專利名稱：一種利用核酸測序分析技術(shù)將核酸應(yīng)用于防偽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種利用核酸測序分析技術(shù)將核酸應(yīng)用于防偽的方法，屬于生物防偽技術(shù)領(lǐng)域。
常用的防偽技術(shù)包括激光全息防偽、磁性防偽、條形碼防偽、熒光防偽、隱形防偽、核隱形防偽、等離子隱形防偽、紫外光防偽、噴碼防偽、溫致變防偽、計算機(jī)編碼防偽等等。
傳統(tǒng)的防偽標(biāo)記大多是物理或化學(xué)性質(zhì)的制品，如光學(xué)變色膜、圖象擾頻、熱變油墨、磁條、軟件等。
目前國際上開始將生物技術(shù)利用于防偽上，形成了多樣的生物防偽技術(shù)和相應(yīng)的生物防偽標(biāo)記。這些防偽技術(shù)主要采用抗原抗體反應(yīng)原理，比一般的防偽技術(shù)準(zhǔn)確、靈敏。由于抗原抗體是蛋白質(zhì)，穩(wěn)定性較差，尤其在高溫環(huán)境中容易失活，從而降低防偽的靈敏度和可靠性。此外，抗原抗體反應(yīng)變化少，一旦知道其中一種成分，就容易被仿制。
本發(fā)明的一個目的是在生物防偽的技術(shù)領(lǐng)域克服已有標(biāo)記容易被仿制的缺陷，設(shè)計出將核酸密碼分析技術(shù)應(yīng)用于防偽的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種新的防偽標(biāo)記及檢測其真?zhèn)蔚姆椒ā?br> 本發(fā)明提供了一種新的防偽技術(shù)和防偽標(biāo)記，其核心是生物大分子一—核酸。一切生命的基本遺傳物質(zhì)(基因)都是核酸，也就是脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)核酸是由四種堿基交互排列組成，其排列組合的差異，形成地球上生命類型的多樣性。一條含有1000個堿基對(1kb)的DNA鏈就可能有10603種排列組合方式?，F(xiàn)在自然界的生物種類(動植物和微生物)在一百萬種以上，因此可以利用作防偽的天然生物基因數(shù)不勝數(shù)。每個物種基因級的長度一般均大于104至106kb。假若設(shè)定用1kb長度的核酸作防偽標(biāo)記，則可供選擇的核酸密碼就有105×(104--106)＝1010--1012之多。因此核酸中所包含的的海量信息為防偽技術(shù)提供了取之不盡的來源。利用核酸密碼序列這樣巨大的信息量可以有數(shù)以億萬計的密碼可用于防偽標(biāo)記。
DNA是由四種脫氧核糖核酸形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)，四種脫氧核糖核酸依其所結(jié)合的堿基不同而分為腺嘌呤(A)，鳥嘌呤(G)，胞嘧啶(C)，胸腺嘧啶(T)。不同的DNA序列，其堿基組成不同，故DNA的堿基組成有特異性，可通過測定一段DNA序列的核苷酸組成來判斷它的特異性。
對于微量的DNA序列，可以先通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)加以擴(kuò)增，使DNA達(dá)到測序儀檢測要求的有效濃度。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chainreaction，PCR)是以一段DNA序列為模板，以兩段寡核苷酸為引物，在DNA聚合酶的催化下特異性擴(kuò)增位于兩段引物之間的DNA區(qū)段。
本發(fā)明是將篩選的一段核酸(可以是DNA，或是RNA)，以一定量(可少到10-8克)固定到固相載體上。固相載體可以是各種各樣的材料，如各種天然或人造纖維制成的紙張或薄膜、多孔顆?；蚍勰?，天然或合成的皮革、塑料或各種有機(jī)或無機(jī)多聚體和樹脂、固體石臘、天然或合成的無機(jī)物質(zhì)如陶瓷、玻璃、水晶、金屬、硅藻土等。各種油墨和涂料也可作為防偽核酸的載體。
為了達(dá)到保護(hù)固相載體上作為防偽標(biāo)記的核酸的目的，可以在含有核酸的固相載體表面加上保護(hù)層，例如可用塑料薄膜，海藻糖等制成保護(hù)層。這種核酸防偽標(biāo)記可固定在商品或物件上或其包裝物及附屬物上。
當(dāng)需要檢驗(yàn)辨別真?zhèn)螘r，將本發(fā)明的防偽標(biāo)記揭去保護(hù)層，用緩沖液溶解固定在固相載體上的核酸。檢測人員用核酸測序方法對防偽標(biāo)記上的核酸進(jìn)行序列檢測，對照已知的核酸防偽標(biāo)記的核酸信息根據(jù)測序結(jié)果與已知核酸序列的比較，即能判定防偽標(biāo)記的真假。如果兩者一致，或結(jié)果有差異的不超過5個多核苷酸，則認(rèn)為防偽標(biāo)記為真。否則為假。
