專利名稱：供制造生物芯片用的塑料載片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明有關(guān)一種用于制造生物芯片的表面經(jīng)處理的塑料載片。
(2)背景技術(shù)玻璃載片已被廣泛地用于充作制造DNA芯片和蛋白質(zhì)芯片的基材。然而，迄今玻璃載片于充作生物芯片的基材上已顯現(xiàn)出若干缺點(diǎn)。首先，玻璃載片本身易碎，且于操作上需小心處理。玻璃載片的表面不易經(jīng)化學(xué)處理以期能成功地固定生物性小分子化合物(諸如，植物或草藥的代謝物)至該經(jīng)處理的表面上以達(dá)到直接結(jié)合的目的。玻璃載片亦產(chǎn)生不應(yīng)有的高背景信號(hào)，而可能干擾隨后經(jīng)標(biāo)記物處理的生物芯片的分析。因此，此技術(shù)需要開(kāi)發(fā)出新材料或發(fā)展出能夠易于修飾或改質(zhì)的材料以取代玻璃材料充作生物芯片的基材。
近來(lái)，已對(duì)開(kāi)發(fā)塑料載片為基材的生物芯片作出某些努力，作為此芯片基材的塑料載片不僅比玻璃載片的取得成本較低，且還可通過(guò)慣用的注射模塑法輕易地模塑成所需要的形狀。
WO 00/55627揭示一種用于檢測(cè)標(biāo)的分析物的生物芯片，它包含固定于非螢光的丙烯酸性基材上的一列生物性結(jié)合配體。
WO 00/36145揭示一種制造生物芯片的方法，它包含接枝生物性探針至導(dǎo)電性聚合物上。
EP 1026259揭示一種DNA芯片，它包含固體載體及于親水性聚合物的存在下固定于該固體載體上的寡聚核苷酸或聚核苷酸。
雖然塑料材質(zhì)已被使用以制造DNA芯片，然而迄今并未成功地使用表面經(jīng)處理的塑料載片以適宜的微數(shù)組的形式固定蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物至其經(jīng)處理的表面上，特別是在該蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物未經(jīng)修飾的情況下。
此外，現(xiàn)有技術(shù)并未教示或建議聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片的表面可通過(guò)利用簡(jiǎn)單的試劑以一步驟的方式加以處理，使得寡聚核苷酸或聚核苷酸能夠以適宜地的微數(shù)組的形式固定在其經(jīng)處理的表面上。
(3)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一目的是提供一種表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片，用于固定蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物至其經(jīng)處理的表面上以制造生物芯片。
本發(fā)明的另一目的是提供一種聚苯乙烯材質(zhì)的表面經(jīng)處理的塑料載片，用于固定寡聚核苷酸或聚核苷酸至其經(jīng)處理的表面上以制造DNA芯片。
根據(jù)本發(fā)明一方面提供的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特點(diǎn)是，包含塑料載片和于該塑料載片上充作間隔層的涂層。
根據(jù)本發(fā)明另一方面提供的一種供固定寡聚核苷酸或聚核苷酸用的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特點(diǎn)是，包含聚苯乙烯材質(zhì)載片和于該聚苯乙烯材質(zhì)載片上充作間隔層的涂層。
為進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的目的、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和效果，以下將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。
(4)


圖1(a)是顯示已經(jīng)由Cy5標(biāo)記的鏈抗生物素蛋白探測(cè)的固定化生物素、生物素化衍生物及生物素化蛋白質(zhì)的螢光強(qiáng)度的曲線圖。
圖1(b)是顯示已經(jīng)由Cy3標(biāo)記的鏈抗生物素蛋白探測(cè)的固定化生物素、生物素化衍生物及生物素化蛋白質(zhì)的螢光強(qiáng)度的曲線圖。
圖1(c)是顯示經(jīng)單株鼠抗DIG雜交及隨后經(jīng)Cy3標(biāo)記的兔抗鼠1g G探測(cè)的固定化DIG衍生物的螢光強(qiáng)度的曲線圖。
圖2是顯示固定化經(jīng)Cy3標(biāo)記的糖皮質(zhì)激素受體肽的螢光強(qiáng)度。
