專利名稱：：涂覆微噴射體的穩(wěn)定dna組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及阻止核酸降解的方法和組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及涂覆透皮釋放此類核酸的《敬噴射體(microprojections)的方法和組合物。
背景技術(shù)：
：最通常通過口服或注射給予活性劑(或藥物)。遺憾的是，當(dāng)口服時(shí)，許多活性劑完全無效或療效大幅降低，因?yàn)樗鼈冊谶M(jìn)入血流前沒有被吸收或受到不利影響，因而不具有需要的活性。在另一方面，直接將藥物注射到血流中，雖然可保證給藥期間不發(fā)生變化，但它是困難、不方便、痛苦和不舒適的過程，它有時(shí)導(dǎo)致患者依從性差。作為備選方式，透皮釋藥"^是供無需通過皮下注射、靜脈輸注或口服給予生物活性藥物的方法。與口服釋藥相比，透皮釋藥避免了消化道的苛刻環(huán)境，繞過胃腸藥物^a謝，減少首過效應(yīng)，避免由消化酶和肝酶造成的可能的失活。相反，消化道在透皮給藥期間不與生物活性藥物接觸。許多藥物，例如阿司匹林確實(shí)對消化道有副作用。本文中使用的通用術(shù)語"透皮"是指藥物穿過皮膚層。詞"透皮"是指通過局部組織或全身循環(huán)系統(tǒng)的皮膚釋放藥物(例如核酸或其它治療藥物)，而基本上不切開或刺穿皮膚，例如用手術(shù)刀切開或用皮下注射針刺穿皮膚。最外面皮膚層由脂雙層包圍的平坦、充滿角蛋白纖維(即角質(zhì)細(xì)胞)的死細(xì)胞形成。脂雙層的高度條理結(jié)構(gòu)給角質(zhì)層提供相對不滲透的特性。因此，透皮釋藥系統(tǒng)面臨的最主要的問題之一是通過皮膚部分轉(zhuǎn)運(yùn)藥物。透皮釋放藥物包括通過被動(dòng)擴(kuò)散和通過包括電(例如離子電滲療法)和超聲(例如超聲導(dǎo)入法)的外界能源的釋放。雖然藥物確實(shí)穿過角質(zhì)層和表皮擴(kuò)散，但由于上述原因，通過角質(zhì)層擴(kuò)散的速率時(shí)常為限速步驟。為達(dá)到治療劑量，許多化合物需要比可通過簡單被動(dòng)透皮擴(kuò)散達(dá)到的釋藥速率更高的釋藥速率。增加被動(dòng)透皮擴(kuò)散藥物通量的一個(gè)普通方法涉及用皮膚滲透促進(jìn)劑預(yù)處理皮膚或與皮膚滲透促進(jìn)劑共釋放。當(dāng)滲透促進(jìn)劑施用于釋放藥物的體表面時(shí)，滲透促進(jìn)劑促進(jìn)通過其中的藥物通量。但是，這些促進(jìn)透皮藥物通量的方法的效果有限，尤其對于大分子。主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)用外界能源幫助藥物通量穿過角質(zhì)層。這種促進(jìn)透皮釋藥方法的一種稱為"電轉(zhuǎn)運(yùn)"。該機(jī)理是利用電位，電位導(dǎo)致用電流幫助藥物通過體表，例如皮膚轉(zhuǎn)運(yùn)。其它主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)使用超聲(超聲導(dǎo)入法)和熱能作為外界能源。還已開發(fā)出許多技術(shù)和系統(tǒng)，它們機(jī)械滲透或破壞最外面皮膚層，從而開辟出進(jìn)入皮膚的通路，以便提高透皮釋放的藥物量。例如皮膚破皮裝置或劃痕器，它們通常提供用于擦傷皮膚或在施用部位制備小切口的許多齒或針。例如如美國專利號5,487,726中公開的疫苗在皮膚上局部使用，或如美國專利號4,453，926、4,109,655和3,136,314公開的以潤濕液體應(yīng)用于劃痕器的齒上。已建議劃痕器用于透皮釋放疫苗，部分原因是只需極少量疫苗釋放進(jìn)入皮膚即能有效使患者免疫。另外，釋放的疫苗量不是特別重要，因?yàn)檫^量也能達(dá)到符合要求的免疫。與使用劃痕器釋放活性藥物有關(guān)的主要缺點(diǎn)是難以測定透皮藥物通量和所得釋放劑量。另外由于偏轉(zhuǎn)和抵抗刺入的皮膚彈性、變形和回彈特性，在滲透皮膚時(shí)，微小刺入元件通常不能均勻地滲透皮膚和/或擦除藥物的液體涂層。使用微小皮膚刺入元件促進(jìn)透皮藥物釋放的其它裝置在歐洲專利EP0407063Al、授予Godshall等的美國專利號5879326、授予Ganderton等的美國專利號3814097、授予Gross等的美國專利號5279544、授予Lee等的美國專利號5250023、授予Gerstel等的美國專利號3964482、重新授予Kravitz等的美國專利號25637和PCT公布號WO96/37155、WO96/37256、WO96/17648、WO97/03718、WO98/11937、WO98/00193、WO97/48440、WO97/48441、WO97/48442、WO98/00193、WO99/64580、WO98/28037、WO98/29298和WO98/29365中公開；它們通過引用整體結(jié)合到本文中。這些裝置使用各種形狀和大小的刺入元件刺穿皮膚的最外層(即角質(zhì)層)。在這些參考文獻(xiàn)中公開的刺入元件通常由細(xì)、平元件，例如墊或片垂直沿皮膚展開。在某些此類裝置中的刺入元件極其微小，有些的尺寸(即微片長度和寬度)僅約25-400jum,微片厚度僅約5-50pm。這些微小刺入/切割元件在角質(zhì)層制備相應(yīng)的小微裂隙/微切口，用于促進(jìn)透皮藥物釋放透過。公開的系統(tǒng)一般包括保存藥物的儲(chǔ)庫和例如通過裝置本身的中空齒從儲(chǔ)庫通過角質(zhì)層轉(zhuǎn)運(yùn)藥物的釋藥系統(tǒng)?；蛘撸蓪⒑钚运幬锏闹苿┩扛苍谖娚潴w上。這種方法已在美國專利申請?zhí)?002/0132054、2002/0193729、2002/0177839、2002/0128599和10/045,842中公布，它們通過引用整體結(jié)合到本文中。該方法消除了單獨(dú)物理儲(chǔ)庫的必要性，而特別為儲(chǔ)庫開發(fā)出藥物制劑或組合物。因此，用微噴射裝置透皮釋放涂覆在微噴射體上的藥物提供多種益處。因此，本發(fā)明的目的是提供促使透皮釋放生物活性藥物的方法和纟且合物。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供用于改善核酸透皮釋放的涂層。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供降解降低的核酸制劑。類似地，本發(fā)明的目的是通過制備固體涂層的穩(wěn)定制劑阻止核酸降解。發(fā)明概述根據(jù)以上目的和以下將會(huì)提及和顯而易見的那些目的，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及含有施用于固體基體的穩(wěn)定劑和核酸千燥制劑的固體涂層，其中穩(wěn)定劑阻止千核酸的降解。優(yōu)選，固體基體包含微噴射元件。