利用核酸制作防偽標(biāo)記有如下優(yōu)點(diǎn)1.不可仿制性首先核酸密碼無色，肉眼難以看到，其次，密碼來自自然界龐大的基因庫，即使知道是基因的密碼但不知是哪一種，仿冒者也無法破譯和仿造。而對檢驗(yàn)人員來說，只要以專用的分析方法測試，真?zhèn)蝿t一目了然。
2.可靠性只有按預(yù)定的核酸密碼設(shè)計的探針或PCR引物進(jìn)行檢驗(yàn)，才有可能探測出密碼的存在與密碼的種類，所以核酸密碼具有極高的專一性。
3.多樣性可以很容易設(shè)計出千萬種核酸密碼作為防偽標(biāo)記，每種都有自身相應(yīng)的探針和引物，互不通用。所以核酸密碼可為多種多樣的商品和物件分別提供獨(dú)特的防偽標(biāo)記體系。
4. 穩(wěn)定性核酸(特別是DNA)穩(wěn)定，特別是干燥的DNA存放經(jīng)久，不易分解，適于一些長期保存物件的防偽。
5.廣泛的適用性核酸密碼只需極微量(10-8-10-10克)存在于商品或物件中即可探測出來，因此適用于種類貴重的商品和物件。如科學(xué)儀器和家用電器；高檔服裝、家具及文體、文娛用品；高級煙酒、食品及營養(yǎng)品；農(nóng)業(yè)和園藝的珍奇或重要種子；重要的證件和文件；經(jīng)鑒定的珍貴文物和藝術(shù)品等等，幾乎所有固態(tài)的物件上都可適用。
本發(fā)明提供一張附圖


圖1為核酸測序分析技術(shù)所獲得的核酸密碼信息，其中，AGCT分別表示腺嘌呤(A)，鳥嘌呤(G)，胞嘧啶(C)，胸腺嘧啶(T)。
下面結(jié)合附圖就利用核酸測序分析技術(shù)將核酸應(yīng)用于防偽提出一項(xiàng)實(shí)施例本實(shí)施例采用核酸分子測序的方法驗(yàn)證DNA片段的專一性。按照PE公司Big-Dye Terminator測序試劑盒說明進(jìn)行，具體操作步驟如下1.依次加入4μl反應(yīng)緩沖液，200ng DNA模板，1.6pmol特異引物，加雙蒸水使總體積達(dá)到10μl。
2.按96℃10秒，50℃5秒，60℃4分鐘，循環(huán)25次進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3.加入18μl95％乙醇，混勻后冰浴10分鐘。
4.6000g離心30分鐘。
5.鋪一層雪花紙倒置，700g離心2分鐘。
6.加2μl上樣緩沖液，混勻后上樣，在PE公司377測序儀上反應(yīng)，測序結(jié)果見
圖1?？梢跃_判斷是否正品。
需要說明的本實(shí)施例只是一個通例，不是固定的操作程序。實(shí)際操作中，常隨DNA模板和引物設(shè)計上的不同而有所變化，否則不能達(dá)到預(yù)期結(jié)果。這種嚴(yán)格的操作條件對于防偽又極為有利，因防冒者不知反應(yīng)條件，無從破譯密碼。
權(quán)利要求
1.一種利用核酸測序分析技術(shù)將核酸應(yīng)用于防偽的方法，其特征在于將核酸或其片斷，固定在固相載體上用來作為防偽標(biāo)記，利用核酸測序分析技術(shù)檢驗(yàn)真?zhèn)巍?br> 2.如權(quán)利要求1所述的防偽標(biāo)記，其特征在于所述的防偽標(biāo)記可直接固定在任何固態(tài)的物體上。
3.如權(quán)利要求1所述的防偽標(biāo)記，其特征在于所述的防偽標(biāo)記可以加覆塑料薄膜或海藻糖等保護(hù)層。
4. 如權(quán)利要求1所述的固相載體，其特征在于所述的固相載體可以是天然或人造纖維、紙張、薄膜、皮革、塑料、多孔顆粒、粉末、樹脂、固體石臘、陶瓷、玻璃等有機(jī)或無機(jī)的固態(tài)材料。
5.如權(quán)利要求1所述的檢驗(yàn)防偽標(biāo)記真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于根?jù)防偽標(biāo)記上核酸的測序結(jié)果與已知核酸序列的比較，即能判定防偽標(biāo)記的真假。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的將核酸應(yīng)用于防偽的方法,將核酸制成防偽標(biāo)記并利用核酸測序分析技術(shù)檢測出真?zhèn)?。本發(fā)明還公開了以此技術(shù)制作防偽標(biāo)記的方法。本發(fā)明還公開了這種新的方法的用途。
文檔編號C12Q1/68GK1344807SQ0012549
公開日2002年4月17日 申請日期2000年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月29日
發(fā)明者毛裕民, 謝毅 申請人:上海博德基因開發(fā)有限公司