圖3(a)顯示固定化經(jīng)Cy3標(biāo)記的DNA的螢光強(qiáng)度的曲線圖。
圖3(b)是顯示經(jīng)Cy3標(biāo)記的DNA探針處理的固定化DNA的螢光強(qiáng)度d的曲線圖。
(5)
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明揭示表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片，用于可直接固定蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物至其經(jīng)處理的表面上以制造生物芯片。利用本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片所制造的生物芯片可用于充作標(biāo)的物篩選(shotgunscreening)的平臺(tái)，該標(biāo)的物篩選能以標(biāo)的物導(dǎo)向達(dá)到高效結(jié)果(highthroughput)的方式篩選出生物活性物質(zhì)。
本發(fā)明塑料載片的材料可為同聚物或共聚物，是由1種或多種單體所制備，該單體是選自乙烯，鹵乙烯，丙烯，鹵丙烯，丙烯酸酯，甲基丙烯酸酯，丁二烯，丙烯 (腈)，原冰片烯或苯乙烯，其中苯乙烯的聚合物是適宜的。本發(fā)明塑料載片的材料亦可為聚碳酸酯。該塑料載片的大小是相當(dāng)于微數(shù)組器或激光掃描儀所慣用的載片大小。
于本發(fā)明中，使用塑料載片的優(yōu)點(diǎn)是在于可使用各種不同的化學(xué)藥劑以處理或修飾塑料載片的表面，使得不僅是大分子化合物(諸如蛋白質(zhì)和DNA)，亦包括小分子化合物(諸如植物或草藥的代謝物)可固定于該塑料載片的表面上。此優(yōu)點(diǎn)若對(duì)照慣用的玻璃載片僅能用于固定大分子化合物(諸如蛋白質(zhì)和DNA)的事實(shí)尤顯得重要。另外，塑料載片可易于模制成所需要的形狀，且亦具有成本低的優(yōu)點(diǎn)。于本發(fā)明的較佳體系中，塑料載片是經(jīng)模制以具有至少2個(gè)凹槽，使得于同一個(gè)塑料載片的凹槽中可同時(shí)進(jìn)行至少2個(gè)不同的反應(yīng)。每一個(gè)凹槽的深度可為相同或不同，且是介于低于0.03MM至高達(dá)0.5MM之間。另外，每一個(gè)凹槽的相對(duì)兩邊可分別模制欄桿以用于支撐玻璃蓋，其中該玻璃蓋是用于防止蒸發(fā)或損失加載至該凹槽內(nèi)的溶液。
于制備本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片中，是利用多官能性醛及隨后浸沒(méi)于提供NH2基團(tuán)的前體溶液中以先期處理上述的塑料載片，使得經(jīng)先期處理的塑料載片于其表面上含有具活性的胺基。該提供NH，基團(tuán)的前體可為有機(jī)物或無(wú)機(jī)物，且可選自NH4OH，一級(jí)胺，二級(jí)胺或叔胺，其中該一級(jí)胺，二級(jí)胺及叔胺的脂肪族及/或芳香族部分可用于充作額外的間隔層。于該提供NH2基團(tuán)的前體中，直接提供自由NH2基團(tuán)的NH4OH和一級(jí)胺是適宜的。
進(jìn)一步，使該經(jīng)先期處理的塑料載片涂覆一層充作間隔層的多官能性分子(例如，多官能性環(huán)氧化物)以制備本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片。于功能上，該多官能性環(huán)氧化物的作用是連接固定于該表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片上的測(cè)試樣品(適宜地呈微數(shù)組的型式)中所需要的成份。該多官能性環(huán)氧化物的一端的活性環(huán)氧基是與該經(jīng)先期處理的塑料載片的表面上的胺基反應(yīng)，而該多官能性環(huán)氧化物的另一端的活性環(huán)氧基是吸附測(cè)試樣品中所需要的成份或與其反應(yīng)。具體說(shuō)，測(cè)試樣品中含有自由羥基，氫硫基及/或胺基的成份能與該多官能性環(huán)氧化物的另一端的活性環(huán)氧基反應(yīng)以形成至少1個(gè)共價(jià)鍵，因而該成份能連接至該表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片上。該多官能性環(huán)氧化物適宜地是含有6至24個(gè)碳原子的化學(xué)鏈，使得所需要的成份不會(huì)直接地結(jié)合或吸附至該經(jīng)先期處理的塑料載片上。該所需要的成份與本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片的結(jié)合是牢固的，甚至經(jīng)嚴(yán)厲的脫離沖洗后亦是這樣。于本發(fā)明中，不僅是大分子化合物(諸如蛋白質(zhì)和多肽)，亦包括小分子化合物(諸如植物或草藥的代謝物)皆可以均一相或不均相的方式固定于本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片的表面上。
