專利名稱：凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)用材料的生產(chǎn)方法，特別是凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法，均用去冷沉淀上清血漿或FIII沉淀為原料，經(jīng)聚乙二醇分離去除雜蛋白并經(jīng)陰離子交換凝膠DEAE-SephadexA-50吸附及S/D或干熱等滅活工序制取的人凝血酶原復(fù)合物(PCC)，由于在滅活方法上均為單一滅活工序，因而其滅活不徹底，仍有病毒傳播的可能性，且單位體積制品中的IX因子含量較少，其比活性也較低，因而臨床使用效果較差。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有病毒滅活更徹底及IX因子的含量和比活性較高的凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣的，它包括有以下工序以FIII沉淀為原料經(jīng)溶解、PEG沉淀和低溫離心分離、過濾、凝膠吸附、洗滌凝膠、洗脫液超濾透析和濃縮、S/D滅活病毒、二次凝膠吸附、洗滌和洗脫凝膠、超濾透析、微孔膜除菌過濾和分裝、冷凍干燥，其特征在于洗滌凝膠的洗滌液中的NaCl濃度為0.23-0.28mmol/L及對(duì)上述已冷凍干燥的人凝血酶原復(fù)合物置于98-100℃的沸水浴中進(jìn)行干熱滅活30分鐘。本發(fā)明由于調(diào)整了洗滌液中的NaCl濃度以及采用了S/D及干熱雙重滅活工序，因而制品具有IX因子含量大于20IU/ml，IX因子比活性大于0.6IU/mg蛋白的歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)，且病毒滅活更徹底，使用更安全的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法，包含有以下工序(1)取FIII2公斤，用10升溶解液溶解后體積為12升，在溫度為25℃下，加1公斤40％的PEG溶解液，用NaHCO3、約450毫升調(diào)PH值至6.8，(2)將上述溶液降至5℃在離心機(jī)分離，其上清液用濾板過濾，得體積14升，(3)加入DEAE-SephadexA-50濕凝膠200克吸附60分鐘，(4)用洗滌液洗滌凝膠3個(gè)體積，然后用洗脫液洗凝膠2次，收集洗脫液600毫升，(5)上述洗脫液經(jīng)過濾、超濾透析，濃縮后體積為0.4升，(6)S/D滅活病毒，加入S/D母液40毫升，在24-26℃條件下緩慢攪拌滅活6小時(shí)，得體積為450毫升，(7)加入DEAE-Sephadex A-50濕凝膠120克進(jìn)行吸附30-45分鐘后裝柱，(8)用洗滌液連續(xù)洗滌凝膠6-10個(gè)柱體積，洗滌時(shí)其線性速度45厘米/小時(shí)，然后用洗脫液脫3-5個(gè)體積，其線性速度為30厘米/小時(shí)，收集洗脫液1500毫升，(9)進(jìn)行超濾透析，得體積500毫升，其IX因子效價(jià)26IU/毫升，IX比活性大于0.65IU/mg蛋白，加入肝素5000IU作為保護(hù)劑，(10)用孔徑為0.2微米的膜除菌過濾，然后進(jìn)行分裝，(11)冷凍干燥，(12)進(jìn)行干熱滅活(沸水浴30分鐘)病毒。
權(quán)利要求
1.凍干人凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法，它包括有以下工序以FIII沉淀為原料經(jīng)溶解、PEG沉淀和低溫離心分離、過濾、凝膠吸附、洗滌凝膠、洗脫液超濾透析和濃縮、S/D滅活病毒、二次凝膠吸附、洗滌和洗脫凝膠、超濾透析、微孔膜除菌過濾和分裝、冷凍干燥，其特征在于；對(duì)上述洗滌凝膠時(shí)洗滌液中的NaCl濃度調(diào)整為0.23-0.28mmol/L及對(duì)已冷凍干燥的人凝血酶原復(fù)合物置于98-100℃的沸水浴中進(jìn)行干熱滅活30分鐘。
全文摘要
本發(fā)明的凍干凝血酶原復(fù)合物的生產(chǎn)方法，它包括有以下工序以FIII沉淀為原料經(jīng)溶解→低溫離心分離、過濾→凝膠吸附→洗滌、洗脫凝膠→超濾濃縮→S/D滅活病毒→二次凝膠吸附→洗滌和洗脫凝膠→超濾透析→微孔膜除菌過濾分裝→冷凍干燥，其特征在于；將凍干人凝血酶原復(fù)合物置于98－100℃的沸水浴中進(jìn)行干熱滅活30分鐘。本發(fā)明的凍干人凝血酶原復(fù)合物具有IX因子含量大于2010/ml，IC因子比活性大于0.610/ag蛋白的歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)及病毒滅活更徹底，使用更安全的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N9/48GK1475569SQ0213894
公開日2004年2月18日 申請(qǐng)日期2002年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月15日
發(fā)明者安康, 潘若文, 馬小偉, 張寶獻(xiàn), 范蓓, 郭建偉, 楊保平, 安 康 申請(qǐng)人:華蘭生物工程股份有限公司