專(zhuān)利名稱(chēng)：酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物的真空冷凍干燥制品及其制備方法，特別是涉及酵母拮抗菌C.laurentii的一種真空冷凍干燥制品及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前保持酵母菌生活力的方式主要有傳代培養(yǎng)保藏、液體石蠟低溫保藏、斜面低溫保藏、半固體穿刺保藏、液氮冷凍保藏和真空冷凍干燥保藏等(Ashwood-Smith MJ.Preservation of microorganisms by freezing，freeze-drying and desiccation.InAshwood-Smith M J(Eds).Low Temperature Preservation in Medicine andBiology.Tunbridge WellsPitman Medical，1980，pp219-252.；李鐘慶 編 微生物菌種保藏技術(shù).北京科學(xué)出版社，1989，pp19-28)。由于真空冷凍干燥保藏法具有保藏期長(zhǎng)、可避免其它雜菌污染、便于運(yùn)輸和易于實(shí)現(xiàn)商品化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，因而成為目前保存細(xì)菌、酵母菌真菌孢子及霉菌最有效、成功的方法之一(李華，駱艷娥，劉延琳.真空冷凍干燥微生物的研究進(jìn)展.微生物學(xué)通報(bào)，2002，2978-82)。然而，并非所有的微生物都適合于真空冷凍干燥保存，既使能采用真空冷凍干燥保存的微生物，其存活率也可能低于0.1％(Benny J F，Hennebert G L.Viability andstability of yeast cells and filamentous fungus spores during freeze dryingeffects of protectants and cooling rates.Mycologia，1991，83805-815.)。據(jù)報(bào)道，影響微生物真空冷凍干燥效果的因素主要包括懸浮液濃度、預(yù)凍速度、保護(hù)劑的種類(lèi)和濃度以及復(fù)水方式等(Bozoglu T F，Ozilgen M，Bakir U.Survivalkinetics of lactic acid starter cultures during and after freez drying.EnzmymeMicrobial Technology，1987，9531-537.；Champage C P，Gardner N，Brochu E，Beaulier Y.The freeze-drying of lactic acid bacteriaa review.Can.Inst.Sci.Technol.J.，1991，24118-126)。為了獲得理想的真空冷凍干燥效果，需要篩選有效地制備方式及其保護(hù)劑。但目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有對(duì)酵母拮抗菌Cryptococcuslaurentii(C.laurentii)真空冷凍干燥方式效果的報(bào)道。
研究表明酵母拮抗菌C.laurentii對(duì)葡萄、桃、蘋(píng)果、冬棗、甜櫻桃等果實(shí)的主要采后病害均具有明顯抑制效果(劉海波，田世平，秦國(guó)政，徐勇.羅倫隱球酵母對(duì)葡萄采后病害的拮抗效果.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，35831-835.；林麗，田世平，秦國(guó)政，徐勇.兩種拮抗酵母菌對(duì)桃果實(shí)貯藏期間主要病害的防治效果.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，361535-1539.)；可以耐受低溫、低氧和高二氧化碳等果實(shí)采后的主要貯藏條件(Qin G Z，Tian S P.Biocontrol of postharvest diseases of jujube fruitby Cryptococcus laurentii combined with a low dosage of fungicides underdifferent storage conditions.Plant Dis.，2004a，88497-501.)，能夠與鉬酸銨、碳酸氫鈉、水楊酸以及低劑量的殺菌劑(Qin et al.，2004a)配合使用(WanY K，Tian S P，Qin G Z.Enhancement of biocontrol activity of yeasts by addingsodium bicarbonate or ammonium molybdate to control postharvest disease ofjujube fruits.Lett.Appl.Microbiol.，2003，371-5.)，并能在采前田間噴施(Tian S P，Qin G Z，Xu Y.Survival of antagonistic yeasts under field conditionsand their biocontrol ability against postharvest diseases of sweet cherry.Postharvest Biol.Technol.，2004a，In press.)，具有良好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品。
