沒有抗菌活性，因此，幾十年來人們一直以絲核菌為對象，研究井閃霉素的 選擇性機制，發(fā)現(xiàn)有效霉素/井閃霉素干擾絲核菌肌醇和海藻糖代謝，從而破壞細胞壁的 構造，阻止絲核菌侵染植物，具有良好的保護作用。數(shù)十年來該抗生素一直被局限于用來防 治農作物絲核菌病害，尤其是水稻紋枯病。
[0037] 眾所周知，作用單一的專化性殺菌劑極易篩選出抗藥性病原菌，在廣泛應用后不 久便會失去應用價值。本發(fā)明人自20世紀80年代研究絲核菌對選擇性井閃霉素的抗藥性 風險，發(fā)現(xiàn)井閃霉素不同于抗性風險極高的其它任何選擇性抗生素和化學殺菌劑，在實驗 室和田間條件下均無法篩選到井閃霉素抗性絲核菌。由此推斷，井閃霉素除干擾已知的肌 醇和海藻糖生物合成以外，可能還存在其他特殊的抗病作用機制。
[0038] 本發(fā)明人在研究鐮刀菌DON毒素生物合成途徑及調控機制的基礎上，開展了抑制 DON毒素生物合成的大量化合物篩選。在篩選過程中，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)井閃霉素在一定處理 劑量下，能夠強烈抑制小麥赤霉病菌DON毒素生物合成早期途徑中的生物化學反應。因此， 提供一種降低DON污染的井閃霉素與戊唑醇組合物防治麥類赤霉病技術，成為本發(fā)明的重 要目的。
[0039] 本發(fā)明人在國際上首次開展了井岡霉素/有效霉素抑制鐮刀菌致病因子DON合 成，及其與其他各種殺菌劑的混合物在田間防治麥類赤霉病的增效配方篩選，創(chuàng)造性地發(fā) 現(xiàn)其中井閃霉素與戊唑醇組合物防治麥類作物赤霉病具有顯著增效、降低DON毒素污染和 大幅度減少戊唑醇用量的有益效果。
[0040] 在本發(fā)明的農藥組合物中，如果井岡霉素的量在1~150重量份范圍內，而戊唑醇 的量小于1重量份時，則會降低對赤霉病的防治效果；戊唑醇的量大于30重量份時，則會增 加成本和抑制小麥生長。因此，戊唑醇的量為1~30重量份是合理的。
[0041] 同樣地，如果戊唑醇的量在1~30重量份范圍內，而井岡霉素的量小于1重量份 時，則會失去與戊唑醇協(xié)同防治赤霉病、降低毒素污染水平的增效作用；井岡霉素的量大于 150重量份時，則會增加成本，降低與戊唑醇協(xié)同防治赤霉病和降低毒素污染的增效作用； 因此，井岡霉素的量為1~150重量份是恰當?shù)摹?br>[0042] 優(yōu)選地，所述的農藥組合物是由井閃霉素與戊唑醇按照重量比5~85 :3~24組 成的。
[0043] 更優(yōu)選地，所述的農藥組合物是由井閃霉素與戊唑醇按照重量比5~30 :6~18 組成的。
[0044] 本發(fā)明使用的井閃霉素與戊唑醇都是目前市場上銷售的常規(guī)農藥產品，例如由浙 江錢江生物化學股份有限公司3%、5% A、20%、40% A、60% A井閃霉素粉劑和水劑；由江 蘇省鹽城雙寧農化有限公司生產的25%戊唑醇可濕性粉劑。
[0045] 本發(fā)明還涉及一種用于防治麥類赤霉病的農用殺菌劑制劑。所述的農用殺菌劑含 有以重量計〇. 1~90. 0%所述的井閃霉素與戊唑醇殺菌劑組合物，余量為在農藥中可接受 的載體和/或助劑。
[0046] 在本發(fā)明中，農藥載體或助劑應該理解是在農藥制劑加工或使用中用于改善藥劑 理化性質，提高藥效，便于運輸貯藏等性能的輔助物質，例如潤濕劑、乳化劑、分散劑、粘著 劑、穩(wěn)定劑或增效劑。根據(jù)本發(fā)明，凡是具有這些性能且對本發(fā)明的農用殺菌劑沒有任何負 面影響的化學物質都可以用于本發(fā)明，它們都在本發(fā)明的保護范圍之內。
[0047] 本發(fā)明使用的載體例如是一種或多種選自水、凹凸棒土、高嶺土或輕質碳酸鈣。除 此之外，本發(fā)明也可以使用符合本發(fā)明要求的在本技術領域里通常使用的其它載體。