還優(yōu)選固體涂層的厚度在約l-50(im的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑選自非還原糖、多糖和還原糖。在含有非還原糖的實(shí)施方案中，優(yōu)選穩(wěn)定劑選自蔗糖、海藻糖、水蘇糖和棉子糖。在含有多糖的實(shí)施方案中，優(yōu)選穩(wěn)定劑選自右旋糖酐、可溶性淀粉、糊精和菊粉。在含有還原糖的實(shí)施方案中，優(yōu)選穩(wěn)定劑選自芽菜糖、阿拉伯糖、來蘇糖、核糖、木糖、洋地黃毒糖、巖藻糖、槲皮醇、異鼠李糖、鼠李糖、阿洛糖、阿卓糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、金鏤梅糖、艾杜糖、甘露糖、塔格糖、櫻草糖、莢豆二糖、蕓香糖、綿棗兒二糖、纖維二糖、龍膽二糖、乳糖、乳果糖、麥芽糖、蜜二糖、槐糖和松二糖。在本發(fā)明的另一方面，核酸選自雙鏈DNA、單鏈DNA和RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，優(yōu)選的核酸是質(zhì)粒DNA。本發(fā)明目前優(yōu)選的固體涂層實(shí)施方案包括含約10%-80%總干重穩(wěn)定劑，更優(yōu)選約20%-80%總干重。另外，本發(fā)明固體涂層還可含最高達(dá)10%總干重的一種或多種表面活性劑。優(yōu)選，表面活性劑選自吐溫20、吐溫80和十二烷基硫酸鈉。或者，或與表面活性劑組合，制劑還可含有約0.5%-20%總干重的緩沖劑。優(yōu)選此類緩沖劑選自磷酸、檸檬酸和TRIS。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，制劑中含有約20%-80%總千重核酸和約10%-80%總千重穩(wěn)定劑。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，核酸是DNA，制劑還含有DNA酶抑制劑，其中在用所述微噴射元件釋放所述固體涂層進(jìn)入或透過皮膚后，所述DNA酶抑制劑阻止DNA降解。優(yōu)選DNA酶抑制劑選自金精三羧酸、EDTA、EGTA、二脒二苯氧基丙烷和DMI-2。還優(yōu)選DNA酶抑制劑占制劑總干重約1%-20%。在目前優(yōu)選的實(shí)施方案中，制劑含有約20%-80%總千重核酸、約10%-80%總干重穩(wěn)定劑和約1%-20%總干重DNA酶抑制劑。在每個(gè)涉及的實(shí)施方案中，制劑中還可含有上述表面活性劑和/或緩沖劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，涂層制劑包括血管收縮藥，包括^f旦不限于阿米福林、咖啡氨醇、環(huán)噴他明、去氧腎上腺素、腎上腺素、苯賴加壓素、茚唑啉、美替唑啉、米多君、萘?xí)踹蜻惸I上腺素、奧托君、鳥氨加壓素、羥甲唑啉、去氧腎上腺素、苯乙醇胺、苯丙醇胺、丙己君、偽麻黃堿、四氳唑啉、曲馬唑啉、異庚胺、泰馬唑啉、加壓素、賽洛唑啉及其混合物。最優(yōu)選的血管收縮藥包括腎上腺素、萘?xí)踹蜻?、四氫哇啉茚哇淋、美替峻啉、曲馬峻啉、泰馬峻啉、羥曱哇啉和賽洛唑啉。如使用，優(yōu)選血管收縮藥的濃度以涂層重量計(jì)約為0.1%-10%。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，涂層制劑包括至少一種"通路開放調(diào)節(jié)劑"，它可包括但不限于滲透性藥物(如氯化鈉)、兩性離子化合物(如氨基酸)和抗炎藥物，例如倍他米松21-磷酸二鈉鹽、曲安奈德21-磷酸二鈉、鹽酸氬可他酯、氫化可的松21-磷酸二鈉鹽、曱潑尼龍21-磷酸二鈉鹽、曱潑尼龍21-琥珀酸鈉鹽、帕拉米松磷酸二鈉和潑尼松龍21-琥珀酸鈉鹽和抗凝血藥，例如4寧檬酸、檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)、右旋糖酐硫酸鈉、阿司匹林和EDTA。在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案中，涂層制劑包括至少一種可以螯合的抗氧化劑，例如檸檬酸鈉、檸檬酸、EDTA(乙二胺四乙酸)或自由基清除劑，例如抗壞血酸、蛋氨酸、抗壞血酸鈉等。目前優(yōu)選的抗氧化劑包括EDTA和蛋氨酸。本發(fā)明還涉及穩(wěn)定核酸的方法。在某些實(shí)施方案中，該方法包括將核酸與穩(wěn)定劑的制劑混合，并將制劑干涂至固體基體上，其中穩(wěn)定劑阻止核酸降解。優(yōu)選，固體基體是微噴射元件。在本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括將涂覆的微噴射元件施用于患者，以透皮釋放核酸。優(yōu)選本發(fā)明方法包括將選自非還原糖、多糖和還原糖的穩(wěn)定劑與核酸混合。還優(yōu)選本發(fā)明方法包括將選自雙鏈DNA、單鏈DNA和RNA的核酸混合。在另外的實(shí)施方案中，制劑還可包含最高達(dá)10%總干重的一種或多種選自吐溫20、吐溫80和十二烷基硫酸鈉的表面活性劑，和/或約0.5%-20%總干重緩沖劑，其中緩沖劑選自磷酸、檸檬酸和TRIS。在其中核酸是DNA的實(shí)施方案中，制劑還可包含上述DNA酶抑制劑，優(yōu)選選自金精三羧酸、EDTA、EGTA、二脒二苯氧基丙烷和DMI-2。此類制劑還可包含上述表面活性劑和/或緩沖劑。在涉及的實(shí)施方案中，優(yōu)選本發(fā)明方法包括將制劑干涂在微噴射元件上。另外，此類方法還包括將微噴射元件應(yīng)用到患者，以透皮釋放核酸，其中釋藥后，DNA酶抑制劑阻止核酸降解。附圖簡述按，通過以下和對本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案更具體描述，進(jìn)一步特征和優(yōu)勢將會(huì)顯而易見，其中如涉及的特征通常是指整個(gè)視圖的一些部分或元件，和其中圖1顯示在4X:或-20。C儲(chǔ)存l-4周后，在溶液或在干涂至玻璃或鈦微噴射陣列(S250)的超螺旋質(zhì)粒DNA百分率；圖2顯示在4!M諸存1-8周后，千涂至鈦微噴射陣列(S250)的超螺旋質(zhì)粒DNA百分率。用于涂層的制劑不含蔗糖(對照)或含指定濃度(％重量)的蔗糖；根據(jù)本發(fā)明，圖3是微噴射元件的透視圖；和根據(jù)本發(fā)明，圖4是圖3中所示的涂層沉積在微噴射體上的微噴射元件的透視圖。發(fā)明詳述在詳細(xì)描述本發(fā)明前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于具體例舉物質(zhì)、方法或結(jié)構(gòu)，因此它們當(dāng)然可改變。因此，盡管在實(shí)施本發(fā)明中可使用與本文中所述那些相似或等同的多種物質(zhì)和方法，但本文描述的是優(yōu)選的物質(zhì)和方法。還應(yīng)理解本文中所用的術(shù)語僅用于描述本發(fā)明具體的實(shí)施方案目的，并非用于限定。除另有定義外，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明有關(guān)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。