專利名稱：菌數(shù)測定方法、菌數(shù)測定裝置及用于該裝置的放置室的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于菌數(shù)測定方法、菌數(shù)測定裝置及用于該裝置的放置室的發(fā)明，特別是涉及使用氧電極測定菌數(shù)的菌數(shù)測定方法、菌數(shù)測定裝置及用于該裝置的放置室。
背景技術(shù)：
基于食品的衛(wèi)生管理等目的，有時要求測定食品中所含有的細菌數(shù)。以往測定食品等檢體中所含有的細菌的方法有如下方法梯度稀釋檢體并分別涂布一定量于瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24小時左右，再目視計算所得到的菌落數(shù)從而測定細菌數(shù)。但是，該方法存在的問題是，需要梯度稀釋檢體的作業(yè)、需要培養(yǎng)24小時左右等。因此，開發(fā)了如專利文獻1(即特開2000-287699號公報)所述的測定方法，其是用氧電極測定添加了檢體的液體培養(yǎng)基中所含有的溶解氧濃度，從而測定細菌數(shù)(以下也稱為氧電極法)。
對于專利文獻1所述的氧電極法，液體培養(yǎng)基中含有的溶解氧的濃度越高，則可以測得越大的電流。檢體中含有的細菌進行呼吸而消耗液體培養(yǎng)基中的溶解氧。隨著由該細菌呼吸而引起的溶解氧濃度的降低，流動在氧電極中的電流也會降低。另外，溶解氧的消耗量取決于檢體中含有的初期細菌數(shù)。也就是說，初期細菌數(shù)越多，則被消耗的氧量越多，溶解氧濃度的降低也越快。溶解氧濃度如果在短時間內(nèi)降低，則被測定的電流值也會在短時間內(nèi)降低。也就是說，通過求出在含有初期細菌數(shù)未知的檢體的液體培養(yǎng)基中流通的電流直至減少到給定閾值所用時間，可以確定與該所用時間對應(yīng)的初期菌數(shù)。通過如上所述，用氧電極法可以短時間且準確地測定初期菌數(shù)。
對于專利文獻1所述的氧電極法，培養(yǎng)基和菌種的一些組合會產(chǎn)生被測定的電流值不降低到閾值以下的狀態(tài)。如果產(chǎn)生這樣的狀態(tài)，則會產(chǎn)生擬陰性等誤檢和檢測時間的波動等，存在測定精度降低的問題。
另外，用氧電極法測定真菌類時，由于真菌類的呼吸速度慢，經(jīng)通常的培養(yǎng)后氧濃度不會急劇減少，因而對于以往的氧電極法存在不能以良好的精度進行測定的問題。進而，真菌類的增殖速度也慢，要是不增殖1周左右，則不能用以往的氧電極法進行判定，因而存在測定時間長的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供使用氧電極法能高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的菌數(shù)測定方法、菌數(shù)測定裝置及用于該裝置的放置室。另外，本發(fā)明的目的是提供可以高精度地且大幅縮短測定時間地測定真菌類初期菌數(shù)的菌數(shù)測定方法、菌數(shù)測定裝置及用于該裝置的放置室。
本發(fā)明的第1方案涉及的解決手段，其包括步驟(a)，將含有給定菌種的測定對象的試樣添加到給定的培養(yǎng)基中；步驟(b)，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下，使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值；步驟(c)，計測從步驟(b)的測定開始到電流值一度降低之后上升并且超過給定閾值為止所用的時間；步驟(d)，基于所用時間計算出在試樣中含有的菌種的初期菌數(shù)。
本發(fā)明的第1方案記載的菌數(shù)測定方法由于包括步驟(a)，將含有給定菌種的測定對象的試樣添加到給定的培養(yǎng)基中；步驟(b)，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值；步驟(c)，計測從步驟(b)的測定開始到所述電流值一度降低的之后上升并且超過給定的閾值為止所用的時間；步驟(d)，基于所用時間計算出在試樣中含有的菌種的初期菌數(shù)。所以，通過利用電流值一度降低隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，從而具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第2方案涉及的解決手段，其是第1方案記載的菌數(shù)測定方法，其中，電流值一度下降隨后上升是由試樣中含有的菌種的代謝活動引起的。
本發(fā)明的第2方案記載的菌數(shù)測定方法由于電流值一度下降隨后上升是源于試樣中含有的菌種的代謝活動，因而具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第3方案涉及的解決手段，其是第1或者2方案記載的菌數(shù)測定方法，其中，培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基，菌種是大腸菌或者大腸菌群。