本發(fā)明所提供的酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品，是收集經(jīng)培養(yǎng)24-48h的酵母拮抗菌C.laurentii的菌體，將其用保護(hù)劑制成濃度為5×108-5×109個(gè)細(xì)胞/mL的菌懸液，孵育1-2h，再進(jìn)行真空冷凍干燥后得到的產(chǎn)品；所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分含量為5-10％的葡萄糖、蔗糖、醋酸鈉、脫脂奶粉或谷氨酸鈉水溶液。
所述酵母拮抗菌C.laurentii的培養(yǎng)條件為；按2％的接種濃度將酵母拮抗菌C.laurentii接種于專(zhuān)用培養(yǎng)基中，在25℃，200rpm下振蕩培養(yǎng)；所述專(zhuān)用培養(yǎng)基的配方為檸檬酸40，大豆蛋白胨15，硫酸鎂1.23，氯化鈣0.56，單位gL-1。
菌懸液的濃度優(yōu)選為5×108個(gè)細(xì)胞/mL，孵育時(shí)間優(yōu)選為2h，保護(hù)劑優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為5％的脫脂奶粉水溶液。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種上述酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品的制備方法。
本發(fā)明所提供的酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品的制備方法，是收集經(jīng)培養(yǎng)24-48h的酵母拮抗菌C.laurentii的菌體，將其用保護(hù)劑制成濃度為5×108-5×109個(gè)細(xì)胞/mL的菌懸液，孵育1-2h，再進(jìn)行真空冷凍干燥后得到酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品；所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分含量為5-10％的葡萄糖、蔗糖、醋酸鈉、脫脂奶粉或谷氨酸鈉水溶液。
在上述制備方法中，所述酵母拮抗菌C.laurentii的培養(yǎng)條件為；按2％的接種濃度將酵母拮抗菌C.laurentii接種于專(zhuān)用培養(yǎng)基中，在25℃，200rpm下振蕩培養(yǎng)；所述專(zhuān)用培養(yǎng)基的配方為檸檬酸40，大豆蛋白胨15，硫酸鎂1.23，氯化鈣0.56，單位gL-1。
菌懸液的濃度優(yōu)選為5×108個(gè)細(xì)胞/mL，孵育時(shí)間優(yōu)選為2h，保護(hù)劑優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為5％的脫脂奶粉水溶液。
所述真空冷凍干燥條件可采用一般的微生物制品的真空冷凍干燥條件，如干燥溫度-45℃，真空度0.54mPa，干燥時(shí)間24h。
本發(fā)明首先通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定影響酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥效果的主要因子，并在此基礎(chǔ)上深入探討不同生長(zhǎng)階段和保護(hù)劑對(duì)冷凍干燥制品的生活力的影響，得到酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥的有效地制備方法。用本發(fā)明的方法制備的酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥制品具有較高的生物活性，活菌率可達(dá)80％。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單、成本低廉，具有工業(yè)化生產(chǎn)的可行性，將在酵母拮抗菌C.laurentii及其它微生物的保藏及其相關(guān)產(chǎn)品的制備中發(fā)揮巨大作用。


圖1為鑒定不同保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥效果的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖2為鑒定不同保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥制品貨架期(0℃，3月)影響的的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖3為鑒定不同保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥制品0℃貯藏3月后細(xì)胞膜完整性與活性氧產(chǎn)生影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)施方式
下述實(shí)施例中如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法。
實(shí)施例1、一、酵母拮抗菌C.laurentii菌種的保存、活化及其發(fā)酵培養(yǎng)1、菌種的分離及保存從蘋(píng)果果實(shí)表面分離獲得酵母拮抗菌C.laurentii菌種，置于甘油中-20℃保存(劉海波，田世平，秦國(guó)政，徐勇.羅倫隱球酵母對(duì)葡萄采后病害的拮抗效果.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，35831-835)。
