專利名稱：一種治療黃褐斑的馬拉色菌菌素、其制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療黃褐斑的外用制劑及其制備方法和應(yīng)用，尤其涉及一種治療黃褐斑的馬拉色菌外用藥物及其制備方法和應(yīng)用，特別涉及一種治療黃褐斑的馬拉色菌(花斑癬菌，拉丁名Malassezia)菌素、其制劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃褐斑為發(fā)生于人體面部皮膚有礙美容的常見皮膚病，其主要特征為面部皮膚不同程度的色素加深。
黃褐斑的發(fā)病機(jī)理和原因不十分清楚，常見于妊娠、口服避孕藥或原因不明，目前尚無滿意治療方法，其主要病理特征為表皮內(nèi)黑色素細(xì)胞產(chǎn)生過量黑素顆粒并沉積于皮膚內(nèi)。除全身用藥外，目前最常用的外用祛斑劑有2％氫醌霜，2％曲酸霜，20％王二酸霜，0.01％維甲酸霜，5％白降汞軟膏，3％過氧化氫溶液，超氧化物歧化酶(SOD)霜等，上述治療方法均存在以下問題1、顯效率低，療效慢，療程長；2、常出現(xiàn)毒副反應(yīng)，如面部潮紅，灼熱，皮膚干燥和脫屑等(常見皮膚過敏反應(yīng)除外)(文獻(xiàn)見“美容皮膚病學(xué)的研究與展望”，賴永賢.揚(yáng)?；葜腥A醫(yī)學(xué)美容雜志，2002第3期164頁-166頁)；3、復(fù)發(fā)率高，臨床觀察上述治療有效者需長期用藥，往往在停藥后即復(fù)發(fā)等。
目前治療黃褐斑這一皮膚病所有外用藥及祛斑化妝品中，尚無使用馬拉色菌菌素作為原料。
馬拉色菌(花斑癬菌Malassezia)《皮膚性病學(xué)》第五版78-79頁.主編.張學(xué)軍人民衛(wèi)生出版社.2001年9月.全國高等醫(yī)藥院校教材。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療黃褐斑的外用制劑及其制備方法和應(yīng)用，尤其提供一種治療黃褐斑的馬拉色菌外用藥物及其制備方法和應(yīng)用，特別提供一種治療黃褐斑的馬拉色菌菌素、其制劑及其制備方法和應(yīng)用，克服了目前治療黃褐斑藥物顯效率低、療效慢、療程長，常出現(xiàn)毒副反應(yīng)，復(fù)發(fā)率高的缺點(diǎn)。
本發(fā)明是基于以下治病機(jī)理根據(jù)臨床觀察和經(jīng)典文獻(xiàn)(臨床皮膚病學(xué).第二版.主編趙辨.江蘇科學(xué)技術(shù)出版社1989年1月)記載，致病性馬拉色菌臨床雖可引起花斑癬，但此馬拉色菌亦為正常人體寄生菌，只在特定條件下，如皮膚多脂多油才會(huì)致病，并且致病力弱，只侵犯表皮而不侵犯真皮及皮下組織。
黃褐斑的主要病理特征是皮膚內(nèi)黑色素細(xì)胞產(chǎn)生過多的黑色素顆粒，而花斑癬的臨床病理特點(diǎn)是在花斑癬發(fā)病1-2個(gè)月后出現(xiàn)皮膚色素減退斑，并且此色素減退斑在花斑癬病愈后仍會(huì)持續(xù)數(shù)月甚至半年以上，證實(shí)馬拉色菌在生長繁殖過程中會(huì)產(chǎn)生馬拉色菌素，此菌素能夠抑制人體黑素細(xì)胞產(chǎn)生黑素顆粒。致病后所致花斑癬臨床表現(xiàn)輕微，無炎性反應(yīng)而只有色素性的改變。
據(jù)此，我們自花斑癬患者身上收集馬拉色菌后進(jìn)行大量人工培養(yǎng)，將收集菌落制成溶液，高壓滅菌后制備外用制劑用于治療黃褐斑并取得良好效果，并且不會(huì)對人體皮膚造成不良反應(yīng)。