專利名稱：人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的大規(guī)模培養(yǎng)新工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于干細(xì)胞基因工程，基因治療和動物細(xì)胞發(fā)酵培養(yǎng)工程三大領(lǐng)域范疇。具體涉及GMP條件下人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的大規(guī)模培養(yǎng)新工藝。
背景技術(shù)：
進(jìn)入新的世紀(jì)，生命科學(xué)的迅猛發(fā)展和相關(guān)學(xué)科的交叉滲透，干細(xì)胞的研究與應(yīng)用成為其中最令人矚目的領(lǐng)域之一。“干細(xì)胞研究的新發(fā)現(xiàn)”在美國《科學(xué)》雜志公布的1999年十大科學(xué)成果中名列榜首，2000年再度入選世界十大科學(xué)成果。在20世紀(jì)90年代后期生命科學(xué)的綜合發(fā)展，使干細(xì)胞研究和應(yīng)用領(lǐng)域得以不斷拓寬和深入，特別是分離和體外培養(yǎng)各種不同來源干細(xì)胞的技術(shù)日益成熟，而且研究不斷取得突破性進(jìn)展。至今，干細(xì)胞生物學(xué)研究幾乎涉及所有生命科學(xué)和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。隨著基因治療這一學(xué)科的快速發(fā)展，干細(xì)胞臨床應(yīng)用與基因治療方法的快速和有機(jī)結(jié)合，這必將為人類遺傳性和獲得性疾病的治療帶來新的希望。干細(xì)胞可分為許多種，根據(jù)胚胎學(xué)的發(fā)育來源不同其發(fā)育與分化潛能也不相同。本發(fā)明利用人類異體骨髓和胎盤，臍血間質(zhì)干細(xì)胞作于基因治療的靶載體，采用基因?qū)敕椒?，將外源目的DNA(治療基因)質(zhì)粒DNA、RNA分子或病毒載體和非病毒載體重組的治療基因，轉(zhuǎn)導(dǎo)入間質(zhì)干細(xì)胞，采用發(fā)酵罐無血清或低血清懸浮培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)過大規(guī)模的放大培養(yǎng)，從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)跨越到工業(yè)化培養(yǎng)，使干細(xì)胞作為靶細(xì)胞應(yīng)用到基因治療產(chǎn)業(yè)中成為現(xiàn)實(shí)。本發(fā)明是由于干細(xì)胞基因工程，基因治療，發(fā)酵工程的三門先鋒學(xué)科的緊密結(jié)合，共同推動人異體間質(zhì)干細(xì)胞基因工程和基因治療學(xué)科的向產(chǎn)業(yè)化方向前進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明選擇人異體間質(zhì)干細(xì)胞作于基因治療的靶細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)載體，是由于間質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特征決定。間質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是中胚層來源的具有多向分化能力的干細(xì)胞，主要存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，在骨髓組織中含量最豐富，胎兒臍血，胎盤中也可以分離得到。間質(zhì)干細(xì)胞具有向骨髓、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌腱細(xì)胞、肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和造血支持間質(zhì)細(xì)胞等分化的能力，與所有干細(xì)胞一樣，骨髓間質(zhì)干細(xì)胞也有自我更新能力和多向分化潛能。它雖然僅占骨髓單核細(xì)胞的0.001％-0.01％，但是卻有驚人的增殖能力和具有強(qiáng)大的自我更新能力。間質(zhì)干細(xì)胞除上述生物學(xué)特征支持它作為基因治療的靶細(xì)胞。還有以下的特點(diǎn)和優(yōu)勢1.能在體外大批量擴(kuò)增培養(yǎng)，傳代至40-50代或擴(kuò)增109以上仍保持不分化的特性和不丟失其多向分化潛能；2.外源基因易于植入并整合到間質(zhì)干細(xì)胞的基因組中穩(wěn)定表達(dá)而不影響其干細(xì)胞特性；3.外源基因的表達(dá)具有組織特異體，受所定位微環(huán)境的作用；4.間質(zhì)干細(xì)胞是未分化的原始細(xì)胞，不表達(dá)成熟的細(xì)胞抗原，異體注射入體內(nèi)免疫源性很弱，不發(fā)生異體排斥反應(yīng)；5.間質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新能力，治療基因?qū)腴g質(zhì)干細(xì)胞后如果能長期表達(dá)，病人可終生受益；6.