專利名稱：：免疫原性hiv組合物和相關(guān)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)且更特定地涉及用于預(yù)防和治療AIDS的免疫原性組合物。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)今世界上超過(guò)3千萬(wàn)的人被人類免疫缺陷病毒(HIV)感染，這個(gè)病毒是造成AIDS的原因。盡管HIV的流行迅速散布到全世界范圍，但約90%的HIV感染個(gè)體生活在發(fā)展中國(guó)家，包括撒哈拉沙漠以南的非洲和東南亞的部分地區(qū)。近來(lái)減少病毒負(fù)荷并減緩發(fā)展成AIDS的抗病毒治療藥物已變得可以獲得。然而，這些藥物的使用對(duì)于發(fā)展中國(guó)家而言過(guò)于昂貴。因而，仍然迫切需要研制用于減少全球AIDS流行的有效預(yù)防性和治療性疫苗。迄今為止，已證實(shí)有效疫苗的研制難以將HIV作為目標(biāo)。因?yàn)镠IV傾向于快速變異，所以現(xiàn)在世界不同地區(qū)存在的眾多主流病毒株具有不同抗原決定部位。另外，在特定的感染個(gè)體中，HIV病毒可通過(guò)在抗原決定部位上產(chǎn)生突變而避開(kāi)宿主免疫系統(tǒng)的控制。仍然需要研制改良的HIV疫苗，其刺激免疫系統(tǒng)，以識(shí)別保守抗原表位的廣譜，抗原表位包括來(lái)自p24核心抗原的抗原決定部位。在20世紀(jì)90年代，超過(guò)30種的不同候選HIV-1疫苗進(jìn)入人類臨床試驗(yàn)。這些疫苗引起各種體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，其視特定疫苗組份而定在類型和強(qiáng)度上有所不同。仍然需要研制HIV疫苗組合物，其強(qiáng)烈引起與預(yù)防HIV感染相關(guān)的特定免疫反應(yīng)。通過(guò)對(duì)盡管重復(fù)暴露于HIV但仍保持未感染或已被HIV感染許多年但卻未發(fā)展為AIDS的個(gè)體進(jìn)行研究，已提出保護(hù)性HIV免疫反應(yīng)的性質(zhì)。這些研究已顯示CD4+T輔助細(xì)胞與預(yù)防HIV感染和隨后的疾病發(fā)展密切相關(guān)。除了抗原特異性CD4+輔助T細(xì)胞反應(yīng)之外，認(rèn)為CD8+細(xì)胞毒素T細(xì)胞反應(yīng)在預(yù)防最初HIV感染和疾病發(fā)展中也很重要。在有效的抗病毒免疫反應(yīng)中，活化的CD8+T細(xì)胞直接殺死被病毒感染的細(xì)胞并分泌具有抗病毒活性的細(xì)胞激素。P-趨化因子系統(tǒng)在預(yù)防最初HIV感染及疾病發(fā)展中似乎也很重要。最原始的HIV分離體感染免疫細(xì)胞需要病毒與CCR5相互作用，CCR5的正常生物學(xué)作用是作為p-趨化因子RANTES、MIP-la和MIP-p的主要受體。已顯示導(dǎo)致CCR5受體的表達(dá)降低的遺傳多態(tài)現(xiàn)象提供對(duì)HIV感染的抵抗。另外，已證明P-趨化因子含量與對(duì)HIV感染的抵抗在暴露個(gè)體和培養(yǎng)細(xì)胞中均具有顯著相關(guān)性。已表明(3-趨化因子可通過(guò)若干機(jī)制阻斷HIV感染性，包括與HIV競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至CCR5或干擾HIV結(jié)合至CCR5并下調(diào)表面CCR5。由于J3-趨化因子在預(yù)防最初HIV感染和疾病發(fā)展中的重要性，有效的HIV免疫原性組合物應(yīng)包括在感染之前和對(duì)感染性病毒作出反應(yīng)時(shí)誘導(dǎo)高含量的P-趨化因子產(chǎn)生。已描述能誘導(dǎo)p-趨化因子產(chǎn)生的HIV免疫原性組合物。然而，刺激產(chǎn)生高含量(3-趨化因子的免疫原性組合物誘導(dǎo)強(qiáng)烈、持久的HIV-特異性Thl細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，而HIV-特異性細(xì)胞毒素活性尚未有所述。引起某種類型的HIV-特異性免疫反應(yīng)的組合物可能不引起其它重要的保護(hù)性反應(yīng)。例如，Deml等人.Clin.Chem.Lab.Med.37:199-204(1999)中描述含有HIV-1gpl60包膜抗原、免疫刺激DNA序列和明礬佐劑的疫苗，盡管其誘導(dǎo)抗原特異性Thl型細(xì)胞激素反應(yīng)，但其不能誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。此外，不預(yù)期僅含有包膜抗原的疫苗會(huì)誘導(dǎo)對(duì)抗更高度保守的HIV核心蛋白的免疫反應(yīng)。因而，存在對(duì)將有助于預(yù)防HIV感染或至少減緩感染個(gè)體向AIDS發(fā)展的免疫原性組合物和方法的需要。本發(fā)明滿足這一需要并又提供相關(guān)的優(yōu)勢(shì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供可用于增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中免疫反應(yīng)的效力的免疫原性組合物。本發(fā)明的免疫原性組合物可增強(qiáng)所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)的幅度、類型、強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。免疫原性組合物含有最優(yōu)化的HIV抗原、含有免疫體的經(jīng)分離核酸分子和可選佐劑。HIV抗原可為缺少外部包膜蛋白gpl20的全滅活HIV病毒。HIV抗原也可為蛋白酶缺失的HIV粒子，如L2粒子?；蛘?，HIV抗原可為全滅活HIV病毒，或所選HIV抗原或肽(包括p24抗原、nef、gp41及其類似物)的組合。在其中存在佐劑的本發(fā)明的免疫原性組合物中，佐劑可適用于投予人類。示范性佐齊l)為不完全弗氏佐齊Ll(incompleteFreund'sadjuvant)。本發(fā)明的免疫原性組合物可進(jìn)一步增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中P-趨化因子含量、干擾素"7(IFNy)、白細(xì)胞間介素2(IL2)、腫瘤壞死因子ot(TNFa)和白細(xì)胞間介素15(IL15)的產(chǎn)生和/或HIV-特異性IgG2b抗體產(chǎn)生。本發(fā)明的免疫原性組合物也可增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中HIV-特異性輔助CD4+T細(xì)胞、HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞反應(yīng)和非細(xì)胞毒素抑制性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。本發(fā)明還提供含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的試劑盒。所述試劑盒的組份當(dāng)組合時(shí)產(chǎn)生本發(fā)明的免疫原性組合物。本發(fā)明還提供通過(guò)將HIV抗原、免疫體和可選佐劑組合來(lái)制成免疫原性組合物的方法。所述組份可在活體外或活體內(nèi)組合以獲得免疫原性組合物。本發(fā)明還提供通過(guò)投予哺乳動(dòng)物含有HIV抗原、含有免疫體的經(jīng)分離核酸分子和可選佐劑的免疫原性組合物來(lái)使哺乳動(dòng)物免疫的方法。本發(fā)明還提供抑制AIDS的方法，其通過(guò)投予哺乳動(dòng)物含有HIV抗原、含有免疫體的經(jīng)分離核酸分子和可選佐劑的免疫原性組合物來(lái)增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。在本發(fā)明的方法中，所述哺乳動(dòng)物可為靈長(zhǎng)類(如人)或嚙齒動(dòng)物。在所述方法的某些實(shí)施例中，所述靈長(zhǎng)類為孕期母親或嬰幼兒。人可為HIV血清反應(yīng)陰性或HIV血清反應(yīng)陽(yáng)性。可有利地將免疫原性組合物投予哺乳動(dòng)物兩次或兩次以上并通過(guò)多種投予途徑來(lái)投予，包括皮下、肌內(nèi)和粘膜內(nèi)。圖1顯示用于連接寡核苷酸以形成免疫體的示范性連接子的化學(xué)結(jié)構(gòu)(Yu等人，LMed.Chem.45:4540-4548(2002);Yu等人.，Nucl.AcidsRes.30:4460-4469(2002))。圖2顯示免疫體HYB2055(也稱為Amplivax)的示意圖。圖3顯示通過(guò)HIV-1免疫原誘導(dǎo)HIV-特異性細(xì)胞激素RANTES、MIPla、MIP卬、白細(xì)胞間介素-10(IL-10)和IL-5。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與鹽水相比具有顯著性。圖4顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-1免疫原誘導(dǎo)的HIV-特異性干擾素-Y(IFNY)產(chǎn)生。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖5顯示AmplivaxTM對(duì)RANTES、MIPla、MIPip、IL-10和IL-5的產(chǎn)生水平的效應(yīng)。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與鹽水相比具有顯著性。圖6顯示由Amplivax引起的增強(qiáng)的HIV-特異性IFN丫產(chǎn)生。對(duì)于RANTES、MIP1a、MIP1)3和IL-10發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與鹽水相比具有顯著性。圖7顯示在酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(Elispot)檢定中AmplivaxTM對(duì)分泌HIV-特異性IFNy的T細(xì)胞的增強(qiáng)效應(yīng)。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖8顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性IFNy產(chǎn)生。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖9顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性RANTES產(chǎn)生。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖10顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性MIP-la產(chǎn)生。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖11顯示通過(guò)AmplWaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性MIP-lp產(chǎn)生。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖12顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性IL-10產(chǎn)生。免疫原經(jīng)皮下投予。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖13顯示通過(guò)皮下(SC)給予的AmplivaxTM增強(qiáng)HIV-特異性IL-5產(chǎn)生。"*"指示與單獨(dú)的HIV-1免疫原相比具有顯著性。圖14顯示小鼠中AmplivaxTM對(duì)HIV-1免疫原誘導(dǎo)的p24抗體滴度的效應(yīng)。免疫原經(jīng)皮下投予。圖15顯示IFA中的HIV-1全滅活疫苗(HIV-1免疫原)一經(jīng)皮下(SC)和肌內(nèi)(IM)投予即誘導(dǎo)HIV-特異性細(xì)胞激素產(chǎn)生。圖16顯示AmplivaxTM可在與IFA乳化之前或之后添加并增強(qiáng)IFNy產(chǎn)生。圖17顯示AmplivaxTM可在與IFA乳化之前或之后添加并增強(qiáng)RANTES產(chǎn)生。圖18顯示在沒(méi)有IFA的情況下具有AmplivaxTM的HIV-1全滅活疫苗抗原在皮下免疫的小鼠中觸發(fā)HIV-特異性IFNy產(chǎn)生。"*"指示與HIV-1免疫原(IM)相比具有顯著性。HIV抗原為不含IFA的HIV全滅活疫苗。圖19顯示在沒(méi)有IFA的情況下具有AmplivaxTM的HIV-1全滅活疫苗抗原在皮下免疫的小鼠中觸發(fā)分泌HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞的活性。指示與HIV'-1免疫原(IM投予)相比具有顯著性。HIV抗原為不含IFA的HIV全滅活疫苗。圖20顯示在沒(méi)有IFA的情況下具有AmpUvaxTM的HIV-1全滅活疫苗抗原在皮下免疫的小鼠中觸發(fā)HIV-特異性RANTES產(chǎn)生。"*"指示與HIV-1免疫原(IM投予)相比具有顯著性。HIV抗原為不含IFA的HIV全滅活疫苗。圖21顯示通過(guò)活體外添加的AmplivaxTM來(lái)增加產(chǎn)生a-防御素的CD8+T細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。圖22顯示經(jīng)REMUNE⑧治療的患者和HIV陽(yáng)性對(duì)照(0pg/mlAmplivax)中產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖23顯示在活體外添加的0.1lig/mlAmplivaxTM存在下產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖24顯示在活體外添加的1pg/mlAmplivaxTM存在下產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖25顯示在活體外添加的10|ig/mlAmplivaxTM存在下產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖26顯示周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞(PBMC)中的IFN-y酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定。使用lgg/ml的HYB2055。圖27顯示在未接受抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(ART)的患者中第一次注射REMUNE之后CD4T細(xì)胞的表型改變。圖28顯示在未接受ART的患者中第一次注射REMUNE⑧之后CD8T細(xì)胞的表型改變。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供免疫原性HIV組合物，其含有HIV抗原、含有免疫體的經(jīng)分離核酸分子和可選佐劑。本發(fā)明還提供含有所述組合物的組份用于一起使用的試劑盒。本發(fā)明還提供用所述組合物或用所述組合物的組份來(lái)使哺乳動(dòng)物免疫的方法，以使得相對(duì)于單獨(dú)的HIV抗原可增強(qiáng)經(jīng)免疫哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。