一種人工催芽方法及白芨育苗方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)科技技術領域，特別是涉及一種人工催芽方法及白芨育苗方法。
【背景技術】
[0002]白發(fā)，即Bletilla sfriata(Thunb.)Reiehb.f.，為陸生型蘭科植物，其主要藥用部分為干燥的白芨塊莖，主含白芨膠，其含量高達50%。首先，白芨膠對皮膚無毒無刺激作用，是綠色安全產(chǎn)品；其次，白芨膠具有止血補肺、生肌止痛等功效，用于治療內外傷出血，瘡瘍腫毒，促進皮膚修復具有奇效，是云南白藥、葵花胃康靈、創(chuàng)口貼等藥物的主要原料；再者，白芨膠還具有清除體內自由基、延緩皮膚衰老的功效，在化妝品行業(yè)具有廣泛用途；最后，白芨膠具有很高的粘稠特性，可做為增稠劑、懸浮劑、助乳化劑等作用，在食品行業(yè)具有廣泛的用途。全國每年需求白芨干品約2000-3000噸，而每年現(xiàn)實供應量僅有300噸左右，缺口巨大，導致白芨價格年年攀升，現(xiàn)在白芨干品接近800元/kg。
[0003]白芨及其它蘭科植物的種子構造簡單，成熟時為原胚階段，非常細小且無胚乳，多數(shù)種子無萌發(fā)所需的營養(yǎng)貯存組織，自然狀態(tài)下很難萌芽成苗，只有當白芨種子落在陰暗、潮濕且含有共生菌環(huán)境才能順利萌芽成苗。隨著白芨價格高企，野生資源逐漸被采挖而接近枯竭，這反過來又助長了白芨價格的進一步攀升。目前白芨種植業(yè)面臨的最大難關在于種苗嚴重短缺。
[0004]白芨的自然繁殖是以分株繁殖為主，種植兩年生的假鱗莖只能長I個新的假鱗莖，第三年增長2個，第四年再增長4個，其繁殖周期長，繁殖效率低，很難滿足大量栽培的需要。同時由于連續(xù)分芽繁殖3代后，第I代的母球莖就很難再萌芽，這給以傳統(tǒng)分株的育苗方式帶來較大困難，實際生產(chǎn)中有些母球莖不能萌芽生長。
[0005]通過組培方式以白芨種子為基礎育出的無菌苗是目前能大量供白芨苗的主要方式。但組培無菌苗最大難關在于種苗根部攜帶的瓊脂固體培養(yǎng)基無法洗干凈，導致人工馴化過程中受病菌感染的死亡率很高，白芨苗的成活率低，難以滿足白芨產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要。因此，加強白芨高質量種苗的培育至關重要。
[0006]也有實驗做直播育苗的，但直播苗的條件要求相當苛刻，需要共生菌接種，以及合適的溫度、濕度和PH值。直播苗缺陷在于萌芽率低于10%，且萌芽所需時間長，約需3-4個月才能萌芽分化出芽，長成5-lOcm的苗需要I年半時間。

【發(fā)明內容】

[0007]有鑒于此，本發(fā)明提供了一種人工催芽方法及白芨育苗方法，該人工催芽方法解決了種苗根部攜帶的固體培養(yǎng)基無法洗凈的問題，且育苗方法的成活率高，育苗時間短。
[0008]本發(fā)明第一方面提供了一種人工催芽方法，包括以下步驟:
[0009](I)將種子接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基包含質量百分比為0.1-2.0%的刺槐豆膠；
[0010](2)將解木聚糖類芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基上，降解培養(yǎng)基，所述解木聚糖類芽孢桿菌于2009年I月8日保藏于武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M209014，命名為解木聚糖類芽抱桿菌 Paenibacillus xylanilyticus YUPP-10[0011 ] 解木聚糖類芽孢桿菌YUPP-1的菌學特性:
[0012]革蘭氏染色陽性或陰性，桿狀，大小為0.3-0.8 X 3-5 μ m，適宜生長溫度為20-30°C，兼性厭氧，產(chǎn)橢圓形芽孢，芽孢端生。鹽離子濃度高于I %不利于其生長繁殖。其在肉湯固體培養(yǎng)基表面菌落污白色，表面濕潤光滑。
[0013]本發(fā)明第二方面提供了應用了上述人工催芽方法的白芨育苗方法，包括以下步驟:
[0014](I)采用上述人工催芽方法對白芨進行催芽；
[0015](2)在地面上鋪基質，再在廂面上撒白芨共生菌即得苗床，將白芨芽播種至苗床上培養(yǎng)育苗；所述白芨共生菌的獲得方法包括如下步驟:將消毒的白芨塊莖在培養(yǎng)基上于23-27°C下培養(yǎng)3-5天，將菌絲定殖于白芨塊莖內，選取不會導致白芨無菌苗死亡的菌絲，即為白芨共生菌。
