專利名稱：一種繡凹螺瓊膠酶的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種繡凹螺瓊膠酶的制備方法及其應(yīng)用背景技術(shù)天然多糖酶降解是制備寡聚糖的一個(gè)重要途徑。酶降解由于具有特異性，可選擇性地酶解切斷多糖的特定鏈，從而制得特定的寡聚糖，并且反應(yīng)條件溫和，降解過(guò)程易于控制，在多糖降解中運(yùn)用日益增多。海洋無(wú)脊椎動(dòng)物是海洋生物中分布廣泛，種類較多的一大類動(dòng)物。有關(guān)海洋無(wú)脊椎動(dòng)物消化酶類的研究，大都是定性地分析某一生物器官內(nèi)酶類的存在，以此來(lái)闡明與消化生理的關(guān)系；分析養(yǎng)殖動(dòng)物不同發(fā)育階段體內(nèi)消化酶類的變化；用于大型經(jīng)濟(jì)海藻制備單細(xì)胞和原生質(zhì)體的研究，魚卵受精專一性研究，核質(zhì)移植實(shí)驗(yàn)和培養(yǎng)新品種等。但是，利用無(wú)脊椎動(dòng)物消化酶類作為多糖降解酶的應(yīng)用研究較少，特別是有關(guān)從軟體動(dòng)物中獲得瓊膠酶的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種繡凹螺瓊膠酶的制備方法及其應(yīng)用，并將繡凹螺瓊膠酶用作瓊膠的降解劑，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足。
一種繡凹螺瓊膠酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟以繡凹螺軟體組織為原料，經(jīng)勻漿，離心取上清液，加硫酸銨離心沉淀，透析，濃縮，用凝膠柱分離純化，得繡凹螺瓊膠酶。
將繡凹螺瓊膠酶用作瓊膠的降解劑。
本發(fā)明的繡凹螺瓊膠酶可用于制備瓊膠寡糖，該瓊膠寡糖單體可用于生產(chǎn)、研究瓊膠寡糖的生物活性物質(zhì)或中間體。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1.
取繡凹螺軟體組織500g，加入100ml 0.1mol/L的磷酸緩沖液勻漿。該勻漿液于-18℃冰凍24h，然后取出溶化，在4℃下離心，取上清液加入固體硫酸銨至30％飽和度，時(shí)而攪拌至8h后離心，取上清液，并加入固體硫酸銨至80％飽和度，生成沉淀，不斷攪拌，6h后離心，傾去上清液。向所得沉淀物加入50ml 0.01mol/L Tris-HCl緩沖溶液，使其溶解，離心分離，將上清液移入透析袋中，對(duì)0.0lmol/LTris-HCl緩沖溶液透析，透析液經(jīng)柱層析，冷凍干燥制得繡凹螺瓊膠酶。取10g瓊膠糖，加入100ml蒸餾水并加熱使其溶解，冷至40℃，加入1％(W/V)上述繡凹螺瓊膠酶，于36℃水浴中保溫36h，水解結(jié)束后，將水解液加熱煮沸5min，于40℃減壓濃縮至50ml，加入4倍體積95％的乙醇，離心分離，上清液經(jīng)濃縮，冷凍干燥得寡糖混合物。取2g寡糖混合物，加1ml水溶解后注入Superdex30色譜柱，室溫下以蒸餾水進(jìn)行洗脫，將各糖峰洗脫液分別合并，減壓濃縮，冷凍干燥，得新瓊二糖、新瓊四糖、新瓊六糖、新瓊八糖、新瓊十糖，其結(jié)構(gòu)式依次分別為
實(shí)施例2.
取繡凹螺軟體組織1000g，加入250ml 0.1mol/L的磷酸緩沖液勻漿。該勻漿液于-18℃冰凍24h，然后取出溶化，在4℃下離心，取上清液加入固體硫酸銨至40％飽和度，時(shí)而攪拌，8h后離心，取上清液并加入固體硫酸銨至90％飽和度，生成沉淀，不斷攪拌6h后離心，傾去上清液。向所得沉淀加入80ml 0.01mol/L Tris-HCl緩沖溶液，使其溶解，離心分離，將上清液移入透析袋中，對(duì)0.01mol/L Tris-HCl緩沖溶液透析，透析液經(jīng)柱層析，冷凍干燥制得繡凹螺瓊膠酶。取100g瓊膠糖，加入10000ml蒸餾水并加熱至99℃搖動(dòng)使其溶解，冷至40℃，加入1％(W/V)上述繡凹螺瓊膠酶，于36℃水浴中保溫36h，水解結(jié)束后，將水解液加熱煮沸5min，于40℃下減壓濃縮至200ml，加入4倍體積95％的乙醇，離心分離，將上清液經(jīng)濃縮，冷凍干燥得寡糖混合物。取10g寡糖混合物，加2ml水溶解后注入Superdex30色譜柱，室溫下以蒸餾水進(jìn)行洗脫，將各糖峰洗脫液分別合并，減壓濃縮，冷凍干燥，得新瓊二糖、新瓊四糖、新瓊六糖、新瓊八糖、新瓊十糖。
權(quán)利要求
1.一種繡凹螺瓊膠酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟以繡凹螺軟體組織為原料，經(jīng)勻漿、離心取上清液、加硫酸銨離心沉淀、透析、濃縮，用凝膠柱分離純化，凍干，得繡凹螺瓊膠酶。
2.將繡凹螺瓊膠酶用作瓊膠的降解劑。
全文摘要
一種繡凹螺瓊膠酶的制備方法，其特征在于包括以下步驟以繡凹螺軟體組織為原料，經(jīng)勻漿、離心取上清液、加硫酸銨離心沉淀、透析、濃縮，用凝膠柱分離純化、凍干，得繡凹螺瓊膠酶。并將繡凹螺瓊膠酶用作瓊膠的降解劑。本發(fā)明的繡凹螺瓊膠酶可用于制備瓊膠寡糖，該瓊膠寡糖單體可用于生產(chǎn)、研究瓊膠寡糖的生物活性物質(zhì)或中間體。
文檔編號(hào)C12N9/24GK1513989SQ0313897
公開(kāi)日2004年7月21日 申請(qǐng)日期2003年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月4日
發(fā)明者毛文君, 管華詩(shī) 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)