本發(fā)明的組合物也可有利地誘導(dǎo)HIV特異性CD4T輔助細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞，所述細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)抗廣譜HIV抗原決定部位的有效的TW免疫反應(yīng)，從而提供強(qiáng)烈的HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。因而，本發(fā)明的免疫原性組合物適用于預(yù)防HIV感染和/或減緩感染個(gè)體向AIDS發(fā)展。所述組合物和方法可用于引起對(duì)保守HIV抗原決定部位具有特異性的有效的Thl細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)；引起HIV-特異性CD4T輔助細(xì)胞、HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞活性；剌激趨化因子和細(xì)胞激素(諸如P-趨化因子、干擾素-Y、白細(xì)胞間介素2(IL2)、白細(xì)胞間介素7(IL7)、白細(xì)胞間介素15(IL15)、a-防御素及其類似物)的產(chǎn)生；并增加記憶細(xì)胞。所述疫苗可經(jīng)由多種投予途徑來(lái)投予。所述疫苗可用于預(yù)防HIV的母體傳播以用于新生兒、兒童和高危個(gè)體的疫苗接種及用于感染個(gè)體的疫苗接種。所述疫苗也可與其它HIV療法組合使用，包括具有核酸酶和蛋白酶抑制劑和阻斷病毒進(jìn)入的藥劑(如T20)的多種組合的抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(ART)(參見(jiàn)Baldwin等人，Curr.Med.Chem.10:1633-1642(2003))。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"HIV"指HIV病毒的所有形式、亞型和變種并且與以前的術(shù)語(yǔ)HTLVIII和LAV同義。已研制出多種能增殖HIV或被HIV病毒永久感染的細(xì)胞株并將其以ATCC存放，包括HuT78細(xì)胞和HuT78衍生物H9以及具有登記號(hào)CCL214、TIB161、CRL1552和CRL8543的那些細(xì)胞株，其描述于美國(guó)專利第4,725,669號(hào)和Gallo，ScientificAmerican256:46(1987)中。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"全滅活HIV病毒"指完整、無(wú)活性的HIV病毒。無(wú)活性的HIV病毒指不能感染和/或復(fù)制的病毒。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"外部包膜蛋白"指逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的部分膜糖蛋白，其與跨膜蛋白gp41相反而突出膜。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"缺少外部包膜蛋白的HIV病毒"指缺少外部包膜蛋白gpl20但含有更多病毒的遺傳保守部分(例如p24和gp41)的HIV粒子或HIV基因產(chǎn)物的制劑。缺少外部包膜蛋白gpl20的HIV在本文中也稱作REMUNE。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"HIVp24抗原"指HIV的gag區(qū)域的基因產(chǎn)物，其特征是具有約24,000道爾頓的表觀相對(duì)分子量并標(biāo)示為p24。術(shù)語(yǔ)"HIVp24抗原"也指具有p24免疫活性的p24的修飾和片段。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可確定p24的適當(dāng)修飾，諸如添加、刪除或取代天然氨基酸或氨基酸類似物，用來(lái)例如增加p24的穩(wěn)定性或生物利用性或有助于其純化而不破壞其免疫活性。同樣地，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可確定具有p24免疫活性的p24的適當(dāng)片段。p24的免疫活性片段可具有6個(gè)來(lái)自多肽之殘基直至全長(zhǎng)多肽減去一個(gè)氨基酸。由其它HIV基因產(chǎn)物編碼的其它HIV抗原可包括與HIVp24抗原的上述那些片段或修飾相似的片段或修飾。其它示范性HIV抗原例如包括gp41、nef及其類似物。本文中所使用的"免疫體"指寡核苷酸，其包含2個(gè)更小的在其3'末端連接的寡核苷酸，從而產(chǎn)生具有2個(gè)5'末端的寡核苷酸。免疫體的這兩個(gè)更小的寡核苷酸可為相同或不同序列和/或長(zhǎng)度，但一般是相同的。除了其免疫刺激活性之外，免疫體含有3'-3'連接并因此不具有游離3'末端，因而增加對(duì)核酸酶消化的抗性。免疫體的更小的寡核苷酸一般為至少約5或6個(gè)核苷酸，其連接在一起以形成2個(gè)5'末端，但可為更長(zhǎng)，諸如7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或甚至更長(zhǎng)的免疫體的更小寡核苷酸。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易確定足以刺激比單獨(dú)抗原所見(jiàn)更大的免疫反應(yīng)的免疫體的長(zhǎng)度和/或序列。因而，在一個(gè)實(shí)施例中，免疫體包含兩個(gè)相同的經(jīng)由其3'末端連接的寡核苷酸。免疫體也可包括經(jīng)修飾的堿基。免疫體描述于例如Kandimalla等人,Bioorg.Med.Chem.9:807-813(2001);Yu等人，Nucl.AcidsRes.30:4460-4469(2002);Yu等人，Bioorg.Med.Chem.11:459-464(2003);Bhagat等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.300:853-861(2003);禾口Yu等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.297:83-90(2002);Yu等人.Nucl.AcidsRes.30:1613-1619(2002);Yu等人.J.Med.Chem.45:4540-4548(2002);Kandimalla等人，BioconiugateChem.13:966-974(2002);Yu等人，BioorganicMed.Chem.Lett.10:2585-2588(2000);Agrawal和Kandimalla,TrendsMol.Med.8:114-121(2002)中；其各自以引用的方式并入本文中。所述免疫體可具有比含有CpG的免疫刺激序列更有效的免疫刺激活性。當(dāng)與抗原組合投予時(shí)，免疫體增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。如下所論述，免疫體可為CpG免疫體或無(wú)CpG免疫體。示范性免疫體在實(shí)例X和XI中加以描述。本文中所使用的"CpG免疫體"指如上所述的免疫體，其特定地含有CpG基序。因而，CpG免疫體為包含兩個(gè)相同或不同的更小寡核苷酸的寡核苷酸，其中至少一個(gè)更小寡核苷酸含有至少一個(gè)CpG基序。本文中所使用的"無(wú)CpG免疫體"指特定地排除CpG基序的免疫體。因而，無(wú)CpG免疫體為包含兩個(gè)相同或不同的更小寡核苷酸的寡核苷酸，其中沒(méi)有一個(gè)更小寡核苷酸含有CpG基序。免疫體可含有經(jīng)修飾的堿基(參見(jiàn)Kandimalla等人，上文，2001)。例如，免疫體可含有CpG類似物。例如，免疫體可含有脫氧胞嘧啶的嘧啶類似物，標(biāo)示為Y。尤其適用的用于免疫體中的脫氧胞嘧啶核苷類似物為脫氧-5-羥基胞嘧啶核苷或脫氧-N4-乙基胞嘧啶核苷。在另一實(shí)施例中，免疫體可含有鳥嘌呤的嘌呤類似物，標(biāo)示為R。尤其適用的脫氧鳥嘌呤類似物為7-脫氧鳥嘌呤(7-deazguanine)。因而，免疫體可含有YpG基序、CpR基序或YpR基序，其中Y和R分別是胞嘧啶和鳥嘌呤的類似物。先前已描述連接兩個(gè)更小寡核苷酸以形成免疫體的方法(Kandimalla等人，Bioorg.Med.Chem.9:807-813(2001);Yu等人，Nucl.AcidsRes.30:4460-4469(2002);Yu等人，Bioorg.Med.Chem.11:459-464(2003);Bhagat等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.300:853-861(2003);禾口Yu等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.297:83-90(2002);Yu等人.Nucl.AcidsRes.30:1613-1619(2002);Yu等人，J.Med.Chem.45:4540-4548(2002);Kandimalla等人，BioconiugateChem.13:966-974(2002);Yu等人，BioorganicMed.Chem.Lett.10:2585-2588(2000);Agrawal和Kandimalla,TrendsMol.Med.8:114-121(2002))。示范性連接子例如包括經(jīng)由甘油基連接子的3'-3'連接(Yu等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.297:83-90(2002))。連接子可為垸基、支鏈垸基或乙二醇連接子，如Yu等人，LMed.Chem.45:4540-4548(2002)中所述(參見(jiàn)圖1)。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易認(rèn)識(shí)到可使用這些方法及其它方法來(lái)經(jīng)由寡核苷酸的3'末端將其連接以產(chǎn)生兩個(gè)游離5'末端。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"免疫刺激序列"或"ISS"指含有未甲基化的CpG基序的核苷酸序列，當(dāng)與抗原組合投予時(shí)，其能增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。免疫刺激序列例如描述于PCT公開(kāi)案WO98/55495中。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"含有免疫體的核酸分子"指含有免疫體的線性、環(huán)狀或分支的單或雙股DNA或RNA核酸。含有免疫體的核酸分子可含有單一免疫體。若游離5'末端中之一個(gè)或兩個(gè)連接至另一個(gè)核酸分子序列的5'末端以產(chǎn)生另一個(gè)用于連接額外免疫體的潛在3'末端，則核酸分子也可含有一個(gè)以上的免疫體。除免疫體之外，所述核酸分子可具有大于6個(gè)堿基或堿基對(duì)的任何長(zhǎng)度，并一般大于約15個(gè)堿基或堿基對(duì)，諸如大于約20個(gè)堿基或堿基對(duì)，并在長(zhǎng)度上可為若干kb。當(dāng)含有免疫體的所述核酸為環(huán)狀時(shí)，或當(dāng)其含有多個(gè)需要5'-5'連接的免疫體時(shí)，應(yīng)了解只要5'-5'連接不干擾嵌入核酸的免疫體的免疫剌激活性，游離5'末端就(例如)如Kandimalla等人，BioconiugateChem.13:966-974(2002)和Yu等人，Bioorgan.Med.Chem.10:2585-2588(2000)中所述進(jìn)行連接，如在短免疫體情況下所發(fā)現(xiàn)的(Kandimalla等人，上文，2002,和Yu等人，上文,2000)。含有免疫體的核酸可另外含有編碼一個(gè)或一個(gè)以上HIV抗原的核酸序列以用作DNA疫苗。免疫體或含有免疫體的核酸分子可通過(guò)例如本文所揭示的化學(xué)合成寡核苷酸和經(jīng)由其3'末端化學(xué)連接寡核苷酸來(lái)產(chǎn)生。另外，免疫體或含有免疫體的核酸分子可通過(guò)重組合成免疫體或含有免疫體的核酸的兩個(gè)半部分和經(jīng)由其3'末端化學(xué)連接兩個(gè)半部分來(lái)產(chǎn)生。免疫體可含有天然或經(jīng)修飾的核苷酸或天然或非天然核苷酸連接。所屬領(lǐng)域已知的修飾包括例如3'0H基或5'OH基的修飾、核苷酸堿基的修飾、糖組份的修飾和磷酸根基團(tuán)的修飾。非天然核苷酸連接可為例如硫代磷酸酯連接而不是磷酸二酯連接，其增加核酸分子對(duì)核酸酶降解的抗性。多種修飾和連接描述于例如PCT公開(kāi)案WO98/55495中。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"佐劑"指如下物質(zhì)當(dāng)將其添加到免疫原性藥劑中時(shí)，一旦受試者接觸混合物，就非特異性增強(qiáng)或加強(qiáng)受試者對(duì)藥劑的免疫反應(yīng)。佐劑可包括例如水包油乳液、油包水乳液、明礬(鋁鹽)、脂質(zhì)體和微粒，諸如聚苯乙烯、淀粉、聚磷氮烯和聚交酯/聚糖苷。佐劑也可包括例如角鯊烯混合物(SAF-I)、胞壁酰基肽、皂草苷衍生物、分枝桿菌細(xì)胞壁制劑、單磷酰基脂質(zhì)A、分枝菌酸衍生物、非離子嵌段共聚物界面活性劑、QuilA、霍亂毒素B亞單位、聚磷氮烯及衍生物和免疫刺激復(fù)合物(ISCOM)，諸如Takahashi等人(1990)^15344:873-875所述的那些復(fù)合物。弗氏佐劑(完全和不完全)的促有絲分裂組份可用于獸醫(yī)用途和用于在動(dòng)物中產(chǎn)生抗體。在人類中，不完全弗氏佐劑(IFA)是尤其適用的佐劑。所屬領(lǐng)域中熟知多種適當(dāng)?shù)淖魟┎⒂衫鏦arren和Chedid，CRCCriticalReviewsinImmunology8:83(1988)綜述。本文中所使用的"AIDS"指HIV感染的癥狀期，并包括獲得性免疫缺陷綜合癥(通常稱為AIDS)和"ARC"或AIDS相關(guān)的綜合癥，如Adler,Brit.Med.J.294:1145(1987)所述。AIDS的免疫學(xué)和臨床表現(xiàn)在所屬領(lǐng)域中熟知且包括例如機(jī)會(huì)性感染和由免疫缺陷導(dǎo)致的癌癥。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"抑制AIDS"指免疫原性組合物關(guān)于HIV感染或AIDS癥狀的有益預(yù)防或治療效應(yīng)。所述有益效應(yīng)包括例如預(yù)防或延緩暴露于HIV的個(gè)體的最初感染；在被HIV感染的個(gè)體中減少病毒負(fù)荷；延長(zhǎng)HIV感染的無(wú)癥狀階段；在病毒含量已經(jīng)由抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(ART)降低的HIV感染患者中維持低病毒負(fù)荷；在未接受藥物治療的患者和用ART治療的患者中，HIV-1特異性和非特異性地增加CD4T細(xì)胞含量或減輕CD4T細(xì)胞的減少；增加患AIDS個(gè)體的整體健康或生存質(zhì)量；并延長(zhǎng)患AIDS個(gè)體的預(yù)期壽命。臨床醫(yī)師可將免疫效應(yīng)與治療前的患者情況相比，或與未治療患者的預(yù)期情況相比，以確定所述治療是否有效抑制AIDS。本文中所使用的關(guān)于免疫反應(yīng)的術(shù)語(yǔ)"增強(qiáng)"用以意謂免疫原性組合物比含有單獨(dú)的HIV抗原的組合物引起更大的免疫反應(yīng)。在免疫原性組合物含有三種組份HIV抗原、免疫體和佐劑的情況下，以相同量投予并依照相同的免疫進(jìn)程，免疫原性組合物比含有免疫原性組合物的三種組份中的任何兩種的組合物引起更大的免疫反應(yīng)。本發(fā)明的免疫原性組合物的組份可協(xié)同作用。