間質(zhì)干細(xì)胞具有向各系分化的能力，只要少數(shù)間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染目的基因后，由其分化而成的細(xì)胞便可隨著血液循環(huán)分布到全身各部位，利于其攜帶的外源治療基因能更大限度地發(fā)揮治療作用，7.間質(zhì)干細(xì)胞無論在骨髓內(nèi)還是在循環(huán)或組織中，治療基因表達(dá)產(chǎn)物都能通過血液循環(huán)而達(dá)到靶器官，也能通過血腦屏障進(jìn)入腦循環(huán)。除上述這些優(yōu)勢和特點(diǎn)，再與其多向分化潛能相結(jié)合，及易受機(jī)體損傷或病患部位誘發(fā)信號召喚，到達(dá)誘發(fā)信號部位等特性，為人類多種難以治愈的疾病的基因治療帶來新希望。
本發(fā)明公開了人異體間質(zhì)干細(xì)胞作為基因治療的靶細(xì)胞，其攜帶的治療基因的轉(zhuǎn)染方式可分為質(zhì)粒DNA、RNA分子、病毒載體(如腺病毒AV，腺相關(guān)病毒AAV或其它病毒載體)和非病毒載體。本發(fā)明著重闡述了與AAV載體轉(zhuǎn)染的優(yōu)勢。腺相關(guān)病毒(Adeno-Associated Virus，AAV)是一種小的無色膜單鏈DNA缺陷型病毒，兩端由含有145個(gè)核苷酸的反向末端重復(fù)(Inverted Terminal Repeats，ITR)序列界定，內(nèi)部含有3個(gè)啟動子和2個(gè)結(jié)構(gòu)基因Rep和Cap，Rep編碼4種病毒復(fù)制和在19號染色體上位點(diǎn)特異性整合所需的蛋白，Cap則編碼3種組成病毒色殼的結(jié)構(gòu)蛋白。AAV是依賴性病毒，需要其它病毒如腺病毒或單純皰癥病毒，或輔助因素提供輔助功能才能在宿主細(xì)胞中復(fù)制、包裝，產(chǎn)生新的病毒顆粒。在沒有輔助病毒存在時(shí)，AAV感染后其基因組將整合到細(xì)胞染色體中成為潛伏狀態(tài)，而不產(chǎn)生子代病毒。AAV被認(rèn)為是基因治療最理想的載體。AAV宿主范圍廣，幾乎可以感染所有被測的培養(yǎng)細(xì)胞，80％以上的人均有抗AAV抗體血清陽性，但其感染無任何致病性。實(shí)驗(yàn)研究表明，在很多組織細(xì)胞中，無論分裂還是靜息，都能成功地觀察到rAAV的轉(zhuǎn)染，整合以及隨后的表達(dá)。早期研究表明，利用原始細(xì)胞，包括骨髓和臍帶血的造血祖細(xì)胞也能獲得相似的結(jié)果，培養(yǎng)14-21天后，這些細(xì)胞表現(xiàn)出高水平的轉(zhuǎn)基因表達(dá)，表明rAAV載體適用于以造血干細(xì)胞為靶細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染。近年來，有多家實(shí)驗(yàn)室證明，用質(zhì)粒DNA或病毒載體能有效轉(zhuǎn)染間質(zhì)干細(xì)胞，且能在動物實(shí)驗(yàn)中觀察到有效的目的基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄，比常規(guī)的質(zhì)粒DNA和病毒載體攜帶的基因治療方法更有效，表達(dá)率更高，分布更廣泛。
本發(fā)明中闡述的治療基因其覆蓋范圍是所有治療作用的基因。該生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品是腫瘤的基因治療藥物和其它心血管系統(tǒng)疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，內(nèi)分泌疾病，自身免疫性疾病等基因治療藥物。
本發(fā)明中的大規(guī)模培養(yǎng)的新工藝，采用發(fā)酵罐懸浮無血清或低血清培養(yǎng)的工藝。工藝的創(chuàng)新是起用了發(fā)酵罐的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)。隨著發(fā)酵工程技術(shù)更新，動物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)工藝已有很大發(fā)展，特別是發(fā)酵罐的懸浮及大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)日益完善。對于懸浮生長的細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)酵設(shè)備經(jīng)過適當(dāng)?shù)母脑毂憧蛇m用，經(jīng)改造的發(fā)酵罐能節(jié)省空間，內(nèi)部條件均一，而且能嚴(yán)格控制，細(xì)胞放大培養(yǎng)方式相對簡單，細(xì)胞生長的各種參數(shù)和條件都可以由計(jì)算機(jī)程控的自動瞬間監(jiān)控系統(tǒng)顯示，細(xì)胞在培養(yǎng)過程中可隨時(shí)改變和補(bǔ)充培養(yǎng)介質(zhì)，如氧，二氧化碳，pH值，濕度，滲透壓，氣相，葡萄糖濃度，氨濃度等，維持細(xì)胞良好的生長環(huán)境。