本發(fā)明的第3方案記載的菌數(shù)測定方法由于培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基、菌種是大腸菌或者大腸菌群，因而構(gòu)成可以利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象的條件之一，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第4方案涉及的解決手段，其是第1或者2方案記載的菌數(shù)測定方法，其中，培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基，菌種是真菌類。
本發(fā)明的第4方案記載的菌數(shù)測定方法由于培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基、菌種是真菌類，因而構(gòu)成可以利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象的條件之一，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。并且，本發(fā)明的第4方案記載的菌數(shù)測定方法由于可以利用新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，因而與以往的方法相比具有可以大幅縮短測定時間的效果。
本發(fā)明的第5方案涉及的解決手段，其具有放置室，盛裝含有給定菌種的測定對象的試樣和給定的培養(yǎng)基；氧電極，設(shè)在放置室內(nèi)；電流測定部，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值；所用時間計測部，計測從電流測定部的測定開始到電流值一度降低之后上升并且超過給定閾值為止所用的時間；菌數(shù)計算部，基于所用時間計算出在試樣中含有的菌種的初期菌數(shù)。
本發(fā)明的第5方案記載的菌數(shù)測定裝置由于具有放置室，盛裝含有給定菌種的測定對象的試樣和給定的培養(yǎng)基；氧電極，設(shè)在放置室內(nèi)；電流測定部，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值；所用時間計測部，計測從電流測定部的測定開始到電流值一度降低之后上升并且超過給定閾值為止所用的時間；菌數(shù)計算部，基于所用時間計算出在試樣中含有的菌種的初期菌數(shù)。從而，通過利用電流值一度降低隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第6方案涉及的解決手段，其是第5方案記載的菌數(shù)測定裝置，其特征在于，電流值一度下降隨后上升是由試樣中含有的菌種的代謝活動引起的。
本發(fā)明的第6方案記載的菌數(shù)測定裝置由于電流值一度下降隨后上升是源于試樣中含有的菌種的代謝活動，因而具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第7方案涉及的解決手段，其是第5或者6方案記載的菌數(shù)測定裝置，其中，培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基，菌種是大腸菌或者大腸菌群。
本發(fā)明的第7方案記載的菌數(shù)測定裝置由于培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基、菌種是大腸菌或者大腸菌群，因而構(gòu)成可以利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象的條件之一，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第8方案涉及的解決手段，其是第5或者6方案記載的菌數(shù)測定裝置，其中，培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基，菌種是真菌類。
本發(fā)明的第8方案記載的菌數(shù)測定裝置由于培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基、菌種是真菌類，因而構(gòu)成可以利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象的條件之一，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。并且，本發(fā)明的第8方案記載的菌數(shù)測定裝置由于可以利用新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，因而與以往的方法相比具有可以大幅縮短測定時間的效果。
