[0045] 實驗用海水為珠海近海海水，通過運水車運至珠海市斗口區(qū)河口漁業(yè)研究所。淡 水為珠海自來水廠供應(yīng)的自來水。分別用化〇2、MgClz(分析純）在自來水中添加巧、儀離 子至海水的濃度W得到添加巧儀的自來水。用ATAG0手持式折光儀測定鹽度，用邸TA絡(luò)合 滴定法測定巧、儀離子濃度，用火焰原子吸收光譜法測定鋼、鐘離子濃度，各實驗用水離子 濃度如（表1)。W上實驗用水都經(jīng)充分沉淀和曝氣后用于鹽度馴化或淡化實驗。
[0046] 表1實驗用水離子濃度
[0047]
W4引 2實驗方法
[0049] 2. 1鹽度馴化實驗
[0050] 本實驗為降鹽度馴化實驗，1~4d進行淡化，5~lOd穩(wěn)定培養(yǎng)。設(shè)置降鹽度梯 度為每日降1、降2、降3、降4、降2補充巧儀（巧、儀離子濃度至海水濃度）、降4補充巧儀 (巧、儀離子濃度至海水濃度），對照組為海水，鹽度30。每個處理組設(shè)置3個平行，7X3共 21個水箱。
[0051] 每處理組各選取200尾健康初解仔魚放入裝有2化海水的水箱內(nèi)。溫度16~ 20°C，日光燈控制光照強度為400~lOOOlux，微充氣。其中日降1、降2、降3、降4的處理 組用自來水進行淡化；日降2補充巧儀、日降4補充巧儀的處理組用添加巧儀的自來水進行 淡化。各處理組鹽度變化如（表2)。第4日開始投喂經(jīng)室外池塘培育的輪蟲，密度保持在 5~10個/mU每日吸污并穩(wěn)定培育至lOd。每日吸除死亡仔魚2次（W玻璃棒親觸無反 應(yīng)的為死亡）并計數(shù)，觀察仔魚分布狀態(tài)。分別于0、2、4、10d每處理組采樣15尾，用江南 SE2200體視鏡觀察，并用圖森IS500顯微相機拍照后測量仔魚全長、卵黃囊長徑、卵黃囊短 徑、油球直徑。第lOd實驗結(jié)束時每處理組各取樣50~100尾，用蒸饋水洗凈后投入液氮 中保存?zhèn)溆谩?br>[0052] 表2各處理組的鹽度變化
[0053]
陽化5] 2. 2指標測定
[0056]生長率=(Li-L〇)/T
[0057]公式中，L。為開始時測量（Od)的仔魚全長，L1為結(jié)束時測量（4d)的仔魚全長；T 為開始到結(jié)束的天數(shù)。
[0058] 卵黃囊體積和油球體積計算公式參照（Alderdice等，1979)的方法：
[0059]卵黃囊體積=4/3· 31 .(r/2)2.Ri/2
[0060]油球體積=4/3· 31 ·巧2/2)3
[0061] 公式中，r為卵黃囊短徑，Ri為卵黃囊長徑，R2為油球直徑。
[0062] 卵黃囊利用效率和油球利用效率計算公式參照巧ideout等，2004)的方法做出改 良： 陽06；3]卵黃囊利用效率二化1-L。)/燈。-Yi) W64] 油球利用效率=化i-U)/(〇e-〇i) W65] 公式中，L。為開始時測量（Od)的仔魚全長，L1為結(jié)束時測量（4d)的仔魚全長；Y。 為開始時測量（Od)的仔魚卵黃囊體積，Yi為結(jié)束時測量（4d)的仔魚卵黃囊體積；0。為開 始時測量（Od)的仔魚油球體積，〇1為結(jié)束時測量（4d)的仔魚油球體積。
[0066] lOd齡的仔魚樣品采用全魚整體勻漿的方法制備組織勻漿液，勻漿后取上清液備 用。采用南京建成生物工程公司生產(chǎn)的試劑盒測定ATP酶、過氧化氨酶、抗氧化酶的活性。 總蛋白含量依據(jù)化a壯ord(1976)的方法測定，用W計算ATP酶、過氧化氨酶、抗氧化酶的相 對活性。
[0067] 2. 3數(shù)據(jù)分析