本發(fā)明所用的發(fā)酵罐基本上符合和滿足間質(zhì)干細(xì)胞的生長培養(yǎng)，以下是反應(yīng)器滿足和適合間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)生長的基本條件和注意事項(xiàng)
1.細(xì)胞生長過程中的各種參數(shù)能自動由計(jì)算機(jī)程控連續(xù)監(jiān)控顯示。
2.發(fā)酵罐具有彎曲或圓形的底部，在低旋轉(zhuǎn)速度下(100-350r/min)提高體系的混合效率。
3.用水循環(huán)的方式控制體系的溫度控制系統(tǒng)，避免用浸入式加熱器以防止局部產(chǎn)生高溫而損傷細(xì)胞。
4.發(fā)酵罐內(nèi)容器的內(nèi)部高度平滑，避免使用一些鋒利的突起物，減少機(jī)械對細(xì)胞的損傷。
5.罐體的高度與直徑的比例為2∶1到1.5∶1之間。
6.間質(zhì)干細(xì)胞的壁比較脆薄，選擇合適的葉輪以避免攪拌時(shí)葉輪切力過大、過尖銳，對細(xì)胞產(chǎn)生破損。
本發(fā)明的間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)工藝與其它動物細(xì)胞略有不同，但培養(yǎng)過程中的一些注意事項(xiàng)與常規(guī)的動物細(xì)胞培養(yǎng)基本相似。接種的間質(zhì)干細(xì)胞種子工作庫細(xì)胞是處于對數(shù)生長狀態(tài)，生長旺盛。在接種細(xì)胞前，罐內(nèi)的培養(yǎng)基預(yù)先加熱到37℃，培養(yǎng)基的pH用二氧化碳預(yù)先平衡，細(xì)胞的接種密度要大于1.5×105。細(xì)胞培養(yǎng)過程中攪拌速度在100-300r/min的范圍內(nèi)。如果罐內(nèi)細(xì)胞無成團(tuán)或貼壁，可以降低攪拌速度，攪拌速度的基本原則是保持培養(yǎng)細(xì)胞處于均勻的懸浮狀態(tài)即可。培養(yǎng)過程中，至少每天取樣一次，檢測細(xì)胞的生長情況和計(jì)數(shù)細(xì)胞密度。細(xì)胞長到要求的密度時(shí)，加入治療基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染。此時(shí)的攪拌速度要嚴(yán)格控制，加入治療基因時(shí)作輕微的攪拌，然后間隔每小時(shí)輕微攪拌數(shù)次，直到6小時(shí)或過夜(當(dāng)載體是腺相關(guān)病毒時(shí))。本發(fā)明用rAAV載體作轉(zhuǎn)染。因此，當(dāng)rAAV與間質(zhì)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)染過程中，應(yīng)充分讓rAAV進(jìn)入細(xì)胞，使轉(zhuǎn)染率達(dá)到80％以上，及時(shí)地收集細(xì)胞，進(jìn)行純化。如果用質(zhì)粒DNA或RNA分子作轉(zhuǎn)染，應(yīng)充分讓間質(zhì)干細(xì)胞與質(zhì)粒DNA或RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染，在時(shí)間上可以延長，轉(zhuǎn)染率達(dá)到40％以上，就可收集細(xì)胞，進(jìn)行純化。
本發(fā)明將干細(xì)胞基因工程，人類疾病的基因治療方法，動物細(xì)胞發(fā)酵工程結(jié)合成一體，使這生命科學(xué)中的三門前沿科學(xué)成為有生力量，為攻克人類遺傳性疾病和后天獲得的一些難治疾病(包括癌癥，心腦血管疾病，HIV和其它疾病等)做出貢獻(xiàn)。
圖面說明

圖1是生產(chǎn)工藝示意圖。
權(quán)利要求
1.人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因的種子細(xì)胞)在GMP條件下大規(guī)模培養(yǎng)新工藝，其創(chuàng)新性包括以下幾個(gè)重要生產(chǎn)工藝的改進(jìn)和創(chuàng)新發(fā)酵罐懸浮培養(yǎng)技術(shù)；無血清培養(yǎng)工藝；治療基因的轉(zhuǎn)染技術(shù)(質(zhì)粒DNA、RNA分子、病毒載體和非病毒載體)；攜帶治療基因的間質(zhì)干細(xì)胞的大量富集。具體生產(chǎn)工藝步驟如下(1).人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)種子的來源和建立取自引產(chǎn)胎兒的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(選擇前應(yīng)對抽取者母體做安全性要求的檢測如HIV，乙肝，丙肝，梅毒，衣支原體，遺傳病，以及詳細(xì)地采集病史，排除不健康的諸多因素，證明鍵康和安全的引產(chǎn)兒)或胎盤，臍血，成體骨髓間質(zhì)干細(xì)胞。