增強(qiáng)的免疫反應(yīng)可為例如促進(jìn)記憶細(xì)胞的趨化因子和/或細(xì)胞激素的產(chǎn)生增加、記憶細(xì)胞增加、IgG2b產(chǎn)生增加、細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞活性增加、P-趨化因子或IL15產(chǎn)生增加及其類似反應(yīng)。增強(qiáng)的免疫反應(yīng)的實(shí)例為本發(fā)明的免疫原性組合物可通過(guò)CD4細(xì)胞(輔助功能)和CD8細(xì)胞(細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞；CTL)增加Y-干擾素的產(chǎn)生。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"(3-趨化因子"指一類小的、趨化性多肽的成員，其包括RANTES、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-l卩(MIP-1(3)和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-la(MIP-lcO。(3-趨化因子的物理和功能性質(zhì)在所屬領(lǐng)域?yàn)槿怂熘Ｔ?3-趨化因子產(chǎn)生增強(qiáng)的情況下，P-趨化因子產(chǎn)生可為"HIV-特異性p-趨化因子產(chǎn)生"，其指(3-趨化因子響應(yīng)HIV抗原刺激T細(xì)胞而產(chǎn)生。或者或另外，增強(qiáng)的(3-趨化因子產(chǎn)生可為"非特異性P-趨化因子產(chǎn)生"，其指(3-趨化因子在缺乏HIV抗原刺激T細(xì)胞的情況下產(chǎn)生。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"試劑盒"指將組份包裝并標(biāo)記以用于一起使用。例如，試劑盒可含有在三個(gè)獨(dú)立容器中的HIV抗原、免疫體和佐劑?；蛘?，試劑盒可含有在一個(gè)容器中的任何兩種組份，并且第三組份和任何額外組份在一個(gè)或一個(gè)以上的獨(dú)立容器中。試劑盒可視情況進(jìn)一步含有用于將組份組合以調(diào)配適于投予哺乳動(dòng)物的免疫原性組合物的說(shuō)明書。本發(fā)明提供含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的免疫原性組合物。所述免疫原性組合物增強(qiáng)經(jīng)投予組合物的哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施例中，免疫原性組合物增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)。在另一個(gè)實(shí)施例中，免疫原性組合物增強(qiáng)HIV-特異性CD4+輔助T細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施例中，免疫原性組合物中的HIV抗原為全滅活HIV病毒，其可通過(guò)所屬領(lǐng)域中已知的方法來(lái)制備。例如，HIV病毒可通過(guò)從感染個(gè)體的周圍血液樣本培養(yǎng)來(lái)制備。在培養(yǎng)HIV病毒的示范性方法中，來(lái)自周圍血液的單核細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞)可通過(guò)使肝素化靜脈血樣本在聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)密度梯度上分層并將樣本離心來(lái)獲得。接著收集單核細(xì)胞，用植物血球凝集素活化2至3天并在適當(dāng)培養(yǎng)基(優(yōu)選補(bǔ)充白細(xì)胞間介素2(IL2))中培養(yǎng)?？赏ㄟ^(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶檢定、通過(guò)p24抗原捕捉檢定、通過(guò)免疫熒光法或通過(guò)電子顯微術(shù)檢測(cè)病毒以檢測(cè)細(xì)胞中病毒粒子的存在，所有所述方法均為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。用于分離全滅活HIV粒子的方法描述于例如Richieri等人.Vaccine16:119-129(1998)和美國(guó)專利第5,661,023號(hào)和第5,256,767號(hào)中。在一個(gè)實(shí)施例中，HIV病毒為1976年扎伊爾的感染個(gè)體中分離的HZ321，其描述于Choi等人，AIDSRes.Hum.Retroviruses13:357-361(1997)中。用于使病毒成為非感染性的多種方法在所屬領(lǐng)域中已知(例如參見(jiàn)Hanson,MEDICALVIROLOGYII(1983),delaMaza禾QPeterson編輯，Elsevier)。例如，可通過(guò)用化學(xué)品處理或通過(guò)物理?xiàng)l件(諸如加熱或輻射)來(lái)使病毒失活。優(yōu)選用一種或一種以上維持病毒的免疫原性性質(zhì)的藥劑來(lái)處理病毒。例如，病毒可用(3-丙內(nèi)酯或Y-輻射、或P-丙內(nèi)酯和Y-輻射以足以使病毒失活的劑量和時(shí)間來(lái)處理。在另一個(gè)實(shí)施例中，免疫原性組合物中的HIV抗原為缺少外部包膜蛋白的全滅活HIV病毒，其可通過(guò)所屬領(lǐng)域中已知的方法來(lái)制備。為制備缺少外部包膜蛋白的全滅活病毒，處理經(jīng)分離的病毒以移除外部包膜蛋白。所述移除優(yōu)選通過(guò)結(jié)合造成病毒粒子膨脹和收縮的物理方法將病毒重復(fù)冷凍和解凍來(lái)完成，盡管其它物理或非物理方法(如超聲波處理法)也可單獨(dú)或組合使用。在另一實(shí)施例中，免疫原性組合物中的HIV抗原為HIV的一種或一種以上大體純化的基因產(chǎn)物。所述基因產(chǎn)物包括由gag基因編碼的產(chǎn)物(p55、p39、p24、p17和pl5)、由pol基因編碼的產(chǎn)物(p66/p51和p31-34)和跨膜糖蛋白gp41;和nef蛋白。這些基因產(chǎn)物可單獨(dú)使用或與其它HIV抗原組合使用。HIV抗原也可為引起免疫反應(yīng)的HIV基因產(chǎn)物的肽片段。HIV的大體純化的基因產(chǎn)物可為大體純化的HIVp24抗原或其它HIV抗原和基因產(chǎn)物。p24以及其它HIV抗原可通過(guò)所屬領(lǐng)域中巳知的生化方法從病毒中大體純化，或可通過(guò)由所屬領(lǐng)域中熟知的方法在宿主有機(jī)體(諸如細(xì)菌、真菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中克隆和表達(dá)適當(dāng)基因來(lái)產(chǎn)生?；蛘?，可使用所屬領(lǐng)域中熟知的方法(諸如自動(dòng)肽合成法)來(lái)合成p24抗原或其保持p24的免疫活性的修飾或片段以及其它HIV抗原或其修飾或片段。例如可通過(guò)其刺激先前免疫的PBMC活體外增殖的能力來(lái)確定p24的修飾或片段是否保持P24的免疫活性或其它病毒抗原是否保持其分別的免疫活性，其通過(guò)所屬領(lǐng)域中已知的常規(guī)的淋巴細(xì)胞增殖檢定(LPA)(參見(jiàn)實(shí)例III)、通過(guò)使哺乳動(dòng)物免疫并比較如此產(chǎn)生的免疫反應(yīng)、或測(cè)試修飾或片段與p24競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至p24抗體的能力或與其它HIV抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至其分別抗體的能力來(lái)分析。在另一實(shí)施例中，免疫原性組合物中的HIV抗原為蛋白酶缺失性HIV的大體上純化的基因產(chǎn)物(參見(jiàn)美國(guó)專利第6，328，976號(hào)和第6,557,296號(hào))。HIV-1的復(fù)制過(guò)程具有每5-10個(gè)堿基對(duì)中約l個(gè)堿基對(duì)的誤差率。由于整個(gè)病毒基因組剛好少于10,000個(gè)堿基對(duì)，所以這導(dǎo)致每個(gè)復(fù)制周期中約1個(gè)堿基對(duì)的誤差率。這一高突變率有助于任何一個(gè)人內(nèi)部的病毒的廣泛可變性和跨越種群的更廣闊的可變性。這一可變性已導(dǎo)致三種正在描述中的HIV-1變體和病毒的大約IO個(gè)亞種，稱為"分化枝"。這些區(qū)別是基于尤其可變的包膜蛋白的結(jié)構(gòu)。M(代表主要)變體是目前為止世界范圍內(nèi)最流行的變體。M變體內(nèi)為分化枝A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K，其中分化枝A到E代表全球絕大多數(shù)的感染。分化枝A、C和D在非洲占優(yōu)勢(shì)。分化枝B在歐洲、北美洲和南美洲和東南亞最流行。分化枝E和C在亞洲占優(yōu)勢(shì)。這些分化枝彼此有多達(dá)35%不同。HIV-1的極高突變率有兩個(gè)重要結(jié)果，其對(duì)流行病具有深遠(yuǎn)意義。第一，高突變率是使病毒避開(kāi)藥物治療控制的機(jī)制之一。這些新的病毒代表抗性株。髙突變率也使病毒通過(guò)改變由免疫組份識(shí)別的結(jié)構(gòu)來(lái)避開(kāi)患者免疫系統(tǒng)。這一廣泛可變性的附加結(jié)果在于病毒也可避開(kāi)疫苗的控制并且基于包膜蛋白的疫苗很可能無(wú)效。結(jié)構(gòu)上的最大變化見(jiàn)于包膜蛋白gpl20和gp41中。較少的變化見(jiàn)于多種內(nèi)部蛋白中。如本文所揭示，REMUNE為由全病毒制成的免疫原，其不具有全病毒的gpl20，但含有HIV-1病毒的大部分高度保守抗原表位。這些抗原決定部位的數(shù)目及其低突變率意味著缺少外部包膜蛋白的HIV病毒(如REMUNE)剌激在個(gè)體內(nèi)具有更高成功機(jī)會(huì)的免疫反應(yīng)。另外，HuT78細(xì)胞株有目的地經(jīng)含有保守抗原的分化枝A和G的極早期HIV病毒株感染，所述保守抗原已在世界范圍內(nèi)可見(jiàn)的大多數(shù)分化枝變體之間得以保持，并且這個(gè)HuT78HIV感染細(xì)胞株提供用作HIV抗原的病毒。因而，也缺少外部包膜蛋白的具有多個(gè)早期分化枝的HIV病毒用于免疫可通過(guò)提供被多數(shù)患者識(shí)別的保守抗原而在分化枝之間有效。HIV抗原和免疫體可一起混合，或可由共價(jià)連接或非共價(jià)連接來(lái)共軛。使抗原和核酸分子共軛的方法在所屬領(lǐng)域中已知，且示范性方法描述于PCT公開(kāi)案WO98/55495中。免疫體的寡核苷酸組份可使用所屬領(lǐng)域中熟知的方法來(lái)制備，包括例如寡核苷酸合成法、PCR、較大核酸分子的酶促或化學(xué)降解和常規(guī)的聚核苷酸分離程序。免疫體的寡核苷酸組份(包括含有一個(gè)或一個(gè)以上經(jīng)修飾堿基或連接的寡核苷酸)的生產(chǎn)方法描述于例如PCT公開(kāi)案WO98/55495中。通過(guò)用含有特定免疫體的組合物使相同物種或所屬領(lǐng)域中已知物種的哺乳動(dòng)物免疫來(lái)展示類似的免疫反應(yīng)，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易確定特定的免疫體是否有效增強(qiáng)特定哺乳動(dòng)物中的所需免疫反應(yīng)?？山又褂枚喾N所屬領(lǐng)域中已知的檢定來(lái)表征和比較所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)的特征。例如，供投予人類的包括于免疫原性組合物中的最優(yōu)化免疫體，其可藉通過(guò)例如LPA、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)和/或所產(chǎn)生的IgGl/G2抗體的比率的方法，來(lái)評(píng)估其在人類或非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物如狒狒、黑猩猩、獼猴或猴子中的免疫活性加以確認(rèn)。本發(fā)明的免疫原性組合物可進(jìn)一步含有佐劑，諸如經(jīng)證明對(duì)人類安全的佐劑。示范性佐劑為不完全弗氏佐劑(IFA)。另一個(gè)示范性佐劑含有分枝桿菌細(xì)胞壁組份和單磷酰基脂質(zhì)A，如市售佐劑DETOXtm。另一個(gè)示范性佐劑為明礬。免疫原性組合物中佐劑的制備和調(diào)配在所屬領(lǐng)域中為人所熟知。本發(fā)明的免疫原性組合物可視情況含有其它醫(yī)藥學(xué)上可接受的成份或與其它醫(yī)藥學(xué)上可接受的成份一起調(diào)配，所述成份包括無(wú)菌水或生理緩沖鹽水。醫(yī)藥學(xué)上可接受的成份可為用于例如穩(wěn)定、溶解、乳化、緩沖免疫原性組合物或維持其無(wú)菌性的任何化合物，其適宜投予哺乳動(dòng)物且不會(huì)使免疫原性組合物對(duì)其預(yù)期目的無(wú)效。所述成份及其用途在所屬領(lǐng)域中為人所熟知。本發(fā)明還提供含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的試劑盒。所述試劑盒的組份當(dāng)組合時(shí)產(chǎn)生增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)的免疫原性組合物。試劑盒的組份可活體外組合以產(chǎn)生含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的免疫原性組合物?；蛘?，任何兩種組份可活體外組合并與第三組份一起投予，以使得免疫原性組合物在活體內(nèi)形成。例如，可將HIV抗原乳化于佐劑中、溶解于佐劑中、與佐劑混合或吸附于佐劑并注射入哺乳動(dòng)物，在這之前或之后注射免疫體。同樣地，試劑盒的各組份可獨(dú)立投予。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解存在多種組合和投予HIV抗原、免疫體和可選佐劑以增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)的方法。如以下更詳細(xì)地論述，本發(fā)明的免疫原性組合物可通過(guò)所屬領(lǐng)域中熟知的方法局部或全身投予，包括(但不限于)肌內(nèi)、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)口或其它粘膜途徑。如本文所揭示，已發(fā)現(xiàn)盡管具有不同程度的效力和持續(xù)時(shí)間，但REMUNE在大多數(shù)患者中免疫原性(實(shí)例VIII)。因此，包含與IFA佐劑組合的缺少外部包膜蛋白的HIV(如REMUNE)的免疫原性組合物可用于誘導(dǎo)大多數(shù)HIV感染患者中的免疫反應(yīng)。本發(fā)明的免疫原性組合物增強(qiáng)對(duì)HIV免疫原(如REMUNETM)的免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和效力，由此增強(qiáng)疫苗的治療和/或預(yù)防功效。增強(qiáng)的免疫反應(yīng)可為例如HIV-1特異性CD4+輔助T細(xì)胞、趨化因子和/或細(xì)胞激素的產(chǎn)生增加；記憶細(xì)胞增加；整個(gè)抗體的產(chǎn)生增加且尤其是IgG2b產(chǎn)生比率增加；細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞活性增加；P-趨化因子或IL15的產(chǎn)生增加及其類似反應(yīng)。因而，本發(fā)明的免疫原性組合物可用于增強(qiáng)TH1細(xì)胞激素概況(高IFNy、高lgG2/IgGl比率)。如本文所揭示，本發(fā)明的免疫原性組合物的組份可協(xié)同作用。