另外，本文中引用的所有出版物、專利和專利申請，無論上文或下文均通過引用整體結(jié)合到本文中。最后，除另有明確規(guī)定外，在本說明書和權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式"一"和"該"包括復(fù)數(shù)指示物。因此，例如涉及的"一種活性藥物"包括兩種或多種此類藥物；涉及的"一種微噴射體"包括兩種或多種此類微噴射體等。定義本文中使用的術(shù)語"透皮"表示藥物釋放進(jìn)入和/或透過皮膚，用于局部或全身治療。本文中使用的術(shù)語"透皮通量"表示透皮釋藥的速率。本文中使用的術(shù)語"共釋放"表示在釋放藥物前，在藥物透皮流入前和期間、藥物透皮流入期間、藥物透皮流入期間和之后和/或藥物透皮流入之后，透皮給予一種或多種補(bǔ)充劑。此外，可將兩種或多種生物活性藥物配制在涂層中，導(dǎo)致生物活性藥物共釋放。本文中使用的術(shù)語"生物活性藥物"是指含核酸，例如寡核普酸和多核普酸的物質(zhì)或混合物的組合物。本文中使用的術(shù)語"核酸"包括雙鏈DNA、單鏈DNA和RNA以及質(zhì)粒DNA。應(yīng)理解可將大于一種的生物活性藥物加入本發(fā)明的藥物源和/或涂層中，使用術(shù)語"活性藥物"絕不排除使用兩種或多種此類活性藥物。本文中使用的術(shù)語"穩(wěn)定劑"是指阻止或延緩核酸降解至任何可測量程度的任何物質(zhì)。本文中使用的術(shù)語"干"當(dāng)與核酸有關(guān)時(shí)，是指基本上無液體的核酸。本文中使用的術(shù)語"阻止，，及其所有變化形式是指延緩核酸降解至任何可測量的程度。本文中使用的術(shù)語"降解"當(dāng)與核酸有關(guān)時(shí)，是指使其完整結(jié)構(gòu)的完整性受損的核酸結(jié)構(gòu)的任何改變，例如超螺旋結(jié)構(gòu)喪失。本文中使用的術(shù)語"微噴射陣列"、"微噴射元件"、"微針陣列裝置"等均指將活性藥物釋放進(jìn)入或透過皮膚的裝置，該裝置包含許多微噴射體，可將活性藥物干涂在微噴射體上。術(shù)語"微噴射體"是指適宜通過活動(dòng)物，尤其人皮膚的角質(zhì)層刺入或切割到表皮下層或表皮和真皮層的刺入元件。刺入元件刺入皮膚的深度不應(yīng)造成出血。通常，刺入元件的刀片長度小于1000jnm，優(yōu)選小于500jum。微噴射體通常的寬度為約75Mm-500/Lim,厚度為約5pm-50^im。微噴射體可制成多種形狀，例如針、空心針、刀片、釘、鉆孔器及其組合。微針陣列裝置在例如美國專利申請公布號2002/0132054中有描述，該文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。本文中使用的術(shù)語"混合"、"加入，，及其所有變化形式是指直接或間接導(dǎo)致部分或組件放置在一起，以致部分或組件^^此接近的任何方式。該術(shù)語包括例如將部分或組件一起放置在容器中，將部分或組件結(jié)合，使部分或組件接觸或?qū)⒉糠只蚪M件一起攪拌、旋轉(zhuǎn)、攪動(dòng)的動(dòng)作。術(shù)語"混合物"是指已緊密放置在一起的部分或組件。本文中使用的術(shù)語"干涂"是指任何方法，通過這些方法含一種或多種目的藥物的溶液涂在固體基體表面，和然后通過這些方法從一種或多種目的藥物的溶液中基本上除去所有液體。術(shù)語"干涂的"或"干涂"及其所有變化形式是指通過千涂方法制備獲得固體涂層。本文中使用的術(shù)語"固體"當(dāng)與涂層有關(guān)時(shí)，是指性質(zhì)上是基本上非多孔或非顆粒的涂層。固體涂層不包括性質(zhì)上是多孔的冷凍干燥組合物。固體涂層也不包括由噴霧千燥方法形成的性質(zhì)上是顆粒的顆粒形式。本文中使用的術(shù)語"固體基體"是指和包括可將核酸干涂其上的任何物質(zhì)，例如微噴射元件的;微噴射體。本文中使用的術(shù)語"釋放"、"釋藥"及其所有變化形式是指和包括任何方式，通過這些方式活性藥物可進(jìn)入或透過皮膚給藥。本文中使用的術(shù)語"厚度"當(dāng)與固體涂層有關(guān)時(shí)，是指測量的被固體涂層涂覆的固體基體上基本上所有部分的固體涂層的平均厚度。本文中使用的術(shù)語"微噴射體"是指適宜通過活動(dòng)物，尤其哺乳動(dòng)物，更尤其人皮膚的角質(zhì)層刺入或切割到表皮下層或表皮和真皮層的刺入元件。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，刺入元件的噴射長度小于1000(am。在另一個(gè)實(shí)施方案中，刺入元件的噴射長度小于500(im，更優(yōu)選小于250pm。微噴射體通常的寬度和厚度為約5-50^im。微噴射體可制成不同形狀，例如針、空心針、刀片、釘、鉆孔器及其組合。本文中使用的術(shù)語"微噴射元件"通常表示含有排成陣列的用于刺入角質(zhì)層的許多微噴射體的微噴射陣列?？赏ㄟ^在許多微噴射體薄片上蝕刻或打孔，并折疊或彎曲微噴射體薄片使其離開平面，形成例如圖3所示的結(jié)構(gòu)，從而形成微噴射元件。還可用其它已知方法，例如按美國專利號6，050，988(通過引用整體結(jié)合到本文中)中公開，通過沿每條邊緣形成具有微噴射體的一個(gè)或多個(gè)條而形成微噴射元件。本發(fā)明涉及出乎意料之外的發(fā)現(xiàn)，即可用碳水化合物，例如非還原糖、多糖和還原糖穩(wěn)定干核酸。申請人有利地發(fā)現(xiàn)可通過將核酸與一種或多種碳水化合物一起配制，來防止或明顯延緩干核酸降解。出于多種不同的原因?qū)⒑怂岣稍?，干核酸用于各種用途和方法。有時(shí)在儲(chǔ)存前將核酸干燥。在給予患者或受試者前，也可將核酸干涂在包括釋藥裝置例如微噴射元件的固體基體上。申請人根據(jù)出乎意料之外發(fā)現(xiàn)，即碳水化合物穩(wěn)定干核酸，開發(fā)出穩(wěn)定干燥形式核酸的方法和制劑。申請人的方法和組合物可用于防止或阻止干涂至包括釋藥裝置，例如微噴射元件的固體基體上的核酸降解。申請人的方法和制劑能使干涂的核酸在4'C或室溫下長時(shí)間，例如數(shù)周至幾年穩(wěn)定儲(chǔ)存。申請人還有利地發(fā)現(xiàn)可通過將核酸與一種或多種DNA酶抑制劑一起配制，來進(jìn)一步穩(wěn)定直接釋放進(jìn)入或透過皮膚的干涂核酸。直接釋放進(jìn)入或透過皮膚的棵DNA被存在于皮膚組織間隙的DNA酶迅速降解。DNA酶抑制劑防止或明顯阻止核酸降解。申請人開發(fā)出穩(wěn)定直接釋放進(jìn)入或透過皮膚或其它組織的干核酸的方法和組合物，它們涉及將干核酸與一種或多種DNA酶抑制劑一起配制，它增加細(xì)胞攝取核酸和表達(dá)一種或多種外源性目的基因的可能性。本發(fā)明的某些實(shí)施方案涉及阻止干核酸降解的方法，該方法包括將核酸與一種或多種穩(wěn)定劑混合，將混合物干涂在固體基體上。