攜帶治療基因的種子人異體間質(zhì)干細(xì)胞的建立，分兩步進(jìn)行從原代細(xì)胞開始轉(zhuǎn)染治療基因，取已轉(zhuǎn)染治療基因的細(xì)胞作種子細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)至5-8代左右細(xì)胞(細(xì)胞傳代培養(yǎng)中觀察到，第10代的細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)，細(xì)胞繁殖最旺盛)，達(dá)到生產(chǎn)量后，收集細(xì)胞；從原代細(xì)胞開始傳代培養(yǎng)(不轉(zhuǎn)染治療基因)，傳代培養(yǎng)至5-8代左右細(xì)胞分別存入種子工作庫，備作大規(guī)模生產(chǎn)培養(yǎng)的工作種子。(2).人異體間質(zhì)干細(xì)胞的放大(生產(chǎn)化)培養(yǎng)用50L的特殊專用發(fā)酵罐，將人異體間質(zhì)干細(xì)胞工作細(xì)胞庫中的種子細(xì)胞復(fù)蘇、傳代，按25L的發(fā)酵培養(yǎng)用量，接種1.5×105/mL的接種量，接種人異體間質(zhì)干細(xì)胞入罐，接種前先預(yù)熱發(fā)酵罐至37℃，用CO2校正和平衡培養(yǎng)基pH值。按間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)生長條件，采用無血清或血清的培養(yǎng)介質(zhì)，進(jìn)行間質(zhì)干細(xì)胞發(fā)酵罐懸浮培養(yǎng)方法進(jìn)行生產(chǎn)化擴(kuò)增培養(yǎng)，為保持間質(zhì)干細(xì)胞不分化，培養(yǎng)基中絕不能加入有促進(jìn)間質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的細(xì)胞因子和細(xì)胞生長因子，只能加入使細(xì)胞保持在未分化狀態(tài)增殖的細(xì)胞因子和細(xì)胞生長因子。發(fā)酵罐培養(yǎng)過程中的各項(xiàng)間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)生長條件的參數(shù)，由發(fā)酵罐的計(jì)算機(jī)程控自控檢測。培養(yǎng)過程中程控所顯示的培養(yǎng)參數(shù)變化，應(yīng)立即予以補(bǔ)充(特別是細(xì)胞培養(yǎng)生長過程中對介質(zhì)的要求和代謝產(chǎn)物清除)必須及時(shí)給予滿足，使罐內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)在最佳狀況。細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)過程中，攪拌的速度約100-300r/min，不得大于350r/min，葉輪的切片應(yīng)光滑，不能有鋒尖的棱角在攪拌時(shí)損傷細(xì)胞。攪拌的目的是保持細(xì)胞均勻呈懸浮狀態(tài)生長，保持罐內(nèi)立面的細(xì)胞均能得到所需的代謝物(如氧，氨基酸，糖原，核酸等)和排除代謝的廢物，使細(xì)胞保持三維空間最佳生長狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞增殖至罐內(nèi)有效培養(yǎng)面積的80％時(shí)，進(jìn)行下階段治療基因的轉(zhuǎn)染過程。(3).人間質(zhì)干細(xì)胞與治療基因載體共轉(zhuǎn)染培養(yǎng)人間質(zhì)干細(xì)胞作于載體的靶細(xì)胞在發(fā)酵罐中大量擴(kuò)增培養(yǎng)，至罐內(nèi)培養(yǎng)密度的80％左右，將目的基因(質(zhì)粒DNA、RNA分子、病毒載體和非病毒載體)加入發(fā)酵罐中進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，如果是轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA或RNA分子，技術(shù)相對簡單，(轉(zhuǎn)染時(shí)加氯化鈣其它物質(zhì)以增加細(xì)胞膜的通透性，使細(xì)胞膜空隙增大，易于吸入質(zhì)粒DNA到細(xì)胞內(nèi))，但轉(zhuǎn)染率不高。用病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染的過程比較復(fù)雜，特別是本發(fā)明著重推薦的腺相關(guān)病毒載體(rAAV)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。值得一提的是間質(zhì)干細(xì)胞在發(fā)酵罐中培養(yǎng)的基本條件，應(yīng)盡量提供與體內(nèi)生活條件相接近的培養(yǎng)環(huán)境，培養(yǎng)環(huán)境至少包括以下幾個(gè)因素所有與細(xì)胞接觸的設(shè)備，器材，溶液等，其中包括種子庫細(xì)胞培養(yǎng)和放大培養(yǎng)及生產(chǎn)過程，都必須保持絕對無菌，避免細(xì)胞受微生物的污染；必須要有充足的營養(yǎng)供應(yīng)，絕對不能含有有害物質(zhì)，甚至極微量有害離子；保證有適量的氧氣供應(yīng)；及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)；有良好的適于細(xì)胞生存的外界環(huán)境，包括滲透壓，離子密度，氨基酸濃度，氧分壓，二氧化碳分壓，葡萄糖濃度，pH值，氨濃度等，以及保持合適的細(xì)胞密度。