例如，本發(fā)明的免疫原性組合物可通過(guò)引起產(chǎn)生與添加免疫原性組合物組份的成對(duì)組合的效應(yīng)所預(yù)期的相比更高濃度的P-趨化因子來(lái)增強(qiáng)P-趨化因子產(chǎn)生。在感染的最初急性狀態(tài)之后維持長(zhǎng)期免疫性需要記憶細(xì)胞。在感染的最初急性階段之后的收縮期內(nèi)，大量的經(jīng)誘導(dǎo)以對(duì)抗感染因子的免疫細(xì)胞被細(xì)胞凋亡破壞，僅存活的細(xì)胞保持能夠變成記憶細(xì)胞。因此，保護(hù)HIV-特異性CD4和CD8T細(xì)胞免受細(xì)胞凋亡可促進(jìn)HIV-特異性CD4輔助細(xì)胞和CD8CTL記憶細(xì)胞的增加。本發(fā)明的免疫原性組合物可用于增加記憶細(xì)胞，由此促進(jìn)長(zhǎng)期的輔助功能和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性。本發(fā)明的免疫原性組合物可通過(guò)減少細(xì)胞凋亡或刺激促進(jìn)記憶細(xì)胞存活的因子來(lái)用于增加記憶細(xì)胞的數(shù)目。本發(fā)明的免疫原性組合物可用于將TH2反應(yīng)轉(zhuǎn)換為TH1反應(yīng)，由此增加細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，包括更強(qiáng)烈的CD8+反應(yīng)。因而，本發(fā)明的免疫原性組合物可用于加強(qiáng)患者中的免疫反應(yīng)并將反應(yīng)轉(zhuǎn)化為細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性，否則所述患者僅微弱地反應(yīng)。本發(fā)明的免疫原性組合物因而可用于增加患者中的免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間，所述患者已經(jīng)對(duì)與免疫原性組合物中所使用的HIV-抗原相似的HIV-抗原微弱地反應(yīng)。本發(fā)明的免疫原性組合物有效增強(qiáng)經(jīng)投予所述組合物的哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)，例如P-趨化因子和/或IL15、IFN、IL2、TNFa的產(chǎn)生增強(qiáng)；HIV-特異性CD4輔助細(xì)胞增加；IgG2b抗體的產(chǎn)生增加；HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞(CTL)產(chǎn)生增加；由CD4十細(xì)胞和CD8T細(xì)胞產(chǎn)生的INFY增加；及其類似反應(yīng)。如2000年5月5日申請(qǐng)的美國(guó)申請(qǐng)案第09/565,906號(hào)和WO00/67787(各自以引用的方式并入本文中)中及以下的實(shí)例I和m中所述，可使用來(lái)自經(jīng)投予組合物的哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞(如淋巴結(jié)細(xì)胞或周圍血液細(xì)胞)上清液的酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)檢定來(lái)檢測(cè)和定量P-趨化因子RANTES。為測(cè)定抗原-特異性P-趨化因子產(chǎn)生，可用與抗原呈現(xiàn)胸腺細(xì)胞組合的HIV抗原刺激來(lái)自經(jīng)免疫哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞，且在上清液中測(cè)量P-趨化因子的含量。為測(cè)定非特異性|3-趨化因子產(chǎn)生，可檢定來(lái)自經(jīng)免疫哺乳動(dòng)物的T細(xì)胞上清液或血液或血漿樣本。類似地，其它(3-趨化因子(如MIP-1(X和MIP-1(3)的產(chǎn)生可使用市售酶聯(lián)免疫吸附分析檢定根據(jù)廠商的說(shuō)明書來(lái)檢測(cè)和定量。通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法、酶聯(lián)免疫吸附分析或細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞激素染色來(lái)測(cè)量細(xì)胞激素(包括干擾素、IL15、IL2、TNFcuIL10和IL7)產(chǎn)生的方法為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知(例如參見(jiàn)Robbins等人，AIDS17:1121-1126(2003))。本發(fā)明的免疫原性組合物可進(jìn)一步能夠增強(qiáng)經(jīng)投予組合物的哺乳動(dòng)物中的HIV-特異性IgG2b抗體產(chǎn)生。與Thl型反應(yīng)相關(guān)的高含量的IgG2b抗體與預(yù)防HIV感染和向AIDS發(fā)展有關(guān)。因而，本發(fā)明提供可增加TH1反應(yīng)的組合物。本發(fā)明的免疫原性組合物可進(jìn)一步能夠增強(qiáng)經(jīng)投予組合物的哺乳動(dòng)物中的HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)。本發(fā)明的免疫原性組合物可通過(guò)匸04+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞來(lái)增加INF-y的產(chǎn)生。通過(guò)CD4+T細(xì)胞的INF-Y產(chǎn)生的特征是對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性重要的典型CD4輔助反應(yīng)。產(chǎn)生IFN和IL2的CD4+T細(xì)胞可能最有效。通過(guò)CD8+T細(xì)胞的INF-y產(chǎn)生代表細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)，并與細(xì)胞溶解活性高度相關(guān)。產(chǎn)生IFN和TNFa的細(xì)胞可能最有效。CTL活性為有效的預(yù)防性或治療性抗HIV免疫反應(yīng)的重要組份。確定CTL反應(yīng)是否在投予本發(fā)明的免疫原性組合物之后得到增強(qiáng)的方法在所屬領(lǐng)域中熟知，并包括細(xì)胞溶解檢定和LPA檢定(例如描述于Deml等人，上文(1999);參見(jiàn)實(shí)例III)、用于CD8-特異性INF-Y產(chǎn)生的酶聯(lián)免疫吸附分析和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定(參見(jiàn)美國(guó)申請(qǐng)案第09/565,卯6號(hào)和WO00/67787和以下實(shí)例I和11)、細(xì)胞內(nèi)染色和使用許多對(duì)抗細(xì)胞表面標(biāo)記物的抗體的FACS分析。本發(fā)明還提供使個(gè)體免疫的方法。所述方法是由通過(guò)投予哺乳動(dòng)物含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的免疫原性組合物來(lái)增強(qiáng)個(gè)體中的免疫反應(yīng)而組成。免疫原性組合物的組份可以任何順序或組合投予，以使得活體外或活體內(nèi)形成免疫原性組合物。在特定實(shí)施例中，HIV抗原、免疫體和可選佐劑在大約相同的位點(diǎn)同時(shí)投予或在大約相同的時(shí)間投予。然而，在若干分鐘或若干小時(shí)內(nèi)各自投予組份也可有效地提供增強(qiáng)免疫反應(yīng)的免疫原性組合物。另外，在哺乳動(dòng)物中的不同位點(diǎn)投予組份也可有效地提供增強(qiáng)免疫反應(yīng)的免疫原性組合物。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易確定合適的時(shí)間和位置以獨(dú)立投予組份(即HIV抗原、免疫體和可選佐劑組份)，從而通過(guò)在不同時(shí)間和位置投予獨(dú)立組份并測(cè)量免疫反應(yīng)來(lái)提供充足的免疫反應(yīng)。需要時(shí)，免疫原性組合物也可多次投予，例如2次或2次以上、3次或3次以上、4次或4次以上、5次或5次以上、6次或6次以上、7次或7次以上、8次或8次以上、9次或9次以上、10次或10次以上或任何需要的次數(shù)以剌激或增強(qiáng)HIV-特異性免疫反應(yīng)。本發(fā)明的免疫原性組合物可投予人類以抑制AIDS，諸如通過(guò)預(yù)防暴露于HIV的個(gè)體的最初感染、減少被HIV感染的個(gè)體的病毒負(fù)荷、延長(zhǎng)HIV感染的無(wú)癥狀階段、增加患AIDS個(gè)體中的整體健康或生存質(zhì)量或延長(zhǎng)患AIDS個(gè)體的預(yù)期壽命。如本文所揭示，投予哺乳動(dòng)物含有HIV抗原、含有免疫體的經(jīng)分離核酸分子和可選佐劑的免疫原性組合物可刺激與預(yù)防HIV感染和向AIDS發(fā)展有關(guān)的免疫反應(yīng)。詳言之，免疫原性組合物比含有HIV抗原、免疫體和佐劑的三組份組合物中的任何個(gè)別組份的組合或免疫原性組合物的任何兩個(gè)組份的組合所預(yù)期的更有效地增強(qiáng)免疫反應(yīng)。另外，免疫原性組合物促進(jìn)強(qiáng)烈的Thl型免疫反應(yīng)，包括Thl型細(xì)胞激素(例如IFN-y)和Thl型抗體同種型(例如IgG2b)。因而，本發(fā)明的免疫原性組合物當(dāng)投予血清反應(yīng)陰性個(gè)體時(shí)將有效地作為疫苗以預(yù)防HIV感染，并將有效地作為疫苗以減少血清反應(yīng)陽(yáng)性個(gè)體的病毒負(fù)荷、延長(zhǎng)感染的無(wú)癥狀階段并積極影響健康或壽命。已經(jīng)暴露于HIV病毒的個(gè)體通常在其對(duì)于HIV特異的血清特定抗體中表達(dá)。所述個(gè)體稱為HIV的"血清反應(yīng)陽(yáng)性"，與"血清反應(yīng)陰性"的個(gè)體形成對(duì)比。HIV特異性抗體的存在可通過(guò)市售檢定系統(tǒng)來(lái)確定。目前，檢測(cè)病毒抗體存在的血清學(xué)測(cè)試為確定感染的最廣泛使用的方法。然而，當(dāng)個(gè)體已經(jīng)感染病毒但尚未發(fā)動(dòng)免疫反應(yīng)時(shí)，所述方法可導(dǎo)致假陰性；并且當(dāng)胎兒可能獲得抗體而不是來(lái)自母親的病毒時(shí)，所述方法可導(dǎo)致假陽(yáng)性。當(dāng)血清學(xué)測(cè)試提供對(duì)感染的指示時(shí)，可能必需認(rèn)為所有測(cè)試為血清反應(yīng)陽(yáng)性的個(gè)體實(shí)際上正被感染。另外，如果滿足某些其它感染指示(諸如與已知載劑接觸)，則某些發(fā)現(xiàn)是血清反應(yīng)陰性的個(gè)體實(shí)際上應(yīng)作為正被感染而進(jìn)行治療。本發(fā)明的免疫原性組合物可投予HIV血清反應(yīng)陰性或血清反應(yīng)陽(yáng)性的個(gè)體。在血清反應(yīng)陽(yáng)性的個(gè)體中，可能需要將組合物作為治療方案的一部分來(lái)投予，所述治療方案包括用諸如蛋白酶抑制劑的抗病毒劑治療?？共《緞┘捌湓谥委煼桨钢械氖褂迷谒鶎兕I(lǐng)域中為人所熟知，并且用于特定個(gè)體的適當(dāng)方案可由熟練的臨床醫(yī)師來(lái)確定。如美國(guó)申請(qǐng)案第09/565,906號(hào)和WO00/67787中所述及本文和以下實(shí)例IV中所揭示，將本發(fā)明的免疫原性組合物投予靈長(zhǎng)類胎兒或投予靈長(zhǎng)類新生兒可導(dǎo)致產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗HIV免疫反應(yīng)，指示胎兒和嬰兒的免疫系統(tǒng)能夠發(fā)動(dòng)對(duì)保護(hù)兒童免受HIV感染或免于向AIDS發(fā)展的所述組合物的免疫反應(yīng)。因此，本發(fā)明的免疫原性組合物可投予被HIV感染的孕期母親以預(yù)防HIV向胎兒傳播，或作為預(yù)防性或治療性疫苗投予胎兒、嬰兒、兒童或成人。選擇本發(fā)明的方法中待投予的免疫原性組合物或其組份的劑量以使其有效刺激所需的免疫反應(yīng)。用于單次投予而調(diào)配的免疫原性組合物一般含有介于約1到200)ag之間的蛋白抗原。用于投予靈長(zhǎng)類(如人類)的免疫原性組合物一般含有約lOOiig蛋白抗原。如美國(guó)申請(qǐng)案第09/565,906號(hào)和WO00/67787中所述及本文所揭示和以下實(shí)例IV所顯示，免疫原性組合物中的約100)jgHIV抗原引起靈長(zhǎng)類動(dòng)物中的強(qiáng)烈免疫反應(yīng)。約10HIV抗原適于投予嚙齒動(dòng)物。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易確定本發(fā)明的免疫原性組合物中待包括的足以刺激免疫反應(yīng)的HIV抗原的合適量。本發(fā)明的免疫原性組合物可進(jìn)一步含有約5pg到約100)ig免疫體并且需要時(shí)，可含有多達(dá)10mg免疫體。例如在用于投予人類的劑量中，所述劑量可為約0.01mg到約5mg，例如約0.05mg、約0.1mg、約0.2mg、約0.3mg、約0.4mg、約0.5mg、約0.6mg、約0.7mg、約0.8mg、約0.9mg、約1mg、約1.1mg、約1.2mg、約1.3mg、約1.4mg、約1.5mg、約1.7mg或約2mg。待投予的免疫體的量一般為約0.1mg/kg到約0.25mg/kg到多達(dá)約5mg/kg并可為例如約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1、約1.2、約1.5、約1.7、約2、約2.5、約3、約3.5、約4、約4.5或約5mg/kg。免疫體的量也可為約0.2ng/kg、約0.5ng/kg、約1pg/kg、約2pg/kg、約3iag/kg、約4^g/kg、約5^g/kg、約6ng/kg、約7^ig/kg、約8pg/kg、約9pg/kg、約10lag/kg、約11lag/kg、約12pg/kg、約13lig/kg、約14lig/kg、約15ng/kg、約16pg/kg、約17ng/kg、約18|jg/kg、約19ng/kg、約20ng/kg、約22|ig/kg、約25pg/kg及其類似量。如先前美國(guó)申請(qǐng)案第09/565,906號(hào)和WO00/67787中所述，核酸分子與HIV抗原的至少5:1的重量比率比較低的比率更有效地引起免疫反應(yīng)。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易確定用于引起免疫反應(yīng)的免疫體與HIV抗原的適當(dāng)或最優(yōu)化比率。例如，可變化比率并且可通過(guò)本文所揭示的方法測(cè)量免疫反應(yīng)，以確定免疫體與HIV抗原的適當(dāng)或最優(yōu)化比率。嚙齒動(dòng)物中，免疫原性組合物中免疫體的有效量為5ng到大于50pg，如約100pg。靈長(zhǎng)類動(dòng)物中，約500|ig的免疫體適用于免疫原性組合物中。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可輕易確定引起所需免疫反應(yīng)的免疫體的適當(dāng)量。對(duì)于所有的免疫原性組合物，免疫學(xué)有效量是經(jīng)驗(yàn)確定的，但可基于例如動(dòng)物模型(如嚙齒動(dòng)物和非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物)的免疫學(xué)有效量。應(yīng)考慮的因素包括抗原性、配方(例如體積、佐劑類型)、投予途徑、待投予的免疫劑量數(shù)目、個(gè)體的身體情況、體重和年齡及其類似因素。