本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及包括固體涂層的組合物，它包含一種或多種穩(wěn)定劑和核酸。適用于本發(fā)明方法和組合物的核酸穩(wěn)定劑包括^談水化合物，例如非還原糖、多糖和還原糖。其它非碳水化合物核酸穩(wěn)定劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉，并可與一種或多種碳水化合物穩(wěn)定劑組合用于本發(fā)明組合物和方法的某些實(shí)施方案。用于本發(fā)明方法和組合物的適宜非還原糖包括例如蔗^f唐、海藻糖、水蘇糖或棉子糖。用于本發(fā)明方法和組合物的適宜多糖包括例如右旋糖酐、可溶性淀粉、糊精和菊粉。用于本發(fā)明方法和組合物的適宜還原糖包括例如單糖，例如芽菜糖、阿拉伯糖、來蘇糖、核糖、木糖、洋地黃毒糖、巖藻糖、槲皮醇、異鼠李糖、鼠李糖、阿洛糖、阿卓糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、金鏤梅糖、艾杜糖、甘露糖、塔格糖等；和二糖，例如櫻草糖、莢豆二糖、蕓香糖、綿棗兒二糖、纖維二糖、龍膽二糖、乳糖、乳果糖、麥芽糖、蜜二糖、槐糖和松二糖等。特別優(yōu)選的穩(wěn)定劑包括例如蔗糖。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑占組合物和固體涂層總干重約10%-80%。在某些更優(yōu)選的實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑占組合物和固體涂層總干重約20%至約75%。在還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑占組合物和固體涂層總干重約30%至約70%。根據(jù)本發(fā)明方法，可以干燥形式穩(wěn)定的核酸和本發(fā)明組合物和干涂層中包含的核酸包括單鏈和雙鏈核酸，例如單鏈和雙鏈DNA和RNA，包括例如超螺旋質(zhì)粒DNA;線性質(zhì)粒DNA;粘粒；細(xì)菌人工染色體(BACs);酵母人工染色體(YACs);哺乳動(dòng)物人工染色體；DNA寡核普酸，例如含寡核苷酸CpG;DNA酶；mRNA、反義寡核苷酸、核酶和siRNA(RNAi)。核酸的大小可從小于IO個(gè)核苷酸至數(shù)千個(gè)千對堿基。另外，在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，核酸可與蛋白質(zhì)藥物偶合或可包括一種或多種化學(xué)修飾，例如^5克代磷酸酯部分。核酸可用作例如佐劑(免疫刺激序列)、免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑，可與蛋白質(zhì)或DNA疫苗共配制，或在蛋白或DNA免疫前或之后分別給予。因此發(fā)現(xiàn)核酸在例如感染疾病、癌癥、變應(yīng)性疾病和炎性疾病中的用途。如同本領(lǐng)域普通技術(shù)人員;l夸理解的那樣，幾乎無例外，冷凍和干燥后，明礬-輔助疫苗制劑通常失效。為保留本發(fā)明的明礬吸附的疫苗制劑的效力和/或免疫原性，涉及的制劑還可具有如臨時(shí)申請?zhí)?所公開；其內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，核酸占組合物和固體涂層總干重約20%-80%。在某些更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸占組合物和固體涂層總干重約25%-75%。在還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸占組合物和固體涂層總干重約30%-70%。本發(fā)明的某些實(shí)施方案涉及阻止干核酸降解的方法，該方法包括將核酸與一種或多種穩(wěn)定劑和一種或多種表面活性劑混合，將混合物干涂至固體基體上。本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及包括固體涂層的組合物，該固體涂層包含一種或多種穩(wěn)定劑、核酸和一種或多種表面活性劑。適用于本發(fā)明方法和組合物的表面活性劑包括例如陰離子表面活性劑，例如十二烷基硫酸鈉；陽離子表面活性劑，例如十六烷基氯化吡啶輸、TMAC和苯扎氯銨；和中性表面活性劑，例如吐溫、山梨坦和聚乙二醇單十二醚。優(yōu)選的表面活性劑包括例如吐溫20、吐溫80和十二烷基^L酸鈉。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，一種或多種表面活性劑占組合物和固體涂層總干重最高達(dá)約10%。在本發(fā)明的某些更優(yōu)選的實(shí)施方案中，一種或多種表面活性劑占本發(fā)明組合物和固體涂層總干重約0.01%-10%。在還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，一種或多種表面活性劑占本發(fā)明組合物和固體涂層總干重約0.03%-3%。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及阻止干核酸降解的方法，該方法包括將核酸與一種或多種穩(wěn)定劑、一種或多種緩沖劑和/或一種或多種表面活性劑混合，并將混合物干涂至固體基體上。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包括固體涂層的組合物，該固體涂層包含一種或多種穩(wěn)定劑、核酸、一種或多種緩沖劑和/或一種或多種表面活性劑。適用于本發(fā)明方法和組合物的緩沖劑包括例如乙酸、丙酸、戊酸、檸檬酸、琥珀酸、羥基乙酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、乳酸、蘋果酸、丙酮酸、酒石酸、羥基丙二酸、富馬酸、谷氨酸天冬氨酸、氨水、嗎啉、咪唑、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、葡甲胺、葡糖胺、MES、ADA、PIPES、ACES、MOPS、TES、HEPES、HEPPS、組氨酸和其它具有等電位pH的緩沖劑，在該pH下，緩沖劑不含3-ll之間的凈電荷(pl)。適用于本發(fā)明方法和組合物的緩沖劑還包括具有例如在歐洲專利申請公布號EP1028706Bl、美國專利申請公布號2002/0058608和PCT專利申請公布號WO99/24015中所述pl5-9的二肽緩沖劑，這些文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。適宜的二肽緩沖劑的實(shí)例包括Gly-His和His-Gly。尤其優(yōu)選的緩沖劑包括例如磷酸、檸檬酸和TRIS。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，一種或多種緩沖劑占組合物和固體涂層總干重約0.1%-30%。在某些更優(yōu)選的實(shí)施方案中，一種或多種緩沖劑占組合物和固體涂層總干重約0.5-20%。