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑，包括馬拉色菌菌素和輔料；所述輔料可以含任何無毒的皮膚用常規(guī)藥物或美容活性成分，如遮光劑、滲透增強(qiáng)劑、增濕劑、表面活性劑、潤滑劑、著色劑、調(diào)色劑、收斂劑等物質(zhì)；所述輔料可以為任何皮膚常用賦形劑和添加劑，包括防腐劑、增稠劑和香料，以及常規(guī)抗氧劑，如叔丁對甲氧酚(BHA)、抗壞血酸棕櫚酸酯、沒食子酸丙酯、檸檬酸、二叔丁對甲氧酚(BHT)、乙氧喹等，還可以含有本領(lǐng)域熟知的增稠劑、助溶劑、潤濕劑、乳化劑和粘度穩(wěn)定劑等；所述制劑可以為任何一種皮膚外用制劑，尤其為溶液劑、膏劑、乳劑；所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑的制備方法，包括將馬拉色菌菌素和輔料混合而成；所述馬拉色菌菌素的制備至少包括以下步驟馬拉色菌的采集培養(yǎng)和菌液的制備；所述采集培養(yǎng)包括由以下重量份組分的培養(yǎng)基制成取豆粉加入蒸餾水中置冰箱過夜取出；過濾，濾液中按100份加蛋白胨1∶瓊脂1.8∶葡萄糖4的比例加入上述成分；加熱融化滅菌，制成培養(yǎng)基；接種，37℃培養(yǎng)5-7天；所述菌液的制備包括取培養(yǎng)的馬拉色菌苔溶于生理鹽水中，制成菌懸液；和/或，將培養(yǎng)的菌苔接種于液體培養(yǎng)基中，置37℃搖床培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5-7天，制成菌懸液；上述菌懸液過濾滅菌即得。
所述馬拉色菌菌素的制備還包括以下步驟所述采集培養(yǎng)包括由以下重量份組分的培養(yǎng)基制成，取豆粉40份加入1000份蒸餾水中置冰箱過液次日取出；用濾紙或8層紗布過濾，濾液中按100份加蛋白胨1份、瓊脂1.8份、葡萄糖4份的比例加入上述成分；加熱融化，分裝，10磅10分鐘滅菌，置斜面?zhèn)溆?；將制備液分裝入三角燒瓶內(nèi)，滅菌備用，制成固體培養(yǎng)基；培養(yǎng)基最好為沙堡培養(yǎng)基，PH為6.5。菌種接種量為適量以接種成功為限；滅菌壓力為10磅10分鐘。
所述取材及培養(yǎng)為對花斑癬病人皮損區(qū)刮取鱗屑，接種于上述固體培養(yǎng)基的表面，37℃培養(yǎng)5-7天；所述菌懸液消毒滅菌后，過濾備用；所述置37℃搖床培養(yǎng)基培養(yǎng)后消毒滅菌，過濾去沉渣，備用。
所述菌懸液每ml含馬拉色菌約30-90個(gè)億，最好為50-70個(gè)億，尤其為約60個(gè)億，即100g制劑輔料加菌懸液5ml。
一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑在制備治療黃褐斑藥物方面的應(yīng)用，所述制劑含有馬拉色菌菌素和皮膚藥用輔料。
一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑在制備治療黃褐斑美容護(hù)膚品方面的應(yīng)用，所述制劑含有所述馬拉色菌菌素和護(hù)膚常用輔料。
本發(fā)明制劑用于皮膚的使用頻率應(yīng)根據(jù)病人和使用者個(gè)體而定。具體使用方法應(yīng)根據(jù)病人個(gè)體的年齡、體重和皮膚狀況來定。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明制劑可制成各種制劑，使用簡便。
2、本發(fā)明顯效率高，療效快，療程短。
3、除個(gè)別正常皮膚過敏反應(yīng)外，無毒副反應(yīng)，如面部潮紅，灼熱，皮膚干燥和脫屑等現(xiàn)象出現(xiàn)。
4、停藥后復(fù)發(fā)率低。
為證明本發(fā)明所述效果，本發(fā)明藥物治療黃褐斑50例效果觀察如下所述。
黃褐斑的臨床診斷和療效判定標(biāo)準(zhǔn)一、臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)(1)面部淡褐色至深褐色，界限清楚的斑片，通常對稱性分布，無炎癥表現(xiàn)及鱗屑。
(2)無明顯自覺癥狀。
(3)主要發(fā)生在青春期后，女性多發(fā)。
(4)病情有一定季節(jié)性，夏重冬輕。
(5)無明顯內(nèi)分泌疾病，并排除其它疾病引起的色素沉著。
(6)色素沉著區(qū)域的平均光密度值大于自身面部平均光密度值的20％以上。
二、療效判定標(biāo)準(zhǔn)(一)基本治愈(1)肉眼視色斑面積消退大于90％，顏色基本消失。
