專利名稱：一種離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法及其專用分化培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)藥蒲公英的方法及其專用培養(yǎng)基，特別是涉及一種離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法及其專用分化培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
藥蒲公英是菊科(Compositae)蒲公英屬(Taraxacum)的多年生草本植物，分布廣泛，是傳統(tǒng)的中藥材，具有清熱解毒、消腫散結(jié)等功效，被稱為中藥八大金剛之一。最新研究表明，蒲公英甾醇具有抗腫瘤作用，而且在蒲公英中含量較高，從而使蒲公英成為開(kāi)發(fā)抗癌新藥的又一個(gè)努力方向。營(yíng)養(yǎng)成分分析表明，蒲公英葉片中蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、胡蘿卜素等有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分的含量明顯高于其他常見(jiàn)蔬菜，而且蒲公英還含有豐富的微量元素，其中包括鈣、鐵、硒等人體必需的礦質(zhì)元素，是一種理想的營(yíng)養(yǎng)保健蔬菜。
近年來(lái)，隨著世界范圍內(nèi)“崇尚自然，反樸歸真”保健時(shí)尚的興起，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)天然保健品的需求日益增加，以蒲公英開(kāi)發(fā)的健胃劑、利尿劑、美容劑等系列產(chǎn)品深受市場(chǎng)歡迎。用野生蒲公英進(jìn)行保健已成為發(fā)達(dá)國(guó)家的消費(fèi)時(shí)尚。在“綠色食品”倍受青睞的今天，集食用和藥用于一身的營(yíng)養(yǎng)保健蔬菜——蒲公英必將成為蔬菜市場(chǎng)的新寵，在給人們帶來(lái)健康的同時(shí)，也會(huì)創(chuàng)造出十分可觀的經(jīng)濟(jì)效益。隨著人們對(duì)蒲公英的利用和需求的日益增加，野生蒲公英越來(lái)越少，組織培養(yǎng)以其繁殖快的優(yōu)點(diǎn)而成為蒲公英生產(chǎn)的重要商業(yè)途徑。
發(fā)明創(chuàng)造內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法及其專用培養(yǎng)基。
本發(fā)明所提供的離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法，是以藥蒲公英葉片為外植體，接種在分化培養(yǎng)基MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或0-2mg/L TDZ中，培養(yǎng)7-14天分化出叢生芽，再將得到的叢生芽轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基進(jìn)行生根，培養(yǎng)8-12天得到完整的再生植株。
其中，所述分化培養(yǎng)基優(yōu)選為MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ，尤其優(yōu)選為MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/LIAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ；最優(yōu)選為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
上述方法中采用的培養(yǎng)條件可為溫度20-28℃，光照周期10-14h/14-10h，光照強(qiáng)度1400-1800lx；優(yōu)選為溫度24-26℃，光照周期12h/12h，光照強(qiáng)度1600lx。
本發(fā)明以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同的激素成分篩選得到了藥蒲公英(Taraxacum officinale F.H.Wigg)的分化培養(yǎng)基，進(jìn)而建立了離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用本發(fā)明的方法，可以得到穩(wěn)定的藥蒲公英植株再生體系，藥蒲公英葉片在本發(fā)明的專用培養(yǎng)基中能夠快速高效地再生，平均誘芽數(shù)高達(dá)15，不僅為藥蒲公英化學(xué)成分的研究以及無(wú)融合生殖現(xiàn)象的深入研究提供了一個(gè)平臺(tái)，而且可以快速地進(jìn)行藥蒲公英的規(guī)?；a(chǎn)，滿足市場(chǎng)需求。


