櫻花組織培養(yǎng)和快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物的培養(yǎng)方法，具體地指一種櫻花組織培養(yǎng)和快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]樓花，一般指的是薔薇科(Rosaeeae)李亞科(Prunoidea)樓屬(Cerasus)植物的花朵統(tǒng)稱。櫻花屬木本，傳統(tǒng)的繁殖方法主要是利用扦插、嫁接等繁殖方法，但這些繁殖方法一方面需要大量的母株，另方面還需花費大量人力、物力、財力、時間等，且繁殖系數(shù)低，成苗慢。隨著櫻花在城市和鄉(xiāng)鎮(zhèn)園林綠化建設(shè)中的廣泛應(yīng)用，需要大規(guī)模的苗木。因此，傳統(tǒng)的繁殖方法已遠遠不能滿足生產(chǎn)上的需要。
[0003]隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，人們利用植物細胞的全能性，在人工控制的環(huán)境中，可以利用植物的莖尖、莖段、葉片等外植體誘導(dǎo)成小植株，這就是植物組織培養(yǎng)技術(shù)。植物組織苗具有根系發(fā)達，生長健壯，抗性增強，管理粗放，降低生產(chǎn)成本等特點。組織培養(yǎng)技術(shù)不僅具有繁殖系數(shù)大、成苗周期短的優(yōu)點，而且能夠保持親本優(yōu)良遺傳性狀的穩(wěn)定性，為櫻花快速繁殖和工業(yè)化生產(chǎn)提供了一條有效的途徑。
[0004]近年來櫻花的組培快繁技術(shù)日益受到人們的關(guān)注，并開展了廣泛的研究，論文“日本晚櫻組培快繁技術(shù)研究”(中國農(nóng)學(xué)通報，第22卷，第10期，264-266)中將晚櫻進行組培快繁，增值系數(shù)最高為2.31?，F(xiàn)有技術(shù)櫻花的組培快繁過程中:外植體萌芽率約為30?40%、增殖系數(shù)I?2.4、生根率不足50%，較低的成活率嚴重制約了櫻花在城市綠化及園林建設(shè)中的應(yīng)用。
[0005]目前，每當春天櫻花盛開之季，各地櫻花公園的游人如織，形成了獨特的“賞櫻游”并催生了 “櫻花經(jīng)濟”，據(jù)湖北省統(tǒng)計局報道，湖北省2013年首嘗“花經(jīng)濟”碩果400億，僅櫻花一項就占全年旅游收入的20%，可見櫻花在國內(nèi)園林綠化中的地位十分重要，因此生產(chǎn)上迫切需要探討出一種外植體萌芽率高、增殖系數(shù)大、生根率好的櫻花快速繁殖技術(shù)，推動我國櫻花產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是要解決上述【背景技術(shù)】的不足，提供一種外植體萌芽率高、增殖系數(shù)大、生根率好的櫻花組織培養(yǎng)和快速繁殖方法。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種櫻花組織培養(yǎng)和快速繁殖方法，其特征在于，步驟為:
[0008](I)櫻花莖段外植體的獲得:取櫻花一年生幼嫩枝條剪成枝段，經(jīng)消毒、無菌水沖洗、吸干水分后，將枝段切成帶一個腋芽的莖段；
[0009](2)櫻花莖段外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng):將帶一個腋芽的莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4?5周后腋芽開始萌動，形成小芽;所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為:MS+6-BA 0.5?1.0mg/L+NAA或IBA
0.1?0.2mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂6g/L，pH 5.6?6.0;
[0010](3)櫻花叢生芽的增殖培養(yǎng):將由腋芽萌動形成的小芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，4?5周后形成叢生芽;所述增殖培養(yǎng)基成分為:WPM+KT 1.0?2.0mg/L+IBA 0.05?0.2mg/L+活性炭0.5g/L+鹿糖30g/L+瓊脂6g/L，pH 5.6?6.0 ；
[0011 ] (4)樓花的生根培養(yǎng):共分2個階段，第一階段:先將叢生芽切割的單芽在第一生根培養(yǎng)基培養(yǎng)I周;第二階段:再轉(zhuǎn)接第二生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)3?4周，長出良好的根系;所述第一生根培養(yǎng)基成分為:1/2WPM+IBA O?I.5mg/L+NAA 0.5?I.0mg/L+活性炭0.5g/L+蔗糖25g/L+瓊脂6g/L，pH 5.6?6.0;所述第二生根培養(yǎng)基成分為:1/2WPM+活性炭0.5g/L+蔗糖25g/L+瓊脂6g/L，pH 5.6?6.0;
[0012](5)櫻花組培苗的煉苗和移栽:常溫?zé)捗??6d后，移栽入基質(zhì)中培養(yǎng)4?5周，獲得櫻花的快速繁殖苗。