(4).人間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的收集間質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)目的基因(質(zhì)粒DNA、RNA分子、病毒載體或非病毒載體)轉(zhuǎn)染后，利用反應(yīng)器(發(fā)酵罐)的濾膜排放系統(tǒng)將培養(yǎng)混合液濾放掉，排放去占發(fā)酵罐總體積約90％的培養(yǎng)液，留下大約5L的細(xì)胞混合液，在洗脫液的洗脫下，將細(xì)胞和洗脫液一起經(jīng)過離心或過濾，收集沉淀的細(xì)胞層；等測試細(xì)胞凍存制品的安全性和細(xì)胞生物活性后，分別罐裝入西林瓶中，貼上標(biāo)簽，再存入液氮中保存，分裝時(shí)的細(xì)胞(攜帶治療基因)加入適量的冰凍保護(hù)液以保證細(xì)胞在冰凍中不易破壞，保持細(xì)胞的生物活性。在銷售到臨床使用整個(gè)過程也應(yīng)做到液氮低溫運(yùn)送條件，使產(chǎn)品在臨床使用時(shí)，始終保持最佳的生物活性。
2.如權(quán)利要求所述的人異體間質(zhì)干細(xì)胞是取自人體骨髓間質(zhì)干細(xì)胞和胎盤，臍血間質(zhì)干細(xì)胞，最佳的來源是引產(chǎn)兒的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求所述的人異體間質(zhì)干細(xì)胞可以是如下幾種轉(zhuǎn)染方式質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人異體間質(zhì)干細(xì)胞(質(zhì)粒DNA、RNA分子)；腺病毒(攜帶治療基因)載體與間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染；腺相關(guān)病毒(攜帶治療基因)載體與人異體間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染；或其它病毒和非病毒載體(攜帶治療基因)與人異體間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
4.權(quán)利要求所述人異體間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)工藝之一是發(fā)酵罐中的懸浮培養(yǎng)方法。
5.權(quán)利要求所述人異體間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)工藝之二是無血清培養(yǎng)方法。
6.權(quán)利要求所述人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)所攜帶的治療基因的治療范圍包括癌癥，艾滋病，血液系統(tǒng)疾病，心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，內(nèi)分泌疾病，自身免疫性疾病，遺傳性疾病，以及與基因突變后產(chǎn)生的疾病。治療基因是人類同源基因，如質(zhì)粒DNA和RNA分子或合成的寡核苷酸，簡略地說是覆蓋所有用來做基因治療的治療基因。
7.權(quán)利要求人間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法的受試者為人。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人異體間質(zhì)干細(xì)胞被用于基因治療載體的商業(yè)化培養(yǎng)工藝，解決了人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)從實(shí)驗(yàn)室制備到工業(yè)化生產(chǎn)過程中的一系列難題，特別是采用發(fā)酵罐和轉(zhuǎn)瓶的生產(chǎn)工藝，使產(chǎn)量得到大幅提升，降低了生產(chǎn)成本，滿足了臨床商業(yè)化的要求；其次，是采用無血清生產(chǎn)工藝，克服和杜絕了動物血清對產(chǎn)品的污染問題。本發(fā)明的生產(chǎn)工藝過程包括人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因的種子細(xì)胞)的生產(chǎn)培養(yǎng)；治療基因的轉(zhuǎn)染和導(dǎo)入(質(zhì)粒DNA、RNA分子、病毒載體如AV、AAV等以及非病毒載體)；細(xì)胞的收集和純化；安全性和生物活性檢測后包裝儲存。該生產(chǎn)工藝具有可控性和可操作性，保證了間質(zhì)干細(xì)胞的生物活性，有很高的生產(chǎn)效益。
文檔編號C12N5/10GK1872997SQ20051002634
公開日2006年12月6日 申請日期2005年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月1日
發(fā)明者張?jiān)聘? 裘建英, 董西銀 申請人:上海二醫(yī)新生基因科技有限公司