因此，制備本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片包含下列步驟取得塑料載片(適宜地含有凹槽)，利用多官能性醛及隨后浸沒(méi)于提供NH2基團(tuán)的前體溶液(適宜地是NH4OH溶液)中以先期處理該塑料載片，及利用多官能性分子(適宜地是多官能性環(huán)氧化物)以涂覆該經(jīng)先期處理的塑料載片的表面。
本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片可用于制備生物芯片，其中均一相或不均相的微數(shù)組樣品斑點(diǎn)可固定于本發(fā)明的表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片的表面上。所得到的生物芯片可用于以標(biāo)的物導(dǎo)向的方式篩選出測(cè)試樣品斑點(diǎn)中所需要的成份。上述的篩選方法可包含下列步驟將含有標(biāo)記探針的溶液加載上述的生物芯片中以進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)(其中每一個(gè)凹槽可覆蓋玻璃片以防止該含有標(biāo)記探針的溶液的蒸發(fā))，及通過(guò)利用裝置(例如激光掃描儀)以顯影并鑒定出能與該標(biāo)記探針?lè)磻?yīng)或結(jié)合的樣品斑點(diǎn)。供標(biāo)記探針用的標(biāo)記物可為染料或放射性物質(zhì)。另外，用于雜交反應(yīng)的探針可為基于已界定的分子機(jī)轉(zhuǎn)而呈均一相或不均相的已知標(biāo)記物，其是為，例如，拮抗諸如經(jīng)選擇的細(xì)胞、受體、酶或蛋白質(zhì)的小分子化合物、競(jìng)爭(zhēng)性配體、或抗體。
另一方面，本發(fā)明還揭示表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片，用于在其經(jīng)處理的表面上以適宜的微數(shù)組的方式固定寡聚核苷酸或聚核苷酸以制造DNA芯片。利用本發(fā)明的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片所制造的DNA芯片可用于充作檢測(cè)DNA用的平臺(tái)，該平臺(tái)可通過(guò)利用標(biāo)記探針于雜交條件下檢測(cè)出于樣品斑點(diǎn)中是否存有所需要的DNA。
本發(fā)明所使用的聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片的大小亦相當(dāng)于微數(shù)組器或激光掃描儀所慣用的載片大小。如前所述，該聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片亦可經(jīng)模制以適宜地具有至少2個(gè)凹槽，使得于同一個(gè)塑料載片的凹槽中可同時(shí)進(jìn)行至少2個(gè)不同的雜交反應(yīng)。每一個(gè)凹槽的深度可為相同或不同，且是介于低于0.03MM至高達(dá)0.5MM之間。另外，每一個(gè)凹槽的相對(duì)兩邊可分別模制欄桿以用于支撐玻璃蓋，其中該玻璃蓋是用于防止蒸發(fā)或損失加載至該凹槽內(nèi)的溶液。
對(duì)于修飾聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片的表面，是于較強(qiáng)的堿性條件下，利用試劑溶液涂覆聚苯乙烯材質(zhì)的原始塑料載片，該試劑溶液包含不含有NH4+基團(tuán)的緩沖液且該緩沖液含有提供正電荷的聚合物(例如聚離胺酸)。該不含有NH4+基團(tuán)的緩沖液可為碳酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液。上述較強(qiáng)的堿性條件可為介于PH9至11之間。制備本發(fā)明的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片的優(yōu)點(diǎn)是在于僅需要單一步驟涂覆簡(jiǎn)單的試劑溶液。