所述因素在疫苗領(lǐng)域?yàn)槿怂熘槊庖邔W(xué)家所熟知以進(jìn)行所述確定而無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明的免疫原性組合物可通過(guò)所屬領(lǐng)域中已知的任何方法局部或全身投予，包括(但不限于)肌內(nèi)、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)口或其它粘膜途徑。免疫原性組合物可在合適的、無(wú)毒的醫(yī)藥載劑中投予或可調(diào)配于微膠囊中或調(diào)配為持續(xù)釋放植入物。需要時(shí)，本發(fā)明的免疫原性組合物可多次投予以持續(xù)所需的免疫反應(yīng)。適當(dāng)途徑、調(diào)配物和免疫進(jìn)程可通過(guò)所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)確定。應(yīng)了解，大體上不影響本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施例的功能的修改也包括在本文所提供的本發(fā)明的定義內(nèi)。因此，以下實(shí)例意在說(shuō)明本發(fā)明而并非對(duì)其進(jìn)行限制。由mv免疫原性組合物引起細(xì)胞激素、抗體和趨化因子反應(yīng)設(shè)計(jì)這一實(shí)例以顯示含有HIV抗原、免疫體和佐劑的免疫原性組合物為哺乳動(dòng)物中的IFN-Y產(chǎn)生(TM(CD8)和Th2(CD4輔助細(xì)胞)細(xì)胞激素)、抗體反應(yīng)和P-趨化因子產(chǎn)生的有效刺激劑。因此，含有HIV抗原、免疫體和佐劑的免疫原性組合物介導(dǎo)有效的免疫反應(yīng)，從而指示這些組合物是有效的預(yù)防性和治療性疫苗，所述免疫反應(yīng)是在保護(hù)個(gè)體免受HIV感染和疾病發(fā)展中起重要作用的類型。免疫體。免疫體如先前所述而合成(Kandimalla等人，Bioorg.Med.Chem.9:807-813(2001);Yu等人，Nucl.AcidsRes.30:4460-4469(2002);Yu等人，Bioorg.Med.Chem.11:459-464(2003);Bhagat等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.300:853-861(2003);和Yu等人，Biochem.Biophvs.Res.Comm.297:83-90(2002);Yu等人，Nucl.AcidsRes.30:1613-1619(2002);Yu等人，J.Med.Chem.45:4540-4548(2002);Kandimalla等人,Bio—ugateChem.13:966-974(2002);Yu等人，BioorganicMed.Chem.Lett.10:2585-2588(2000);Agrawal和Kandimalla,TrendsMol.Med.8:114-121(2002))。免疫。HIV-1抗原基本上如先前所述(WO00/67787)來(lái)制備。簡(jiǎn)而言之，HIV-1抗原是由經(jīng)扎伊爾病毒分離體(HZ321)慢性感染的Hut78的培養(yǎng)物中所獲得的病毒粒子來(lái)制備，所述扎伊爾病毒分離體的特征是含有erwA/gagG重組病毒的亞型"M"(Choi等人，AIDSRes.Hum.Retroviruses13:357-361(1997))。gpl20在兩步驟的純化過(guò)程中去除。通過(guò)添加(3-丙內(nèi)酯和50kGy下的Y輻射來(lái)使抗原失活。使用西方墨點(diǎn)法和HPLC分析來(lái)顯示在這個(gè)抗原的制備中不可檢測(cè)含量的gP120(Prior等人，Pharm.Tech.19:30-52(1995))。對(duì)于活體外實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選用2%曲拉通(triton)X-100使天然p24從純化的HIV-1抗原中細(xì)胞溶解并接著用PharmaciaSepharoseTM快速流動(dòng)S樹脂(PharmaciaSepharoseFastFlowSresin)純化。在pH=5.0下進(jìn)行色譜分離并用線性鹽梯度洗提p24通過(guò)SDS(十二烷基硫酸鈉)電泳和反相高壓液相色譜法評(píng)估最終產(chǎn)物的純度并發(fā)現(xiàn)一般是大于99%。以最終體積的至少5%的體積將免疫體添加到稀釋的HIV-1抗原中。CFA(完全弗氏佐劑)通過(guò)將結(jié)核分枝桿菌H37RA(DIFCO,Detroit,Michigan)以10mg/ml再懸浮于IFA(DIFCO,Detroit,Michigan)中來(lái)制備。IFA或ISA51⑧通過(guò)將1份界面活性劑Montanide80(高純度二縮甘露醇單油酸酯，Seppie，Paris)添加到9份Drakeol6VR輕質(zhì)礦物油(Panreco,KarnesCity,Pennsylvania)中來(lái)調(diào)配。在PBS中將去除gpl20的HIV-1抗原稀釋到200pg/ml并與相同體積的含有或不含免疫體的CFA或IFA乳化。將保持在無(wú)病原體設(shè)施中的C57B1小鼠用100)al乳液皮內(nèi)注射。每個(gè)動(dòng)物接受CFA、IFA、10-100iig免疫體中或IFA加10-100免疫體中的1-10|ig失活HIV-1抗原。兩周之后，使用相同的方案在尾根處使動(dòng)物皮下促升，除了將用CFA中的HIV-1抗原使動(dòng)物引發(fā)改為用IFA中的HIV-1抗原促升。在免疫體的存在下用HIV-1抗原使小鼠引發(fā)并促升。可對(duì)陰性對(duì)照投予鹽水或鹽水中的IFA。在第28天，處死動(dòng)物以用于細(xì)胞激素、趨化因子和抗體分析。用于抗原-特異性抗體的酶聯(lián)免疫吸附分析。通過(guò)在研究末期的心臟穿刺從免疫動(dòng)物收集全血。在800rpm下離心SST管20分鐘。將血清等分并儲(chǔ)存于-20。C下直至檢定。用稀釋于PBS中的天然p24以1pg/ml涂布PVC板(多氯化聯(lián)苯板，F(xiàn)alcon,Oxnard,California)并將板于4'C下儲(chǔ)存隔夜。通過(guò)在每孔中添加200pi的PBS中的4%BSA來(lái)阻斷板1小時(shí)。將血清以1:100稀釋于PBS中的1%BSA中，接著4倍連續(xù)稀釋。一式兩份添加100nl稀釋的血清并在室溫下培育2小時(shí)。用PBS中的0.05%吐溫(Tween)20清洗板3次并將板吸干。將檢測(cè)的第二抗體(例如山羊或大鼠抗小鼠IgG生物素、山羊或大鼠抗小鼠IgGl生物素或山羊或大鼠抗小鼠IgG2a生物素，例如Zymed，SanFrancisco,California)稀釋于PBS中的1%BSA中。將100|al稀釋的第二抗體添加到各孔中并又在室溫下培育l小時(shí)。在清洗過(guò)量第二抗體之后，在每孔中添加50|^1鏈霉素-抗生物素蛋白-生物素-HRP(Pierce,Rockford，Illinois)并培育30分鐘。用PBS中的0.05%吐溫20清洗板3次。添加ABTS基質(zhì)(KPL,Gaithersburg,Maryland)直至出現(xiàn)泛藍(lán)色-綠色。通過(guò)添加1%SDS中止反應(yīng)并在405nm下讀取板的吸收度。對(duì)于每個(gè)給出的樣本，報(bào)導(dǎo)為50%抗體滴度的抗體反應(yīng)是等于50%最大結(jié)合(最高光學(xué)讀數(shù))的稀釋度的倒數(shù)。吸收度值(OD@405nm)對(duì)對(duì)數(shù)分度的抗體稀釋度作圖，得到s形劑量響應(yīng)曲線。50%最大結(jié)合通過(guò)用0.5乘以最高OD來(lái)計(jì)算。50%的值位于曲線上并且相應(yīng)的x軸值被報(bào)導(dǎo)為抗體稀釋度。用于細(xì)胞激素和趨化因子分析的酶聯(lián)免疫吸附分析檢定。促升后兩周，將引流淋巴結(jié)(腹股溝淺淋巴結(jié)和胭淋巴結(jié))從免疫動(dòng)物中分離。通過(guò)使用無(wú)菌70jim目篩機(jī)械分離來(lái)制備來(lái)自這些淋巴結(jié)的單細(xì)胞懸浮液。通過(guò)淘洗法將T細(xì)胞從淋巴結(jié)細(xì)胞純化。簡(jiǎn)而言之，在室溫下用20ng/ml的兔抗小鼠IgG預(yù)涂布培養(yǎng)皿(petridish)(100x15mm)45分鐘。用冰冷的PBS清洗培養(yǎng)皿2次并用冰冷的PBS中的2%人類AB血清清洗1次。將lxl(^個(gè)淋巴結(jié)細(xì)胞添加到預(yù)清洗的板上并在4'C下培育90分鐘。接著收集非粘附細(xì)胞(富集T細(xì)胞)并將其轉(zhuǎn)移到無(wú)菌50ml圓錐管中。將板清洗2次并與非粘附細(xì)胞組合。接著離心細(xì)胞并將細(xì)胞離心塊以4xl0e個(gè)細(xì)胞/ml再懸浮于完全培養(yǎng)基(RPMI1640中的5%人類AB血清，具有25mMhepes、2mML-谷氨酰胺、100)jg鏈霉素和5xl(T6M(3-巰基乙醇)中。來(lái)自C57BL小鼠的y輻射的胸腺細(xì)胞用作抗原呈現(xiàn)細(xì)胞。將2xl()S個(gè)富集T細(xì)胞和5><105個(gè)胸腺細(xì)胞添加到96孔圓底板的各孔中。HIV-1抗原和天然p24在完全培養(yǎng)基中稀釋到10|ag/ml，而conA稀釋到5pg/ml。將100pi的各抗原或T細(xì)胞有絲分裂原一式三份添加。在5%C02、37。C下培育板72小時(shí)。收集上清液并在-7(TC下儲(chǔ)存直至檢定。使用對(duì)小鼠細(xì)胞激素和趨化因子特異的市售試劑盒(例如Biosource,Camarillo,California)對(duì)樣本檢定IL-4、IFN-y和RANTES。統(tǒng)計(jì)方法。利用曼-惠特尼(Mann-Whitney)U非參數(shù)統(tǒng)計(jì)比較各組。所有p值均為雙尾。完全弗氏佐劑(CFA)當(dāng)前為已知用于刺激細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的最有效佐劑。然而，由于安全問(wèn)題，CFA不是用于人類的適當(dāng)佐劑。因而，用于HIV免疫原性組合物中的免疫體與IFA的組合提供用于人類治療的安全和有效疫苗。為檢驗(yàn)對(duì)IFN-Y的劑量相關(guān)的免疫反應(yīng)，用乳化于含有不同濃度免疫體的IFA中的去除gpl20的失活HIV-1抗原使C57BL小鼠免疫。為檢驗(yàn)是否也能促升抗體對(duì)HIV-1抗原的抗體反應(yīng)，檢定血清的總IgG和Th2同種型(IgGl和IgG2a)抗體對(duì)p24抗原的反應(yīng)。因而，本發(fā)明的免疫原性組合物可用于增強(qiáng)個(gè)體中的P-趨化因子的產(chǎn)生。由于P-趨化因子含量與預(yù)防HIV感染和疾病發(fā)展的強(qiáng)烈相關(guān)性，本發(fā)明的組合物將比其它所述的用于抑制AIDS的組合物更有效。實(shí)例n通過(guò)HIV免疫原性組合物引起CD4和CD8免疫反應(yīng)設(shè)計(jì)這一實(shí)例以顯示在用含有HIV抗原、免疫體和佐劑的免疫原性組合物免疫之后，誘導(dǎo)有效的CD4輔助功能、CD8HIV-特異性Thl型免疫反應(yīng)和向更高的IgG2a/IgGl抗體比率轉(zhuǎn)換。通過(guò)CD8+、細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞引起的抗原特異性反應(yīng)是預(yù)防最初HIV感染和疾病發(fā)展中的重要因素。因而，這一實(shí)例提供本發(fā)明的免疫原性組合物為有效的預(yù)防性和治療性疫苗的進(jìn)一步證據(jù)。HIV抗原、免疫體和IFA基本上如實(shí)例I中所述來(lái)制備。C57BL小鼠基本上如實(shí)例I中所述來(lái)免疫并在第28天處死以用于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法和p24抗體分析。p24抗體分析基本上如實(shí)例I中所述來(lái)進(jìn)行。用于來(lái)自大塊的和純化的T細(xì)胞群體的y-干擾素的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法。通過(guò)在RPMI1640(Hyclone，Logan,Utah)中將脾切碎并擠壓通過(guò)無(wú)菌細(xì)目尼龍篩從免疫小鼠的脾制備單細(xì)胞懸浮液。通過(guò)聚蔗糖梯度離心來(lái)純化脾細(xì)胞。通過(guò)磁珠去除來(lái)分離CD4和CD8細(xì)胞。用5|ig兔或大鼠抗小鼠CD4或兔或大鼠抗小鼠CD8將2xl07個(gè)細(xì)胞染色。在冰上培育細(xì)胞30分鐘并用冰冷的PBS中的2%人類AB血清清洗。將預(yù)清洗的涂布有山羊抗小鼠IgG的Dynabeads(DYNAL,Oslo,Norway)添加到細(xì)胞懸浮液中并在恒定攪拌下于4'c下培育20分鐘。將純化的CD4、CD8和未去除的脾細(xì)胞以5xl06個(gè)細(xì)胞/ml再懸浮于完全培養(yǎng)基(RPMI1640中的5呢失活人類AB血清，具有青霉素-鏈霉素(Pen-strep)、L-谷氨酰胺和P-ME)中并用于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定以計(jì)數(shù)個(gè)別的分泌IFN-y的細(xì)胞。簡(jiǎn)而言之，以每孔400ng兔抗小鼠IFN-y(Biosource，Camarillo,California)涂布96孔硝化纖維素底微滴定板(MilliporeCo.，Bedford,U.K.)。在4。C下培育隔夜之后，在室溫下用無(wú)菌PBS清洗板并將板用RPMI1640(含有青霉素-鏈霉素、L-谷氨酰胺和p-ME)中的5%人類AB血清阻斷1小時(shí)。用無(wú)菌PBS清洗板并一式三份每孔添加5><105個(gè)脾細(xì)胞(純化的CD4、純化的CD8或未去除的脾細(xì)胞)，并在37'c和5%C02下培育隔夜。將細(xì)胞與培養(yǎng)基、OVA(雞蛋卵清蛋白，Sigma-Aldrich,St.Louis,Missouri)、天然p24或去除gpl20的HIV-1抗原一起培養(yǎng)。經(jīng)純化CD4和經(jīng)純化CD8的脾細(xì)胞在含有每毫升20單位重組大鼠IL-2(Pharmingen,SanDiego，CA)的完全培養(yǎng)基中進(jìn)行檢定。清洗未結(jié)合細(xì)胞后，每孔添加400ng多克隆兔抗小鼠IFN-y并在室溫下培育2小時(shí)，接著清洗并用山羊抗兔IgG生物素(Zymed,SanFrancisco,California)染色。在用無(wú)菌PBS廣泛清洗后，添加抗生物素蛋白堿性磷酸酶復(fù)合物(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)并又在室溫下培育l小時(shí)。通過(guò)添加產(chǎn)色堿性磷酸鹽基質(zhì)(Sigma,St.Louis,MO)顯影斑點(diǎn)并使用具有高光3000光源的解剖顯微鏡(40倍)(Olympus,LakeSuccess,NY)對(duì)IFN，細(xì)胞計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)方法。利用曼-惠特尼U非參數(shù)統(tǒng)計(jì)比較各組。進(jìn)行斯皮爾曼(Spearman)等級(jí)相關(guān)以檢驗(yàn)CD4與CDSY干擾素產(chǎn)生之間的關(guān)系。所有p值均為雙尾。檢驗(yàn)通過(guò)未去除的脾細(xì)胞引起的IFN-y產(chǎn)生和通過(guò)純化的CD4+或純化的CD8+群體引起的IFN-7產(chǎn)生。