[0068] 運用SPSS統(tǒng)計軟件（19. 0)對存活率、生長率、卵黃囊體積、油球體積、卵黃囊利 用效率、油球利用效率、化\r-AT化se相對活性、Ca2\Mg2+-AT化se相對活性、過氧化 氨酶相對活性、抗氧化酶相對活性進行AN0VA單因素方差分析，并進行DUNCAN多重比較， WP< 0. 05為有顯著性差異；所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)+標準誤表示（Mean±SEM)，最后用 EXCEL2013 作圖。 W例3結(jié)果
[0070] 3. 1不同鹽度馴化下花驢仔魚的分布狀態(tài)
[0071] 表3顯示了實驗過程中仔魚在水層中的分布狀態(tài)。4化p前，仔魚在不同鹽度中的 分布水層與受精卵在不同鹽度中的分布水層相同，鹽度馴化低于23的處理組，仔魚沉底； 4~5化h所有處理組的仔魚都處于中層W上；6~1(M地鹽度低于18的處理組的仔魚沉 底，9化h后原處于上層水層的處理組也分布于中層水層。
[0072] 表3不同鹽度馴化下花驢仔魚的分布狀態(tài)
[0073]
陽074] 注：上層為水體上部20%水層，底層為水體下部20%水層，中層為水體中部60% 水層，根據(jù)70%W上仔魚分布的區(qū)域界定其分布水層
[0075] 3. 2不同鹽度馴化下花驢仔魚的存活率
[0076] 不同梯度的鹽度馴化對花驢仔魚的存活率有影響（圖1)。4化h(淡化處理結(jié)束 時），各處理組的存活率沒有顯著性差異（P> 0. 05)。1(M地時各處理組的存活率隨著降鹽 幅度的增大而降低，其中日降3、日降4、日降4補巧儀的存活率要比對照組低（P< 0. 05); 在同一降鹽度梯度中，補充巧、儀離子不影響仔魚的存活率（P> 0. 05)。
[0077] 3. 3不同鹽度馴化下花驢仔魚的生長
[0078] 不同梯度的鹽度馴化對花驢仔魚的生長有影響（圖2)。4化h內(nèi)的日生長率，隨著 鹽度的降低先增大后減小，在日降3組有最大值。日降4和日降4補充巧儀組與對照組沒 有顯著性差異（P> 0. 05)。
[0079] 4~l(Mph的日生長率，隨著鹽度的降低先減小后增大，日降3有最小值（P < 0.05)。其中日降 2(-.0042±.03001mm)、日降 2 補充巧儀（-.0019+ .06067)、日降 3(-.0136 + .06340)出現(xiàn)了負生長。日降4和日降4補充巧儀有最大值（P< 0.05)。
[0080] 3. 4不同鹽度馴化下花驢仔魚卵黃囊和油球的變化
[0081] 不同梯度的鹽度馴化對花驢仔魚卵黃囊消耗和油球消耗均沒有顯著性影響（P> 0. 05,圖3)。0~2化h仔魚卵黃囊已完成大部分消耗，2~4化h仔魚卵黃囊消耗速率相對 降低（圖3A)。2化h時仔魚油球消耗了大約50% (圖3B)，4化h后仔魚油球體積變化速率 相對降低，而油球顏色逐漸由鮮黃轉(zhuǎn)為透明。
[0082] 不同梯度的鹽度馴化對花驢仔魚4化h內(nèi)的油球利用效率和卵黃囊利用效率有顯 著性影響（P< 0. 05,圖4)。油球利用效率和卵黃囊利用效率變化規(guī)律相同，并且與4化h 內(nèi)的生長率有相同變化趨勢，隨著鹽度的降低先增大后減小。 陽08引在日降3組，油球利用效率（43. 58 + 2. 50mm/mm3)和卵黃囊利用效率 (0. 91 + 0. 05mm/mm3)有最大值；同一降鹽度梯度中，補充巧、儀離子對油球利用效率和卵黃 囊利用效率沒有顯著性影響（P> 0. 05)。
[0084] 3. 5不同鹽度馴化下花驢仔魚ATP酶的活性