本發(fā)明的第9方案涉及的解決手段，其是盛裝含有給定菌種的測定對象的試樣和給定的培養(yǎng)基的放置室，在放置室的內(nèi)壁具有氧電極，氧電極在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下測定一度下降并在之后上升的流過培養(yǎng)基的電流值。
本發(fā)明的第9方案記載的放置室，由于其是盛裝含有給定菌種的測定對象的試樣和給定的培養(yǎng)基的放置室，在放置室的內(nèi)壁具有氧電極，氧電極在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下測定一度下降并在之后上升的流過培養(yǎng)基的電流值；從而，通過利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第10方案涉及的解決手段，其是第9方案記載的放置室，電流值一度下降隨后上升是由試樣中含有的菌種的代謝活動引起的。
本發(fā)明的第10方案記載的放置室，由于電流值一度下降隨后上升是源于試樣中含有的菌種的代謝活動，因而具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第11方案涉及的解決手段，其是第9或者10方案記載的放置室，其中，培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基，菌種是大腸菌或者大腸菌群。
本發(fā)明的第11方案記載的放置室，由于培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基、菌種是大腸菌或者大腸菌群，因而構(gòu)成可以利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象的條件之一，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
本發(fā)明的第12方案涉及的解決手段，其是第9或者10方案記載的放置室，培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基，菌種是真菌類。
本發(fā)明的第12方案記載的放置室，由于培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基、菌種是真菌類，因而構(gòu)成可以利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象的條件之一，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。并且，本發(fā)明的第12方案記載的放置室由于可以利用新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，因而與以往的方法相比具有可以大幅縮短測定時間的效果。
本發(fā)明的目的、特征、局面及優(yōu)點通過以下的詳細說明和附圖會更加清楚。


圖1是本實施方式1涉及的菌數(shù)測定方法的流程圖；圖2是本實施方式1涉及的菌數(shù)測定裝置的框圖；
圖3是本實施方式1涉及的放置室的截面立體圖；圖4是表示本實施方式1涉及的菌數(shù)測定裝置的電流值變化的圖；圖5是表示本實施方式1涉及的菌數(shù)測定裝置的電流值變化的圖；圖6是表示本實施方式1涉及的菌數(shù)測定裝置的標準曲線的圖；圖7是表示本實施方式1涉及的菌數(shù)測定裝置的電流值變化的圖；圖8是表示本實施方式1涉及的菌數(shù)測定裝置的電流值變化的圖；圖9是表示本實施方式2涉及的菌數(shù)測定裝置的電流值變化的圖。
具體實施例方式
對于氧電極法，由于菌種的呼吸(代謝活動)，溶解氧濃度會降低，與之相應(yīng)地是在作為氧電極的作用極和對極之間流通的電流值(以下也簡稱為電流值)降低。但是，組合特定的培養(yǎng)基、特定的菌種時，新發(fā)現(xiàn)被測定的電流值隨著代謝活動一度下降隨后急劇上升這一現(xiàn)象。本發(fā)明是在氧電極法中利用了上述現(xiàn)象的菌數(shù)測定方法、菌數(shù)測定裝置和用于該裝置的放置室。
在以下的實施方式中，通過列舉特定的培養(yǎng)基、特定的菌種的具體名稱進行說明。但是，本發(fā)明并不限于以下的實施方式中所說明的具體名稱。
實施方式1在本實施方式中，作為特定的培養(yǎng)基使用被用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基(以下僅稱為特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基)。作為該特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基例如有コリラ一ト(注冊商標)等。在本實施方式中，作為特定的菌種使用大腸菌或者大腸菌群。另外，在本實施方式中，作為氧電極的母材使用不銹鋼(SUS)。