通過(guò)CD4+細(xì)胞引起的IFN-y產(chǎn)生為特征性Thl免疫反應(yīng)，而通過(guò)CD8+細(xì)胞引起的IFN-y產(chǎn)生與細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞(CTL).的細(xì)胞溶解活性相關(guān)。還檢測(cè)對(duì)p24特異的總IgG、IgGl和IgG2b?？傊?，這一實(shí)例顯示含有HIV抗原、免疫體和佐劑的免疫原性組合物可用于產(chǎn)生有效的HIV-特異性CD4和CD8HIV-特異性免疫反應(yīng)。CD4T輔助細(xì)胞的誘導(dǎo)對(duì)于CD8效應(yīng)細(xì)胞的產(chǎn)生可能是關(guān)鍵性的。CD8T細(xì)胞可通過(guò)若干機(jī)帝lj(包括直接細(xì)胞溶解(CTL)活性)以及通過(guò)釋放抗病毒抑制因子(如P-趨化因子)及其它較不明確的因子而作為對(duì)抗HIV病毒的效應(yīng)細(xì)胞。因此，本文所述的組合物優(yōu)于其它用作HIV疫苗的所述組合物。實(shí)例hi比較由不同免疫原性組合物和免疫進(jìn)程引起的免疫反應(yīng)設(shè)計(jì)這一實(shí)例以顯示含有免疫體的核酸當(dāng)與HIV抗原和佐劑同時(shí)投予時(shí)，比當(dāng)用于在投予HIV抗原和佐劑之前一周使哺乳動(dòng)物引發(fā)時(shí)更有效地引起保護(hù)性免疫反應(yīng)，包括RANTES產(chǎn)生和HIV-特異性IgG2b抗體產(chǎn)生。這一實(shí)例也顯示含有HIV抗原、免疫體和佐劑的組合物比僅含有HIV和IFA的組合物更有效地促進(jìn)抗原依賴性淋巴細(xì)胞增殖。HIV抗原、免疫體和IFA基本上如實(shí)例I中所述來(lái)制備。使C57bBL小鼠(每組至少3只)在第7天免疫并如指示在第0天用表1中所示的以下組合物來(lái)引發(fā)小鼠。表1組第0天第7天A免疫體HIV-1BHIV-1C免疫體HIV-1/IFADHIV-1/IFAEHIV-1/IFA/免疫體在第21天處死動(dòng)物并基本上如實(shí)例I所述用于細(xì)胞激素、趨化因子和抗體分析，以及用于淋巴細(xì)胞增殖的分析。淋巴細(xì)胞增殖分析。由免疫動(dòng)物的引流淋巴結(jié)制備單細(xì)胞懸浮液。通過(guò)淘洗法從淋巴結(jié)細(xì)胞中去除B細(xì)胞。簡(jiǎn)而言之，用抗小鼠IgG預(yù)涂布的培養(yǎng)皿培育淋巴結(jié)細(xì)胞90分鐘。收集非粘附細(xì)胞(富集T細(xì)胞)并將其以4xl0e個(gè)細(xì)胞/ml再懸浮于完全組織培養(yǎng)基中。用p24或HIV-l抗原在Y-輻射的胸腺細(xì)胞存在下于37'C、5%(:02下培養(yǎng)富集T細(xì)胞40-48小時(shí)。用氳化胸腺嘧啶脈沖樣本并又培育16小時(shí)。收集細(xì)胞并使用J3-閃爍計(jì)數(shù)器對(duì)并入的氚化胸腺嘧啶計(jì)數(shù)。使用所屬領(lǐng)域中熟知的方法測(cè)定T細(xì)胞中細(xì)胞激素的產(chǎn)生，例如IFN-y和(3-趨化因子(如RANTES、MIP-lp和MIP-la)。也檢驗(yàn)對(duì)p24特異的總IgG、IgGl和IgG2b的血清含量。另外，檢驗(yàn)對(duì)p24抗原和去除pgl20的HIV的T細(xì)胞增殖反應(yīng)。因而，本發(fā)明的免疫原性組合物可有效地引起HIV-特異性Thl細(xì)胞激素(IFN-Y)和體液反應(yīng)(IgG2抗體)，并可增強(qiáng)非特異性和HIV-特異性P-趨化因子產(chǎn)生。對(duì)免疫原性組合物的這些反應(yīng)與強(qiáng)烈的HIV-特異性T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)相關(guān)。實(shí)例IV用mv免疫原性組合物兔疫靈長(zhǎng)類動(dòng)物設(shè)計(jì)這一實(shí)例以顯示含有HIV抗原、免疫體和佐劑的免疫原性組合物可有效增強(qiáng)靈長(zhǎng)類動(dòng)物中的HIV-特異性免疫反應(yīng)。將含有IFA中的去除gpl20的HIV-l(lOOpg總蛋白，等于10個(gè)p24單位)與500lig免疫體的免疫原性組合物子宮內(nèi)注入3只狒狒胎兒中。四周后，使用相同方案促升胎兒。收集新生狒狒的周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞并檢定對(duì)p24和HIV-1抗原的增殖反應(yīng)。也在相同的狒狒中測(cè)量HIV-特異性抗體、細(xì)胞激素和P-趨化因子的產(chǎn)生。這些結(jié)果顯示在靈長(zhǎng)類動(dòng)物中也引起由以上實(shí)例i-m中所述的免疫原性組合物對(duì)于嚙齒動(dòng)物引起的免疫反應(yīng)類型。這些結(jié)果證明本發(fā)明的HIV免疫原性組合物和方法有效地在靈長(zhǎng)類動(dòng)物中刺激HIV-特異性免疫反應(yīng)。此外，這些結(jié)果證明胎兒和嬰兒能夠引起對(duì)本發(fā)明的免疫原性組合物的強(qiáng)烈HIV免疫反應(yīng)，指示這些組合物將適用于預(yù)防HIV的母體傳播并用作兒科疫苗。實(shí)例v小鼠模型中對(duì)去除gpl20的失活HIV免疫原與免疫體的組合的疫苗接種的免疫反應(yīng)這一實(shí)例描述對(duì)免疫體在小鼠模型中增強(qiáng)HIV-1抗原和HIV-1免疫原(抗原在IFA中乳化)的免疫原性性的能力進(jìn)行表征。如下所指示對(duì)C57BL/6小鼠(6-8周年齡)進(jìn)行注射。每組的數(shù)目一般是至少8-10只小鼠。1)PBS2)每只小鼠30|^免疫體=1.5mg/kg3)免疫體(最高劑量卯ng)=4.5mg/kg4)HIV-1免疫原(10|Jg)5)HIV-1免疫原+免疫體(10|ug、30yg、90jag)6)HIV-1免疫原+免疫體30將去除gpl20的HIV-1抗原于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中稀釋至200|_ig/ml的濃度并乳化于相同體積的含有或不含免疫體的IFA中。在乳化之前，以最終體積的至少5%的體積將免疫體添加到稀釋的HIV-1抗原中。在第O時(shí)進(jìn)行最初單次皮內(nèi)注射，接著在2周后皮內(nèi)注射。在促升注射后的第2周處死小鼠。所使用的HIV-1免疫原為IFA中的去除gpl20的失活HIV-1抗原。免疫學(xué)分析。分離新鮮的脾單核細(xì)胞并活體外刺激4天(Davis等人，J.Immunol.160:870-876(1998))。所分離的細(xì)胞在單獨(dú)培養(yǎng)基中用天然p24抗原或用HIV-1抗原刺激。使用酶聯(lián)免疫吸附分析方法評(píng)估多種細(xì)胞激素的產(chǎn)生。待檢定的示范性細(xì)胞激素包括例如本文中所揭示和先前所述的IFNy、IL-12、IL-4、IL-5、IL-IO、MIPlouMEPlp、RANTES、a-防御素并通過(guò)所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法來(lái)檢定。如實(shí)例I和II中所述，在酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定中評(píng)估CD4和CD8淋巴細(xì)胞中P24抗原-特異性和HIV-1抗原-特異性IFNy產(chǎn)生。使用熟知方法在標(biāo)準(zhǔn)增殖檢定中評(píng)估P24抗原-特異性、HIV-1抗原-特異性和LPS-特異性淋巴細(xì)胞的增殖。實(shí)例VI免疫體對(duì)由PBMC產(chǎn)生的HIV特異性免疫反應(yīng)的活體外效應(yīng)，所述PBMC來(lái)自先前用HIV-1免疫原免疫的HIV感染患者這一實(shí)例描述對(duì)免疫體增加患者的周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞(PBMC)中活體外HIV-特異性免疫反應(yīng)的能力進(jìn)行評(píng)估，所述患者已經(jīng)用IFA中的去除gpl20的失活HIV-1抗原(REMUNE)治療。檢驗(yàn)下列各組的患者15個(gè)被HIV感染、經(jīng)HAART+REMUNE治療的患者；15個(gè)被HIV感染、經(jīng)HAART治療的患者。所述患者在疾病持續(xù)時(shí)間、CD4計(jì)數(shù)、HIV病毒血癥和缺少/存在蛋白酶抑制劑(PI)方面相匹配。通過(guò)靜脈穿剌將全血(530ml)抽取入含有EDTA的管中用-丁隨后的分析。按以下濃度將免疫體添加到PBMC中0.1Hg/ml、1.0|ag/inl、10.0|ig/ml。測(cè)量對(duì)多種抗原特異的反應(yīng)，例如HIV抗原、p24抗原、HIV-1抗原、eiw肽、gag肽；和flu(對(duì)照抗原)。需要時(shí)，也可測(cè)量其它HIV抗原。如實(shí)例I和II中所述，在酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定中評(píng)估CD4和CD8淋巴細(xì)胞中抗原特異性IFN丫產(chǎn)生。也在標(biāo)準(zhǔn)增殖檢定中評(píng)估抗原特異性淋巴細(xì)胞的增殖。通過(guò)在CD8+中細(xì)胞內(nèi)染色，用熒光活性細(xì)胞分類(FACS)方法評(píng)估RANTES、a防御素的產(chǎn)生。需要時(shí)，可檢定其它細(xì)胞激素或其它細(xì)胞類型。實(shí)例VH三嵌合體鼠模型中免疫體對(duì)HIV特異性免疫反應(yīng)的活體內(nèi)效應(yīng)這一實(shí)例描述使用三嵌合體小鼠模型測(cè)定含有免疫體的HIV免疫原性組合物的效應(yīng)。將三嵌合體小鼠模型用于測(cè)試當(dāng)與HIV抗原組合時(shí)免疫體的效應(yīng)?？杀O(jiān)測(cè)所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)以及保護(hù)免疫性。如先前所述產(chǎn)生三嵌合體小鼠(Reisner和Dagan,TrendsBiotechnol.16:242-246(1998);Ilan等人，Curr.Opin.Mol.Ther.4:102-109(2002);美國(guó)專利第6,254,867號(hào)；WO97/47654)。簡(jiǎn)而言之，通過(guò)致死的分劑量全身輻射使正常小鼠宿主無(wú)免疫力。接著通過(guò)去除T細(xì)胞的鼠SCID骨髓輻射保護(hù)小鼠并通過(guò)腹膜內(nèi)注射人類周圍血液?jiǎn)魏税准?xì)胞(PBMC)將小鼠轉(zhuǎn)化為三嵌合體小鼠。通過(guò)熒光活性細(xì)胞分類(FACS)分析人類T細(xì)胞標(biāo)記(如CD3或其它)來(lái)驗(yàn)證人類細(xì)胞移植入三嵌合體小鼠。用HIV感染三嵌合體小鼠以作為AIDS模型。簡(jiǎn)而言之，用一個(gè)或一個(gè)以上的HIV-1病毒株感染三嵌合體小鼠。對(duì)照動(dòng)物為僅注射培養(yǎng)基(無(wú)HIV-1)的三嵌合體小鼠和未注射PBMC的小鼠。在不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)測(cè)定共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的血漿HIV-1RNA含量、前病毒DNA的存在和活性病毒來(lái)評(píng)估小鼠的HIV-1感染。通過(guò)對(duì)HIV-l序列(如gag)進(jìn)行PCR來(lái)證明前病毒HIV-lDNA的存在。為測(cè)試含有免疫體的免疫原性組合物對(duì)免疫反應(yīng)的剌激，連同或不連同至少一種免疫體且連同或不連同佐劑，用去除gpl20的HIV-l注射三嵌合體小鼠?？墒褂每乖c免疫體的多種比率，例如實(shí)例V中所述，并測(cè)試最優(yōu)化的免疫反應(yīng)?；蛘?，將組合物脈沖入人類自體單核細(xì)胞衍生的樹突狀細(xì)胞(DC)中并將這些DC注射入三嵌合體小鼠中。小鼠視情況可用類似的組合物促升。在免疫之后，收集血液和腹膜淋巴細(xì)胞。測(cè)定對(duì)HIV抗原特異的免疫球蛋白的存在。另外，在從小鼠分離的人類淋巴細(xì)胞中測(cè)定特異性細(xì)胞抗HIV反應(yīng)。例如，在暴露于HIV-l抗原之后，測(cè)定從三嵌合體小鼠中回收的人類淋巴細(xì)胞中IFN)'的產(chǎn)生。測(cè)定在免疫體存在下，增強(qiáng)的對(duì)HIV抗原的免疫原性反應(yīng)。以類似的方式監(jiān)測(cè)保護(hù)免疫性，除了在用感染性HIV接種之前用不同組合物使小鼠免疫。如上所述，測(cè)量不同組合物影響隨后病毒血癥的水平的能力。最有效的疫苗為提供對(duì)循環(huán)病毒的最有效控制和/或延長(zhǎng)存活時(shí)間的疫苗。實(shí)例VIII用REMUNEtm使HIV感染患者免疫這一實(shí)例描述用REMUNE(IFA中的去除GP120的HIV-l抗原)使HIV感染患者免疫并證明大多數(shù)患者可發(fā)動(dòng)免疫反應(yīng)，盡管強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間不同。這一特定研究的目標(biāo)是在用與高活性逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(HAART)(英地那韋(indinavir)/ZDV/3TC)組合的REMUNE治療之后，與不完全弗氏佐劑(IFA)加上HAART相比來(lái)評(píng)估HIV-l特異性免疫反應(yīng)。研究計(jì)劃為隨機(jī)、雙盲、雙臂、平行組、佐劑對(duì)照、多中心研究。受試者的數(shù)目(總數(shù)和用于各治療的數(shù)目)是隨機(jī)的52個(gè)患者，其中43個(gè)可評(píng)估的患者進(jìn)行意向性治療分析(22個(gè)REMUNE+HAART;21個(gè)IFA+HAART)。包括HIV-l感染患者的診斷和標(biāo)準(zhǔn)是先前未使用HIV蛋白酶抑制劑或拉米夫定(lamivudine，3TC)的HIV-1感染患者CD4計(jì)數(shù)大于每微升350個(gè)細(xì)胞。測(cè)試產(chǎn)品、劑量和投予模式為REMUNE(HIV-l免疫原)；IO單位(等于10)Jg/ml的p24含量)，1.0mlEV1的給予體積(批號(hào)8155-015和8155-017)。關(guān)于治療的持續(xù)時(shí)間，患者接受HAART持續(xù)2周。REMUNE或IFA安慰劑(對(duì)照)在第4、16和28周給予。參照療法、劑量和投予模式為佐劑對(duì)照；使用IFA安慰劑(批號(hào)8144-和8160-005)。第一功效標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞(PBMC)中HIV-1抗原刺激的淋巴細(xì)胞增殖(LP)反應(yīng)。第二功效標(biāo)準(zhǔn)包括對(duì)PBMC中天然p24和BaLHIV-1抗原刺激的LP反應(yīng)；對(duì)PBMC中天然p24和HIV抗原刺激的趨化因子反應(yīng)；gagCTL活性(患者亞組中)；CD4細(xì)胞數(shù)和CD4百分?jǐn)?shù)的改變；作為血漿RNA和PBMCDNA測(cè)量的病毒負(fù)荷的改變；和對(duì)HIV-l和p24抗原的DTH皮膚測(cè)試反應(yīng)。所使用的統(tǒng)計(jì)方法為意向性治療分析中的費(fèi)氏確切檢驗(yàn)(Fisher'sExactTest)(雙尾)和雙側(cè)曼-惠特尼檢驗(yàn)(two-sidedMann-Whitneytest)。第一分析將反應(yīng)率定義為在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對(duì)基線上5倍的HIV-1抗原的刺激指數(shù)(SI)。