一種芒果莖段無菌系體系建立的方法
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，涉及一種芒果莖段無菌系體系建立的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]芒果(mangiferaindica)屬于漆樹科(anacardiaceae)芒果屬(meagifera)，是熱帶優(yōu)質(zhì)水果之一，是世界第二大熱帶水果。芒果肉質(zhì)細(xì)嫩，風(fēng)味濃郁，營養(yǎng)豐富，具有十二種必需氨基酸，維生素A和C、胡蘿卜素等含量較高。食用芒果具有抗癌、美化肌膚、防止高血壓、動脈硬化、防止便秘、止咳、清腸胃的功效，是消費(fèi)者非常喜愛的熱帶亞熱帶著名水果，素有“熱帶果王”之美譽(yù)。中國是僅次于印度的第二大芒果生產(chǎn)國，芒果栽培地區(qū)主要分布于海南、廣西、廣東、云南和四川的金沙江干熱河谷區(qū)域，廣西百色市則以盛產(chǎn)芒果而聞名，具有很高的經(jīng)濟(jì)價值和社會價值。芒果是基因高度雜合的木本植物，種子的存活期不長，用傳統(tǒng)的育種方法改良芒果較困難。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0003]鑒于以上內(nèi)容，本發(fā)明提供一種芒果莖段無菌系體系建立的方法，該方法利用芒果幼嫩枝條作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，實現(xiàn)了芒果莖段培養(yǎng)誘導(dǎo)無菌芽，達(dá)到快速繁殖的作用。
[0004]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種芒果莖段無菌系體系建立的方法，包括以下步驟:1)剪取芒果嫩枝莖段作為外植體預(yù)處理；2)滅菌；3)接種；4)白熾光照培養(yǎng)；5) 二次滅菌；6)獲取再生植株。
[0005]進(jìn)一步地，在步驟I)中，芒果嫩枝莖段為剪取芒果樹上新抽的嫩枝條，剪刀剪去葉片，留0.5cm的葉柄，枝條剪成1.5cm長帶一個腋芽的莖段。
[0006]進(jìn)一步地，在步驟I)中，用流水沖洗莖段1min后，而后用0.01%高猛酸鉀溶液浸泡15min，再用流水沖洗30min。
[0007]進(jìn)一步地，在步驟2)中，將經(jīng)步驟I)處理后的莖段放置在滅菌過的超凈工作臺上，用75%酒精對莖段滅菌20s，而后用無菌水沖洗3次，再用0.1% HgCljP 3滴吐溫-80滅菌13min，最后用無菌水沖洗5次。
[0008]進(jìn)一步地，在步驟3)中，將經(jīng)步驟2)滅菌后的莖段接種到菌種培養(yǎng)基，該菌種培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA 4.0mg/L，pH 為 5.8。
[0009]進(jìn)一步地，在步驟4)中，將步驟3)中的菌種培養(yǎng)基放置在白熾光照環(huán)境下培養(yǎng)4天，光照時間為12h。
[0010]進(jìn)一步地，在步驟5)中，將經(jīng)步驟4)培養(yǎng)得到的莖段重新放置在超凈工作臺上用0.1% HgCljP 3滴吐溫-80滅菌5min，再用無菌水沖洗5次。
[0011]進(jìn)一步地，在步驟6)中，將經(jīng)步驟5)的莖段接種到傳代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以獲取再生植株。
[0012]進(jìn)一步地，所述傳代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH 為 5.8。
[0013]本發(fā)明的有益效果是:打破傳統(tǒng)的以體細(xì)胞胚發(fā)生途徑獲得芒果再生植株，同時能夠傳承母株的優(yōu)良性狀，獲得大量芒果組培苗，實現(xiàn)了芒果莖段培養(yǎng)誘導(dǎo)無菌芽，達(dá)到快速繁殖的作用。
【【具體實施方式】】
[0014]以下實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0015]一種芒果莖段無菌系體系建立的方法，所述方法包括以下步驟:
[0016]I)芒果嫩枝莖段作為外植體的預(yù)處理:芒果嫩枝莖段為剪取芒果樹上新抽的嫩枝條，剪去葉片，留0.5cm的葉柄，枝條剪成1.5cm長帶一個腋芽的莖段，作為外植體，在本實施方式中，用流水沖洗莖段1min,而后用0.01%高猛酸鉀溶液浸泡15min，再用流水沖洗30min，沖洗完成后備用；
[0017]2)滅菌:將經(jīng)步驟I)處理后的莖段放置在滅菌過的超凈工作臺上，用75%酒精對莖段滅菌20s，而后用無菌水沖洗3次，再用0.1 % HgCljP 3滴吐溫-80滅菌13min，最后用無菌水沖洗5次；
[0018]3)接種:將經(jīng)步驟2)滅菌后的莖段接種到菌種培養(yǎng)基，該菌種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA4.0mg/L, pH 為 5.8 ;