針對以上的組合所使用的菌數(shù)測定方法進行說明。圖1是本實施方式涉及的菌數(shù)測定方法的流程圖。首先，在步驟a中，將含有大腸菌或者大腸菌群的試樣(檢體)添加到特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基中。具體來說，特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基是液體，用混合器粉碎、攪拌含大腸菌或者大腸菌群的試樣，并添加到該液體培養(yǎng)基中。
接著，在步驟b中，測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值。另外，電流值的測定在通過溫度控制而被控制的給定溫度下且在給定的恒定電壓下進行。圖2中示出本實施方式涉及的菌數(shù)測定裝置的框圖。在該菌數(shù)測定裝置中設(shè)有放置室1，在該放置室1中盛裝添加了試樣的培養(yǎng)基。并且，在放置室1內(nèi)設(shè)有用于氧電極法的氧電極2。圖3表示放置室1的截面立體圖。在放置室1底面附近的側(cè)壁設(shè)有構(gòu)成氧電極2的對極21、作用極22、參照極23這三個電極。進而，在放置室1中設(shè)有與對極21、作用極22、參照極23以電學方式連接的輸出端子24，氧電極2通過輸出端子24與電流測定部3相連接。
接著，針對對極21、作用極22、參照極23的構(gòu)造進行說明。對極21、作用極22、參照極23的電極母材使用不銹鋼。并且，在該電極母材的表面實施了鍍金。另外，本發(fā)明中利用的氧電極2的電極母材不限于不銹鋼，也可以是其他的金屬材料(例如銅等)。但是，即使電極母材是其他的金屬材料，也要對其表面進行鍍金。
對于圖2的電流測定部3，用氧電極2測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值(步驟b)。特別是用對極21和作用極22測定在培養(yǎng)基中流通的電流。在此，所謂在培養(yǎng)基中流通的電流如在背景技術(shù)所說明的，是指培養(yǎng)基的溶解氧在作用極22被還原成水而流動的電流。因此，培養(yǎng)基的溶解氧濃度高時，電流值也高；溶解氧濃度低時，則電流值也低。另一方面，在試樣中含有的大腸菌或者大腸菌群，隨著增殖其氧消耗量也增加。因此，培養(yǎng)基的溶解氧濃度降低，電流值隨著溶解氧濃度的降低也會降低。從而，對于以往的氧電極法，如果將閾值設(shè)定為接近零的電流值(例如100nA)，可以判定電流值降低直到與閾值交叉的時間(以下也稱為所用時間)。
但是，用氧電極測定作為特定的培養(yǎng)基和特定的菌種的組合的特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基中的大腸菌或者大腸菌群時，新發(fā)現(xiàn)會產(chǎn)生和背景技術(shù)不同的現(xiàn)象。圖4是表示本實施方式涉及的電流值變化的曲線圖。在圖4中，用氧電極測定了特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基(コリラ一ト)中的大腸菌群。對于圖4的電流值的變化，從測定開始直至大約400分鐘穩(wěn)定地流動大約1000nA的電流值，其后隨著大腸菌群的增殖，溶解氧濃度開始降低，測定時間為大約500分鐘時電流值降低至大約650nA。隨后電流值開始急劇上升，測定時間為大約580分鐘時電流值上升至大約2000nA。另外，測定開始時在培養(yǎng)基中含有的氧處于飽和狀態(tài)，因而從外部流入的氧對電流值的上升影響小。電流值如圖4所示那樣變化時，即使設(shè)定如以往那樣的接近零電流值的閾值(例如100nA)，也不能計測所用時間。
因此，在本實施方式中，通過將較測定開始時高的電流值設(shè)定為閾值，即使是電流值一度下降隨后上升那樣的情況，也可以測定所用時間。在圖4中，將閾值設(shè)定為1500nA，在大約540分鐘超過閾值。因此，圖4所示的所用時間為大約540分鐘。在圖1的流程圖中，在步驟c1中判定電流值上升是否超過閾值，在步驟c1中判定了超過閾值時，則在步驟c2中計測所用時間。該所用時間在圖2所示的菌數(shù)測定裝置的所用時間計測部4中被測定。另外，在進行步驟b、步驟c1及步驟c2期間，在大約30℃培養(yǎng)大腸菌或者大腸菌群。