結(jié)果顯示，REMUNE+HAART組中有14/22(64%)個(gè)反應(yīng)者并且IFA+HAART組中有4/21(19%)個(gè)反應(yīng)者(p=0.005)。第二分析將反應(yīng)率定義為在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對(duì)基線上3倍的BAL型HIV-1抗原和/或p24抗原的SI。結(jié)果顯示，REMUNE+HAART組中有15/22(68%)個(gè)反應(yīng)者并且1八+HAART組中有5/21(24免)個(gè)反應(yīng)者(p-0.006)。在接受REMUNE+HAART的受試者中，對(duì)HIV-1(HZ321)抗原的LP反應(yīng)的量值大于接受IFA+HAART的受試者(p=0.0028),所述量值定義為每一受試者第一次注射后所測(cè)量的幾何平均數(shù)SI與預(yù)治療值的幾何平均數(shù)的比率。與IFA+HAART組相比，REMUNE+HAART組中對(duì)天然p24(p=0.0002)和對(duì)HIV-1BaL抗原(p=0.007)的LP反應(yīng)率在統(tǒng)計(jì)上顯著更大。在兩組之間，對(duì)喚起抗原(假絲酵母，鏈激酶，破傷風(fēng))的LP反應(yīng)無(wú)差異。與IFA+HAART組相比，REMUNE+HAART組中通過(guò)HIV-1抗原刺激的PBMC引起的MIP-l卩產(chǎn)生顯著增加(第32周p+0.0007)。與IFA+HAART組相比，REMUNE+HAART組中對(duì)于HIV-1(53%對(duì)9%)和天然p24抗原(47%對(duì)0%)的DTH皮膚測(cè)試反應(yīng)率更大。根據(jù)反應(yīng)者數(shù)目和反應(yīng)的量值，投予REMUNE加ZDV/3TC/英地那韋導(dǎo)致顯著刺激對(duì)HIV-1抗原的淋巴細(xì)胞增殖(LP)反應(yīng)。對(duì)于定義為在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對(duì)基線上5倍的HIV-1抗原的刺激指數(shù)的反應(yīng)率，REMUNE加ZDV/3TC/英地那韋組(14/22，64%)中比IFA加ZDV/3TC/英地那韋組(4/21，19%)中的反應(yīng)者數(shù)目顯著更高(p=0.005)。高百分?jǐn)?shù)的接受REMUNE的受試者產(chǎn)生對(duì)天然p24抗原的強(qiáng)烈LP反應(yīng)，證明REMUNE可對(duì)更保守的HIV核心抗原特異性地產(chǎn)生反應(yīng)。IFA治療不刺激對(duì)任何抗原的HIV-1特異性免疫反應(yīng)。REMUNE加ZDV/3TC/英地那韋產(chǎn)生對(duì)純化的天然p24的顯著更高的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)率(p=0.0002)。投予REMUNE刺激對(duì)HIV-1(HZ321)免疫抗原以及對(duì)HIV-1抗原(即分化枝B,HIV-1BaL抗原)的LP反應(yīng)，證明由REMUNE產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是交叉分化枝且并不限于免疫劑。與IFA加ZDV/3TC/英地那韋相比，REMUNE加ZDV/3TC/英地那韋產(chǎn)生顯著更高的對(duì)HIV-1BaL抗原的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)率(p=0.007)。在整個(gè)研究中REMUNE力nZDV/3TC/英地那韋組中抗原刺激的MIP-1(3的產(chǎn)生顯著增加(第32周p=0.0007),且在研究期間IFA加ZDV/3TC/英地那韋組中不改變。兩組的受試者均顯示CD4細(xì)胞數(shù)的顯著增加和血漿HIVRNA和前病毒HIVDNA拷貝數(shù)目的顯著降低。在時(shí)間對(duì)HIVRNA復(fù)發(fā)的分析中，REMUNE加ZDV/3TC/英地那韋組存在較低的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)傾向；6/22(27%)的REMUNE加ZDV/3TC/英地那韋受試者在第16周與第32周之間復(fù)發(fā)，與之相對(duì)，12/21(57%)的IFA加ZDV/3TC/英地那韋受試者在第16周與第32周之間復(fù)發(fā)(對(duì)數(shù)級(jí)檢驗(yàn)p-0.08)。通過(guò)投予包括HIV抗原(如REMUNE)和一種或一種以上免疫體的本發(fā)明的免疫原性組合物，預(yù)期達(dá)到更強(qiáng)烈、更持久的反應(yīng)。這些結(jié)果證明REMUNE刺激大多數(shù)患者中的免疫反應(yīng)。實(shí)例IX用REMUNEtm和免疫體使HIV感染患者免疫這個(gè)實(shí)例描述用REMUNE和免疫體使HIV感染患者免疫。進(jìn)行研究的目的是評(píng)估與不完全弗氏佐劑(IFA)加免疫體和/或HAART相比，在用與免疫體和/或高活性逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(HAART)(英地那韋/ZDV/3TC)組合的REMUNE治療之后的HIV-1特異性免疫反應(yīng)。方法學(xué)使用隨機(jī)、雙盲、雙臂、平行組、佐劑對(duì)照研究。包括HIV-1感染患者的診斷和標(biāo)準(zhǔn)是先前未使用HIV蛋白酶抑制劑或拉米夫定(3TC)的患者CD4計(jì)數(shù)大于每微升350個(gè)細(xì)胞。也可使用選擇患者的其它標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)試產(chǎn)品、劑量和投予模式為REMUNE(HIV-1免疫原)；10單位(等于10|_ig/ml的p24含量)，1.0mlIM的給予體積。投予約1到5mg/kg之間的免疫體劑量。也可測(cè)試其它更高或更低的免疫體劑量對(duì)免疫反應(yīng)的有效增強(qiáng)。關(guān)于用HAART治療的患者的治療持續(xù)時(shí)間，患者接受HAART持續(xù)32周。REMUNE或IFA安慰劑(對(duì)照)和免疫體在第4、16和28周給予。參照療法、劑量和投予模式為佐劑對(duì)照，其中使用IFA安慰劑。用于評(píng)估功效和安全性的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)例VIII中描述的相似。另外，可包括用于測(cè)定免疫反應(yīng)的檢定，例如本文所揭示和實(shí)例I-III和V中所述的干擾素酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法、IgGl/IgG2抗體比率、細(xì)胞激素產(chǎn)生的酶聯(lián)免疫吸附分析檢定、淋巴細(xì)胞增殖檢定、脾細(xì)胞剌激及其類似檢定。預(yù)期與不含免疫體的HIV抗原相比，免疫體與REMUNE或其它HIV抗原的組合增強(qiáng)免疫反應(yīng)。因而，預(yù)期本實(shí)例中的免疫反應(yīng)比實(shí)例VIII中觀察到的免疫反應(yīng)更強(qiáng)烈和/或持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。這一實(shí)例描述投予HIV抗原和免疫體在刺激HIV感染患者的免疫反應(yīng)中的效應(yīng)得到增強(qiáng)。實(shí)例X具有免疫體的hiv-1抗原引起hiv-特異性免疫性這一實(shí)例描述使用HIV抗原和免疫體刺激HIV-特異性免疫性。HIV-1免疫原為用不完全弗氏佐劑(IFA)調(diào)配的去除gpl20的全滅活病毒疫苗候選物，據(jù)先前報(bào)告其誘導(dǎo)HIV-1特異性免疫反應(yīng)；含有免疫剌激胞嘧啶-鳥嘌呤(CpG)二核苷酸基序的合成寡核苷酸為細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的有效剌激物。在小鼠模型中研究產(chǎn)生與免疫體佐劑(AmplivaX)組合的HIV-1免疫原的增強(qiáng)免疫原性性的可能性。在隨后的實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證HIV-特異性免疫反應(yīng)可由不含IFA的去除gpl20的全滅活病毒(HIV-1抗原)力bAmplivaxTM來(lái)引起。在這些研究中，所使用的HIV-1免疫原為用不完全弗氏佐劑(IFA)調(diào)配的去除gp120的全滅活病毒疫苗。所述實(shí)驗(yàn)基本上如實(shí)例V中所述來(lái)進(jìn)行。這個(gè)免疫原誘導(dǎo)HIV-特異性免疫反應(yīng)。AmplivaxTM為免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸，在本文中也稱為免疫體，其含有新穎結(jié)構(gòu)和合成的免疫調(diào)節(jié)基序。這個(gè)免疫體誘導(dǎo)不同的免疫刺激概況。圖2顯示AmplivaxTM免疫體(也稱為HYB2055)的示意圖。HYB2055為第二代免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸(IMO)，其是由新穎結(jié)構(gòu)和合成的CpR免疫刺激基序組成。這個(gè)免疫體通過(guò)經(jīng)由TLR9發(fā)送信號(hào)來(lái)刺激免疫系統(tǒng)并誘導(dǎo)Thl免疫反應(yīng)。免疫體顯示增強(qiáng)的代謝穩(wěn)定性。已完成健康志愿者的I期試驗(yàn)。啟動(dòng)這些小鼠研究以評(píng)估小鼠模型中Amplivax(HYB2055)增強(qiáng)IFA中的HIV-1全滅活疫苗(HIV-1免疫原)的免疫原性性的能力。這些研究也檢驗(yàn)HIV-特異性免疫反應(yīng)是否可通過(guò)與AmplivaxTM組合使用的不含IFA的全滅活病毒(HIV-1抗原)來(lái)引起。簡(jiǎn)而言之，用不完全弗氏佐劑(IFA)中的lOiagHIV全滅活疫苗(HIV-1免疫原)加上3個(gè)劑量的AmplivaxTM(每只小鼠卯、30或10|ag)或用HIV全滅活疫苗(不含IFA的HIV-1免疫原，每只小鼠10|ag)禾bAmplivax(每只小鼠90|ag)使C57/BL6小鼠皮下(SC)或肌內(nèi)(IM)免疫(第O天和第14天)。經(jīng)HIV-1免疫原、經(jīng)單獨(dú)的AmplivaxTM或經(jīng)PBS免疫的動(dòng)物用作對(duì)照(每組8-10只)。小鼠免疫體HYB2048用作參照化合物。在第28天處死小鼠。在新鮮的脾單核細(xì)胞中評(píng)估HIV-1抗原刺激的和p24刺激的細(xì)胞激素的產(chǎn)生和分泌IFNy的T細(xì)胞。在血清中評(píng)估p24抗體的產(chǎn)生。如圖3所示，HIV-1免疫原誘導(dǎo)HIV-特異性RANTES、MIPla、MIPl(i、IL-10和IL-5產(chǎn)生。表2顯示HIV-1免疫原與AmpIivaxTM的組合將細(xì)胞激素廓型轉(zhuǎn)換為Thl型反應(yīng)。SC投予免疫原。所顯示的值為平均值。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>圖4顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性IFN-y產(chǎn)生。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(ng/小鼠)。對(duì)于RANTES、MIPla、MIP1卩和IL-10可見(jiàn)到相似結(jié)果。圖5顯示AmplivaxTM對(duì)HIV-1免疫原誘導(dǎo)的RANTES、MIPla、MIP1(3、IL-10和IL-5的產(chǎn)生水平的效應(yīng)。圖6顯示通過(guò)AmplivaxTM增強(qiáng)HIV-特異性IFN-y產(chǎn)生(所示資料是關(guān)于每只小鼠90ngAmplivax)。對(duì)于RANTES、MIPla、MIP1(3和IL-10可發(fā)現(xiàn)相似的結(jié)果。如圖7中所示，在酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定中，AmplivaxTM對(duì)分泌HIV-特異性IFN-Y的T細(xì)胞具有增強(qiáng)效應(yīng)。皮下投予免疫原。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(jjg/小鼠)。圖8顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性IFNy產(chǎn)生。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(pg/小鼠)。圖9顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性RANTES產(chǎn)生。圖10顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性MIP-la產(chǎn)生。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(pg/小鼠)。圖11顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性MIP-1|3產(chǎn)生。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(pg/小鼠)。圖12顯示通過(guò)AmplivaxTM以劑量依賴性方式增強(qiáng)HIV-特異性IL-10產(chǎn)生。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(pg/小鼠)。圖13顯示通過(guò)皮下給予的AmplivaxTM減少HIV-特異性IL-5產(chǎn)生。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示(ng/小鼠)。圖14顯示小鼠中AmplivaxTM對(duì)HIV-1免疫原誘導(dǎo)的p24抗體滴度的效應(yīng)。所使用的免疫體的量在括號(hào)中顯示()Jg/小鼠)。圖15顯示IFA中的HIV-1全滅活疫苗(HIV-1免疫原)一經(jīng)皮下(SC)和肌內(nèi)(IM)投予即誘導(dǎo)HIV-特異性細(xì)胞激素產(chǎn)生。圖16顯示AmplivaxTM可在與IFA乳化之前或之后添加并增強(qiáng)IFN丫的產(chǎn)生。圖17顯示AmplivaxTM可在與IFA乳化之前或之后添加并增強(qiáng)RANTES的產(chǎn)生。如表4中所示，HIV-1免疫原與AmplivaxTM的組合將細(xì)胞激素廓型轉(zhuǎn)換為Thl型反應(yīng)。表4IFN-y/IL-10比率IFN-y/IL-5比率細(xì)胞激素廓型HIV-1免疫原1,420,02Th2型mv-1免疫原+Amplivax74,04321Thl型Amplivax圖18顯示在沒(méi)有IFA的情況下具有AmplivaxTM的HIV-1全滅活疫苗在皮下免疫的小鼠中觸發(fā)HIV-特異性IFNY產(chǎn)生。圖19顯示在沒(méi)有IFA的情況下具有AmplivaxTM的HIV-1全滅活疫苗在皮下免疫的小鼠中觸發(fā)分泌HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞活性。圖20顯示在沒(méi)有IFA的情況下具有AmplivaxTM的HIV-1全滅活疫苗在皮下免疫的小鼠中觸發(fā)HIV-特異性RANTES產(chǎn)生。當(dāng)與單獨(dú)的HIV-1免疫原或AmplivaxTM相比時(shí)，用HIV-1免疫原與AmplivaxTM的組合皮下免疫的C57/BL6小鼠顯示顯著增強(qiáng)的p24抗體、HIV-特異性IFNY(產(chǎn)生其的CD4和CD8T細(xì)胞的數(shù)量和數(shù)目)、趨化因子(RANTES、MIP-la、MIP-1(3)和IL-10的HIV-特異性產(chǎn)生。