[0013]誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為:MS+6-BA0.5?I.0mg/L+NAA或IBA 0.I?0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH 5.6?6.0，表示以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，每升基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入6-BA0.5?1.0mg、NAA或IBA0.1?0.2mg、蔗糖30g、瓊脂6g，培養(yǎng)基pH 5.6?6.0。以下增殖培養(yǎng)基、第一生根培養(yǎng)基、第二生根培養(yǎng)基同理，均為現(xiàn)有技術(shù)中植物培養(yǎng)基成分的通用表不方法，6_BA、NAA、IBA、KT為植物生長調(diào)節(jié)劑。
[0014]優(yōu)選的，所述步驟(I)為:
[0015]櫻花莖段外植體的獲得:春天花后取櫻花母株上生長發(fā)育正常、健康粗壯、無病害和蟲害的一年生幼嫩枝條;用清水將嫩枝清洗干凈，剪成3_5cm枝段，后用緩慢流水沖淋2?4h，再在超凈工作臺上用70 %的酒精浸泡30?40s，用無菌水沖洗3?5次后用0.1 %的升汞浸泡3?5min，無菌水沖洗3?5次，重復(fù)0.1 %的升萊浸泡3?5min，無菌水沖洗3?5次；用吸水紙吸干多余水分，將枝段切成帶一個腋芽的莖段。
[0016]優(yōu)選的，所述步驟(2)中誘導(dǎo)培養(yǎng)基、步驟(3)中增殖培養(yǎng)基、步驟(4)中第一生根培養(yǎng)基、第二生根培養(yǎng)基配制好后均用蒸汽高壓滅菌鍋滅菌，121°C滅菌20min。
[0017]優(yōu)選的，所述步驟(2)、步驟(3)、步驟(4)的培養(yǎng)條件均為:日光燈光源，每天連續(xù)光照16h，光照強度為1500?20001x，培養(yǎng)溫度(25 ± I) °C。
[0018]優(yōu)選的，所述步驟(5)為:
[0019]櫻花組培苗的煉苗和移栽:將生根的試管苗移至常溫環(huán)境中，去除試管苗所在培養(yǎng)瓶的封口膜，在常溫?zé)捗??6d后，取出試管苗，再用清水洗凈試管苗的根系后，移栽入由消毒蛭石、消毒泥炭、消毒珍珠巖混合而成的基質(zhì)中培養(yǎng)4?5周，獲得櫻花的快速繁殖苗。
[0020]進一步的，所述步驟(5)中基質(zhì)由消毒蛭石、消毒泥炭、消毒珍珠巖按體積比1:1:1混合而成。
[0021]本發(fā)明的有益效果為:
[0022]1.生根培養(yǎng)采用兩階段共同培養(yǎng)，在第一生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)I周后再轉(zhuǎn)入第二生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)3?4周，兩種不同的培養(yǎng)基調(diào)節(jié)了生根階段單芽所需的養(yǎng)分，使吸收的營養(yǎng)均衡，提高了生根率。櫻花組織培養(yǎng)和快速繁殖的方法體系穩(wěn)定，操作較易，增殖率和組培苗生根率高，莖段外植體萌芽率為70 %以上，增殖系數(shù)為4.0以上，生根率為90 %以上。
[0023]2.獲得的幼苗生根容易，健壯抗逆，抗病蟲能力強，且幼苗整齊一致，質(zhì)量高，栽培管理較容易。利用本發(fā)明獲得的組培苗，對濕熱環(huán)境適應(yīng)能力強，其莖干挺立，質(zhì)量提高I?2個等級，價值增加20 %?40 %。
[0024]3.對實現(xiàn)櫻花的規(guī)范化種植，為櫻花的現(xiàn)代化生產(chǎn)得到高產(chǎn)量、優(yōu)品質(zhì)的櫻花產(chǎn)品起到關(guān)鍵性的作用，具有較好的市場應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0025]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0026]實施例1
[0027]櫻花組織培養(yǎng)和快速繁殖方法的步驟為:
[0028](I)櫻花莖段外植體的獲得:
[0029]春天花后取櫻花母株上生長發(fā)育正常、健康粗壯、無病蟲害的一年生帶頂芽的幼嫩枝條，剪成5cm左右枝段，于流水中沖洗2h，然后在超凈工作臺上將材料浸入70 %酒精中浸泡30s，用無菌水沖洗3次，再用0.1 %升萊消毒3min，無菌水沖洗3次，重復(fù)0.1 %升萊消毒3min，無菌水沖洗3次。將消毒好的材料放入無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，用吸水紙吸干多余水分，將枝段切成帶一個腋芽的莖段。
[0030](2)櫻花莖段外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng):
[0031]將帶一個腋芽的莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH 5.6?6.0 (優(yōu)選5.6)，即在1000ml MS培養(yǎng)基中加入1.0mg 6-1^、0.111^凡嫩4、3(^的