(2)評分法計(jì)算治療后下降指數(shù)≥0.8。(3)色素沉著區(qū)域皮膚圖像測量療效評定單位ID≥55。
(二)顯效(1)肉眼視色斑面積消退大于60％，顏色明顯變淡。
(2)評分法計(jì)算治療后下降指數(shù)≥0.5。(3)色素沉著區(qū)域皮膚圖像測量療效評定單位ID≥15。
(三)好轉(zhuǎn)(1)肉眼視色斑面積消退大于30％，顏色變淡。
(2)評分法計(jì)算治療后下降指數(shù)≥0.3。(3)色素沉著區(qū)域皮膚圖像測量療效評定單位ID≥5。
(四)無效(1)肉眼視色斑面積消退小于30％，顏色變化不明顯。
(2)評分法計(jì)算治療后下降指數(shù)≥0。(3)色素沉著區(qū)域皮膚圖像測量療效評定單位ID≥1。
說明色素沉著區(qū)域皮膚圖像測量療效評定單ID值的計(jì)算方法①光密度(OPT)計(jì)算假定目標(biāo)(皮膚)圖像中某點(diǎn)灰度(顏色)為A，入射光(特定光)標(biāo)定為B，該點(diǎn)的光密度值為OPT＝Lng(B/A)＝LngB-LngA由于B≥A所以O(shè)PT≥0。②積分光密度(OPTDM)計(jì)算假定面積(AREA)為M×N，而積分光密度為面積內(nèi)各點(diǎn)光密度的總和；平均光密度(OPTDI)為積分光密度內(nèi)的光密度平均值，即OPTDI=ΣMΣNOPtij]]>OPTDM=OPTDIi=1/AREAs=1.]]>③ID值代表皮膚圖像測量療效評定單位，根據(jù)黃褐斑患者皮損區(qū)域色素沉著治療前和治療后的積分光密度值的改變，而計(jì)算出的相對值。
三、評分方法和標(biāo)準(zhǔn)皮損分布 面積大小 色素程度0 無0 無1 面雙側(cè)＜2cm2輕淡褐色2 面雙側(cè)2～4cm2中明顯褐色3 面部泛發(fā) ＞4cm2重深褐色四、評分法下降指數(shù)計(jì)算方法下降指數(shù)＝(治療前總積分-治療后總積分)/治療前總積分本發(fā)明藥物治療黃褐斑50例效果觀察1、一般資料50例患者均為我院門診患者及本院職工，其中女性48例，男性兩例，年齡22～45歲，平均32.7歲，已婚44人，未婚6人。病程3個(gè)月～10年，平均3年，所有患者均診斷明確。診斷標(biāo)準(zhǔn)以中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚科學(xué)會(huì)色素病學(xué)組委員會(huì)(1998年8月哈爾濱)制定的《黃褐斑的臨床診斷和療效制定標(biāo)準(zhǔn)(草案)》為準(zhǔn)，其中5人為妊娠前后發(fā)病，月經(jīng)不正常者11人，余無明顯誘因。
2、治療方法常規(guī)清潔面部外涂本發(fā)明霜?jiǎng)┟咳赵缤砀?次，涂后輕按摩1~3分鐘，用藥期間停用其它一切口服及外用祛斑藥物，停用皮膚護(hù)理祛斑治療。每15～30天復(fù)診1次記錄效果。治療過程中未見任何不良反應(yīng)及過敏現(xiàn)象。
3、療效制定根據(jù)《標(biāo)準(zhǔn)》中療效判定標(biāo)準(zhǔn)，以前2項(xiàng)為主，基本痊愈皮損消退大于90％，顏色基本消失；顯效皮損消退大于60％，顏色明顯變淡；有效皮損消退大于30％，顏色變淡；無效皮損消退小于30％，顏色變化不明顯。
4、結(jié)果50例中，基本痊愈9例(18％)，顯效15人(30％)，有效19人(38％)，無效7人(14％)，總有效率86％，效果良好者多在用藥10~15天見效，2～3個(gè)月顯效或痊愈。本發(fā)明藥物(A組)與傳統(tǒng)祛斑藥物復(fù)方曲酸霜(B組)相比較，效果優(yōu)于后者，復(fù)方曲酸霜病例23例。(引用中華醫(yī)學(xué)美容雜志2000年第6卷第5期277頁《復(fù)方曲酸霜治療色素性皮膚病的臨床觀察》)。
兩組病人治療效果比較組別 總例數(shù) 痊愈 顯效 有效 無效 總有效率(％)A 50 9 15197 86B 23 1 3 9 9 61合計(jì)73 10182816統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.01注A組斑迪霜組B組復(fù)方曲酸霜組具體病例病例1劉某某.女.38歲，黃褐斑中度.病史10年。使用馬拉色菌制劑外涂患處每日2次，治療期間不用其他任何內(nèi)服外用藥。1月后顯效，2月后痊愈。