重要的是，如果HIV-1抗原未與IFA乳化，則仍觀察到由Amplivax引起的增強(qiáng)。與單獨(dú)的HIV-1免疫原或Amplivax相比，用AmplivaxTM+HIV-1免疫原的組合和Amplivax+HIV-l抗原的組合進(jìn)行免疫均可顯著增強(qiáng)HIV-特異性和p24-特異性IFNy、RANTES、MIPleuMIPip和IL-10產(chǎn)生以及產(chǎn)生IFNy的細(xì)胞的數(shù)目。在用HIV-1免疫原或用與Amplivax組合的HIV-1抗原免疫的小鼠中所觀察到的免疫反應(yīng)的量值是相當(dāng)?shù)?。這些結(jié)果顯示與單獨(dú)的HIV-1免疫原或AmplivaxTM相比，用HIV-1免疫原加AmplivaxTM免疫顯著增強(qiáng)HIV-特異性IFNy、RANTES、MIP-la、MIP-lp和IL-10產(chǎn)生以及產(chǎn)生IFNy的細(xì)胞的數(shù)目。在用HIV-1抗原和AmplivaxTM(無(wú)IFA)免疫的小鼠中所觀察到的免疫反應(yīng)的量值與用HIV-1免疫原(HIV-1抗原加IFA)和AmplivaxTM所獲得的反應(yīng)的量值相當(dāng)。與使用IFA無(wú)關(guān)，與全滅活病毒疫苗聯(lián)合的AmplivaxTM引起強(qiáng)烈的HIV-特異性免疫反應(yīng)。與使用IFA無(wú)關(guān)，與HIV-1免疫原或HIV-1抗原聯(lián)合的Amplivax引起強(qiáng)烈的病毒特異性免疫反應(yīng)。HIV-l+Amplivax組合的強(qiáng)烈免疫原性性保證其用作HIV感染患者的治療疫苗。實(shí)例xi人類周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞中與免疫體組合的hiv免疫原對(duì)活體外hiv-特異性免疫反應(yīng)的效應(yīng)這一實(shí)例描述人類周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞(PBMC)中AmplivaxTM對(duì)活體外HIV-特異性免疫反應(yīng)的效應(yīng)。啟動(dòng)這些研究以評(píng)估如果AmplivaxTM可增加用抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒治療的HIV感染患者的人類PBMC的活體外HIV-特異性免疫反應(yīng)，則哪位患者被HIV-1全滅活疫苗免疫或不被免疫?；铙w外調(diào)查AmplivaxTM增強(qiáng)對(duì)分離自用抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(ART)治療的HIV+患者的PBMC的HIV抗原刺激的能力?；颊呶唇?jīng)免疫或先前用HIV-1免疫原免疫。兩組患者組均具有相當(dāng)?shù)腃D4計(jì)數(shù)、HIV血漿病毒血癥、感染持續(xù)時(shí)間和ART。通過(guò)對(duì)IFNy酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定中產(chǎn)生的總斑點(diǎn)和更高百分?jǐn)?shù)的產(chǎn)生a防御素的細(xì)胞的測(cè)量，結(jié)果顯示AmplivaxTM在用HIV-1免疫原接種的患者中誘導(dǎo)更強(qiáng)烈的HIV-特異性的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。使用1|ig/ml的AmplivaxTM的兩種效應(yīng)均為最明顯。簡(jiǎn)而言之，患者已用6-24劑量的HIV全滅活疫苗(REMUNE=HIV-1免疫原)接種。最后一劑在收集血液前6-8個(gè)月給予。未接種的患者在CD4、HIV病毒血癥和HAART暴露方面相匹配。以4個(gè)濃度'(0、0.1、1.0和10pg/ml)將AmplivaxTM添加到PBMC中。用HIV-1、np24、gag和flu抗原刺激細(xì)胞。通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法進(jìn)行CD8+、產(chǎn)生IFNY的細(xì)胞的評(píng)估。通過(guò)熒光活性細(xì)胞分類(FACS)方法分析產(chǎn)生a-防御素的細(xì)胞。圖21顯示通過(guò)活體外添加的AmpIivaxTM來(lái)增加產(chǎn)生a-防御素的CD8+T細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。圖22顯示REMUNE⑧治療患者和HIV陽(yáng)性對(duì)照(無(wú)Amplivax)中產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖23顯示在活體外添加的0.1|ig/mlAmplivaxTM存在下產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖24顯示在活體外添加的1ng/mlAmplivaxTM存在下產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖25顯示在活體外添加的10|ug/mlAmplivaxTM存在下產(chǎn)生HIV-特異性IFNy的CD8+T細(xì)胞。圖26顯示周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞(PBMC)中的IFN-y酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢定。使用1pg/ml的HYB2055。在未接受HAART的患者中己產(chǎn)生REMUNE(HIV-1免疫原加IFA)的初步資料。當(dāng)試驗(yàn)完成時(shí)，其將監(jiān)測(cè)50個(gè)HIV-1RNA在每毫升IO，OOO-40,000個(gè)拷貝的范圍內(nèi)和CD4細(xì)胞在每微升350個(gè)細(xì)胞以上的HIV-1陽(yáng)性受試者。患者隨機(jī)分為3組REMUNE⑧(IFA中的HIV-1免疫原)；IFA佐劑；或鹽水。在未接受抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒療法(ART)的患者中，第一次注射REMUNE⑧之后觀察至IJCD4T細(xì)胞(圖27)和CD8T細(xì)胞(圖28)的表型改變。顯示首先的少數(shù)患者的初步資料。額外患者將類似地加以分析。正進(jìn)行臨床試驗(yàn)的未接受藥物的HIV+患者的初步資料表明，HIV-1免疫原也具有在這個(gè)患者群體中產(chǎn)生HIV-特異性免疫反應(yīng)的陽(yáng)性效應(yīng)。通過(guò)將AmplivaxTM添加到HIV-1免疫原中以作為疫苗的一部分，AmplivaxTM的潛在增強(qiáng)效應(yīng)將在這些相同患者中翻轉(zhuǎn)試驗(yàn)(roll-overtrial)來(lái)檢驗(yàn)。在整個(gè)本申請(qǐng)案中，已參考多個(gè)公開(kāi)案。這些公開(kāi)案的整體揭示內(nèi)容以引用的方式并入本申請(qǐng)案中，以便更充分地描述本發(fā)明所屬的技術(shù)狀態(tài)。盡管已根據(jù)所揭示的實(shí)施例描述本發(fā)明，但所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)輕易了解所詳述的特定實(shí)驗(yàn)僅為說(shuō)明本發(fā)明之用。應(yīng)了解可在不脫離本發(fā)明的精神的情況下進(jìn)行多種修改。權(quán)利要求1.一種免疫原性組合物，其包含(a)缺少外部包膜蛋白gp120的全滅活HIV病毒；(b)免疫體；和(c)佐劑。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫原性組合物，其中所述HIV病毒為HIV-1。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述HIV病毒為HZ321病毒株。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述經(jīng)分離的核酸分子包含硫代磷酸酯主鏈。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述HIV病毒與所述核酸分子共軛。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述免疫體為CpG免疫體。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述免疫體為無(wú)CpG免疫體。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑適用于人類。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含不完全弗氏佐劑(incompleteFreund'sadjuvant,IFA)。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含分枝桿菌細(xì)胞壁組份和單磷?；|(zhì)A。11.根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫原性組合物，其中所述佐劑包含明礬。12.根據(jù)權(quán)利要求l所述的組合物，其中所述組合物增強(qiáng)(3-趨化因子的產(chǎn)生。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的免疫原性組合物，其中所述增強(qiáng)的(3-趨化因子的產(chǎn)生為非特異性(3-趨化因子產(chǎn)生。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的免疫原性組合物，其中所述增強(qiáng)的)3-趨化因子的產(chǎn)生為HIV-特異性P-趨化因子產(chǎn)生。15.根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫原性組合物，其中所述P-趨化因子為RANTES。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述組合物增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的HIV-特異性IgG2b抗體的產(chǎn)生。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述組合物增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的HIV-特異性細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述組合物增強(qiáng)HIV-特異性CD4+輔助T細(xì)胞。19.一種試劑盒，其包含(a)缺少外部包膜蛋白gpl20的全滅活HIV病毒；(b)免疫體；和(c)佐劑，所述試劑盒組份當(dāng)組合時(shí)產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物。20.—種制成根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫原性組合物的方法，其包含將以下物質(zhì)組合-(a)缺少外部包膜蛋白gpl20的全滅活HIV病毒；(b)免疫體；和(c)佐劑。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述組合在活體外進(jìn)行。22，根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述組合在活體內(nèi)進(jìn)行。23.—種使哺乳動(dòng)物免疫的方法，其包含通過(guò)投予所述哺乳動(dòng)物根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物來(lái)增強(qiáng)所述哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。24.—種抑制AIDS的方法，其包含通過(guò)投予哺乳動(dòng)物根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物來(lái)增強(qiáng)所述哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)。25.根據(jù)權(quán)利要求23或權(quán)利要求24所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為靈長(zhǎng)類動(dòng)物。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物處于嬰幼兒期。27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物處于孕期。28.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為人。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述人為HIV血清反應(yīng)陰性。30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述人為HIV血清反應(yīng)陽(yáng)性。31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為嚙齒動(dòng)物。32.根據(jù)權(quán)利要求30或權(quán)利要求31所述的方法，其中將所述組合物投予所述哺乳動(dòng)物兩次或兩次以上。33.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中將所述組合物投予所述哺乳動(dòng)物兩次或兩次以上。34.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中將所述組合物皮下、肌內(nèi)或粘膜內(nèi)投予。全文摘要本發(fā)明提供免疫原性組合物，其增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中免疫反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間和強(qiáng)度。所述免疫原性組合物含有HIV抗原、免疫體和佐劑。所述HIV抗原可為缺少外部包膜蛋白gp120的全滅活HIV病毒?；蛘?，所述HIV抗原可為全滅活HIV病毒或p24抗原。本發(fā)明還提供試劑盒，其組份當(dāng)組合時(shí)產(chǎn)生本發(fā)明的免疫原性組合物。本發(fā)明還提供通過(guò)將HIV抗原、免疫體和可選佐劑組合來(lái)制成所述免疫原性組合物的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種通過(guò)投予哺乳動(dòng)物含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的免疫原性組合物來(lái)增強(qiáng)所述哺乳動(dòng)物中的免疫反應(yīng)而使所述哺乳動(dòng)物免疫的方法。本發(fā)明還提供一種通過(guò)投予哺乳動(dòng)物含有HIV抗原、免疫體和可選佐劑的免疫原性組合物來(lái)抑制所述哺乳動(dòng)物中的AIDS的方法。文檔編號(hào)C12NGK101291691SQ200480024653公開(kāi)日2008年10月22日申請(qǐng)日期2004年8月27日優(yōu)先權(quán)日2003年8月28日發(fā)明者羅納德·B·莫斯申請(qǐng)人:免疫反應(yīng)公司