上述所得到的DNA芯片可通過(guò)利用標(biāo)記探針于雜交條件下檢測(cè)出于測(cè)試樣品斑點(diǎn)中是否存有所需要的DNA。該檢測(cè)方法可包含下述的步驟將含有標(biāo)記探針的溶液加載上述的DNA芯片中以進(jìn)行雜交反應(yīng)(其中每一個(gè)凹槽可覆蓋玻璃片以防止該含有標(biāo)記探針的溶液的蒸發(fā))，及通過(guò)利用裝置(例如激光掃描儀)以顯影并鑒定出能與該標(biāo)記探針結(jié)合的樣品斑點(diǎn)。如前所述，供標(biāo)記探針用的標(biāo)記物可為染料或放射性物質(zhì)。
于效果上，利用本發(fā)明的表面經(jīng)處理的塑料載片所制造的生物芯片及DNA芯片皆比玻璃載片所制造的生物芯片顯現(xiàn)出極弱的螢光背景。
本發(fā)明是以下述的實(shí)施例加以進(jìn)一步的闡釋和說(shuō)明，但須明了的是本發(fā)明的范圍并不以下述的實(shí)施例為限。
實(shí)施例實(shí)施例1
化學(xué)修飾聚苯乙烯材質(zhì)載片的表面以用于固定蛋白質(zhì)、 或小分子化合物使用聚苯乙烯材質(zhì)載片，其大小是相當(dāng)于微數(shù)組器或激光掃描儀所使用的慣用玻璃載片，且該聚苯乙烯材質(zhì)載片具有2個(gè)凹槽，該凹槽的深度皆為0.05MM。利用二次蒸餾水沖洗該聚苯乙烯材質(zhì)載片，隨后于室溫下利用95％乙醇(ETOH)沖洗達(dá)至少2小時(shí)。利用二次蒸餾水再次沖洗已清潔的聚苯乙烯材質(zhì)載片3次，隨后加以干燥。室溫下，使上述經(jīng)干燥的聚苯乙烯材質(zhì)載片浸沒(méi)于0.4％戊二醛的0.1M磷酸鹽緩沖液溶液(PH5.0)中達(dá)4小時(shí)，隨后以二次蒸餾水加以沖洗，再于60℃下浸入于3M NH4OH溶液(PH11.0)中達(dá)4小時(shí)。于37℃下，利用100mM 1，4-丁二醇二縮水甘油醚(PH11.0)隔夜處理所生成的聚苯乙烯材質(zhì)載片。利用二次蒸餾水沖洗上述經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，隨后加以干燥。該所生成的經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片即可用于制造生物芯片，其中可固定蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物。
實(shí)施例2修飾聚苯乙烯材質(zhì)載片的表面以用于固定DNA使用實(shí)施例l所使用的具有2個(gè)凹槽的聚苯乙烯材質(zhì)載片，利用二次蒸餾水加以沖洗，隨后于室溫下利用95％ETOH沖洗達(dá)至少2小時(shí)。利用二次蒸餾水再次沖洗已清潔的聚苯乙烯材質(zhì)載片3次，隨后加以干燥。室溫下，使所生成的聚苯乙烯材質(zhì)載片浸入于試劑溶液中達(dá)30分鐘，該試劑溶液含有1.12％聚離胺酸(Sigma)，0.03％二甲亞砜(DMSO)的50mM碳酸鹽緩沖液，PH9.5。取出經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，并以二次蒸餾水沖洗4次，隨后置于層流器(Laminar Flow)中干燥。所生成的經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片即可用于制造DNA芯片。
實(shí)施例3制造固定蛋白質(zhì)、擺或小分子化合物的生物芯片利用配備有0.4MM固體針管的自動(dòng)裝置MicroGrid II(購(gòu)自BioRobotics)，將蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物配置于實(shí)施例1所制備的經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片上。使蛋白質(zhì)溶于水溶性緩沖液中，且令肽和小分子化合物分別溶于DMSO中，以生成貯存液，隨后使分別含有蛋白質(zhì)、肽及小分子化合物的貯存液稀釋成30％DMSO/0.1M碳酸鹽緩沖液，PH9.5(其細(xì)節(jié)將詳細(xì)說(shuō)明于下述的「結(jié)果」部份)。該固體針管是用于投遞分別含有蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物的溶液并形成斑點(diǎn)，因此于負(fù)載每一個(gè)樣品前，利用二次蒸餾水沖洗該固體針管達(dá)2秒，再利用70％ETOH沖洗該固體針管達(dá)2秒，隨后置于熱空氣流中干燥達(dá)2秒。經(jīng)利用該固體針管完成配置樣品于該經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片上后，于室溫下培育所生成的生物芯片達(dá)2小時(shí)，隨后將其浸沒(méi)于1M乙醇胺中以阻斷殘留的未反應(yīng)環(huán)氧基團(tuán)。隨后利用TBST緩沖液(50mM Tris·HCl，0.15M NaCl，0.05％Tween 20)沖洗所得到的生物芯片3次，再以二次蒸餾水輕洗3次，進(jìn)而置于37℃下干燥。