在還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，一種或多種緩沖劑占組合物和固體涂層總干重約1%-10%。本發(fā)明的某些其它實(shí)施方案涉及阻止干DNA降解的方法，該方法包括將DNA與一種或多種穩(wěn)定劑、一種或多種DNA酶抑制劑，和任選一種或多種表面活性劑和/或緩沖劑混合，并將混合物干涂至固體基體上，例如微針陣列裝置。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，方法還包括用例如微針陣列裝置或針將干涂的混合物釋放進(jìn)入或透過皮膚。本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及包括固體涂層的組合物，該固體涂層含DNA、一種或多種穩(wěn)定劑、一種或多種DNA酶抑制劑和^壬選一種或多種表面活性劑和/或緩沖劑?？捎糜诒景l(fā)明組合物和方法的DNA酶抑制劑包括例如細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)DNA酶抑制劑。優(yōu)選的細(xì)胞外DNA酶抑制劑包括例如金精三羧酸(ATA);EDTA;EGTA;和二脒二苯氧基丙烷，它是在AT段序列與DNA的溝槽選擇性結(jié)合的芳族二脒輸化合物。優(yōu)選的細(xì)胞內(nèi)DNA酶抑制劑包括例如DMI-2,它是鏈霉菌屬OSV，,o，cays/.)560菌抹的polyketice代謝物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，DNA酶抑制劑占本發(fā)明組合物和固體涂層總干重約0,1%-30%。在某些更優(yōu)選的實(shí)施方案中，DNA酶抑制劑占組合物和固體涂層總干重約1-20%。在還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，DNA酶抑制劑占組合物和固體涂層總干重約2%-10%。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及阻止核酸降解的方法，該方法包括將核酸與一種或多種穩(wěn)定劑混合，將混合物干涂至固體基體上。本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及包括固體涂層的組合物，該固體涂層包含一種或多種穩(wěn)定劑和核酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物采用含一種或多種穩(wěn)定劑和核酸的固體涂層的形式。在某些實(shí)施方案中，將核酸和一種或多種穩(wěn)定劑、任選與一種或多種表面活性劑、一種或多種緩沖劑和/或一種或多種DNA酶抑制劑組合干涂至固體基體表面上?？蓪⒔M合物干涂在其上的固體基體包括例如微噴射元件的微噴射體；任何類型的針；微量滴定板；任何大小、形狀或組分的試管；和可在其中或其上儲(chǔ)存核酸的任何介質(zhì)。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，將組合物干涂至微噴射元件的微噴射體上。微噴射元件具有可用活性藥物，例如核酸干涂的許多皮膚刺入微噴射體。當(dāng)微噴射體滲透皮膚時(shí)，核酸被釋放至組織間隙并溶解。微噴射元件和用活性藥物涂覆此類裝置的方法在例如美國專利申請公布號200/0132054和PCT申請公布號WO02/074173中描述，這些文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。在微針陣列裝置的微噴射體上的固體涂層的需要厚度取決于每單位面積的微噴射體密度和涂層組合物的粘度和濃度以及選擇的涂覆方法。涂層厚度是指測量的已涂覆的微噴射體部分的平均涂層厚度。一般而言，優(yōu)選涂層厚度小于50pm，因?yàn)榇倘虢琴|(zhì)層后，較厚的涂層具有脫落微噴射體的傾向。在某些本發(fā)明實(shí)施方案中，干燥固體涂層的厚度為約1-50(am，優(yōu)選為約5-30(im?，F(xiàn)在，參考圖3，其中表示的是用于本發(fā)明的角質(zhì)層刺入微噴射元件IO的一個(gè)實(shí)施方案。如圖3中所示，元件10包括許多適宜刺入和穿過角質(zhì)層的微噴射體12。微噴射體12典型地以基本上90度角度自具有開孔16的片14延伸。優(yōu)選通過在薄金屬片14蝕刻或打孔出許多微噴射體12來形成微噴射體12，并將微噴射體12折離片平面。現(xiàn)在參考圖4,其中表示的是具有沉積在微噴射體12的固體涂層18的微噴射元件10。根據(jù)本發(fā)明，涂層18可部分或完全覆蓋微噴射體12。也可在微噴射體12形成之前或之后施用涂層18?？赏ㄟ^用硅片蝕刻技術(shù)蝕刻硅或用蝕刻微模模塑塑料形成可用于本發(fā)明的其它微噴射元件。硅和塑料微噴射元件在Godshall等美國專利號5879326中公開；該專利通過引用結(jié)合至本文中。根據(jù)本發(fā)明，可通過多種已知方法將涂層18施用于微噴射體12些部分(例如尖端)。這種涂覆方法的一種包括浸涂。浸涂可描述為通過將微噴射體12部分或完全浸入涂層溶液涂覆微噴射體的方法。通過利用部分浸入技術(shù)，可將涂層18只限于涂在微噴射體12尖端。其它涂層技術(shù)包括輥涂，它利用輥涂機(jī)理，類似地該才幾理限制涂層18施用于微噴射體12尖端。輥涂方法在美國專利申請?zhí)?0/099,604(公布號2002/0132054)中公開，該文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。如在涉及的申請中詳細(xì)論述的那樣，公開的輥涂方法提供平滑涂層，該涂層在皮膚刺入期間不易從微噴射體12上離開。根據(jù)本發(fā)明，微噴射體12還可包括適宜接受和/或增加涂層18體積的手段，例如孔(未顯示)、槽(未顯示)、表面不規(guī)則性(未顯示)或類似的改進(jìn)，其中這些手段提供的表面積加大，在之上可沉淀更大量的涂層。可在本發(fā)明范圍內(nèi)使用的再一個(gè)涂覆方法包括噴涂，才艮據(jù)本發(fā)明，噴涂可包括涂層組合物的霧狀懸浮液的形成。在一個(gè)實(shí)施方案中，將具有約10-200微微升液滴大小的霧狀懸浮液噴在;f鼓噴射體10上，然后干燥。也可使用圖案(Pattern)涂覆法涂覆微噴射體12?？刹捎脠D案涂覆法，使用分配系統(tǒng)將沉積的液體定位在^L噴射體表面上。優(yōu)選沉積液體的量為0.1-20毫微升/微噴射。適宜準(zhǔn)確定量的液體分配器的實(shí)例在美國專利號5,916,524;5,743,960;5,741,554;和5,738,728中描述；這些文獻(xiàn)均通過引用結(jié)合到本文中。也可用使用已知螺線管閥分配器的噴墨技術(shù)施用微噴射體涂層制劑或溶液，任選通過通常使用電場控制流體流動(dòng)的方法和定位方式。其它印刷工業(yè)的液體分配技術(shù)或本領(lǐng)域中已知類似液體分配技術(shù)可用于施用本發(fā)明的圖案涂層。