[0019]4)白熾光照培養(yǎng):將步驟3)中的菌種培養(yǎng)基放置在白熾光照環(huán)境下培養(yǎng)4天，光照時間為12h ；
[0020]5) 二次滅菌:將經(jīng)步驟4)培養(yǎng)得到的莖段重新放置在超凈工作臺上用0.1%HgCljP 3滴吐溫-80滅菌5min，再用無菌水沖洗5次后；
[0021]6)獲取芒果再生植株:將經(jīng)步驟5) 二次滅菌后的莖段接種到傳代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以獲取再生植株，該傳代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH為5.8。
[0022]上述芒果莖段無菌系體系建立的方法打破傳統(tǒng)的以體細(xì)胞胚發(fā)生途徑獲得芒果再生植株，同時能夠傳承母株的優(yōu)良性狀，獲得大量芒果組培苗，實現(xiàn)了芒果莖段培養(yǎng)誘導(dǎo)無菌芽，達(dá)到快速繁殖的作用。
【主權(quán)項】
1.一種芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:包括以下步驟:1)剪取芒果嫩枝莖段作為外植體預(yù)處理；2)滅菌；3)接種；4)白熾光照培養(yǎng)；5) 二次滅菌；6)獲取再生植株。2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟I)中，芒果嫩枝莖段為剪取芒果樹上新抽的嫩枝條，剪刀剪去葉片，留0.5cm的葉柄，枝條剪成1.5cm長帶一個腋芽的莖段。3.根據(jù)權(quán)利要求書2所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟I)中，用流水沖洗莖段1min后，而后用0.01%高猛酸鉀溶液浸泡15min，再用流水沖洗30mino4.根據(jù)權(quán)利要求書2或3所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟2)中，將經(jīng)步驟I)處理后的莖段放置在滅菌過的超凈工作臺上，用75%酒精對莖段滅菌20s，而后用無菌水沖洗3次，再用0.1% HgCljP 3滴吐溫-80滅菌13min，最后用無菌水沖洗5次。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟3)中，將經(jīng)步驟2)滅菌后的莖段接種到菌種培養(yǎng)基，該菌種培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA 4.0mg/L，pH 為 5.8。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟4)中，將步驟3)中的菌種培養(yǎng)基放置在白熾光照環(huán)境下培養(yǎng)4天，光照時間為12h。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟5)中，將經(jīng)步驟4)培養(yǎng)得到的莖段重新放置在超凈工作臺上用0.1% HgCljP 3滴吐溫-80滅菌5min，再用無菌水沖洗5次。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:在步驟6)中，將經(jīng)步驟5)的莖段接種到傳代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以獲取再生植株。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的芒果莖段無菌系體系建立的方法，其特征在于:所述傳代培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L，pH 為 5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種芒果莖段無菌系體系建立的方法，涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域。所述方法包括以下步驟：1)剪取芒果嫩枝莖段作為外植體預(yù)處理；2)滅菌；3)接種；4)白熾光照培養(yǎng)；5)二次滅菌；6)獲取再生植株。本發(fā)明打破了傳統(tǒng)的以體細(xì)胞胚發(fā)生途徑獲得芒果再生植株，同時能夠傳承母株的優(yōu)良性狀，獲得大量芒果組培苗，實現(xiàn)了芒果莖段培養(yǎng)誘導(dǎo)無菌芽，達(dá)到快速繁殖的作用。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105028199
【申請?zhí)枴緾N201510402213
【發(fā)明人】農(nóng)艷豐, 岑湘濤, 蘇仕林
【申請人】百色學(xué)院
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年7月10日