2、菌種的活化從-20℃中保存的甘油管中吸取少量菌液，在NYDA培養(yǎng)基(葡萄糖10，大豆蛋白胨5，牛肉膏1，酵母提取物7.5，瓊脂18，單位gL-1)鋪板并在28℃下培養(yǎng)，72h后取少量生長(zhǎng)良好的酵母拮抗菌接種在NYDB培養(yǎng)基(葡萄糖10，大豆蛋白胨5，牛肉膏1，酵母提取物7.5，單位gL-1)中進(jìn)一步活化，鋪板，并在NYDA培養(yǎng)基上分離單菌落。
3、菌種的培養(yǎng)挑取單菌落接入C.laurentii的專(zhuān)用培養(yǎng)基(檸檬酸40，大豆蛋白胨15，硫酸鎂1.23，氯化鈣0.56，單位gL-1)中(1000mL三角瓶中含200mL培養(yǎng)液)，振蕩培養(yǎng)(25℃，200rpm)12-18h。
4、發(fā)酵培養(yǎng)以2％接種濃度將步驟3培養(yǎng)的菌種接種到120L發(fā)酵罐(含80L培養(yǎng)液)中，在相同條件下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。
二、影響酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥效果的因素分析實(shí)驗(yàn)采用四因素，三水平的正交實(shí)驗(yàn)L9(43)，確定不同培養(yǎng)時(shí)間、懸浮液濃度、保護(hù)劑種類(lèi)以及孵育時(shí)間對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥效果的影響，找到酵母拮抗菌真空冷凍干燥效果的最主要因素，以便進(jìn)一步確定對(duì)其進(jìn)行真空冷凍干燥的方式。正交實(shí)驗(yàn)L9(43)所選用的不同因素與水平的設(shè)計(jì)如表1所示，以酵母拮抗菌Rglutinis為對(duì)照表1 影響酵母拮抗菌C.laurentii與R.glutinis真空冷凍干燥效果的正交實(shí)驗(yàn)L9(34)的因素與水平

具體實(shí)驗(yàn)方法為用步驟一的方法對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii進(jìn)行培養(yǎng)，每種菌設(shè)三個(gè)不同的發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間(24、48和72h)，培養(yǎng)結(jié)束后，離心收集菌體，將菌體用無(wú)菌水沖洗3次，再按表1所示將經(jīng)不同時(shí)間培養(yǎng)的菌體用不同保護(hù)劑配成不同濃度的菌懸液，孵育不同時(shí)間后，置于-18℃冰箱中冷凍，24h后將冷凍樣品放入冷凍干燥機(jī)(FD-1型，北京博醫(yī)康公司)中干燥。干燥溫度為-45℃，真空度0.54mPa，干燥時(shí)間為24h。干燥結(jié)束后立即加入無(wú)菌水復(fù)水，并進(jìn)行1/10，1/100，1/1000，1/10000梯度稀釋?zhuān)伆澹?8℃培養(yǎng)2d，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用一般正交分析的方法進(jìn)行(Montagomery，D C.Design and analysis of experiments，4thed.NewYorkWiley，1996，pp 627-631)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示
表2不同培養(yǎng)時(shí)間、菌懸液濃度，孵育時(shí)間和保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii冷凍干燥效果的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及直觀分析表

aKjA＝∑存活率Aj.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值bkiA＝KiA/2.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值cRiA＝最大(kiA)-最小(kiA).實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為三個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值表2數(shù)據(jù)表明，各因素對(duì)C.laurentii冷凍干燥效果的影響大小依次為保護(hù)劑種類(lèi)＞菌懸液濃度＞酵母菌培養(yǎng)時(shí)間＞保護(hù)劑孵育時(shí)間，在實(shí)驗(yàn)的四個(gè)因子中，保護(hù)劑種類(lèi)對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii真空冷凍干燥效果的影響最大。
對(duì)各因素不同水平之間的均值進(jìn)行比較，結(jié)果表明酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥效果在酵母菌培養(yǎng)24-48h內(nèi)差別不大，酵母菌懸浮液濃度也只有從1×108個(gè)細(xì)胞/mL提高到5×108個(gè)細(xì)胞/mL時(shí)影響較大，保護(hù)劑孵育時(shí)間在1-2h內(nèi)對(duì)冷凍干燥的影響不大。因此初步確定C.laurentii的真空冷凍干燥條件為酵母菌培養(yǎng)時(shí)間24-48h，懸浮液濃度為5×108-5×109個(gè)細(xì)胞/mL，孵育時(shí)間2h。由于保護(hù)劑種類(lèi)對(duì)冷凍干燥效果的影響最大，同時(shí)考慮到不同因素之間也可能存在相互作用，在此基礎(chǔ)上，在下述實(shí)施例中進(jìn)一步鑒定培養(yǎng)時(shí)間和保護(hù)劑的種類(lèi)及濃度對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii冷凍干燥效果的影響。