如所述，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，施用于微噴射元件10形成干燥涂層的涂層制劑可包括具有至少一種生物活性藥物的水和非水制劑。根據(jù)本發(fā)明，可將生物活性藥物溶于可生物相容的載體或懸浮于該載體中。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選涂層制劑包括至少一種濕潤劑。如本領(lǐng)域中熟知的那樣，濕潤劑通?？擅枋鰹閮捎H分子。當(dāng)含濕潤劑的溶液施用于疏水性基體時(shí)，分子的疏水基團(tuán)結(jié)合至疏水性基體，而分子的疏水部分不與水接觸。結(jié)果，基體的疏水表面被濕潤劑的疏水基團(tuán)覆蓋，使它易被溶劑潤濕。濕潤劑包括表面活性劑和具有兩親性質(zhì)的聚合物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，涂層制劑包括至少一種表面活性劑。根據(jù)本發(fā)明，一種或多種活性劑可以是兩性離子型、兩性型、陽離子型、陰離子型或非離子型。表面活性劑的實(shí)例包括兩性月桂酰乙酸鈉(sodiumlauroamphoacetate)、十二烷基石危酸鈉(SDS)、十六烷基氯化吡啶鎖(CPC)、氯化十二烷基三甲銨(TMAC)、苯扎氯銨、吐溫例如吐溫20和吐溫80、其它山梨坦衍生物例如司盤-20和烷氧基化醇，例如聚乙二醇單十二醚4。最優(yōu)選的表面活性劑包括吐溫20、吐溫80和SDS。優(yōu)選表面活性劑的濃度以固體涂層總干重計(jì)最高達(dá)10%。更優(yōu)選以固體涂層制劑計(jì)約0.001-2。/o重量。本發(fā)明的涂層還包括血管收縮藥，例如在共同待審的美國專利申請?zhí)?0/674,626和60/514,433中公開的那些，該文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。如同涉及的共同待審的申請中描述的那樣，涂覆在微噴射元件上期間和之后，用血管收縮藥控制出血。優(yōu)選的血管收縮藥包括但不限于阿米福林、咖啡氨醇、環(huán)噴他明、去氧腎上腺素、腎上腺素、苯賴加壓素、茚唑啉、美替唑啉、米多君、萘?xí)踹蜻?、異腎上腺素、奧托君、鳥氨加壓素、羥曱唑啉、去氧腎上腺素、苯乙醇胺、苯丙醇胺、丙己君、偽麻黃堿、四氫唑啉、曲馬唑啉、異庚胺、泰馬唑啉、加壓素、賽洛唑啉及其混合物。最優(yōu)選的血管收縮藥包括腎上腺素、萘?xí)踹蜻⑺臍溥蜻徇蜻?、美替峻啉、曲馬哇啉、泰馬唑p林、羥曱唑啉和賽洛唑啉。如使用，優(yōu)選血管收縮藥的濃度以涂層重量計(jì)為約0.1%-10%。在本發(fā)明的還另一個(gè)實(shí)施方案中，涂層制劑包括至少一種"通路開放調(diào)節(jié)劑"，如在共同待審的美國專利申請?zhí)?9/950,436中公開的那些，該文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。如同涉及的共同待審的申請中描述的那樣，通路開放調(diào)節(jié)劑阻止或減少皮膚自然愈合過程，從而阻止通路關(guān)閉或微噴射元件陣列在角質(zhì)層中形成微縫隙。通路開放調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括但不限于滲透劑(例如氯化鈉)和兩性離子化合物(例如氨基酸)。按照共同待審的申請定義，術(shù)語"通路開放調(diào)節(jié)劑"還包括抗炎藥，例如倍他米松21-磷酸二鈉鹽、曲安奈德21-磷酸二鈉、鹽酸氫可他酯、氫化可的松21-磷酸二鈉鹽、甲潑尼龍21-磷酸二鈉鹽、曱潑尼龍21-琥珀酸鈉鹽、帕拉米松磷酸二鈉和潑尼松龍21-琥珀酸鈉鹽和抗凝血藥，例如檸檬酸、檸檬酸鹽(例如檸檬酸鈉)、右旋糖酐硫酸鈉、阿司匹林和EDTA。按照本發(fā)明，涂層制劑還可包括非水溶劑，例如乙醇、氯仿、乙醚、丙二醇、聚乙二醇等、染料、顏料、惰性填充劑、滲透促進(jìn)劑、賦形劑和本領(lǐng)域中已知的藥品的其它常Mi且分或透皮裝置。只要它們不對涂層制劑需要的溶解度和粘度特性以及干涂層的物理完整性造成不利影響，還可將其它已知制劑助劑加入涂層制劑中。優(yōu)選涂層制劑的粘度小于約500厘泊并大于3厘泊，以^f更有效地涂覆每個(gè)微噴射體12。更優(yōu)選涂層制劑的粘度范圍為約3-200厘泊。按照本發(fā)明，需要的涂層厚度取決于每單位面積片的微噴射體密度和涂層組合物的粘度和濃度以及選擇的涂覆方法。優(yōu)選涂層厚度小于50|im。如所述，在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，干燥固體涂層的厚度為約1-50(im，優(yōu)選為約5-30(im。在所有的情形中，施用涂層后，通過各種方法將在微噴射體12上的涂層制劑干燥。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，將涂覆的微噴射元件IO在室內(nèi)環(huán)境條件下干燥。但可使用各種溫度和濕度水平干燥微噴射體上的涂層制劑。對于儲(chǔ)存和應(yīng)用(按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案)，優(yōu)選按共同待審的美國專利申請?zhí)?9/976,762(公布號2002/0091357)詳細(xì)描述，通過粘性拉片(tabs)將微噴射元件10懸浮于定位器中，該文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。將微噴射元件io置于定位圏中后，將微噴射元件IO施用于患者皮膚上。優(yōu)選按例如共同待審的美國專利申請?zhí)?9/976,798中公開用沖擊涂布器將微噴射元件IO施用于皮膚，該文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。本發(fā)明的某些優(yōu)選的組合物包含約20%-80%總干重核酸、約20%-75%總干重穩(wěn)定劑、任選最高達(dá)約10%總干重表面活性劑和任選約0.5%-20%總干重緩沖劑。本發(fā)明某些其它優(yōu)選的組合物包含約20%-80%總干重核酸、約20%-75%總干重穩(wěn)定劑、約1%-10%總干重DNA酶抑制劑、任選最高達(dá)約10%總干重表面活性劑和任選約0.5%-20%總干重緩沖劑。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，組合物和固體涂層不包含具有極性殘基的兩性離子或其衍生物。以下實(shí)施例舉例說明本發(fā)明某些實(shí)施方案，但不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1:評價(jià)干涂質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定性通過凝膠電泳和光密度測定法評價(jià)質(zhì)粒DNA在溶液或干涂在玻璃或鈦上，以及在不同溫度下儲(chǔ)存隨時(shí)間變化的穩(wěn)定性。