實(shí)施例4DNA芯片的制備及處理利用上述配備有0.4MM固體針管的自動(dòng)裝置MicroGrid II(購(gòu)自BioRobotics)，將溶于30％DMSO/SSC中的寡核聚苷酸或聚核苷酸樣品配置于實(shí)施例2所制備的經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片的凹槽上以制備DNA芯片，其中一列寡聚核苷酸或聚核苷酸樣品于配置于該經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片上之前，是已先期利用FluoriLinkTMCy3TM雙功能性反應(yīng)染料(Amersham)加以標(biāo)記。
將變性溶液(1.5M NaCl，0.5M NaOH)加載該DNA芯片的凹槽中，并于室溫下培育該DNA芯片2分鐘。自該凹槽移除該變性溶液，將中和溶液(1.5MNaCl，0.5M Tris·HCl，PH7.2，1mM EDTA)加載該凹槽中，并于室溫下培育該DNA芯片1分鐘。于37℃烘箱中干燥該DNA芯片。利用Stratalinker UV交聯(lián)器(Stratagene)于600(×100)微焦耳下，進(jìn)行數(shù)組排列的寡聚核苷酸或聚核苷酸的交聯(lián)達(dá)5分鐘。利用二次蒸餾水沖洗該DNA芯片1分鐘達(dá)4次。將該DNA芯片浸沒(méi)于95％ ETOH中達(dá)1分鐘，隨后置于37℃烘箱中干燥。將所得到的DNA芯片沒(méi)入經(jīng)輕微攪拌的琥珀酐/硼酸鈉溶液(新鮮配制溶液使琥珀酐(5g)溶解于1-甲基-2-吡咯烷酮(20ML)中，且僅于浸沒(méi)該DNA芯片前加入0.2M硼酸鈉溶液，300ml，PH8.0)中達(dá)15分鐘。如前所述，利用二次蒸餾水和95％ETOH沖洗該DNA芯片，并隨后加以干燥。
實(shí)施例5利用螢光團(tuán)標(biāo)記蛋白質(zhì)或肽依據(jù)制造商所建議的處理方法，利用Fluori LinkTMCy3TM雙功能性反應(yīng)染料(Amersham)制備Cy3標(biāo)記的鏈抗生物素蛋白(strepavidin，SA)，兔抗鼠IgG及糖皮質(zhì)激素受體肽。同樣地，依據(jù)制造商所建議的處理方式，利用FluoriLinkTMCy5TM雙功能性反應(yīng)染料(Amersham)制備Cy5標(biāo)記的SA。
實(shí)施例6利用螢光團(tuán)標(biāo)記DNA依據(jù)制造商所建議的處理方法，利用FluoriLinkTMCy3TM-dCTP(Amersham)制備充作探針的Cy3標(biāo)記的DNA。
實(shí)施例7利用螢光團(tuán)標(biāo)記的蛋白質(zhì)或肽探測(cè)生物芯片將實(shí)施例5所制備的經(jīng)螢光團(tuán)標(biāo)記的蛋白質(zhì)或肽的TBST稀釋溶液(約20至25μl)加載實(shí)施例3所制備的生物芯片的凹槽中，隨后于室溫下培育該生物芯片達(dá)2小時(shí)，其中利用22×22MM玻璃片覆蓋該凹槽。利用TBST溶液輕洗該生物芯片1次，再利用TBST溶液徐緩沖洗該生物芯片3次，隨后再以二次蒸餾水沖洗4次。于37℃下干燥經(jīng)探測(cè)的生物芯片，隨后利用Gene Pix 400A載片掃描儀(Axon Instruments)加以掃描或于室溫下貯存于暗室中。
實(shí)施例8利用螢光團(tuán)標(biāo)記的DNA探測(cè)DNA芯片將前雜交緩沖液(25％甲酰胺，5×SSC，0.1％SDS及1％BSA)加載實(shí)施例4所制備的DNA芯片的凹槽中，且于42℃下培育該DNA芯片達(dá)1小時(shí)，其中利用22×22mm玻璃片覆蓋該凹槽。利用二次蒸餾水和95％ETOH沖洗該凹槽。隨后利用緩沖液(含有25％甲酰胺，5×SSC，0.1％SDS，0.5mg/ml聚腺苷阻斷劑及0.5mg/ml大腸桿菌或酵母菌全部RNA)2倍順序地稀釋實(shí)施例6所制備的經(jīng)螢光團(tuán)標(biāo)記的DNA(0.4μg/ml)。經(jīng)于95℃下加熱該含有經(jīng)螢光團(tuán)標(biāo)記的DNA的溶液達(dá)5分鐘及隨后將其置于冰上冷卻達(dá)1分鐘后，將該含有經(jīng)螢光團(tuán)標(biāo)記的DNA的溶液(約20至25μl)加載至該凹槽中。于42℃和潮濕條件下，隔夜培育該DNA芯片以進(jìn)行雜交反應(yīng)。隨后移除覆蓋的玻璃片，且利用2×SSC沖洗該凹槽。室溫下利用0.1×SSC沖洗該凹槽5分鐘。重復(fù)上述的沖洗流程一次，再以二次蒸餾水輕洗該凹槽5分鐘達(dá)4次。干燥所得到的經(jīng)探測(cè)的DNA芯片，并以前述的方法進(jìn)行掃描。