實(shí)施例2、不同保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌真空冷凍干燥制品生活力的影響將用實(shí)施例1中所用方法分別培養(yǎng)24h和48h的酵母拮抗菌C.laurentii菌液離心，收集沉淀，無(wú)菌水沖洗3次。將沉淀分別用不同濃度的保護(hù)劑(葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、檸檬酸鈉、醋酸鈉、脫脂奶粉和谷氨酸鈉)懸浮，以無(wú)保護(hù)劑的水為陰性對(duì)照，以酵母菌經(jīng)24h和48h培養(yǎng)后的培養(yǎng)液為對(duì)照，使最終菌懸液濃度為5×108個(gè)細(xì)胞/mL，室溫孵育1-2h后，放入-18℃冰箱中冷凍24 h，然后將冷凍樣品放入FD-1型冷凍干燥機(jī)中干燥，干燥溫度-45℃，真空度0.54mPa，時(shí)間24h。
干燥結(jié)束后將樣品取出，一部分立即用無(wú)菌水復(fù)水至冷凍干燥前的體積，采用稀釋平板法計(jì)數(shù)，考察不同保護(hù)劑對(duì)酵母菌冷凍干燥后存活率的影響。另一部分冷凍干燥樣品用離心管包裝、密封，0℃下貯藏3個(gè)月后，再用無(wú)菌水復(fù)水，稀釋平板法計(jì)數(shù)，以鑒定不同冷凍干燥條件對(duì)酵母拮抗菌冷凍干燥制品貨架期的影響。
對(duì)不同保護(hù)劑篩選單因素實(shí)驗(yàn)的部分?jǐn)?shù)據(jù)利用SPSS軟件分析，通過(guò)ANOVA方式，采用鄧肯式多重差異分析(Duncan’s multiple range tests)方法對(duì)處理之間的差異性在P＜0.05水平上進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，表明冷凍干燥后，僅以無(wú)菌水懸浮的酵母菌C.laurentii存活率在3.9-5.1％之間，其中酵母菌培養(yǎng)24h后的存活率較高。而以培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞時(shí)，無(wú)論培養(yǎng)24h還是48h，C.laurentii冷凍干燥后的活菌率均在0.5％以下。
酵母拮抗菌C.laurentii冷凍干燥后的存活率也因保護(hù)劑的種類(lèi)和濃度不同而有明顯差異。在四種糖中，只有葡萄糖和蔗糖對(duì)C.laurentii的保護(hù)作用比較明顯，兩者均為當(dāng)保護(hù)劑濃度為10％、培養(yǎng)時(shí)間24h時(shí)的效果最好，即便如此，拮抗菌C.laurentii凍干后的存活率也只有46.8％和31.8％。而以乳糖和海藻糖處理的酵母菌存活率均低于15％。在三種鈉鹽中，檸檬酸鈉的作用效果較差；5％醋酸鈉和谷氨酸鈉、培養(yǎng)48h時(shí)的效果較好，活菌率分別達(dá)到33.9％和28.2％。脫脂奶粉對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii同樣具有較好的保護(hù)作用，在5％脫脂奶粉的保護(hù)下，培養(yǎng)48h時(shí)酵母菌凍干后的存活率達(dá)到80％。
酵母菌C.laurentii的不同生長(zhǎng)階段受到保護(hù)劑的濃度效應(yīng)影響很大。培養(yǎng)24h時(shí)，增加葡萄糖和蔗糖濃度均能顯著提高C.laurentii的存活率，而海藻糖濃度從5％提高到10％時(shí)C.laurentii的活菌數(shù)反而顯著降低。酵母菌培養(yǎng)48h后，除葡萄糖外，增加保護(hù)劑濃度均顯著降低酵母拮抗菌C.laurentii的冷凍干燥效果。
同樣，酵母拮抗菌C.laurentii的不同生長(zhǎng)階段對(duì)其冷凍干燥效果的影響也因保護(hù)劑的種類(lèi)和濃度不同而有明顯差異。以谷氨酸鈉和脫脂奶粉為保護(hù)劑時(shí)，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間均能顯著提高C.laurentii的存活率，而且不同濃度的保護(hù)劑均是如此。而以葡萄糖和海藻糖為保護(hù)劑時(shí)，酵母拮抗菌C.laurentii的存活率均隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而顯著降低。
實(shí)施例3、不同保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii的冷凍干燥制品耐貯性的影響實(shí)施例2獲得的酵母拮抗菌C.laurentii冷凍干制品在0℃下貯藏3個(gè)月后，各處理的拮抗菌C.laurentii冷凍干燥樣品的存活率都大幅度下降(圖2)。在酵母拮抗菌C.laurentii培養(yǎng)時(shí)間為24h時(shí)，3個(gè)月后所有處理的凍干制品存活率都降至3％以下。酵母菌培養(yǎng)48h時(shí)，除了乳糖、海藻糖和乙酸鈉三種保護(hù)劑的不同濃度凍干制品活菌率均低于1％外，其它保護(hù)劑在濃度為5％時(shí)，存活率為8-19％之間，而保護(hù)劑濃度為10％時(shí)，存活率則降至0.8-6.7％之間。