用質(zhì)粒DNA的水儲(chǔ)備液(具有巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子的12.15mg/mLP-半乳糖普酶表達(dá)質(zhì)粒的2mMTris和lmMEDTA溶液，pH7.4)評《介在溶液中的穩(wěn)定性。將相同儲(chǔ)備液干涂至鈦或玻璃基體上。在室溫下，在真空箱(28英寸汞規(guī)格)中，將涂覆的基體干燥2小時(shí)。然后將每個(gè)涂覆的基體移至小瓶中，蓋上，在不同時(shí)間和溫度下儲(chǔ)存。然后用lmlTE緩沖液(IOmMTris/1mMEDTA,pH7.5),通過在室溫下溫和振動(dòng)10min將基體上的干燥制劑洗脫，在-2(TC下冷凍直至分析。結(jié)果以分析時(shí)發(fā)現(xiàn)是超螺旋的質(zhì)粒DNA的百分率表示。在室溫儲(chǔ)存時(shí)，干涂至鈦上的質(zhì)粒DNA極不穩(wěn)定。涂覆前，發(fā)現(xiàn)在4°C下儲(chǔ)存時(shí)，在儲(chǔ)備液中有97%DNA是超螺旋的。涂覆至鈦微噴射陣列(平均38ngDNA/2cn^陣列)后，發(fā)現(xiàn)在室溫下儲(chǔ)存1周和4周后，分別有62%和28%DNA是超螺旋的。當(dāng)在4。C下儲(chǔ)存時(shí)，干涂至玻璃或鈦上的質(zhì)粒DNA也不穩(wěn)定。將質(zhì)粒DNA的儲(chǔ)備液干涂至3皮璃基體或鈦微噴射陣列(S250)，在4。C或-20'C下儲(chǔ)存l-4周。每2cmO車列總計(jì)涂覆約60jugDNA。作為對照，將儲(chǔ)備液在(C下儲(chǔ)存l-4周。每周后通過凝膠電泳和光密度測定法測定超螺旋質(zhì)粒DNA的百分率。圖1說明儲(chǔ)存在4。C下的干涂至玻璃基體或鈦微噴射陣列上的超螺旋質(zhì)粒DNA的百分率隨時(shí)間顯著下降，表明與在該溫度下儲(chǔ)備液中DNA的相對穩(wěn)定性對比，當(dāng)在玻璃或鈦基體上涂覆時(shí)，干涂的質(zhì)粒DNA相當(dāng)不穩(wěn)定。因此，這些結(jié)果表明盡管涂覆基體，但在4'C下干燥狀態(tài)的DNA不穩(wěn)定。結(jié)果還證明自4'C至-2(TC，穩(wěn)定性提高。蔗糖提高儲(chǔ)存在4'C下的干涂的質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定性。將質(zhì)粒DNA儲(chǔ)備液和含0.6%、1.2%或2.4%蔗糖的儲(chǔ)備液干涂至鈦圓片上，在4。C下儲(chǔ)存l-8周。在每2cn^圓片上涂覆總計(jì)60jugDNA。每周通過凝膠電泳和光密度測定法測定超螺旋質(zhì)粒DNA百分率。圖2說明在不含蔗糖的對照涂層中超螺旋質(zhì)粒DNA的百分率隨時(shí)間下降。蔗糖以劑量依賴性方式，按時(shí)間函數(shù)減少超螺旋質(zhì)粒DNA的損失。DNA穩(wěn)定性研究的結(jié)果表明，蔗糖以劑量依賴性方式，顯著提高儲(chǔ)存在4'C下的干涂的質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定性。實(shí)施例2:評價(jià)各種物質(zhì)穩(wěn)定質(zhì)粒DNA的能力對多種試劑防止千涂至鈦圓片上的質(zhì)粒DNA超螺旋結(jié)構(gòu)損失的能力進(jìn)行評價(jià)。用作對照的DNA儲(chǔ)備液是12.5mg/mL質(zhì)粒編碼的卩-半乳糖苷酶的2mMTris和lmMEDTA水溶液，pH7.4。所有其它制劑由DNA儲(chǔ)備液制備，含10mg/mlDNA、含有或不含20mg/ml測25試試劑。用于測試的試劑如下蔗糖(Pfanstiehl，U.S.)、海藻糖(Pfanstiehl)、D-甘露醇(Sigma,U.S.)、乳糖(Pfanstiehl)、平均分子量66卯0的右旋糖酐(Sigma)、低分子量羥乙基纖維素(HEC，UnionCarbide,U.S.)、人白蛋白(Sigma)、甘氨酸(Sigma)、NaCl(Sigma)、平均分子量10000的聚乙二醇(PEG10000，Aldrich，U.S.)、泊洛沙姆F127(Sigma)和葡糖胺基胞壁酰二肽(GMDP，ZaoPeptechU.K.)用水將鈦圓片(2cm"洗滌10min,隨后用無水乙醇洗滌10min，隨后用丙酮洗滌10min,在室溫干燥。從每個(gè)制劑取5ml，按一式兩份移至圓片上。在室溫下，在真空箱中，將涂覆的圓片干燥2小時(shí)。然后將每個(gè)圓片移至小瓶中，蓋上，在4匸下儲(chǔ)存8周。然后用lmlTE緩沖液(IOmMTris/1mMEDTA，pH7.5)，通過在室溫下溫和振動(dòng)10min將圓片上的干燥制劑洗脫，在-20°C下冷凍直至分析。通過樣品的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析。在85V下，按200ngDNA/泳道進(jìn)行105min。由在Alphaimager2200成像系統(tǒng)上獲得的凝膠圖象確定密度積分值(IDVs)。測量超螺旋(SC)和非超螺旋(NSC)帶的IDV,按(IDVsc/IDVSC+NSC)xIOO計(jì)算超螺旋百分率。表I中所示結(jié)果證明非還原糖(蔗糖、海藻糖)、還原糖(乳糖)和多糖例如右旋糖酐減少干DNA降解。相反，化合物例如無機(jī)鹽、氨基酸和糖醇未顯著阻止干DNA降解。表I:各種試劑對質(zhì)粒DNA穩(wěn)定性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>根據(jù)前述，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易確定其中本發(fā)明提供促進(jìn)生物活性藥物的透皮通量進(jìn)入和透過患者的角質(zhì)層的有效和有效率的方法。在不背離本發(fā)明的宗旨和范圍前提下，普通技術(shù)人員可對本發(fā)明進(jìn)行各種改變和修改，使其適用于各種用途和條件。因此，這些改變和修改是適當(dāng)和合理的，并將落入權(quán)利要求書的等同權(quán)利要求全部范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種固體涂層，所述涂層包含施用于固體基體上的穩(wěn)定劑和核酸的干制劑，其中所述穩(wěn)定劑阻止所述干核酸降解。2.權(quán)利要求l的固體涂層，其中所述固體基體包含微噴射元件。3.權(quán)利要求2的固體涂層，所述涂層的厚度范圍為約l-50[im。4.權(quán)利要求1的固體涂層，其中所述穩(wěn)定劑選自非還原糖、多糖和還原糖。5.權(quán)利要求4的固體涂層，其中所述非還原糖選自蔗糖、海藻糖、水蘇糖和棉子糖。6.權(quán)利要求5的固體涂層，其中所述非還原糖包括蔗糖。7.權(quán)利要求4的固體涂層，其中所述多糖選自右旋糖酐、可溶性淀粉、糊精和菊粉。8.