接著，在圖1的步驟d中，計算出在試樣中含有的初期菌數(shù)。在圖2中所示的菌數(shù)測定裝置的菌數(shù)計算部5，基于計測的所用時間計算出在試樣中含有的初期菌數(shù)。另外，為了計算出初期菌數(shù)，如背景技術(shù)所述需要事先求出標準曲線。以下基于具體例子進行說明。首先，針對初期菌數(shù)已知的試樣測定其電流值的變化。圖5中表示初期菌數(shù)已知的試樣的電流值變化。在圖5中針對初期菌數(shù)為0、101、103、105、107(單位CFU/g)5種試樣進行測定，每種測定3個試樣。隨后，設(shè)定閾值為1500nA，從圖5計測所用時間并繪制圖表，得到圖6所示的標準曲線的圖表。在圖6中以橫軸為初期菌數(shù)(LogCFU/g)，以縱軸為測定時間(所用時間)。針對圖6中繪制的所用時間的數(shù)據(jù)應(yīng)用最小二乘法，可以得到測定時間(y)＝-74.65×初期菌數(shù)(x)+668.23的標準曲線。
使用如上所述求出的標準曲線測定含有初期菌數(shù)未知的試樣。首先，測定含有初期菌數(shù)未知的試樣的電流值的變化，得到所用時間。接著，將得到的所用時間應(yīng)用于圖6中得到的標準曲線，計算出初期菌數(shù)。從圖4中所示的圖表求出的所用時間為大約540分鐘，將540代入變量y而求變量x時，x為大約1.72，可以知道初期菌數(shù)為101.72(CFU/g)。為了在步驟d中測定初期菌數(shù)，需要事先求出標準曲線，但如果菌種等不同該標準曲線就不能使用。因此，每種必需的菌種都需要準備標準曲線。圖5是針對大腸菌群的測定，圖6是針對大腸菌群的標準曲線。
如上所述，用氧電極法測定作為特定的培養(yǎng)基和特定的菌種的組合的特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基中的大腸菌或者大腸菌群時，新發(fā)現(xiàn)會產(chǎn)生和背景技術(shù)不同的現(xiàn)象。也就是如下現(xiàn)象，由于大腸菌或者大腸菌群的呼吸，培養(yǎng)基中的溶解氧濃度會降低，與之相應(yīng)地是電流值也開始降低，但隨后電流值會上升。在現(xiàn)階段對該現(xiàn)象詳細的機理還不清楚。但是，組合特定的培養(yǎng)基(特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基)和特定的菌種(大腸菌或者大腸菌群)進行測定時，可以確認具有再現(xiàn)性。
針對上述的現(xiàn)象，詳細的機理還不清楚，但即使改變電極母材的情況下，在組合特定的培養(yǎng)基和特定的菌種時也會產(chǎn)生相同的現(xiàn)象。使用相同的培養(yǎng)基和相同的菌種但使用不同的電極母材進行測定的例子示于圖7和圖8中。另外，在圖7和圖8中，橫軸為測定時間(分鐘)，縱軸為電流值(nA)。在圖7中，作為特定的培養(yǎng)基使用コリラ一ト，作為特定的菌種使用大腸菌群，作為電極母材使用不銹鋼。另一方面，在圖8中，作為特定的培養(yǎng)基使用コリラ一ト，作為特定的菌種使用大腸菌群，作為電極母材使用銅。并且，在圖7和圖8中，針對初期菌數(shù)為0、102、104、106(單位CFU/g)4種試樣進行測定，每種測定3個試樣。其結(jié)果如圖7和圖8所示，只要是コリラ一ト培養(yǎng)基和大腸菌群菌種的組合，就出現(xiàn)電流值一度下降隨后上升的現(xiàn)象，與電極母材為不銹鋼或銅的差異無關(guān)。但是，將圖7和圖8進行比較可以知道，圖7電流的上升明顯急劇，波動小。也就是說，使用不銹鋼為電極母材較使用銅為電極母材，可以縮短測定時間，且可以減少測定波動。
如上所述，對于本實施方式，由于包括步驟(a)，將作為測定對象的試樣添加到用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基中；步驟(b)，使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值；步驟(c)，開始步驟(b)的測定后，電流值由于在試樣中含有的大腸菌或者大腸菌群的代謝活動一度下降隨后又上升，計測直至超過給定的閾值的所用時間；步驟(d)，基于所用時間計算出在試樣中含有的大腸菌或者大腸菌群的初期菌數(shù)。從而，通過利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
另外，本實施方式中，將閾值設(shè)定成較測定開始時高的電流值，但在本發(fā)明中，只要是可以計測電流值以一度下降隨后上升的局面與閾值交叉的時間點，也可以將閾值設(shè)定成較測定開始時低的電流值。
實施方式2在本實施方式中，作為特定的培養(yǎng)基使用PYG(多價胨酵葡萄糖培基)培養(yǎng)基，作為特定的菌種使用真菌類。在此，作為真菌類存在有例如酵母、霉、白假絲酵母(IFO 1594)等。
針對以上的組合應(yīng)用在實施方式1中使用的菌數(shù)測定方法。因而，基于圖1所示的流程圖說明菌數(shù)測定方法。但是，真菌類的增殖速度較大腸菌等慢，因而例如作為準備作業(yè)需要以下的作業(yè)。首先，從繼代的菌落鉤出真菌類(例如酵母)。接著，在用顯微鏡確認下，調(diào)整成1×102CFU/ml的菌液。隨后，將調(diào)整后的菌液接種成果實調(diào)整品。進而，將接種的試樣(檢體)放入30℃的恒溫槽，進行2天的預(yù)培養(yǎng)。隨后，在步驟a中將1ml預(yù)培養(yǎng)后的試樣添加到1ml PYG培養(yǎng)基中。