[0048] 本發(fā)明使用的助劑例如選自乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、NN0-1 (化學名稱：萘磺 酸甲醛縮合物鈉鹽）、NN0_7(化學名稱：萘磺酸甲醛縮合物鈣鹽）、黃原膠、聚乙二醇、甘油、 拉開粉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、硫酸銨、烷基酚聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯 基醚磷酸酯、脂肪酸聚氧乙烯酯、苯甲酸、木質素磺酸鈉、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。本發(fā) 明使用的助劑是目前市場上廣泛銷售的產品，例如由新沂市飛皇化工有限公司以商品名 NN0-1、NN0-7銷售的擴散劑、由湖北興銀河化工有限公司以商品名拉開粉銷售的丁基萘磺 酸鈉乳化、擴散和滲透劑、由上海忠誠精細化工有限公司銷售的烷基酚聚氧乙烯醚、由廣州 市西陸化工有限公司銷售的烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、由山東省梁山宏泰環(huán)氧大豆油有 限公司銷售的脂肪酸聚氧乙烯酯、由江西省萍鄉(xiāng)麻山助劑廠銷售的羧甲基纖維素。除此之 外，本發(fā)明也可以使用符合本發(fā)明要求的在本技術領域里通常使用的其它助劑。
[0049] 在本發(fā)明中，在所述的農用殺菌劑中，所述的農藥組合物的量小于0. 1 %時，則會 增加生產運輸成本及降低防病效果或失去增效作用；所述的農藥組合物的量大于90. 0% 時，則會惡化制劑的物理性能，失去增效作用或降低防病效果；因此，所述農藥組合物的量 為0. 1~90. 0%是合理的。
[0050] 優(yōu)選地，所述的農用殺菌劑含有以重量計10~75. 0%所述的農藥組合物，余量為 在農藥中可接受的載體和/或助劑。
[0051] 更優(yōu)選地，所述的農用殺菌劑含有以重量計26~58. 0%所述的農藥組合物，余量 為在農藥中可接受的載體和/或助劑。
[0052] 在實際應用中，可以按照本領域技術人員熟知的方法將本發(fā)明的殺菌組合物與載 體和/或助劑配制加工成在農業(yè)上通常采用的劑型，例如懸浮劑、水乳劑、微乳劑、可濕性 粉劑或水分散粒劑。
[0053] 在制備懸浮劑時，可以使用的載體或助劑例如是選自烷基萘磺酸鹽、聚羧酸鹽或 木質素磺酸鹽的分散劑；選自烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、 烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽或萘磺酸鹽的潤濕劑；選自黃原膠、硅酸鎂鋁、膨潤土的增稠劑； 選自苯甲酸或苯甲酸鈉的防腐劑；有機硅類消泡劑；選自甘油、尿素、乙二醇或丙二醇的防 凍劑。
[0054] 在制備水乳劑時，可以使用的載體或助劑例如是選自農乳700、農乳2201、 Span-60或乳化劑T-60的乳化劑；選自二甲苯、甲苯或環(huán)己酮的溶劑；選自亞磷酸三苯酯或 環(huán)氧氯丙烷的穩(wěn)定劑；選自乙二醇、丙二醇、甘油或尿素的防凍劑；選自硅酸鎂鋁、膨潤土 或黃原膠的增稠劑；選自苯甲酸或苯甲酸鈉的防腐劑。
[0055] 在制備微乳劑時，可以使用的載體或助劑例如是選自十二烷基苯磺酸鈣（農乳 500)、農乳700、農乳2201、斯盤-60、吐溫-80或TX-10的乳化劑；選自甲醇、異丙醇、正丁 醇或乙醇的助溶劑；選自二甲苯、甲苯、環(huán)己酮或N-甲基吡咯烷酮的溶劑；選自亞磷酸三苯 酯或環(huán)氧氯丙烷的穩(wěn)定劑。
[0056] 在制備可濕性粉劑時，可以使用的載體或助劑例如是選自聚羧酸鹽、木質素磺酸 鹽或烷基萘磺酸鹽的分散劑；選自烷基磺酸鹽、烷基硫酸鹽或萘磺酸鹽的潤濕劑；選自輕 質碳酸鈣、滑石粉、硅藻土、高嶺土或凹凸棒土的填料。