病例2李某女30歲，黃褐斑重度，病史3年，停用其他一切內(nèi)外用藥及祛斑化妝品，外用馬拉色菌制劑后2月余明顯好轉(zhuǎn)。
病例3鄧某某女34歲，中度黃褐斑，病史5年，單用馬拉色菌制劑2月后痊愈，至今2年無復(fù)發(fā)。
病例4劉某某女37歲黃褐斑中度，3個(gè)月后痊愈已堅(jiān)持使用馬拉色菌制劑2年。皮損始終未犯，而切未出現(xiàn)任何副反應(yīng)。
病例5李某某女40歲黃褐斑重度，病史8年，外用馬拉色菌制劑1月后現(xiàn)效，3個(gè)月后痊愈。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1馬拉色菌溶液劑治療黃褐斑的馬拉色菌菌素的制備方法步驟以下1、馬拉色菌的采集培養(yǎng)與濾液的制備培養(yǎng)基的制備可取豆粉40g加入1000ml蒸餾水中置冰箱過液次日取出；用8層紗布過濾，取濾液，按100ml加蛋白胨1g、瓊脂1.8g、葡萄糖4g的比例加入上述成分；加熱融化，分裝，10磅10分鐘滅菌，置斜面?zhèn)溆?；制備液體培養(yǎng)基不加入瓊脂，將100ml制備液分裝入250ml的三角燒瓶內(nèi)，滅菌備用。每100ml液體培養(yǎng)基加3.6g瓊脂制成固體培養(yǎng)基，滅菌備用，其中，培養(yǎng)基PH為6.5。
2、取材及培養(yǎng)用75％酒精對花斑癬病人皮損區(qū)進(jìn)行消毒，用無菌鑷子輕刮取鱗屑，將適量鱗屑接種于上述固體培養(yǎng)基的表面，37℃培養(yǎng)6天，當(dāng)在固培養(yǎng)基的斜面長成典型的菌落時(shí)終止培養(yǎng)。
3、馬拉色菌濾液的制備濾液制備方法為以下兩種(1)取固體培養(yǎng)斜面菌苔，溶于生理鹽水中，制成菌懸液，消毒滅菌后，過濾使用。(2)取2~3接種環(huán)固體斜面培養(yǎng)基上的菌苔接種于液體培養(yǎng)基中，置37℃搖床培養(yǎng)基中，培養(yǎng)6天后高壓消毒滅菌，過濾去沉渣，使用。
一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑，由所述馬拉色菌菌素組成；是將上述培養(yǎng)的濾液經(jīng)高壓滅菌(10磅10分鐘)后混合均勻即可。
其中，菌懸液每ml含馬拉色菌約60個(gè)億。
實(shí)施例2馬拉色菌軟膏劑治療黃褐斑的馬拉色菌菌素的制備方法同實(shí)施例1，不同在于用濾紙過濾豆浸液，取濾液，按100ml加蛋白胨2g、瓊脂3.6g、葡萄糖8g的比例加入上述成分，制成固體馬拉色菌培養(yǎng)基；37℃培養(yǎng)5天，培養(yǎng)基PH為6.5。所述上述培養(yǎng)菌苔制成濾液經(jīng)高壓10磅10分鐘滅菌后混合均勻得馬拉色菌菌素液。
一種治療黃褐斑的馬拉色菌軟膏劑，由所述馬拉色菌菌素液和賦形劑組成，所述賦形劑為加入十八醇4克、硬脂酸4克、單硬脂酸甘油脂3.5克、凡士林10克、甘油10克，土溫-80 2克，加入余量馬拉色菌菌素液配制成軟膏劑100克。
其中，菌懸液每ml含馬拉色菌約30個(gè)億，即100g霜?jiǎng)┗|(zhì)加菌懸液2.5ml。
實(shí)施例3馬拉色菌乳液劑治療黃褐斑的馬拉色菌菌素的制備方法同實(shí)施例1，不同在于用濾紙過濾豆浸液，取濾液，按100ml加蛋白胨2g、瓊脂3g、葡萄糖6g的比例加入上述成分，制成固體馬拉色菌培養(yǎng)基；37℃培養(yǎng)7天，培養(yǎng)基PH為6.5。所述上述培養(yǎng)菌苔制成濾液經(jīng)高壓10磅10分鐘滅菌后混合均勻得馬拉色菌菌素液。
一種治療黃褐斑的馬拉色菌乳液劑，由所述馬拉色菌菌素液和賦形劑組成，所述賦形劑為加入20ml丙二醇，10ml甘油配制而成100ml乳液劑。其中，菌懸液每ml含馬拉色菌約88個(gè)億。
權(quán)利要求