[0085] 不同梯度的鹽度馴化對1(M地花驢仔魚的^\r-ATPase相對活性有影響（圖5)。 各正常降鹽度組與對照組相比，1(M地仔魚的化\r-ATPase相對活性沒有顯著性差異（P > 0. 05)。補充了巧、儀離子的處理組化\r-ATPase酶活性與對照組相比出現(xiàn)了顯著性增 大，并隨著補充巧、儀離子量的增加而增大。
[0086] 不同梯度的鹽度馴化對l(Mph花驢仔魚的Ca2\Mg2+-ATPase相對活性有影響（圖 6)。日降4和日降4補充巧儀組的Ca2\Mg2+-ATPase相對活性與對照組相比出現(xiàn)了顯著性 增大（P< 0. 05)，并且補充巧儀組要高于未補充巧儀組。
[0087] 3. 6不同鹽度馴化下花驢仔魚抗氧化酶的活性
[008引不同梯度的鹽度馴化對1(M地花驢仔魚的過氧化氨酶相對活性有影響（圖7)。日 降4、日降2補充巧儀和日降4補充巧儀的CAT酶相對活性顯著高于對照組（P< 0. 05)。同 一降鹽度梯度中，補充巧、儀離子的處理組CAT相對活性要高于未補充的；但日降4的鹽度 組中，CAT相對活性在統(tǒng)計上并沒有顯著性差異（P> 0. 05)。
[0089] 不同梯度的鹽度馴化對1(M地花驢仔魚的抗氧化酶相對活性有影響（圖8)。日降 4和日漸4補充巧儀組SOD活性顯著高于對照組（P< 0. 05)。
[0090] 盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可W 理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可W對運些實施例進行多種變化、修改、替換 和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。
【主權(quán)項】
1. 一種鹽度馴化花鱸仔魚的方法，其特征在于：所述的方法是在第1-4天進行淡化養(yǎng) 殖，第5-10天進行穩(wěn)定培養(yǎng)；初始海水鹽度為30,第1-4天，每日降低1-4個鹽度；養(yǎng)殖條 件為：溫度16~20°C，日光燈控制光照強度為400~lOOOlux;第4日開始投喂經(jīng)室外池塘 培育的輪蟲，密度保持在5~10個/mL，每日吸污并穩(wěn)定培育至10d。2. 如權(quán)利要求1所述的鹽度馴化花鱸仔魚的方法，其特征在于：淡化通過添加自來水 完成。3. 如權(quán)利要求1所述的鹽度馴化花鱸仔魚的方法，其特征在于：每日降低2和4鹽度， 同時添加鈣、鎂離子濃度至海水濃度。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鹽度馴化花鱸仔魚的方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明的鹽度馴化花鱸仔魚的方法是在第1-4天進行淡化養(yǎng)殖，第5-10天進行穩(wěn)定培養(yǎng)；初始海水鹽度為30，第1-4天，每日降低1-4個鹽度；養(yǎng)殖條件為：溫度16～20℃，日光燈控制光照強度為400～1000lux；第4日開始投喂經(jīng)室外池塘培育的輪蟲，密度保持在5～10個/mL，每日吸污并穩(wěn)定培育至10d。本發(fā)明的鹽度馴化花鱸仔魚的方法能夠提供花鱸的存活率，更加有利于花鱸生長，改善ATP酶活性和抗氧化酶活性，為花鱸早期階段進行淡水養(yǎng)殖奠定了基礎(chǔ)。
【IPC分類】A01K61/00
【公開號】CN105379651
【申請?zhí)枴緾N201510797226
【發(fā)明人】溫海深, 黃杰斯, 張美昭, 李吉方, 何峰
【申請人】中國海洋大學
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年11月18日