實(shí)施例9掃描經(jīng)探測(cè)的生物芯片和DNA芯片利用GenePix 4000A載片掃描儀(Axon Instruments)掃描實(shí)施例8和9所制備的經(jīng)探測(cè)的生物芯片和DNA芯片，并隨后利用GenePix 3.0軟件加以分析，其中通過(guò)比例中間值(medium of ratios)計(jì)算螢光強(qiáng)度，其結(jié)果顯示于附圖中。
結(jié)果圖1A、1B及1C所示的數(shù)組樣品是順序地自欄A至J(由左至右)2倍稀釋。每一列的第1個(gè)樣品的濃度是如下所述第1列B-G(生物素化明膠)，100μg/ml
第2列生物素(Sigma B-4501)，400μg/ml第3列B-ACH(生物素酰胺基己酰肼(biotinamidocaproyl hydrazide)(Sigma B-3770)，400μg/ml第4列B-ACHSE(生物素酰胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(biotinamidocaproate N-hydroxysuccinimide ester)(Sigma B-2643)，400μg/ml第5列B-WGA(生物素化麥牙凝集素，Vector Lab B1025 S)，100mg/ml第6列人類IgG，100μg/ml第7列DIG-HSE(異羥基洋地黃毒苷(digoxigenin)3-O-甲基羰基-胺基己酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯，BM1333054)，100μg/ml第8列兔IgG，100μg/ml第9列皮質(zhì)醇，100μg/ml第10列肽PQGIAGQR，100μg/ml附圖中制備物所使用的蛋白質(zhì)濃度如下所述圖1(a)1μG/mlCy5鏈抗生物素蛋白圖1(b)0.5μg/mlCy3鏈抗生物素蛋白圖1(c)1/5000單株鼠抗DIG 0.5μg/mlCy3兔抗鼠IgG圖2所示的Cy3標(biāo)記肽的序列是CKPLIPDTKPKIKD。數(shù)組肽的濃度是自欄A至J(由左至右)起始自2μg/ml順序地2倍稀釋。
所使用的DNA是由PCR制備，且通過(guò)利用產(chǎn)品組套(High Pure PCR ProductPurification Kit，BM)依循制造商的指示進(jìn)行純化。
圖3(a)溶于30％DMSO/SSC的Cy3標(biāo)記的DNA，未經(jīng)任何修飾，自欄A至J順序地稀釋4次。組阻斷及沖洗處理后，掃描DNA芯片。第1個(gè)樣品濃度是0.2μg/ml。
圖3(b)如上述般將溶于緩沖液的DNA自欄A至J順序地稀釋4次。起始濃度是0.4μg/ml。經(jīng)阻斷及沖洗處理后，利用Cy3標(biāo)記的DNA探針培育DNA芯片。該Cy3標(biāo)記的DNA濃度是0.1μg/ml。
當(dāng)然，本技術(shù)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，以上的實(shí)施例僅是用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，而并非用作為對(duì)本發(fā)明的限定，只要在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)精神范圍內(nèi)，對(duì)以上所述實(shí)施例的變化、變型都將落在本發(fā)明權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，包含塑料載片和于該塑料載片上充作間隔層的涂層。
2.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該塑料載片的材質(zhì)是聚碳酸酯，或一種或多種單體所制備的同聚物或共聚物，該單體是選自乙烯，鹵乙烯，丙烯，鹵丙烯，丙烯酸酯，甲基丙烯酸酯，丁二烯，丙烯 ，原冰片烯或苯乙烯。
3.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該塑料載片的材質(zhì)是苯乙烯的聚合物。
4.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該塑料載片具有至少一個(gè)凹槽。
5.如權(quán)利要求4所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，每一個(gè)凹槽的深度可為相同或不同，且是介于低于0.03MM至0.5MM之間。
6.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，于涂覆該塑料載片前，利用多官能性醛及隨后浸沒(méi)于提供NH2基團(tuán)的前體溶液中以先期處理該塑料載片。