1.一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑，包括馬拉色菌菌素和輔料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑，所述制劑可以為任何一種皮膚外用制劑；所述馬拉色菌菌素菌懸液每ml含馬拉色菌約30-90個(gè)億。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑，所述制劑可以為溶液劑、膏劑、乳劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑，所述輔料可以含任何無毒的皮膚用常規(guī)藥物或美容活性成分，或皮膚常用賦形劑和添加劑。
5.權(quán)利要求1-4所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑的制備方法，包括將馬拉色菌菌素和輔料混合而成。
6.權(quán)利要求5所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑的制備方法，所述馬拉色菌菌素的制備至少包括以下步驟馬拉色菌的采集培養(yǎng)和菌液的制備；所述采集培養(yǎng)包括由以下重量份組分的培養(yǎng)基制成取豆粉加入蒸餾水中置冰箱過夜取出；過濾，濾液中按100份加蛋白胨1∶瓊脂1.8∶葡萄糖4的比例加入上述成分；加熱融化滅菌，制成培養(yǎng)基；接種，37℃培養(yǎng)5-7天；所述菌液的制備包括取培養(yǎng)的馬拉色菌苔溶于生理鹽水中，制成懸液；和/或，將培養(yǎng)的菌苔接種于液體培養(yǎng)基中，置37℃搖床培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5-7天，制成菌懸液；上述菌懸液過濾滅菌即得。
7.權(quán)利要求5所述的治療黃褐斑的馬拉色菌制劑的制備方法，所述馬拉色菌菌素的制備還包括以下步驟所述采集培養(yǎng)包括由以下重量份組分的培養(yǎng)基制成，取豆粉40份加入1000份蒸餾水中置冰箱過液次日取出；用濾紙或8層紗布過濾，濾液中按100份加蛋白胨1份、瓊脂1.8份、葡萄糖4份的比例加入上述成分；加熱融化，分裝，10磅10分鐘滅菌，置斜面?zhèn)溆?；將制備液分裝入三角燒瓶內(nèi)，滅菌備用，制成固體培養(yǎng)基；所述取材及培養(yǎng)為對花斑癬病人皮損區(qū)刮取鱗屑，接種于上述固體培養(yǎng)基的表面，37℃培養(yǎng)5-7天；所述菌懸液消毒滅菌后，過濾備用；所述置37℃搖床培養(yǎng)基培養(yǎng)后消毒滅菌，過濾去沉渣，備用。
8.一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑在制備治療黃褐斑藥物方面的應(yīng)用，所述制劑含有馬拉色菌菌素和皮膚藥用輔料。
9.一種治療黃褐斑的馬拉色菌制劑在制備治療黃褐斑美容護(hù)膚品方面的應(yīng)用，所述制劑含有所述馬拉色菌菌素和護(hù)膚常用輔料。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療黃褐斑的馬拉色菌菌素、其制劑及其制備方法和應(yīng)用，所述馬拉色菌制劑含有馬拉色菌和輔料，可由馬拉色菌和輔料混合制備；所述馬拉色菌菌素的制備方法包括馬拉色菌的采集培養(yǎng)與濾液的制備。所述制劑可以為任何一種皮膚外用制劑，尤其是溶液劑、膏劑、乳劑，本發(fā)明還涉及一種治療黃褐斑的馬拉色菌素在制備治療黃褐斑病癥藥物和美容護(hù)膚品方面的應(yīng)用。本發(fā)明具有顯效率高，療效快，療程短，無毒副反應(yīng)，復(fù)發(fā)率低的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C12N1/14GK1513482SQ0313804
公開日2004年7月21日 申請日期2003年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月30日
發(fā)明者周存才, 武延雋 申請人:周存才, 武延雋