接著，在步驟b中，測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值。本實施方式涉及的菌數(shù)測定裝置也與實施方式1中所說明的菌數(shù)測定裝置相同，圖2表示框圖。在該菌數(shù)測定裝置中設(shè)有放置室1，在該放置室1中盛裝有添加了試樣的培養(yǎng)基。并且，在放置室1內(nèi)設(shè)有用于氧電極法的氧電極。本實施方式涉及的放置室1也與實施方式1中說明的放置室1相同，圖3表示放置室1的截面立體圖。放置室1底面附近的側(cè)壁上設(shè)有構(gòu)成氧電極2的對極21、作用極22、參照極23這三個電極。并且，對極21、作用極22、參照極23的電極母材使用不銹鋼。在該電極母材的表面還進行了鍍金。另外，本發(fā)明中利用的氧電極2的電極母材并不限于不銹鋼，也可以是其他的金屬材料(例如銅等)。但是，即使電極母材是其他的金屬材料，也要對其表面進行鍍金。進而，在放置室1中設(shè)有與對極21、作用極22、參照極23以電學方式連接的輸出端子24，通過該輸出端子24，對極21、作用極22、參照極23與圖2所示的電流測定部3相連接。
圖2的電流測定部3中，使用對極21和作用極22測定在培養(yǎng)基中流通的電流。在本實施方式中，由于真菌類消耗培養(yǎng)基的溶解氧，電流值會降低，但隨后電流值上升。電流值這樣變化的現(xiàn)象與圖4所示的大腸菌群的電流值變化的現(xiàn)象相同，與大腸菌群同樣，在現(xiàn)階段其詳細的機理是不清楚的。圖9是表示真菌類的電流值的變化的圖表。在圖9中針對食品材料分離酵母、白假絲酵母、食品材料分離霉這3種真菌類記載了電流值的變化。另外，圖9的橫軸是測定時間(小時)，縱軸是電流值(nA)。
首先，對于食品材料分離酵母，電流值幾乎不降低，隨后急劇上升。如果與實施方式1同樣將閾值設(shè)定為1500nA，則食品材料分離酵母在測定后大約20分種(0.33小時)與閾值交叉。也就是說，可以知道食品材料分離酵母的所用時間大約為20分鐘。接著，對于白假絲酵母，電流值稍微降低隨后急劇上升。白假絲酵母在大約30分鐘(0.5小時)與閾值交叉，可以知道所用時間大約為30分鐘。接著，對于食品材料分離霉，電流值一度下降隨后上升。食品材料分離霉在大約135分鐘(2.25小時)與閾值交叉，可以知道所用時間為大約135分鐘。另外，在圖9中也表示出所測定的不含有真菌類的放置室(空白放置室)的電流值的變化。對于空白放置室，電流值會隨著測定時間緩慢降低，但沒有發(fā)現(xiàn)急劇的變化。
所用時間的測定在圖2所示的所用時間計測部4進行。用圖1所示的流程圖判定步驟c1中電流值上升是否超過閾值，判定超過閾值時，則在步驟c2中計測所用時間。另外，在進行步驟b、步驟c1和步驟c2期間，在大約30℃培養(yǎng)真菌類。
接著，在步驟d中基于被計測的所用時間計算出在試樣中含有的初期菌數(shù)。對于圖2所示的菌數(shù)測定裝置，在菌數(shù)計算部5進行。為了計算出初期菌數(shù)，與實施方式1同樣需要事先求出標準曲線。對于求出標準曲線的具體說明，在實施方式1中已進行了說明，因而省略。利用事先得到的標準曲線，從得到的所用時間計算出真菌類的初期菌數(shù)。另外，為得到真菌類的初期菌數(shù)所必需的時間為1天左右，是向放置室放置試樣的時間加上測定的所用時間后得到的。本實施方式中，即使加上預(yù)培養(yǎng)的2天時間，3天左右就可以得到真菌類的初期菌數(shù)，與以往需要1周左右時間相比，時間可以得以大幅縮短。
如上所述，對于本實施方式，由于包括步驟(a)，將作為測定對象的試樣添加到PYG培養(yǎng)基中；步驟(b)，使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值；步驟(c)，步驟(b)的測定開始后，由于在試樣中含有的真菌類的代謝活動電流值一度下降隨后又上升，計測測定開始直至超過給定的閾值的所用時間；步驟(d)，基于所用時間計算出在試樣中含有的真菌類的初期菌數(shù)。從而，通過利用電流值一度下降隨后上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，具有可以高精度地且可再現(xiàn)地測定初期菌數(shù)的效果。
另外，對于本實施方式，通過選擇如上所述的適宜的組合，利用電流值上升這一新發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，可以進行以往不能高精度地測定的真菌類的測定。進而，以往要是不對真菌類增殖1周左右時間就不能進行判定，而本實施方式即使包括2天左右的預(yù)培養(yǎng)在內(nèi)在3天內(nèi)就可以進行判定。
權(quán)利要求