[0057] 在制備水分散粒劑時，可以使用的載體或助劑例如是選自聚羧酸鹽、木質素磺酸 鹽或烷基萘磺酸鹽的分散劑；選自烷基硫酸鹽、聚氧乙烯醇、烷基磺酸鹽或萘磺酸鹽的潤濕 劑；選自檸檬酸、硫酸銨、葡萄糖、尿素或碳酸氫鈉的崩解劑；選自玉米淀粉、微晶纖維素類 或硅藻土粘結劑；選自輕質碳酸鈣、海泡石、硅藻土、高嶺土、凹凸棒土或滑石粉的填料。
[0058] 下面將分別進行詳細說明其研究結果。
[0059] I、抑制鐮刀菌生長的活性化合物篩選
[0060] 本發(fā)明采用殺菌劑生物測定的常規(guī)方法，將井閃霉素和戊唑醇原藥分別用滅菌水 及甲醇配制成2mg/mL母液，對照藥劑多菌靈原藥溶于0. 1M/L鹽酸溶液、氰烯菌酯溶于甲 醇，制成2mg/mL母液。在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA)冷卻至溫度約45°C時，分別加入 井岡霉素和戊唑醇至設計濃度（見表1)，然后倒入培養(yǎng)皿制成不同藥劑處理的平板，每處 理3皿重復，接種引起麥類赤霉病的常見禾谷鐮刀菌Fusarium graminearum和亞洲鐮刀菌 Fusarium asiaticum野生敏感菌株（簡稱敏感菌株）及多菌靈和氰稀菌酯抗性菌株（簡稱 抗藥性菌株）的菌絲塊，在溫度25°C下培養(yǎng)4天，十字交叉法量取菌落直徑，根據(jù)劑量-反 應曲線計算不同處理抑制病菌生長50%的有效中劑量出(：5。值），并比較抗菌活性。
[0061] 試驗結果表明，井閃霉素在離體下無論是單劑還是與戊唑醇混用對引起赤霉病的 這兩種鐮刀菌敏感菌株和抗藥性菌株的生長基本沒有抑制活性，只有井閃霉素高達50 μ g/ mL濃度時，對兩種鐮刀菌生長才有6. 5%~7. 8%的抑制作用。但戊唑醇對兩種鐮刀菌的敏 感菌株及抗藥性菌株的菌絲生長具有相似的強烈抑制作用，0. 078 μ g/mL戊唑醇處理對菌 絲生長的抑制作用即可接近50 %。井閃霉素在離體條件下對戊唑醇抑制菌絲生長沒有增效 作用（表1)。
[0062] 根據(jù)亞洲鐮刀菌和禾谷鐮刀菌野生敏感菌株及多菌靈和氰烯菌酯抗性菌株在戊 唑醇不同劑量處理下的生長抑制率，計算戊唑醇對不同藥敏性菌株生長抑制的有效中劑量 (EC5。)，結果發(fā)現(xiàn)敏感菌株、多菌靈抗性菌株、氰烯菌酯抗性菌株對戊唑醇的敏感性相似， EC5。為0. 085~0. 116 μ g/mL，試驗結果列于表2中。
[0063] 以藥劑EC5。為參數(shù)，比較不同殺菌劑抑制鐮刀菌生長的活性，發(fā)現(xiàn)戊唑醇的活性 約是多菌靈對敏感菌株活性（對兩種鐮刀菌EC5。均為0. 45 μ g/mL)的4. 5倍，氰烯菌酯對 敏感菌株活性（對兩種鐮刀菌EC5。均為0. 165 μ g/mL)的1. 5倍。該結果說明戊唑醇具有 強烈抑制野生敏感菌株和多菌靈及氰烯菌酯抗性鐮刀菌生長的活性，利于降低侵染谷物的 DON毒素污染水平和防治抗藥性病害。
[0064] 表1 :井閃霉素和戊唑醇離體條件下對兩種鐮刀菌敏感菌株生長的影響
[0067] *F. g 和 F. a 分別是 Fusarium graminearum和 Fusarium asiaticum 的縮寫，下同。
[0068] 表2 :戊唑醇對兩種鐮刀菌敏感及多菌靈和氰烯菌酯抗性菌株的生長抑制有效中 濃度（ECJ
[0069]
[0070] II.井岡霉素對鐮刀菌毒素生物合成能力的抑制活性
[0071] 由于禾谷鐮刀菌與亞洲鐮刀菌對井閃霉素和戊唑醇的藥敏性相同，發(fā)明人選用毒 素合成能力（單位菌量合成DON重量，μ gDON/g干重菌絲）較強的多菌靈抗性亞洲鐮刀菌 Fusarium asiaticum作為進一步研究毒素合成的材料。將引起麥類赤霉病的多菌靈抗性亞 洲鐮刀菌接種于滅菌的3%綠豆湯中，在溫度25°C和12/24小時散射光下?lián)u培