[0016]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供的人工催芽方法通過在催芽的培養(yǎng)基中添加刺槐豆膠，并在催芽完成后添加解木聚糖類芽孢桿菌YUPP-1使該特殊培養(yǎng)基可以完全液化，解決了種苗根部攜帶的固體培養(yǎng)基無法洗凈的問題，顯著提高苗的成活率；將該人工催芽方法用于白芨并進一步進行規(guī)?；焖儆?，克服了組培方式育苗的移栽成活率不高的缺陷，使成活率由50%以下提高至95%以上，效果明顯，移栽大田無死苗現(xiàn)象及緩苗期，同時明顯縮短直播苗的育苗時間，可提前4-6個月左右成苗，且操作簡單、適合規(guī)?；a(chǎn)、降低了育苗成本、提高了育苗速度與效率，對蘭科藥用植物的人工大規(guī)模種植具有重要的指導意義。
【具體實施方式】
[0017]本發(fā)明第一方面提供了一種人工催芽方法，包括以下步驟:
[0018](I)將種子接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基包含質量百分比為0.1-2.0%的刺槐豆膠；
[0019](2)將解木聚糖類芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基上，降解培養(yǎng)基，所述解木聚糖類芽孢桿菌于2009年I月8日保藏于武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M209014，命名為解木聚糖類芽抱桿菌 Paenibacillus xylanilyticus YUPP-10
[0020]通過在催芽的培養(yǎng)基中添加適量的刺槐豆膠，并在催芽完成后添加解木聚糖類芽孢桿菌YUPP-1使該特殊培養(yǎng)基可以完全液化，解決了種苗根部攜帶的固體培養(yǎng)基無法洗凈的問題，顯著提高苗的成活率。
[0021]優(yōu)選的，步驟⑴所述培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基中添加土豆泥、活性炭、瓊脂、NAA、6-BA及刺槐豆膠，使土豆泥的濃度為10-100g/L，活性炭的濃度為0.l_2g/L，瓊脂的質量百分比為0.1-1 %，NAA的濃度為1.0-1.2mg/L，6-BA的濃度為0.5-1.0mg/L，刺槐豆膠的質量百分比為0.1-2.0%。該培養(yǎng)基配方提供種子萌發(fā)所需的營養(yǎng)物質，在該培養(yǎng)基下進行催芽處理的種子在萌發(fā)率及幼苗生長狀態(tài)上表現(xiàn)最佳。
[0022]進一步優(yōu)選的，步驟(I)所述培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.0。該pH值下有利于種子萌發(fā)。
[0023]優(yōu)選的，步驟⑴所述種子為蘭科植物種子。
[0024]本發(fā)明第二方面提供了應用了上述人工催芽方法的白芨育苗方法，包括以下步驟:
[0025](I)采用上述人工催芽方法對白芨進行催芽；
[0026](2)在地面上鋪基質，再在廂面上撒白芨共生菌即得苗床，將白芨芽播種至苗床上培養(yǎng)育苗；所述白芨共生菌的獲得方法包括如下步驟:將消毒的白芨塊莖在培養(yǎng)基上于23-27°C下培養(yǎng)3-5天，將菌絲定殖于白芨塊莖內，選取不會導致白芨無菌苗死亡的菌絲，即為白芨共生菌。
[0027]優(yōu)選的，步驟(2)所述培養(yǎng)基的配制方法包括:將白芨塊莖在水中煮透后過濾得到濾液，向將PDA培養(yǎng)基中添加所得濾液、瓊脂，使濾液質量百分比為0.1-0.3%，瓊脂質量百分比為1.0-1.4%，滅菌后冷卻到40-50°C時，在培養(yǎng)基中添加卡拉霉素和氨芐青霉素，使其終濃度分別為20-30 μ g/mL和95-105 μ g/mL，混勻，凝固。采用該配方的培養(yǎng)為具有選擇性的培養(yǎng)基，可以避免雜菌的生長，利于得到較純的菌絲。
[0028]進一步優(yōu)選的，步驟(2)所述在廂面上撒白芨共生菌為使每克基質中菌含量達18-1O9個孢子。
[0029]進一步優(yōu)選的，步驟⑵所述消毒的方法包括如下步驟:將白芨塊莖洗凈后浸泡于酒精中漂洗，將白芨切塊后轉入4%的次氯酸鈉溶液中，消毒8-15min后用無菌水漂洗。
[0030]優(yōu)選的，步驟(2)所述基質中氮含量為L 0-2.0g/kg，磷含量為0.5-2.0g/kg，鉀含量為0.5-2.0g/kg，有機質質量百分比為40-70%。
[0031]下面將結合實施例對本發(fā)明提供的一種人工催芽方法及白芨育苗方法予以進一步說明。
[0032]實施例1
[0033]地點選在湖北省鐘祥市官莊湖農(nóng)場內完成本實施例，該農(nóng)場位于北瑋30°左右，海拔約為200m，地勢相對平坦，建有標準化的可控溫