1.一種菌數(shù)測定方法，該方法包括步驟(a)，將含有給定菌種的測定對象的試樣添加到給定的培養(yǎng)基中；步驟(b)，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下，使用氧電極測定在添加了所述試樣的所述培養(yǎng)基中流通的電流值；步驟(c)，計測從所述步驟(b)的測定開始到所述電流值一度降低之后上升并且超過給定閾值為止所用的時間；步驟(d)，基于所述所用時間計算出在所述試樣中含有的所述菌種的初期菌數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌數(shù)測定方法，其特征在于，所述電流值一度下降隨后上升是由所述試樣中含有的所述菌種的代謝活動引起的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的菌數(shù)測定方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基，所述菌種是大腸菌或者大腸菌群。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的菌數(shù)測定方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基，所述菌種是真菌類。
5.一種菌數(shù)測定裝置，該裝置具有放置室，盛裝含有給定菌種的測定對象的試樣和給定的培養(yǎng)基；氧電極，設(shè)在所述放置室內(nèi)；電流測定部，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下使用所述氧電極測定在添加了所述試樣的所述培養(yǎng)基中流通的電流值；所用時間計測部，計測從所述電流測定部的測定開始到所述電流值一度降低之后上升并且超過給定閾值為止所用的時間；菌數(shù)計算部，基于所述所用時間計算出在所述試樣中含有的所述菌種的初期菌數(shù)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌數(shù)測定裝置，其特征在于，所述電流值一度下降隨后上升是由所述試樣中含有的所述菌種的代謝活動引起的。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或者6所述的菌數(shù)測定裝置，其特征在于，所述培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基，所述菌種是大腸菌或者大腸菌群。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或者6所述的菌數(shù)測定裝置，其特征在于，所述培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基，所述菌種是真菌類。
9.一種放置室，其是盛裝含有給定菌種的測定對象的試樣和給定的培養(yǎng)基的放置室，其特征在于，在所述放置室的內(nèi)壁具有氧電極，所述氧電極在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下測定一度下降并在之后上升的流過所述培養(yǎng)基的電流值。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的放置室，其特征在于，所述電流值一度下降隨后上升是由所述試樣中含有的所述菌種的代謝活動引起的。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或者10所述的放置室，其特征在于，所述培養(yǎng)基是用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基，所述菌種是大腸菌或者大腸菌群。
12.根據(jù)權(quán)利要求9或者10所述的放置室，其特征在于，所述培養(yǎng)基是PYG培養(yǎng)基，所述菌種是真菌類。
全文摘要
本發(fā)明的菌數(shù)測定方法具有步驟(a)～(d)的工序。首先，在步驟(a)中，將含有給定菌種(例如大腸菌或者大腸菌群)的測定對象的試樣添加到給定的培養(yǎng)基(例如用于特定酶基質(zhì)培養(yǎng)基法的培養(yǎng)基)中。在步驟(b)中，在給定的溫度下且在給定的恒定電壓下，使用氧電極測定在添加了試樣的培養(yǎng)基中流通的電流值。在步驟(c)中，計測從步驟(b)的測定開始到所述電流值一度降低之后上升并且超過給定閾值為止所用的時間。在步驟(d)中，基于所用時間計算出在試樣中含有的菌種的初期菌數(shù)。
文檔編號C12M1/34GK1898393SQ20058000134
公開日2007年1月17日 申請日期2005年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月2日
發(fā)明者宮原精一郎, 奧村千晶, 福井直樹, 赤松惠 申請人:大金工業(yè)株式會社