圖1為外植體在培養(yǎng)基1-9中的分化頻率柱狀2為3號(hào)培養(yǎng)基中幼葉的形成照片圖3為4號(hào)培養(yǎng)基中幼葉的形成照片圖4為8號(hào)培養(yǎng)基中幼葉的形成照片具體實(shí)施方式
實(shí)施例1、離體培養(yǎng)藥蒲公英藥蒲公英(Taraxacum officinale F.H.Wigg)種子(購(gòu)自意大利SAIS公司)經(jīng)常規(guī)消毒(70％酒精消毒30s，10％NaClO消毒6min，無(wú)菌水沖洗4次)后接種在1/2MS培養(yǎng)基，黑暗中培養(yǎng)。4天后多數(shù)種子已萌發(fā)，轉(zhuǎn)移至光下培養(yǎng)，1月后成苗，苗高6-8cm。
將上述無(wú)菌苗葉片切成0.5cm×0.5cm的小塊，接種到分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)器官發(fā)生。為了得到最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基，葉片外植體以40-60塊為一組，分別接種到不同培養(yǎng)基(培養(yǎng)基配方如表1所示)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，表明藥蒲公英葉片外植體接種2周后，在3號(hào)培養(yǎng)基(MS+0.2mg/L IAA+4mg/L 6-BA)和4號(hào)培養(yǎng)基(MS+0.2mg/L IAA+1mg/L TDZ)中均分化出大量叢生芽，分化頻率(發(fā)生分化的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù))分別為65.21％和71.56％，平均誘芽數(shù)(形成的不定芽數(shù)目/接種的外植體數(shù))(表2)為12-15，其次是8號(hào)培養(yǎng)基(平均誘芽數(shù)為9)。由于3號(hào)培養(yǎng)基中外植體的分化高峰比4號(hào)培養(yǎng)基滯后3-4天，因此，4號(hào)培養(yǎng)基是藥蒲公英分化的最佳培養(yǎng)基。雖然1和9號(hào)培養(yǎng)基中分化頻率也比較高，但它們的平均誘芽數(shù)僅為3-5個(gè)，遠(yuǎn)小于3、4號(hào)培養(yǎng)基(平均幼芽數(shù)12-16)。外植體接種3周后，已經(jīng)由芽點(diǎn)形成了幼葉(圖2、圖3和圖4)。將這些小植株分離后接種在MS基本培養(yǎng)基中，10天后生根，形成完整的再生植株。
表1.藥蒲公英分化培養(yǎng)基

注基本培養(yǎng)基是MS+3％蔗糖+0.8％瓊脂，pH5.8其中，上述整個(gè)組織培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)條件為溫度(25±1)℃，光照周期12h/12h，光照強(qiáng)度1600lx。
表2.藥蒲公英在1-9號(hào)分化培養(yǎng)基中的分化情況

權(quán)利要求
1.一種離體培養(yǎng)藥蒲公英的專用培養(yǎng)基，其配方為MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或0-2mg/L TDZ。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述分化培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
5.一種離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法，是以藥蒲公英葉片為外植體，接種在分化培養(yǎng)基MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-2mg/L TDZ中，培養(yǎng)7-14天分化出叢生芽，再將得到的叢生芽轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基進(jìn)行生根，培養(yǎng)8-12天得到完整的再生植株。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述分化培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述分化培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述分化培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8中的任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述方法中采用的培養(yǎng)條件為溫度20-28℃，光照周期為10-14h/14-10h，光照強(qiáng)度1400-1800lx。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)條件為溫度24-26℃，光照周期12h/12h，光照強(qiáng)度1600lx。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種離體培養(yǎng)藥蒲公英的方法及其專用培養(yǎng)基。該方法是以藥蒲公英葉片為外植體，接種在分化培養(yǎng)基MS+0.2－1.5mg/L IAA+0－5.0mg/L 6－BA或MS+0.2－1.5mg/L IAA+0－2mg/L TDZ中，培養(yǎng)7－14天分化出叢生芽，再將得到的叢生芽轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基進(jìn)行生根，培養(yǎng)8－12天得到完整的再生植株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藥蒲公英葉片在本發(fā)明的專用培養(yǎng)基中能夠快速高效地再生，平均誘芽數(shù)高達(dá)15，可以快速地進(jìn)行藥蒲公英的規(guī)模化生產(chǎn)，滿足市場(chǎng)需求。
文檔編號(hào)C12N5/04GK1667117SQ200410006600
公開(kāi)日2005年9月14日 申請(qǐng)日期2004年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月11日
發(fā)明者李銀心, 陳華 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院植物研究所