合物組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟4的特殊載體由沸石粉、碳酸鈣組成，其重量百分配比為沸石粉40-50％、碳酸鈣50-60％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提高肉牛消化吸收功能特別是肌腹結(jié)締組織合成功能改善的多肽及微生物飼料添加劑，該產(chǎn)品將來源于自然界中選育的納豆桿菌、地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌、啤酒酵母菌進(jìn)行單獨(dú)和復(fù)合培養(yǎng)，得到復(fù)合菌種進(jìn)行馴化和擴(kuò)大培養(yǎng)，然后再與培養(yǎng)基、無菌水等原料進(jìn)行固體發(fā)酵，最后經(jīng)干燥機(jī)進(jìn)行低溫快速干燥，添加特殊載體后粉碎過篩后即得到成品；本發(fā)明中的高濃度的腸道有益菌群和特殊的含有納豆激酶的保健型大豆肽、低聚肽、短肽混合物，能明顯提高肉牛對(duì)飼料中蛋白的消化吸收功能，促進(jìn)肌腹結(jié)締組織的合成，顯著提高在食用中的脆口性，具有明顯的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)安全無毒，是一種針對(duì)性和實(shí)用性很強(qiáng)的生態(tài)農(nóng)業(yè)產(chǎn)品。
文檔編號(hào)C12N1/18GK101074420SQ20061002665
公開日2007年11月21日 申請(qǐng)日期2006年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月18日
發(fā)明者江瀚 申請(qǐng)人:上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司