實(shí)施例4、不同保護(hù)劑對(duì)酵母拮抗菌C.laurentii冷凍干制品細(xì)胞膜完整性與活性氧的影響用活細(xì)胞熒光標(biāo)記法測(cè)定實(shí)施例2獲得的酵母拮抗菌C.laurentii冷凍干制品的細(xì)胞膜完整性與活性氧產(chǎn)生。結(jié)果如圖3所示Bright Field(明場(chǎng))為所有細(xì)胞總數(shù)，PI標(biāo)記的細(xì)胞為紅色(膜系統(tǒng)破壞)，H2DCFDA標(biāo)記的細(xì)胞呈綠色(產(chǎn)生ROS)，雙染料(Integrated，用PI，H2DCFDA共同標(biāo)記)標(biāo)記的細(xì)胞為黃色(正在死亡)。A脫脂奶粉(5％)，48h；B脫脂奶粉(10％)，48h；C脫脂奶粉(5％)，24h；D無(wú)菌水。Bar，20μm。)，表明在0℃下貯藏3個(gè)月后，對(duì)培養(yǎng)48 h的C.laurentii而言，以5％脫脂奶粉為保護(hù)劑的凍干樣品中大多數(shù)酵母菌的細(xì)胞膜保持完整，提高脫脂奶粉濃度(10％)則能促進(jìn)酵母菌細(xì)胞膜的破壞，但兩種處理中均有部分細(xì)胞能夠產(chǎn)生ROS(圖3A，B)?？s短酵母菌培養(yǎng)時(shí)間(24h)同樣能提高C.laurentii中PI(+)的細(xì)胞比例，凍干制品于0℃貯藏3個(gè)月后幾乎所有細(xì)胞均被PI染色，而無(wú)法檢測(cè)到產(chǎn)生ROS的細(xì)胞(圖3C)，這與不加保護(hù)劑的處理相差不大(圖3D)。不同處理之間的這些差異與利用平板稀釋法得到的結(jié)果基本一致。
權(quán)利要求
1.一種酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品，是收集經(jīng)培養(yǎng)24-48h的酵母拮抗菌C.laurentii的菌體，將其用保護(hù)劑制成濃度為5×108-5×109個(gè)細(xì)胞/mL的菌懸液，孵育1-2h，再進(jìn)行真空冷凍干燥后得到的產(chǎn)品；所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分含量為5-10％的葡萄糖、蔗糖、醋酸鈉、脫脂奶粉或谷氨酸鈉水溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品，其特征在于所述酵母拮抗菌C.laurentii的培養(yǎng)條件為；按2％的接種濃度將酵母拮抗菌C.laurentii接種于專(zhuān)用培養(yǎng)基中，在25℃，200rpm下振蕩培養(yǎng)；所述專(zhuān)用培養(yǎng)基的配方為檸檬酸40，大豆蛋白胨15，硫酸鎂1.23，氯化鈣0.56，單位gL-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品，其特征在于所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分含量為5％的脫脂奶粉水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品，其特征在于所述菌懸液的濃度為5×108個(gè)細(xì)胞/mL，孵育時(shí)間為2h。
5.一種權(quán)利要求1所述的酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品的制備方法，是收集經(jīng)培養(yǎng)24-48h的酵母拮抗菌C.laurentii的菌體，將其用保護(hù)劑制成濃度為5×108-5×109個(gè)細(xì)胞/mL的菌懸液，孵育1-2h，再進(jìn)行真空冷凍干燥后得到酵母拮抗菌C.laurentii的真空冷凍干燥制品；所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分含量為5-10％的葡萄糖、蔗糖、醋酸鈉、脫脂奶粉或谷氨酸鈉水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述酵母拮抗菌C.laurentii的培養(yǎng)條件為；按2％的接種濃度將酵母拮抗菌C.laurentii接種于專(zhuān)用培養(yǎng)基中，在25℃，200rpm下振蕩培養(yǎng)；所述專(zhuān)用培養(yǎng)基的配方為檸檬酸40，大豆蛋白胨15，硫酸鎂1.23，氯化鈣0.56，單位gL-1。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于所述保護(hù)劑為質(zhì)量百分含量為5％的脫脂奶粉水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于所述菌懸液的濃度為5×108個(gè)細(xì)胞/mL，孵育時(shí)間為2h。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于所述真空冷凍干燥條件為干燥溫度-45℃，真空度0.54mPa，干燥時(shí)間24h。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了酵母拮抗菌C.laurentii的一種真空冷凍干燥制品及其制備方法。該真空冷凍干燥制品，是收集經(jīng)培養(yǎng)24－48h的酵母拮抗菌C.laurentii的菌體，將其用保護(hù)劑制成濃度為5×10
文檔編號(hào)C12N1/16GK1733898SQ20051009006
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月11日
發(fā)明者田世平, 王友升, 徐勇 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院植物研究所