7.如權(quán)利要求6所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該多官能性醛是戊二醛。
8.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該提供NH2基團(tuán)的前體是NH4OH。
9.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該涂層是由多官能性分子所構(gòu)成。
10.如權(quán)利要求9所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該多官能性分子是于每一個(gè)終端含有至少一個(gè)環(huán)氧基的多官能性環(huán)氧化物。
11.如權(quán)利要求10所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，位于該多官能性環(huán)氧化物的一端的環(huán)氧基是與該經(jīng)先期處理的塑料載片的表面上的胺基反應(yīng)。
12.如權(quán)利要求10所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，位于該多官能性環(huán)氧化物的另一端的環(huán)氧基是與蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物的自由羥基，氫硫基及/或胺基反應(yīng)。
13.如權(quán)利要求10所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該多官能性環(huán)氧化物是含有6至24個(gè)碳原子的化學(xué)鏈。
14.如權(quán)利要求1所述的表面經(jīng)處理的塑料載片，其特征在于，該蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物是呈均一相或不均相。
15.一種供固定寡聚核苷酸或聚核苷酸用的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，包含聚苯乙烯材質(zhì)載片和于該聚苯乙烯材質(zhì)載片上充作間隔層的涂層。
16.如權(quán)利要求15所述的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，該涂層是通過(guò)于堿性條件下覆上試劑溶液而形成，該試劑溶液包含不含有NH4+基團(tuán)的緩沖液且該緩沖液含有提供正電荷的聚合物。
17.如權(quán)利要求16所述的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，該提供正電荷的聚合物是聚離胺酸。
18.如權(quán)利要求16所述的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，該不含有NH4+基團(tuán)的緩沖液是選自碳酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液。
19.如權(quán)利要求16所述的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，該堿性條件是介于PH9至11之間。
20.如權(quán)利要求15所述的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，該聚苯乙烯材質(zhì)載片具有至少一個(gè)凹槽。
21.如權(quán)利要求20所述的表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)載片，其特征在于，每一個(gè)凹槽的深度可為相同或不同，且是介于低于0.03MM至0.5MM之間。
全文摘要
本發(fā)明有關(guān)一種表面經(jīng)化學(xué)處理的塑料載片，用于在其表面上固定蛋白質(zhì)、肽或小分子化合物以制造生物芯片。本發(fā)明還有關(guān)一種表面經(jīng)處理的聚苯乙烯材質(zhì)的塑料載片，用于在其表面上固定寡聚核苷酸或聚核苷酸以制造DNA芯片。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1435488SQ0210344
公開(kāi)日2003年8月13日 申請(qǐng)日期2002年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月1日
發(fā)明者徐立偉, 張素真 申請(qǐng)人:先進(jìn)基因股份有限公司