權(quán)利要求4的固體涂層，其中所述還原糖選自芽菜糖、阿拉伯糖、來蘇糖、核糖、木糖、洋地黃毒糖、巖藻糖、槲皮醇、異鼠李糖、鼠李糖、阿洛糖、阿卓糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、金鏤梅糖、艾杜糖、甘露糖、；荅格糖、櫻草糖、莢豆二糖、蕓香糖、綿棗兒二糖、纖維二糖、龍膽二糖、乳糖、乳果糖、麥芽糖、蜜二糖、槐糖和松二糖。9.權(quán)利要求1的固體涂層，其中所述核酸選自雙鏈DNA、單鏈DNA和RNA。10.權(quán)利要求9的固體涂層，其中所述核酸為質(zhì)粒DNA。11.權(quán)利要求1的固體涂募，其中所述穩(wěn)定劑占所述制劑總干重約10%-80%。12.權(quán)利要求1的固體涂層，其中所述核酸占所述制劑總干重約20%-80%。13.權(quán)利要求1的固體涂層，所述制劑還包含占所述制劑總干重最高達(dá)10%的一種或多種表面活性劑，且所述一種或多種表面活性劑選自吐溫20、吐溫80和十二烷基碌^酸鈉。14.權(quán)利要求l的固體涂層，所述制劑還包含占所述制劑總干重最高達(dá)10%的一種或多種表面活性劑，且所述一種或多種表面活性劑選自陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑和中性表面活性劑。15.權(quán)利要求14的固體涂層，其中所述陰離子表面活性劑包括十六烷基氯化吡啶輸。16.權(quán)利要求14的固體涂層，其中所述陽離子表面活性劑選自十六烷基氯化吡啶鏡、TMAC和苯扎氯銨。17.權(quán)利要求14的固體涂層，其中所述中性表面活性劑選自吐溫、山梨坦和聚乙二醇單十二醚。18.權(quán)利要求13的固體涂層，所述制劑還包含約0.5%-20%總干重緩沖劑，且所述緩沖劑選自磷酸、種檬酸和TRIS。19.權(quán)利要求1的固體涂層，所述制劑還包含約0.5%-20%總干重緩沖劑，且所述緩沖劑選自,粦酸、檸檬酸和TRIS。20.權(quán)利要求1的固體涂層，所述制劑包含約20%-80%總干重的所述核酸和約10%-80%總千重的所述穩(wěn)定劑。21.權(quán)利要求2的固體涂層，其中所述核酸包括DNA,并且還包含DNA酶抑制劑，所述DNA酶抑制劑阻止DNA降解，然后所述固體涂層用所述微噴射元件釋放進(jìn)入或透過皮膚。22.權(quán)利要求21的固體涂層，其中所述DNA酶抑制劑選自金精三羧酸、EDTA、EGTA、二脒二笨氧基丙烷和DMI-2。23.權(quán)利要求21的固體涂層，其中所述DNA酶抑制劑占所述制劑總干重約1%-20%。24.權(quán)利要求21的固體涂層，所迷制劑還包含最高達(dá)10%總干重的一種或多種表面活性劑，且所述一種或多種表面活性劑選自吐溫20、吐溫80和十二烷基^J吏鈉。25.權(quán)利要求24的固體涂層，所述制劑還包含約0.5°/。-20%總干重緩沖劑，且所述緩沖劑選自磷酸、杼檬酸和TRIS。26.權(quán)利要求21的固體涂層，所述制劑還包含約0.5%-20%總干重緩沖劑，且所述緩沖劑選自磷酸、檸檬酸和TRIS。27.權(quán)利要求21的固體涂層，所述制劑包含約20%-80%總干重的所述核酸、約10%-80%總干重的所述穩(wěn)定劑和約1%-20%總干重的所述DNA酶抑制劑。28.權(quán)利要求l的固體涂層，所述制劑包括血管收縮藥。29.權(quán)利要求28的固體涂層，其中所述血管收縮藥選自腎上腺素、萘甲唑啉、四氫唑啉茚唑啉、美替唑啉、曲馬唑啉、泰馬唑啉、羥曱唑啉、賽洛唑啉、阿米福林、咖啡氨醇、環(huán)噴他明、去氧腎上腺素、腎上腺素、苯賴加壓素、茚唑啉、美替唑啉、米多君、萘?xí)踹蜻?、異腎上腺素、奧托君、鳥氨加壓素、羥曱唑啉、去氧腎上腺素、苯乙醇胺、笨丙醇胺、丙己君、偽麻黃堿、四氬唑啉、曲馬"坐啉、異庚胺、泰馬唑啉、加壓素和賽洛唑啉。30.權(quán)利要求l的固體涂層，所述制劑包括通路開放調(diào)節(jié)劑。31.權(quán)利要求30的固體涂層，其中所述通路開放調(diào)節(jié)劑選自滲透劑、氯化鈉、兩性離子化合物、氨基酸、抗炎藥、倍他米松21-磷酸二鈉鹽、曲安奈德21-磷酸二鈉、鹽酸氫可他酯、氫化可的松21-磷酸二鈉鹽、甲潑尼龍21-磷酸二鈉鹽、甲潑尼龍21-琥珀酸鈉鹽、帕拉米松磷酸二鈉、潑尼松龍21-琥珀酸鈉鹽、抗凝血藥、檸檬酸、檸檬酸鹽、檸檬酸鈉、右旋糖酐》危酸鈉和EDTA。32.權(quán)利要求l的固體涂層，所述制劑包括抗氧化劑。33.權(quán)利要求32的固體涂層，其中所述抗氧化劑選自檸檬酸鈉、獰檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、抗壞血酸、蛋氨酸和抗壞血酸鈉。34.—種阻止核酸降解的方法，所述方法包括將所述核酸與穩(wěn)定劑的制劑混合并將所述制劑干涂至固體基體上的步驟，其中所述穩(wěn)定劑阻止所述核酸的降解。35.權(quán)利要求34的方法，其中將所述制劑千涂至固體基體上的步驟包括涂覆微噴射元件。36.權(quán)利要求35的方法，所述方法還包括將所述微噴射元件施用于患者以透皮釋放所迷核酸的步驟。37.權(quán)利要求34的方法，其中將所述制劑干涂至固體基體上的步驟包括將所述固體基體涂覆至約1-50pm的厚度。38.權(quán)利要求34的方法，其中所迷核酸與穩(wěn)定劑的制劑混合的步驟包括混合選自非還原糖、多糖和還原糖的穩(wěn)定劑。39.權(quán)利要求34的方法，其中所述核酸與穩(wěn)定劑的制劑混合的步驟包括混合選自雙鏈DNA、單鏈DNA和RNA的核酸。40.權(quán)利要求34的方法，所述方法還包括將最高達(dá)10%總干重的一種或多種表面活性劑加至所述制劑的步驟，所述表面活性劑選自吐溫20、吐溫80和十二烷基錄u酸鈉。41.權(quán)利要求34的方法，所述方法還包括將約0.5%-20%總干重緩沖劑加至所述制劑的步驟，其中所述緩沖劑選自磷酸、檸檬酸和TRIS。42.權(quán)利要求34的方法，其中所述核酸包括DNA，所述方法還包括將DNA酶抑制劑加至所述制劑的步驟。43.權(quán)利要求42的方法，其中加入所述DNA酶抑制劑的步驟包括加入選自金精三羧酸、EDTA、EGTA、二脒二苯氧基丙烷和DMI-2的DNA酶抑制劑。44.權(quán)利要求43的方法，其中加入所述DNA酶抑制劑的步驟包括加入約1%-20%總干重的所述DNA酶抑制劑。45.權(quán)利要求42的方法，其中將所迷制劑干涂至固體基體上的步驟包括涂覆微噴射元件。46.權(quán)利要求45的方法，所述方法還包括將所述微噴射元件施用于患者以透皮釋放所述核酸的步驟，其中所述DNA酶抑制劑阻止釋放后的核酸降解。全文摘要本發(fā)明提供用碳水化合物，例如非還原糖、多糖和還原糖穩(wěn)定干核酸的方法和組合物。優(yōu)選將穩(wěn)定的核酸涂覆在透皮釋藥的微噴射元件上。本發(fā)明還提供涉及使用DNA酶抑制劑穩(wěn)定直接釋放至身體組織中的干核酸的組合物和方法。文檔編號C12N15/87GK101415443SQ200480038108公開日2009年4月22日申請日期2004年10月21日優(yōu)先權(quán)日2003年10月23日發(fā)明者G·維德拉,M·J·N·科爾米爾,M·阿瑪利申請人:阿爾扎公司